22 de febrero del 2023
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA GENERAL
PRÁCTICA # 6
ESTRUCTURA Y CLASIFICACION DE PROTEINAS
Integrantes del equipo:
Abril Payan Gastelum – 216354
Itzel Janeth Lucero Ramírez 224283
Jennifer Denisse Cardenas Mendez 224105
Abraham Macías Vicuña 229117
1. INDICE
Introducción …………………………………………………………..3
Objetivo………………………………………………………………..
Materiales y métodos………………………………………………...
Resultados…………………………………………………………….
Discusión………………………………………………………………
Conclusión…………………………………………………………….
Bibliografía…………………………………………………………….
2. INDICE DE FIGURAS Y TABLAS
Tabla I. Tabla de los materiales y reactivos de la práctica…………………………
Figura I. Se marco cada tubo de una sustancia y se le agrego 1ml de cada una.
Figura II. Se le agregaron 1ml de Ácido Nítrico HNO3 a cada tubo de ensayo…..
Figura III. Se calentaron a baño maría………………………………………………….
Figura IV. Se dejo enfriara a temperatura ambiente durante 10mn…………………
Figura V. Se le agrego 1ml de Hidróxido de sodio 5M………………………………..
Figura VI. Se marco cada tubo de una sustancia y se le agrego 1ml de cada una..
Figura VII. Se le agrego 1ml de Biuret, se agitaron…………………………………….
Figura VIII. Después de agitar y observar su coloración……………………………..
Tabla II. Resultados del experimento 1………………………………………………..
Tabla lIl. Resultados del experimento 2 ……………………………………………….
1
INTRODUCCION
Las proteínas son moléculas biológicas de gran tamaño (macromoléculas), están
constituidas por la unión de varios cientos a miles de aminoácidos. En su
estructura podemos encontrar elementos como carbono, hidrógeno, oxígeno y
nitrógeno, además pueden combinarse con otros elementos como azufre, hierro,
fósforo, entre [Link] síntesis de proteínas se realiza durante el proceso de
traducción, siendo el resultado de la expresión del código genético. Las moléculas
de proteínas no son estructuras lineales, sino más bien estructuras complejas que
tienen plegamientos tridimensionales que les confieren diversidad de funciones.
(Yon, 2001)
Actualmente se han descrito cuatro niveles de estructuración, las cuales siguen un
orden de complejidad de acuerdo con su nivel de plegamiento. La conformación
final de cada una de estas macromoléculas tiene una influencia directa sobre la
función que cumple en el organismo.
OBJETIVO
MATERIALES Y METODOS
MATERIAL POR MATERIAL POR MESA: REACTIVOS:
EQUIPO:
10 tubos de ensaye 5 pipetas de 2 ml Solución de Biuret
1 gradilla 3 pipetas de 5ml Ácido nítrico (HNO3)
concentrado
1 vaso de precipitado 1 piseta Albumina, peptona y
gelatina 1%
Platina caliente Hidróxido de sodio 5N
(NaOH)
Tabla I. Tabla de los materiales y reactivos de la práctica.
1) En el experimento 1 Se prepararon una serie de tubos de acuerdo con
cómo se indicaba en la práctica, para después mezclar y calentar a baño de
2
agua a ebullición durante 5 min. y enfriar a temperatura ambiente durante
10 min. Luego se agregó sin mezclar 1 ml de Hidróxido de sodio 5N a todos
los tubos.
2) En el experimento 2 Se volvió a preparar nuevamente una serie de tubos de
acuerdo con la práctica, para después agitar y dejar reposar los tubos
durante 5 min. Observar la coloración y su intensidad.
RESULTADOS
Experimento 1 Reacción Xantoproteica
Figura I. Se marco cada tubo de una sustancia y se le agrego 1ml de cada una.
3
Figura II. Se le agregaron 1ml de Acido Nítrico HNO3 a cada tubo de ensayo.
Figura III. Se calentaron a baño maría.
Figura IV. Se dejo enfriara a temperatura ambiente durante 10mn.
Figura V. Se le agrego 1ml de Hidróxido de sodio 5M.
Experimento 2. Reacción de Biuret
4
Figura VI. Se marco cada tubo de una sustancia y se le agrego 1ml de cada una.
Figura VII. Se le agrego 1ml de Biuret, se agitaron.
Figura VIII. Después de agitar y observar su coloración.
Tubo Aminoácido Experimento 1
1 Agua destilada -
2 Albumina +
3 Gelatina -
4 Peptona +
5
5 Tirosina +
Tabla lI. Resultados del experimento 1
(+) Positivo “color naranja”
(-) Negativo
Tubo Aminoácido Experimento 2
1 Agua destilada -
2 Albumina ++
3 Gelatina ++
4 Peptona +
5 Tirosina -
Tabla llI. Resultados del experimento 2
(++) Violeta intenso
(+) Ligeramente coloreado
(-) No formación de color
CONCLUSION
CUESTIONATRIO
1.- Mencione dos reacciones que sirvan para cuantificar proteínas.
