Práctica 10: Análisis cuantitativo de enzimas

Integrantes: Quirarte Sainz Maryan Lizetth, Ruelas Verduzco Valeria, Tarín Sosa
Yajaira, Vázquez Corona Diego Iván.
Asignatura: Procesos Metabólicos.
Licenciatura QFBT
Periodo: 2022-2

Resumen.
La catalasa es una enzima antioxidante presente en la mayoría de los organismos
aerobios. Las enzimas son homeotermos con un grupo hemo en cada [Link]
ha determinado la estructura cristalográfica de nueve catalasas. Algunas catalasas
tienen subunidades pequeñas y otras grandes. Entre estos dos tipos de catalasas
existen diferencias estructurales importantes. Las catalasas pequeñas son menos
resistentes a la desnaturalización, unen NADPH, tienen hemo y se inhiben o
inactivan por sustrato. En cambio, las catalasas grandes tienen un dominio extra en
el C-terminal que es similar a la flavodoxina, son muy resistentes a la
desnaturalización, tienen hemo d, presentan enlaces covalentes inusuales cercanos
al sitio activo y son resistentes a concentraciones molares deH2O2. Aquí revisamos
los aspectos estructurales de las catalasas y sus posibles implicaciones funcionales
y determinación de las mismas también como de la enzima peroxidasa y la
tirosinasa en el rábano y la papa conociendo función de cada una como en donde
se podrá encontrar en mayores cantidades.

Palabras clave: Bencidina, Catalasa, Desnaturalización, Enzimas, Tirosinasa,

Peroxidasa, Pirogalol.

