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GUÍA DE EJERCICIOS N° 1
BALANCES DE MASA EN BIOPROCESOS
BALANCES DE MASA EN BIOPROCESOS
1. Producción de ácido acético a partir de etanol
La bacteria Acetobacter aceti convierte etanol en ácido acético, bajo condiciones aeróbicas. Se ha
propuesto un proceso de fermentación contínua para la producción de vinagre, en el cual se utilizan
células no viables de A. aceti, inmobilizadas sobre la superficie de esferas de gelatina. Se desea
producir 2 Kg h-1, sin embargo, la concentración máxima de de ácido acético tolerada por las
células es de 12%. El aire es suministrado a las célulasa una velocidad de 200 mol h-1.
1.1. ¿Qué cantidad mínima de etanol se requiere para el procesos?
1.2. ¿Qué cantidad mínima se agua debe agregarse para diluir el etanol y evitar así la inhibición
por ácido?
1.3. ¿Cuál es la composición de los gases exhaustos del proceso?
2. Concentración de células utilizando membranas filtrantes
Una batería de membranas de fibra hueca cilíndricas se operan bajo condiciones de estado estable
para concentrar una suspensión de bacterias obtenidas de un proceso de fermentación. Se hace
circular el medio de cultivos a través de la batería de membranas a una velocidad de 350 Kg min -1 .
(ver diagrama). El caldo de fermentación contiene un 1% de bacterias, el esto puede ser
considerado como agua. Una solución tampón entra por el espacio anular entre entre los cilindros
de membrana a una velocidad de 80 Kg min -1; debido a que el caldo de fermentación está bajo
presión, el agua pasa a través de la membrana hacia la solución de buffer. Las células en el caldo
de fermentación tiene un tamaño
Figura 1: demasiado grande como para
atravesar la membrana, y salen al
otro extremo del tubo como una
Caldo de
Solución
fermentación
solución concentrada. El objetivo
de buffer
de esta filtración en membrana
es obtener un concentrado con
6% de biomasa.
2.1. ¿Cuál es la velocidad de flujo
Membrana en el interior del espacio anular?
de fibre hueca 2.2. ¿Cuál es la velocidad de flujo
de la suspensión celular que sale
de la membrana?.
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3. Cultivo in vitro de raíces de plantas
Las raíces de algunas plantas producen sustancias químicas útiles in-vitro. Atropa belladona se
cultiva en lotes, a 25ºC, en un reactor propulsado con aire (ver Fig 2). Dado que las raíces no se
pueden remover durante la operación del reactor, se ha propuesto monitorear el crecimiento
usando balances de masa.
Figura 2:
G a se s Se alimenta 1425 g de medio de cultivo que
exh au sto s
contienen 3 % de glucosa y 1,75% de Amonio; Lo
M ed io d e
cu ltivo demás puede ser considerado como agua. El aire es
alimentado a 1 atm de presión, y 25ºC, a una
velocidad de 22 cm3 min-1. Durante un periodo de
cultivo de 10 días, se recolectan 47 litros de O 2 y 15
litros de CO2. Después de 10 días, 1110 g de líquido
se drenan desde el reactor, y su composición era de
R ea cto r im pu lsa do 0,063% glucosa y 1,7% de amonio. Para las raíces,
co n aire
R a íce s
la relación de peso fresco a peso seco es de 14:1.
3.1. ¿Qué masa de raíces secas se producen al
cabo de 10 días?
3.2. Escriba la ecuación para la reacción de
crecimiento, indicando la fórmula química
A ire
aproximada de las raíces, CHO N
3.3. ¿Cuál es el sustrato limitante?
3.4. ¿Cuál es el rendimiento de raíces a partir de
glucosa?
Líq u id o
dre n a do
4.
Requerimiento de oxígeno para crecimiento
en glicerol
A partir de glicerol y amonio como fuente de nitrógeno, es posible producir Klebsiella aerógenes. La
biomasa así obtenida contiene 8% de cenizas. Por cada gramo de glicerol se obtienen 0,40g de
biomasa, y no se producen cantidad significativas de ningún otro metabolito. ¿Cuál es el
requerimiento (masa) de oxígeno para este cultivo?
