Asignatura BIOLOGÍA
SEMESTRE 2023-I
PRÁCTICAS DE LABORATORIO
PRÁCTICA N° 3
MICROSCOPÍA
I.- BASE TEÓRICA
Se define la microscopía como la observación de objetos muy pequeños bajo grandes aumentos. Los
aparatos que se usan para ello se denominan microscopios. En la medicina se usan la microscopía
especialmente para analizar tejidos, células, componentes sanguíneos y microorganismos. Normalmente
hay varios trabajos que preceden la observación de un material bajo el microscopio (p.e. cortes, técnicas de
color) que permiten una mejor observación, como puede ser la estructura de una célula. Con los
microscopios convencionales, microscopía de luz, se consigue un gran aumento del objeto a investigar a
través de un procedimiento de proyección en dos niveles. En este tipo de microscopía el microscopio
produce primeramente una imagen invertida real aumentada del objeto iluminado mediante el objetivo. En
un segundo paso se aumenta nuevamente esta imagen mediante el ocular. Los aumentos parciales del
objetivo y el ocular producen el aumento total. Cuando se requiere un gran aumento, o cuando se analizan
objetos muy pequeños, se usa un objetivo de inmersión por el que se aplica una gota de aceite sobre el
objeto a investigar para rellenar el espacio entre el objeto y el objetivo, lo que optimiza la capacidad de
resolución. El poder de resolución del ojo humano es de 0,2 mm es decir que para ver dos objetos
separados estos deben estar como mínimo a esa distancia.
La microscopía utiliza instrumentos especiales como la lupa y el microscopio (del griego mikros =
pequeño, skopein= observar), que permiten magnificar el tamaño de estructuras imperceptibles, para lo cual
emplea medidas de longitud que se detallan en la siguiente tabla.
El microscopio óptico es uno de los inventos que ha marcado un antes y un después en la historia de la
ciencia, especialmente en el campo de la biología y la medicina. Esencialmente se puede definir como un
instrumento que permite observar en un tamaño aumentado elementos que son imperceptibles a simple
vista.
Historia del microscopio
Antes de la invención del microscopio ya estaba ampliamente extendido el uso de lentes que permitían
observar una imagen de forma aumentada y que hoy en día se conocen como lupas. Las propiedades de
este tipo de lentes fueron detalladamente estudiadas por Roger Bacon en el siglo XIII.
No fue hasta finales del siglo XVI (1590) cuando Zacharias Janssen, un fabricante de anteojos holandés,
fabricó el primer microscopio compuesto. Este primer microscopio consistía en dos lentes montadas en un
tubo (de aquí el nombre de microscopio compuesto) y permitía amplificar una imagen hasta 9 veces. Esto
representó una mejora significativa respecto a los aumentos obtenidos mediante lupas, también conocidas
como microscopios simples.
Galileo Galilei (1612), también fabricó un microscopio combinando una lente convexa y una cóncava.
Giovanni Faber fue quien en 1625 utilizó por primera vez el término microscopio para referirse a este nuevo
invento.
Durante la segunda mitad del siglo XVII empiezan a aparecer las primeras obras científicas documentando
observaciones llevadas a cabo con el microscopio. La primera de estas obras se tituló Micrographia, fue
escrita por Robert Hooke y publicada en 1665. En ella se pueden encontrar ilustraciones de plantas e
insectos observados a través del microscopio.
Otro gran personaje de este período es Antonie van Leeuwenhoek, (1673), considerado el padre de la
microbiología. Este comerciante y científico holandés mejoró la calidad de los microscopios existentes hasta
el momento mediante la fabricación de mejores lentes. Esto le permitió descubrir las bacterias y los glóbulos
rojos en la sangre.
En 1828, W. Nicol desarrolla la microscopía con luz polarizada.
Robert Koch identifica, en el año 1880, los agentes bacterianos del cólera y de la tuberculosis y logra
colorearlos con tinte de anilina. En 1908, Köhler desarrolla el microscopio de fluorescencia. Lebedeff fabrica
el primer microscopio de interferencia en 1930. Dos años después, Zernike diseña el microscopio de
contraste de fases.