Introducción Cada enzima actúa sobre una

Las enzimas son proteínas sustancia concreta, como una llave y
“especializadas” y controlan todas las una [Link] tipo de reacción es:
reacciones químicas de nuestro la llave cerradura que en efecto hace
cuerpo. Hay enzimas en todo lo que alusión a su nombre, porque el
está vivo. Son catalizadores, porque sustrato y sitio activo encajan
cada reacción química necesita una correctamente como una llave y una
enzima para que se realice, es decir, cerradura, también este encaje es tan
todo lo que se transforma lo hace preciso, que algún otro elemento no
gracias a una enzima. (V,2016) puede integrarse a esta enzima ya que
no encajaría con ellos. El metabolismo
es una serie de reacciones químicas, temperatura, pH y concentració[Link]
efectuadas en las células. Estas enzimas funcionan mejor dentro de
reacciones se realizan a través de las rangos de temperatura y de pH
enzimas. Las enzimas son las específicos, y bajo condiciones que no
mediadoras del metabolismo, son las óptimas una enzima puede
responsables de cada reacción que perder su capacidad de unirse a un
ocurre en la célula. Sin las enzimas, sustrato.
las reacciones metabólicas Temperatura: aumentar la temperatura
procederán tan lentamente que serían generalmente acelera una reacción, y
imperceptibles.(Chan, E ,2018) Las bajar la temperatura la hace más
enzimas se clasifican en base a la lenta. Sin embargo, temperaturas
reacción específica que catalizan. extremadamente altas pueden causar
● Oxidoreductasas: Este tipo de que una enzima pierda su forma (se
enzimas catalizan la transferencia de desnaturalice) y deje de trabajar.
electrones de un compuesto a otro. pH: cada enzima tiene un rango
Casi siempre los electrones van óptimo de pH. Cambiar el pH fuera de
acompañados de portones. este rango hará más lenta la actividad
● Transferasas: La reacción que de la enzima. Valores de pH extremos
catalizan estas enzimas es la de pueden causar la desnaturalización de
transferir un grupo químico de un la enzima.
compuesto a otro Concentración de la enzima: aumentar
● Hidrolasas: Como su nombre lo dice, la concentración de la enzima
estas enzimas catalizan reacciones de acelerará la reacción, siempre que se
hidrólisis. disponga de sustrato al cual unirse.
● Liasas: Las enzimas de este tipo Una vez que todo el sustrato esté
agregan (o sustraen), grupos químicos adherido, la reacción deja de
a dobles ligaduras. acelerarse, puesto que no hay algo a
● Isomerasas: Estas enzimas lo las enzimas adicionales se puedan
transforman un compuesto en alguno unir.
de sus isómeros. (Recuerde que los Concentración del substrato: aumentar
isómeros son compuestos que tienen la concentración de sustrato también
los mismos átomos pero diferente aumenta la velocidad de reacción
arreglo en el espacio). hasta un cierto punto. Una vez que
● Ligasas: Estas enzimas forman todas las enzimas se han adherido,
uniones covalentes entre dos cualquier aumento de sustrato no
compuestos, la reacción es tendrá efecto alguno en la velocidad
endergónica y requieren de la ruptura de reacción, ya que las enzimas
de moléculas de ATP que disponibles estarán saturadas y
proporcionan energía.(Guerra, J, J,M, trabajando a su máxima
2016) capacidad.(Khan Academy,2020).
Factores que afectan la actividad
enzimática Fundamentos Catalasa: La catalasa
La actividad enzimática puede verse es una enzima que cataliza la
afectada por diversos factores, como descomposición del peróxido de
hidrógeno en agua y oxígeno. La reconocimiento como en
prueba se utiliza para comprobar la desnaturalización.
presencia de la enzima catalasa que 2. Conocer la función enzimática
se encuentra en la mayoría de las de la peroxidasa, catalasa y
bacterias aerobias y anaerobias tirosinasa.
facultativas que contienen el citocromo 3. Comparar la actividad
oxidasa. enzimática de cada uno de los
Peroxidasa: Las peroxidasas productos puestos a las
presentes se van a identificar, actúan reacciones químicas.
catalizando la descomposición del Hipótesis
peróxido de hidrógeno, produciendo Mediante esta práctica se hará el
una liberación de oxígeno. Para hacer reconocimiento de la catalasa en
fácilmente evidente la reacción, se diferentes muestras, también se verá
preparan reactivos que al ser oxidados como esta se desnaturaliza, al igual
cambien de color. Tirosinasa: La comprobaremos la determinación de la
tirosinasa cataliza la hidroxilación de peroxidasa (cataliza la oxido-reducción
monofenoles a odifenoles con oxígeno de H2O2 ) y de tirosina (catalizar la
molecular (actividad mono fenolasa) y oxidación de monofenoles, o-difenoles
también es capaz de oxidar los y o-quinonas) con lo cual se verán las
o-difenoles a oquinonas (actividad distintas reacciones que estas
difenolasa). producen conociendo las propiedades
de las muestras en este caso nos
ayudan a cuantificar enzimas.
Planteamiento del problema. Métodos.
Analizar las enzimas tales como la I. RECONOCIMIENTO DE LA
peroxidasa y la catalasa y se CATALASA.
desnaturalizan. ● Pesamos aproximadamente 1g
de cada uno de los tejidos a
Justificación. analizar.
Con el fin de comprender e identificar ● Introducimos los fragmentos de
dichas enzimas al estar en su tejido en tubos de ensayo.
composición natural y Añadimos a cada tubo 5 ml de
desnaturalizadas H2O2.
● Registramos las observaciones
Objetivos de mayor o menor actividad en
cada uno de los tejidos.
General ● Identificamos el tejido más
Determinar la presencia de enzimas reactivo.
en vegetales y productos animales ● Realizamos el esquema de las
mediante las reacciones químicas a observaciones.
utilizar.
Específicos II. DESNATURALIZACIÓN DE
1. Identificar la acción de las LA CATALASA.
catalasas tanto en
● Pesamos ● Agregamos dos
aproximadamente 1 g de gotas de peróxido
cada uno de los tejidos a de hidrógeno al
analizar. 0.5% y agitamos
● Introducimos los suavemente.
fragmentos de tejido en ● Anotamos los
tubos de ensayo. resultados.
● Introducimos los tubos
con los tejidos en un 2) PRUEBA DEL
baño de agua hirviendo PIROGALOL
durante 10 minutos.
● Añadimos a cada tubo 5 ● Con ayuda de un rallador,
ml de H2O2. rallamos una papa fresca.
● Registramos las Tomamos una pequeña
observaciones de mayor cantidad de la papa rallada
o menor actividad en sin exprimir y la colocamos en
cada uno de los tejidos. un tubo de ensayo.
● Añadimos 1 ml. de pirogalol al
[Link]ÓN DE 1% y 2 gotas de peróxido de
PEROXIDASA. hidrógeno al 2%.
● Observamos la aparición de un
1)PRUEBA DE LA precipitado. Anotamos los
BENCIDINA. resultados.