5. Rendimiento de producto en cultivo anaeróbico
La digestión anaeróbica de ácidos volátiles mediante bacterias metanógenas se puede representar
según la ecuaión:
CH3COOH + NH3 Biomasa + CO2 + H2O + CH4
Ácido acético Metanogena
La composición apróximada de la bacteria metanógena qeuda representada en la ecuación
CH1,4O0,40N0,20. Por cada Kg de ácido acético consumido se producen 0,67 Kg de CO 2. Compare el
rendimiento de metano bajo las condiciones del problema con el máximo rendimiento posible para
la reacción.
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6. Estequiometría de la producción de single cell protein
(a) Las bacterias del género Cellulomonas se pueden producir a partir de glucosa, bajo condiciones
anaeróbicas, y se utilizan como single cell protein para alimentación humana y animal. Todo el
carbono presente en el sustrato se convierte en biomasa, utilizando amonio como fuente de
nitrógeno. La fórmula molecular para la biomasa es: CH 1,56O0,54N0,16; las células también contienen
5% de cenizas. Compare el rendimiento de biomasa a partir de sustrato, en términos molares y de
masa, bajo las condiciones del problema, con el máximo rendimiento posible para la reacción.
(b) Otro sistema para la producción de single cell protein es Methylophilus methylotrophus. Este
organismo se produce bajo condiciones aeróbicas, a partir de metanol y amonio como fuente de
nitrógeno. La fórmula molecular para la biomasa es: CH 1,68O0,36N0,22; y las células contienen 6% de
cenizas.
6.1. Compare el máximo rendimiento posible de biomasa para la reacción con lo encontrado en el
caso anterior (a). ¿cuál es la principal razón de la diferencia?
6.2. Si el rendimiento real de biomasa a partir de metanol es 42% del máximo termodinámico,
¿cuánto será la demanda de oxígeno?
7. Producción de etanol en levaduras y bacterias
La levadura S. Cerevisiae y la bacteria Zymomonas mobilis producen etanol a partir de glucosa,
bajo condiciones anaeróbias y sin un aceptor de electrónes externo. El rendimiento de biomasa a
partir de glucosa es de 0,11 g g-1 en levaduras, y 0,05 g g-1 en Z. mobilis. En ambos casos la fuente
de nitrógeno es amonio. La composición celular de ambos organismos se representa en la fórmula:
CH1,8O0,5N0,2.
7.1. ¿Cuál es el rendimiento de etanol a partir de glucosa en ambos casos?
7.2. Compare los rendimientos calculados en 7.1., con el máximo rendimiento termodinámico
posible para la reacción.
8. Demanda de oxígeno para la producción de proteínas recombinantes
La producción de proteína recombinante en una cepa de E. coli modificada es proporcional al
crecimiento celular. Se utiliza amonio como fuente de nitrógeno para el crecimiento aeróbico con
glucosa como sustrato. La proteína recombinante tiene la fórmula química: CH 1,55O0,31N0,25. El
rendimiento de biomasa a partir de glucosa es de 0,48 g g -1. El rendimiento de proteína
recombinante a partir de mismo sustrato es de 20% el correspondiente a las células.
8.1. ¿Cuánto amonio se requiere?
8.2. ¿Cuál es la demanda de oxígeno para el proceso?
8.3. Si el rendimiento de biomasa se mantiene en 0,48 g g-1 ¿Qué tan diferentes serán los
requerimientos de oxígeno y amonio para la cepa silvestre de E. coli que es incapaz de sintetizar la
proteína recombinante?
9. Efecto de crecimiento sobre la demanda de oxígeno
La ecuación química para la reacción de conversión de etanol en ácido acético es la siguiente:
CH3CH2OH + O2 CH3COOH + H2O
Etanol Ácido
acético
El ácido acético se produce a partir de etanol durante el crecimiento de Acetobacter aceti, la cual
tiene la composición CH1,8O0,5N0,2. El rendimiento de biomasa a partir de sustrato es de 0,14 g g-1. El
rendimiento de producto a partir de sustrato es de 0,92 g g -1. Amonio es utilizado como fuente de
nitrógeno. ¿En qué forma el crecimiento afecta la demanda de oxígeno para la producción de ácido
acético?