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El microscopio electrónico, obra de E. Ruska y M. Knoll, aparece en el año 1937. G. Binnig y H. Rohrer
inventan el microscopio de efecto túnel en 1981, que permite aumentos de cien millones de veces,
revelando la estructura atómica de las partículas.
Uno de los fabricantes de microscopios más importantes del siglo XIX fue Carl Zeiss.
Tipos de microscopios
Según la fuente de luz, tenemos dos tipos: ópticos y electrónicos
1.- Dentro de los microscopios ópticos tenemos:
a) Microscopio fotónico simple o lupa: es un instrumento de amplificación de imágenes que consiste en
la utilización de uno o dos lentes convergentes en un solo sistema óptico. Aumenta la imagen de la
muestra a observar alrededor de 10 a 15 veces. Con este instrumento se pueden ver objetos densos
como hojas de vegetales, patas de insectos, cabellos, etc.
b) Microscopio fotónico compuesto: son los instrumentos más utilizados en el estudio de células y
tejidos. Se denominan compuestos porque la imagen se forma mediante la utilización de tres sistemas
de lentes, cada uno de ellos constituidos por lentes convergentes y divergentes. Los sistemas de lentes
son el condensador, los objetivos y los oculares. El aumento total de la imagen del microscopio
compuesto se obtiene multiplicando el aumento propio del objetivo por el aumento propio del ocular. Con
estos instrumentos pueden observarse distintos tipos de células animales como glóbulos rojos, glóbulos
blancos, espermatozoides o neuronas, y células vegetales con sus respectivas organelas como
cloroplastos y vacuolas, entre otras. También es posible identificar diferentes clases de bacterias,
hongos, huevos de parásitos y muchas estructuras de dimensiones microscópicas. En todos los casos, el
material a observar es transparente y atravesado por una fuente luminosa, de luz natural o luz eléctrica.
2.- Microscopio electrónico: Funciona mediante el uso de ondas electrónicas como fuente de luz. El
"bombardeo" de electrones permite obtener imágenes ampliadas de la muestra, las que se proyectan sobre
una pantalla como la del televisor. La ventaja de los microscopios electrónicos frente a los ópticos está en
que la longitud de onda del haz de luz aumenta la resolución. La principal característica de este tipo de
microscopio es que se utiliza un haz de electrones en lugar de un haz de luz para generar la imagen de la
muestra. Esto requiere encerrar la muestra en una pequeña cámara donde se produce el vacío para permitir
hacer un barrido de la muestra con electrones. Algunos de estos electrones son reflejados o reemitidos por
la muestra e impactan en una pantalla que a continuación permite reconstruir la imagen de la muestra. Los
dos tipos de microscopio electrónico más utilizados son el microscopio electrónico de transmisión y el
microscopio electrónico de barrido. Los microscopios electrónicos pueden aumentar la imagen de un objeto
hasta un millón de veces o más.
Partes del microscopio óptico
En un microscopio óptico podemos distinguir entre el sistema óptico y el sistema mecánico.
- El sistema óptico incluye el conjunto de lentes y elementos de manipulación de la luz necesarios para
generar una imagen aumentada.
- El sistema mecánico proporciona el soporte estructural a los anteriores elementos. (Observe la
fotografía que muestra las partes esenciales del microscopio óptico)
Dentro del sistema óptico se incluye un foco (también
denominado fuente de luz) que emite rayos de luz
dirigidos hacia la muestra. Antes de llegar a la muestra
los rayos atraviesan un condensador, la función del
cual es concentrar los rayos de luz sobre la preparación
a observar. Habitualmente el condensador está
acoplado con un diafragma para regular la cantidad de
luz incidente. El siguiente elemento óptico es el
objetivo. Esta parte del microscopio consiste
básicamente en un conjunto de lentes que reciben la luz
proveniente de la muestra y permiten aumentar la
imagen observada. Se distinguen dos tipos: Objetivos
en seco: En éstos, el aire se interpone entre la lente y el
preparado. Los objetivos más comúnmente utilizados
son de 4, 10, y 40 x. Objetivos de inmersión: Se distinguen de los anteriores porque entre la lente y el
preparado se debe interponer un medio transparente. El medio utilizado es un aceite de inmersión, como
por ejemplo el aceite de cedro. Son aptos para la observación de bacterias, finas estructuras, etc.