● Pesamos IV. DETERMINACIÓN DE

aproximadamente TIROSINASA.
2 g de rábano.
Con ayuda de un ● Con ayuda de un
mortero, rallador, rallamos una
trituramos el papa fresca, exprimirla
tejido agregando a través de una
3 ml de agua gasa doble e
destilada. inmediatamente filtramos
● Filtramos a través el extracto en un
de una gasa y embudo.
agregamos 1 mi ● Vaciamos en un tubo de
del extracto ensayo 1 ml del extracto
acuoso a un tubo y añadimos 3 gotas de
de ensayo. solución de tirosina.
● Añadimos 5 gotas ● Mezclamos y colocamos
de la solución el tubo en un baño de
alcohólica de agua a 40ºC.
bencidina. ● Cada 2 min agitamos
el tubo para que el
 líquido tenga mejor fig.2 reconocimiento de catalasas ya
contacto con el oxígeno pasados más de 10 min
del aire. aproximadamente.
● Observamos y
anotamos los cambios
de coloración de la
mezcla reaccionante.
● Limpiamos y entregamos
materiales.
.

Comparamos resultados con

el experimento anterior, Fig.3 proceso de desnaturalización de
anotando observaciones. catalasas.

determinación de peroxidasa
Resultados

fig.1 reconocimiento de las catalasas

Fig.4 prueba de bencidina aplicada al

jugo que se extrajo del rábano.
 enzima como el rábano, la zanahoria,
la carne, y el jitomate, sin embargo
con el limón no hubo ningún tipo de
reacción, la enzima catalasa es
catalizar la reacción del peróxido de
hidrógeno.

en la desnaturalización de la
catalasas, tales que en cada tubo no
hubo ningún tipo de reacción ya que
con el calor se realiza una perdida de
la capacidad de reaccionar, en pocas
palabras se inactiva la catalasa
ocasionando perdida de la actividad
Fig.5 prueba del pirogalol de ralladura enzimatica que se produce, como
fresca de papa. observacion lo que fue la carne, la
papa, el rabano, estos tuvieron un
determinación de tirosinasa cambio de color se podria explicar que
se cocieron perdiendo asi las
propiedades ezimaticas .

