PRUEBA DE
LA OXIDASA
El sistema citocromo oxidasa está constituido por hemoproteinas capaces de
catalizar la oxidación de un citocromo reducido por el oxígeno molecular.
Las bacterias que obtienen su energía por respiración y utilización del oxígeno
molecular como aceptor final de electrones contienen diferentes sistemas
citocromo oxidasa mientras que las bacterias anaerobias obligadas no
contienen tales sistemas.
¿En qué se basa este ensayo?
Permite detectar la presencia en el microorganismo de ciertas enzimas del
sistema citocromo oxidasa, capaces de oxidar rápidamente al colorante redox.
Este ensayo es útil para sospechar la presencia de los géneros de bacterias que
dan el ensayo positvo como Neisseria, Aeromonas, Vibrio, Camplylobacter y
Pseudomonas y para excluir las Enterobacterias que dan reacciones negativas.
Medios y reactivos
1. Cultivo fresco del microorganismo en un medio no selectivo y libre de
colorantes que puedan interferir en el ensayo.
2. Solución al 1% de diclorhidrato de dimetil-p-fenilendiamina (producto de
color rosado), o clorhidrato de tetrametil-p-fenilendiamina (producto de color
azul), recién preparada.
Procedimiento
Añadir unas gotas de reactivo a una tira o disco de papel de filtro (colocada
en una placa de Petri limpia) y extender luego una ansada (bien cargada) de la
colonia a estudiar. Se debe realizar un control negativo del ansa ya que ésta
puede producir falsos positivos.
Interpretación de resultados
Cuando se utiliza Se oconsidera ensayo positivo
el dimetil-p-fenilendiamina cuando aparece un rosado a fuscia
por un tiempo de aprox 2 min
Cuando se utiliza Se considera ensayo positivo cuando aparece un color
el tetrametil-p-etilendiamina azul profundo en un tiempo menor a 10 seg. Se
considera positivo lento a confirmar cuando el color
aparece entre 10 y 60 seg. Y se considera negativo
cuando no hay desarrollo de color o cuando se
produce en un tiempo mayor a 60 seg.
Control positivo: Pseudomonas aeruginosa
Control negativo: Escherichia coli