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10. Considere un cultivo de bacterias con la fórmula empírica de la biomasa siguiente:
CH1.7O0.46N0.18 (MWB = 23,6 g / mol)
(MWB = Molecular Weight of biomase = Peso molecular de la Biomasa)
Creciendo aeróbicamente en glucosa (C6H12O6).
Usted decide medir los coeficientes de rendimiento para la glucosa y el oxígeno y encuentra que:
YX/S = 85 g de biomasa / mol de glucosa
YX/O2 = 39 g de biomasa / mol O2.
Este organismo no secreta cantidades apreciables de producto en estas condiciones.
a. Muestran que los valores medidos de YX/S y YX/O2 son estequiométricamente coherentes entre sí,
haciendo todos los supuestos que sean necesarios, y explicitándolos en su respuesta.
b. Un cultivo discontinuo de este organismo contiene inicialmente 0,01 g de inóculo de biomasa y
20 mmol de glucosa. El cultivo se incubó durante la noche, y las mediciones de densidad óptica
posteriores sugieren que las células ya no están creciendo. La biomasa total en el medio de cultivo
se calcula que es 1,0 g. Estimar la cantidad final de glucosa en el medio (mmol), y especular sobre
la causa de la meseta en la cantidad de biomasa.
11. Considere una fermentación anaeróbica utilizando levadura, con la fórmula empírica de
biomasa siguiente:
CH1.7O0.45N0.15 (MWB = 23,0 g DCW/mol) (DCW = Dry cell weight = Peso seco de la Biomasa)
Las fuentes de carbono y nitrógeno son sales de glucosa (C6H12O6) y de amonio, respectivamente.
Los productos posibles son la biomasa y etanol (C2H6O), junto con el dióxido de carbono y agua.
a. ¿Cuál es el máximo coeficiente de rendimiento posible de la biomasa (g DCW/mol de glucosa), y
bajo qué condiciones y/o supuestos se logra obtener?
b. ¿Cuál es el máximo coeficiente de rendimiento posible de etanol (moles EtOH/mol de glucosa), y
bajo qué condiciones y/o supuestos se logra obtener?
12. Considere un cultivo en lote de bacterias con la fórmula empírica de biomasa
CH1.6O0.55N0.20 (MWB = 25,2 g / mol).
El biorreactor es un recipiente cerrado, rígido en el que el medio líquido contiene 10 mmol de
glucosa (C6H12O6) y se añade un exceso de sulfato de amonio. El espacio de cabeza (el espacio
“vacío” que queda entre la parte superior del líquido y la tapa superior del biorreactor) contenía
inicialmente aire humidificado. Después de algún tiempo, durante el cual se logró un crecimiento
neto de 0,3 g de peso celular seco, se analizó el gas del espacio de cabeza. Después de cuantifica
apropiadamente la concentración de O2 en el líquido en equilibrio con el espacio de cabeza, se
encontró que se consumió un total de 15 mmol O2.
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Este organismo no secreta cantidades apreciables de producto bajo estas condiciones.
a. Estimar el coeficiente de rendimiento de sustrato, YX/S (g DCW / glucosa moles) y la cantidad final
de glucosa en el medio (mmol).
b. Estimar la cantidad de CO2 producido (mmol).
13. Un cultivo bacteriano se lleva a cabo utilizando piruvato (C3H4O3) como sustrato de crecimiento.
La fuente de nitrógeno se compone de sales de amonio. La fórmula empírica de la biomasa es
CH1.8O0.5N0.17 biomasa (MWB = 24,2 g DCW / mol).
a. Basándose en esta información solamente, estimar el rendimiento teórico máximo de biomasa
por mol de piruvato (g DCW / mol).
Este mismo cultivo que ya se ha descrito anteriormente se lleva a cabo en condiciones aeróbicas, y
no hay productos secretados detectables. Basado en las mediciones de las concentraciones de
CO2 en el espacio de cabeza y el que se disuelve en el medio, se determina que se liberan 45
mmol CO2 por para cada g DCW de biomasa producido.
b. Estimar el rendimiento de biomasa real por mol de piruvato (g DCW / mol).
c. Explicar la diferencia entre las respuestas en las partes a y b.