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En cuanto al sistema mecánico hay en primer lugar una base o pie que permite mantener el microscopio
en posición estable. El brazo es la estructura principal del microscopio y conecta la base con el sistema
óptico. El sistema mecánico incluye también la platina, es decir, la pieza horizontal donde se coloca la
muestra. La platina no está conectada de forma fija con el brazo, sino que su posición se puede regular
mediante los tornillos macrométrico y micrométrico. El revólver es la parte del microscopio donde están
montados los objetivos, normalmente 3 ó 4, y que puede girar para seleccionar el objetivo deseado.
Finalmente, el tubo conecta los objetivos con el ocular.
CUIDADO Y MANTENIMIENTO DEL MICROSCOPIO
- Cuando sea necesario cambiar el objetivo, girar el revólver dirigiendo la mirada hacia la lente, para controlar que no se
choque con el preparado. Nunca cambiar de objetivo mientras se observa por el ocular.
- Usar con delicadeza los componentes móviles del microscopio como tornillos, platina, condensador y revólver.
- Si se derramó algún líquido sobre la platina secarla con un trapo limpio.
- Si se utilizó el objetivo de inmersión, limpiarlo suavemente con papel de óptica. Si quedó aceite pegado a la lente,
limpiar con un trapo humedecido en xilol.
- Nunca tomar el microscopio del tubo o de la platina.
- Cuando sea necesario mover el microscopio de un lado a otro, tomarlo del brazo con una mano y de la base con la
otra.
- Al finalizar el trabajo, bajar la platina y colocar el objetivo de menor aumento en posición de observación.
- Controlar que no quede ninguna muestra sobre la platina.
- Cubrir el microscopio con una funda al terminar el trabajo.
- Esa conveniente que un técnico realice un ajuste, una limpieza y una revisión general del microscopio cada
seis meses.
II.- COMPETENCIAS:
Competencias cognitivas:
1) Identifica las partes de un microscopio.
2) Conoce la diversidad de microscopios.
Competencias procedimentales:
1) Ejecuta correctamente una observación microscópica.
2) Manipula con propiedad las partes básicas de un microscopio.
Competencias actitudinales:
1) Valora el conocimiento brindado en el desarrollo de la práctica.
2) Trabajar en equipo fortaleciendo los valores de respeto, y solidaridad.
III.- MATERIALES Y MÉTODOS
1. Vestimenta de laboratorio..
2. Guía de práctica.
3. Microscopios ópticos
4. Metodología descriptiva y explicativa
IV.- PARTE EXPERIMENTAL
Experiencia 1.- PASOS PARA LA OBSERVACIÓN DE MUESTRAS
Objetivos secos (4X, 10X y 40X)
1) Bajar completamente la platina utilizando el tornillo macrométrico.
2) Colocar el objetivo de menor aumento en posición hacia la platina girando el revólver.
3) Ubicar el portaobjetos que contiene el preparado en la platina y sujetarlo correctamente.
4) Sin mirar por el ocular, iniciar el enfoque girando el macrométrico para situar la platina lo más cerca del objetivo
de menor aumento.
5) Observando a través del ocular, bajar lentamente la platina girando el tornillo macrométrico para ir alejando el
preparado del objetivo.
6) Ni bien se vea una imagen poco nítida o borrosa, girar el tornillo micrométrico hasta obtener un enfoque
perfecto.
7) Para obtener una visión más detallada, cambiar el objetivo por otro de mayor aumento. Es probable que al
realizar esta maniobra desaparezca la imagen anterior, con lo cual hay que volver a utilizar el objetivo anterior y
repetir los pasos señalados. Otra opción es girar lentamente el tornillo micrométrico hasta obtener una imagen
bien focalizada. Tener presente que el objetivo de 40X, al posicionarse muy cerca del portaobjetos, puede
dañar el preparado al ejercer presión sobre el mismo.