Con mayor actividad enzimática

tenemos a la papa la cual al instante
comenzó con el burbujeo, después
tenemos la zanahoria la cual también
reaccionó al instante pero sin salir tan
precipitado el burbujeo, como en
tercero está la carne la cual sí tardo en
Fig.6 extracto de papa filtrada para la salir pero salió más que en el rábano
identificación de la tirosinasa. que reaccionó más rápido, al final
tenemos el tomate el cual fue súper
Análisis de resultados mínima la actividad y el limón el cual
en el reconocimiento de catalasas esta no se obtuvo ningún tipo de reacción.
reacciona a las muestras que observaciones en la fig.2.
contengan la enzima de catalasa la
cual al tener demasiada enzima hace En la determinación de peroxidasa la
una reaccion de formacion de cual también es una enzima que
burbujeo es decir las muestras que cataliza el peróxido de hidrógeno, se
forman de inmediato o a los momentos realizaron 2 pruebas.
de agregar el peróxido de hidrógeno el 1. 1era extracto de rábano fig.4 la
burbujeo, contienen mayor cantidad de cual se el coloca solucion de
esta enzima como lo son la papa bencidina la cual al combinarse
como principal, otros que duraron un se tiño de cafe de ser rosa el
poco más en la presentación de esta extracto, se identifica este
 cambio de color como que la catalasa, cambios de color al
ezima de peroxidasa esta activa identificar las peroxidasa y la
en la muestra. tirosidasa, permitiendo observar
2. 2da ralladura de papa fresca reacciones especificas que pueden
fig.5 , se observa un sedimento actuar como reguladores de la
de un color más claro y un color velocidad de una reaccion.
más oscuro hasta arriba, entre Yajaira- Se conoce que las enzimas
estos se ve una coloración son reacciones químicas de nuestro
amarillenta la cual nos indica cuerpo, básicamente hay enzimas
oxidación de la papa y presentes en todo lo que está vivo.
podemos observar un un Mediante esta práctica se logró
resultado positivo a peroxidasa determinar la presencia de enzimas en
la cual es la coloración oscura tejidos tanto vegetales como animales
en la parte superior. mediante las reacciones químicas y
físicas que se obtuvo como resultado
Determinación de tirosinasa la cual es en cada una de las muestras, esto al
un aminoácido que hace la oxidación ser sometidas a las distintas pruebas
de monofenoles y que al reaccionar utilizadas (desnaturalización de
con la tirosina de ser casi transparente catalasa, reconocimiento de catalasa,
la muestra al ponerla al calor cambio prueba de pirogalol y la determinación
de color cafe fig.6, esta ayuda a la de peroxidasa). Se lograron los
formación de pigmento de melanina objetivos esperados.
por medio de la oxidación que se
denomina pardeamiento y se debe a la Ivan
acción de la enzima tirosinasa sobre el La temperatura es un factor importante
aminoácido tirosina, que en presencia en la actividad enzimática. Se puede
de oxígeno, lo va convirtiendo decir que a mayor temperatura
secuencialmente en dopa, aumenta la velocidad de la reacción
dopaquinona y dopacromo (café hasta que llega un punto en el que la
oscuro), hasta que termina en un velocidad disminuye con el aumento
pigmento muy oscuro llamado en el calor.
melanina. Los agentes precipitantes inhiben la
actividad enzimática por
Conclusiones desnaturalización de
Maryan - la actividad enzimática es la enzima.
sumamente importante para la
Valeria.
descomposición de materiales en el
La catalasa es una enzima que se
organismo, como que juegan un papel
encuentra presente en muchos
importante en todos los procesos
organismos vivos y que cataliza la
biologicos como visto en el desarrollo
reacción de deterioro del peróxido de
de esta aceleran reacciones hidrógeno en agua y oxígeno. La
metabolicas como en el caso del temperatura es un punto importante
peroxido de hidrogeno al ocasionar para la actividad enzimática.
una espuma al contacto con la enzima
 Guerra, J. J. M. (2016). Clasificación
Referencias de las enzimas | LIBRO
ELECTRÓNICO DE BIOQUÍMICA |
PRACTICA 4 - EXTRACCION DE LA Juan José Martínez Guerra.
TIROSINASA Y DETERMINACION Clasificación de las enzimas.
DE SU ACTIVIDAD - UNIVERSIDAD [Link]
NACIONAL DE COLOMBIA SEDE 6-enzimas/clasificacion-de-lasenzima.
MEDELLN FACULTAD DE CIENCIAS html
ESCUELA DE. (2016). Retrieved
October 21, 2022, from Khan Academy. (2020). Repaso de
[Link] website: enzimas (artículo).
[Link] [Link]
198/PRACTICA-4-EXTRACCION-DE- biology/cellularenergetics/environment
LA-TIROSINASA-Y-DETERMINACION al-impacts-onenzyme-function/a/hs-en
-DE-SU-ACTIVIDAD/ zymes-review

‌ han,
C E. (2018, 13 junio). V. (2016). Las enzimas son proteínas
¿Metabolismo?. También presente en especializadas y controlan TODAS las
las células. - Evelyn Chan. Medium. reacciones químicas de nuestro
[Link] cuerpo. Enzimas.
abolismo-tambi%C3%A9n-presente-en [Link]
-lasc%C3%A9lulas-dddb830ca592