14. Aerobacter aerógenes se cultiva aeróbicamente, con glucosa (C6H12O6) o piruvato (C3H4O3)
como sustratos de crecimiento. La siguiente información fue tomada de Bailey & Ollis:
Fórmula empírica biomasa: CH1.78N0.24O0.33 (MWB = 22,5 g / mol); grado de reducción de la biomasa
= 4.4
YX/S YX/O2
--------------------------------------------- -------------------------
Sustrate g/g g/mol g/g-C g/g g/mol
Glucosa 0.40 72.7 1.01 1.11 35.5
Piruvato 0.20 17.9 0.49 0.48 15.4
a. Comparar los rendimientos de biomasa reales a partir de glucosa y piruvato con sus respectivos
rendimientos máximos teóricos. ¿Qué sustrato de crecimiento es más eficiente con respecto a la
biosíntesis de biomasa?
b. Dé dos breves explicaciones de por qué la respuesta a la pregunta a, tiene sentido (o, trate de
adivinar que sustrato es más eficiente y justifique su respuesta).
c. Teniendo en cuenta el caso de crecimiento en glucosa, evalue si acaso se podrían esperar
grandes cantidad de productos secretados.
16. Considere un cultivo bacteriano aeróbico, creciendo en lotes, con los siguientes parámetros:
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Fórmula empírica biomasa: CH2O0.5N0.2 (MWB = 24,8 g DCW / mol)
Volumen de medio de cultivo en el reactor: 100 L
Cantidad de inóculo bacteriano inicial: 0,01 g DCW / L.
Tasa de flujo volumétrico de los gases de burbujeo: 40 L / min. (El gas del espacio de
cabeza por encima de la cultura se le permite escapar hacia el medio ambiente a la misma
tasa volúmetrica o caudal de los gases que se burbujea)
Composición de los gases de burbujeo: 20 mol% de O2 (8,6 mM), 0,5% en moles de CO2
MO2 (equilibrio de fase constante): 40
Fuente de carbono: glucosa (C6H12O6; PM = 180 g / mol)
La concentración de glucosa inicial: 20 g / L
Las bacterias no secretan ningún otro productos detectable a parte del CO2 y agua.
Al tiempo de 10 horas después posteriores al tiempo de la fase de latencia, las células se siguían
creciendo de manera exponencial, y se tomaron los siguientes datos:
mol% de O2 en el espacio de cabeza: 4,9%
mol% de CO2 en el espacio cabeza: 16,8%
Concentración de la biomasa: 5,0 g DCW / L
a. Estimar la tasa de crecimiento específico máxima, μmax.
b. Estimar la concentración de glucosa que queda en el medio cuando anteriormente se tomaron
los datos.
17. Este problema se trata con el análisis de bacterias de ácido butírico de fermentación, como se
considera en más detalle por Papoutsakis (Biotechnol Bioeng, 26: 174-187;1984). Se supone que
estas bacterias consumen glucosa y sales anaeróbicamente a la forma que contiene nitrógeno: la
biomasa, expresada como una fórmula empírica reducida CH pOnNq, butirato de (C4H8O2), acetato
de (C2H4O2), CO2, H2 y H2O. Otros productos que o bien no se acumulan o se producen en
cantidades insignificantes.
La vía metabólica, considerando sólo las especies que contienen carbono, se puede simplificar y se
escribe como sigue:
C6H12O6 → 6 CHpOnNq
C6H12O6 → 2 AcCoA + 2 CO2
AcCoA → C2H4O2
AcCoA + C2H4O2 → C4H8O2
El análisis adicional se basa en las siguientes observaciones:
(1) La biomasa es generalmente 46,2% de carbono en peso.
(2) El grado de reducción de la biomasa es generalmente igual a 4,29.
(3) El coeficiente de rendimiento de la biomasa es 40,0 g de glucosa DCW / mol.
(4) La relación molar de H2 / CO2 producido se encuentra que es 1,20.
a. Determinar el peso molecular empírica de la biomasa, MWB (g DCW / mol).
b. Calcule los grados de reducción para todas las especies distintas de la biomasa.
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c. Estimar los coeficientes de rendimiento de acetato y butirato (mol / mol de glucosa) en estas
condiciones.
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