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Objetivo de inmersión (100X)
1) Bajar completamente la platina utilizando el tornillo macrométrico.
2) Subir al máximo el condensador para que pueda verse sobre el preparado un círculo bien iluminado, sobre el
cual se depositará el aceite de cedro.
3) Para tener espacio cuando se deposita el aceite, girar el revólver hasta que el objetivo de inmersión y el que
está al lado queden en posición intermedia, es decir, que ambas lentes no estén dirigidas hacia la muestra.
4) Colocar en el círculo iluminado una sola gota de aceite de cedro.
5) Girar el revólver para posicionar sobre el preparado el objetivo de inmersión.
6) Subir lentamente la platina con el tornillo macrométrico hasta que el objetivo contacte con la gota de aceite.
7) Observar a través del ocular y girar el tornillo micrométrico hasta obtener una imagen nítida de la muestra a
observar.
Al terminar la observación, bajar la platina y girar el revólver para colocar el objetivo de menor aumento en posición.
Retirar el preparado y limpiar el objetivo de inmersión con papel para óptica.
VI.- RESULTADOS DE LA PRÁCTICA
A. Investigue:
¿Cuál es el máximo aumento que puede alcanzarse con un microscopio óptico?
¿Cómo se llama el microscopio que permite observar la muestra en tres dimensiones?
B. Resolver el pasito.
VII.- LITERATURA CONSULTADA:
1. [Link]/El_Microscopio.htm
2. [Link]
3. [Link]/.../ola_aboutolympus_microscopes_esp
4. [Link]/tipos-de-microscopios/
5. [Link]/dianabohorquez35/el-microscopio-38491822
6. microscopía. César E. Montalvo Arenas. Agosto de 2010.
[Link]
7. [Link]
8. [Link]
9. [Link]
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PRÁCTICA Nº 3: MICROSCOPIO: PARTES, MANEJO Y CLASES
INSTRUMENTO DE EVALUACIÓN DE COMPETENCIAS
Estudiante: ……………………………………………………..………………………..………………………………Grupo:………. Fecha: 13 marzo 2023
COMPETENCIA DESCRIPCIÓN PUNTAJES
DEFINE LOS CONCEPTOS BÁSICOS:
SE EVALÚA LA PARTICIPACIÓN ORAL Y/0 ESCRITA Ningún concepto 02 Conceptos básicos 03 Conceptos básicos 04 conceptos
1. Instrucciones generales
COGNITIVO
2. Importancia del microscopio
(8 puntos)
3. Historia del microscopio
0 2 3 4
4. Partes y uso del microscopio
Nota: ________
5. Clases de microscopios
PASITO ESCRITO
0 2 3 4
(4 preguntas)
Distingue y acciona con Reconoce y utiliza
No reconoce Conoce poco
RECONOCE Y EMPLEA: dificultad correctamente
1. Identifica las partes del microscopio
PROCEDIMENTAL 2. Señala el uso de dichas partes del microscopio 0 2 3 4
(8 puntos)
CONOCE Y TRABAJA LA TÉCNICA EJECUTORIA No conoce ni Conoce y trabaja con Conoce y trabaja
Conoce o trabaja poco
Nota: ________ 1. Manipula las partes del microscopio trabaja dificultad correctamente
2. Lleva a observación microscópicas las muestras
3. Utiliza el procedimiento para observación microscópica 0 2 3 4
TRABAJA EN EQUIPO, DESARROLLA LA PRÁCTICA Y Trabajo deficiente, se Buen trabajo, se
No trabaja Trabajo discreto, se
CUMPLE CON LAS COMPETENCIAS refleja muy poco en refleja claramente
guía, explicaciones refleja en resultados y
1. ¿Llega puntualmente a la práctica y correctamente resultados y en resultados y
aisladas conclusiones limitados
ACTITUDINAL vestido? conclusiones conclusiones
(4 puntos) 2. ¿Trae el mapa conceptual correspondiente y la Guía de
Nota: ________ Autoevaluación resueltas?
3. ¿Es proactivo en responder apropiadamente? 0 2 3 4
4. ¿Respeta la clase y las indicaciones del profesor,
trabajando en equipo?
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