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Prueba de Oxidasa en Bacterias

Este documento describe la prueba de oxidasa, un ensayo que detecta la presencia de enzimas citocromo oxidasa en bacterias. Estas enzimas son capaces de catalizar la oxidación de citocromos por oxígeno molecular y están presentes en bacterias respiratorias pero ausentes en bacterias anaerobias. El ensayo involucra la adición de un colorante redox a una colonia bacteriana; si se oxida rápidamente se considera positivo y puede indicar la presencia de géneros como Neisseria, Aeromonas o Pseud

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Prueba de Oxidasa en Bacterias

Este documento describe la prueba de oxidasa, un ensayo que detecta la presencia de enzimas citocromo oxidasa en bacterias. Estas enzimas son capaces de catalizar la oxidación de citocromos por oxígeno molecular y están presentes en bacterias respiratorias pero ausentes en bacterias anaerobias. El ensayo involucra la adición de un colorante redox a una colonia bacteriana; si se oxida rápidamente se considera positivo y puede indicar la presencia de géneros como Neisseria, Aeromonas o Pseud

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PRUEBA DE

LA OXIDASA
El sistema citocromo oxidasa está constituido por hemoproteinas capaces de
catalizar la oxidación de un citocromo reducido por el oxígeno molecular.
Las bacterias que obtienen su energía por respiración y utilización del oxígeno
molecular como aceptor final de electrones contienen diferentes sistemas
citocromo oxidasa mientras que las bacterias anaerobias obligadas no
contienen tales sistemas.

¿En qué se basa este ensayo?

Permite detectar la presencia en el microorganismo de ciertas enzimas del


sistema citocromo oxidasa, capaces de oxidar rápidamente al colorante redox.
Este ensayo es útil para sospechar la presencia de los géneros de bacterias que
dan el ensayo positvo como Neisseria, Aeromonas, Vibrio, Camplylobacter y
Pseudomonas y para excluir las Enterobacterias que dan reacciones negativas.
Medios y reactivos

1. Cultivo fresco del microorganismo en un medio no selectivo y libre de


colorantes que puedan interferir en el ensayo.
2. Solución al 1% de diclorhidrato de dimetil-p-fenilendiamina (producto de
color rosado), o clorhidrato de tetrametil-p-fenilendiamina (producto de color
azul), recién preparada.

Procedimiento

Añadir unas gotas de reactivo a una tira o disco de papel de filtro (colocada
en una placa de Petri limpia) y extender luego una ansada (bien cargada) de la
colonia a estudiar. Se debe realizar un control negativo del ansa ya que ésta
puede producir falsos positivos.
Interpretación de resultados

Cuando se utiliza Se oconsidera ensayo positivo


el dimetil-p-fenilendiamina cuando aparece un rosado a fuscia
por un tiempo de aprox 2 min

Cuando se utiliza Se considera ensayo positivo cuando aparece un color


el tetrametil-p-etilendiamina azul profundo en un tiempo menor a 10 seg. Se
considera positivo lento a confirmar cuando el color
aparece entre 10 y 60 seg. Y se considera negativo
cuando no hay desarrollo de color o cuando se
produce en un tiempo mayor a 60 seg.

Control positivo: Pseudomonas aeruginosa


Control negativo: Escherichia coli

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