1) Ácido bicinconínico (BCA) Las características de esta técnica es que es un
ensayo colorimétrico donde la absorbancia será proporcional a la
concentración de proteína presente en la muestra. La reacción es dada en
dos pasos: Formación de complejos proteína-iones de cobre. Formación de
un quelato Cu-BCA que da lugar a una intensa coloración púrpura que
absorbe a 562nm.
2) Absorción ultravioleta (UV) Este método, mediante la medición de la
absorción característica que presentan el triptófano y la tirosina a 280nm,
estima la cantidad de proteína presente en la muestra.
6
2.- Las proteínas Bence Jones precipitan a una temperatura mayor de 60°C. Las
Crioglobulinas precipitan a una temperatura de 4°C. La albúmina de huevo
precipita a una temperatura mayor de 90°C y también precipita a un pH menor de
4.5. Explique el comportamiento de cada una de estas proteínas tomando en
cuenta los siguientes parámetros: Fuerza iónica del solvente, interacciones
electrostáticas soluto-solvente, agentes desacoplantes de la interacción soluto-
solvente.
Las proteínas de Bence Jones son complejos proteicos derivados de
inmunoglobulinas, estos tienden a precipitar a una temperatura mayor de 60 gros
debido a que al aumentar temperatura la energía cinética de las moléculas
aumenta lo que dificulta la formación de enlaces estables entre solutos y
disolvente, además de esto debido al carácter anfipático de las proteínas al
producir enlaces inestables esta sufre cambios estructurales que producen la
interacción del medio hidrófobo con el entorno acuoso lo que produce una
precipitación de la proteína. Las crioglobulinas se precipitan debido a que al estar
en bajas temperaturas los enlaces no son posibles de realizar y la energía cinética
de las moléculas es tan baja que no existe suficiente energía entre sí para la
realización de atracciones electroestáticas.
En el caso de la albumina, esta se ve afectada por el pH ya que esto afecta la
envoltura acuosa y las cadenas laterales de los aminoácidos constituyentes de las
proteínas de tal modo que las interacciones iónicas y electroestáticas se vuelven
difíciles de realizar y esto lleva a que la solubilidad sea mínima.
3.- Mencione que propiedades fisicoquímicas de la albúmina le permiten
interaccionar y transportar cualquier compuesto incluyendo hidrofóbicos a través
de un medio acuoso.
La albúmina es una proteína, por lo tanto, está conformada por una larga cadena
de aminoácidos que forman una estructura compleja tridimensional que le da sus
características químicas. La clara del huevo está compuesta por esta proteína.
7
También se encuentra en abundancia en el plasma sanguíneo de los humanos. La
albúmina es fundamental para el mantenimiento de la presión osmótica, necesaria
para la distribución correcta de los líquidos corporales entre el compartimento
intravascular y el extravascular, localizado entre los tejidos. La albúmina tiene
carga eléctrica negativa. La membrana basal del glomérulo renal también está
cargada negativamente, lo que impide la filtración glomerular de la albúmina a la
orina.
4.- El punto Isoeléctrico de la Gelatina es de 4.7 y el de la colágena es de 8.4. Se
sabe que la colágena es una proteína fibrilar precursora de la gelatina. Explique
porque hay una diferencia tan grande entre los puntos isoeléctricos de ambas.
El punto isoeléctrico del colágeno ocurre con un pH de aproximadamente 9. La
gelatina se produce por la hidrólisis parcial del colágeno. La gelatina tipo A,
producida mediante el procedimiento ácido, tiene un PI entre 8 y 9. La gelatina
alcalina tipo B tiene un PI entre 4,8 y 5,4. Estas diferencias son el resultado de la
desaminación parcial de glutamina y asparagina, respectivamente, en ácido
glutámico y ácido aspártico en el tratamiento previo alcalino de materias primas.
5.- El Ac. Tricloroacético, el Ac. Sulfosalicílico y el Ac. Fosfotúngstico tienen la
propiedad de precipitar proteínas. Cuál es el mecanismo fisicoquímico que ocurre
en esta precipitación.
Las moléculas de proteína pierden su carga neta y ya no son efectivamente
solvatadas, sino que interaccionan entre ellas formando aglomerados cada vez
más grandes, produciéndose la eventual precipitación. Se desnaturalizan.
BILBLIOGRAFIA
Bibliografía
Yon, J. (2001). Protein folding: a perspective for biology, medicine and biotechnology. En J. Yon,
Protein folding: a perspective for biology, medicine and biotechnology (págs. 419-435).
Francia: Brazilian Journal of Medical and Biological Research.
8
9