Universidad del Valle de México
Practica numero 3: Tinciones especiales
Briones Salazar Ana Victoria, José Alberto Maldonado Barajas, Luis Ángel Padilla
Pacheco
Asignatura: Microbiología
Licenciatura QFBT
Periodo 2021-2
Fecha de entrega: 11 / 09/ 2021
Docente: Dra. Abril Ivett Priscilla Gómez Guzmán
RESUMEN
Tinciones especiales solo requeridas en ciertas ocasiones que ameritan hacer esto, como lo
son las tinción de cápsulas, endosporas y flagelos, ya que son microorganismos más difíciles
de resaltar requieren una tinción especial, puede ser con tinta china o azul de metileno, ambas
tinciones resaltan muy bien a estos microorganismos por lo cual solo suelen ser utilizadas
para esto.
Palabras clave: Tinción, Endoesporas, tinta china, metileno azul, flagelos cápsula
bacteriana.
INTRODUCCIÓN
De acuerdo con J. Tortora, G., R. Funke, especiales se utilizan para colorear y aislar
B., & L. Case, C. (2007) “Las tinciones partes específicas de microorganismos,
como endosporas y flagelos, y para defensa que pone en juego el huésped ante
detectar la presencia de cápsulas (P.71)” la presencia de bacterias capsuladas. Una
respuesta efectiva para defenderse de este
Tinción negativas para cápsulas
tipo de bacterias implica la producción de
Varios microorganismos contienen una anticuerpos que se unan específicamente a
cubierta gelatinosa denominada cápsula la cápsula facilitando la opsonización y la
que se describe cuando se examinan las fagocitosis. Schaechter M, Medoff G,
células procariotas [...] La presencia de Eisenstein BI, Guerra H. (1993).
una cápsula es un medio para determinar la
La tinción de la cápsula es más difícil que
virulencia del microorganismo, es decir el
otros tipos de procedimientos de tinción
grado hasta el cual un patógeno puede
por que los materiales capsulares son
causar enfermedad. J. Tortora, G., R.
hidrosolubles y pueden desprenderse o
Funke, B., & L. Case, C. (2007).
eliminarse durante los lavados rigurosos.
La cápsula está ubicada por fuera de la Para demostrar la presencia de cápsula se
pared celular. Las bacterias producen puede mezclar las bacterias en una
material capsular que, cuando se asocia solución que contenga una suspensión
íntimamente a la superficie celular recibe coloidal fina de partículas coloreadas (por
el nombre de cápsula. Si su adherencia es lo general tinta china o nigrosina) que
débil y de grosor variable, se conoce como proporcione un fondo que contraste y
limo. [...] No es una estructura vital para la luego teñir las bacterias com un colorante
célula, su pérdida no se relaciona con la simple, como la safranina. Debido a su
pérdida de viabilidad celular, pero sí con composición química las cápsulas no
cambios de la morfología colonial y con la aceptan la mayoría de los colorantes
pérdida de la virulencia biológicos, como la safranina, y así
[Link] M, Medoff G, aparecen como halos que rodean cada
Eisenstein BI, Guerra H. (1993). célula bacteriana teñida. J. Tortora, G., R.
Funke, B., & L. Case, C. (2007).
La virulencia de algunos patógenos se
correlaciona con la presencia de cápsula,
como por ejemplo: Streptococcus
pneumoniae y Haemophilus influenzae
tipo b. La cápsula protege a la bacteria de
la fagocitosis, principal mecanismo de
características extraordinarias de la
resistencia de endosporas los hacen de
importancia particular porque no son
matadas fácilmente por muchos
tratamientos antimicrobianos. Una
variedad de diversos microorganismos
forma las "esporas" o los "quistes", pero
las endosporas de bacterias Gram-positivo
y de bajo contenido de G+C son en gran
Fig.1. Cápsula bacteriana de un
medida los más resistentes a las
microorganismo vista desde un
condiciones á[Link] of Agriculture
microscopio de transmisión
and Life Sciences. (2021).
Tinción para endosporas (Esporas)
La más utilizada para este fin es la tinción
Una endospora es una estructura especial, de Schaeffer Fulton para endosporas. Se
resistente y latente que se forma dentro de aplica el colorante primario verde de
una célula y que protege a una bacteria de malaquita a un extendido fijado con calor
las condiciones ambientales adversas. y se lo calienta hasta la emisión de vapores
Aunque las endosporas son relativamente durante alrededor de 5 minutos. El calor
inusuales en las células bacterianas, ayuda a que el colorante atraviese la pared
pueden ser formadas por algunas bacterias. de la endospora. Luego se lava el
Las endosporas no se tiñen con los preparado con agua durante cerca de 30
métodos comunes, como la tinción simple segundos para eliminar el verde de
y la tinción de Gram, porque estos malaquita de todas las partes de las células
colorantes no atraviesan sus paredes. J. salvo las endosporas. A continuación se
Tortora, G., R. Funke, B., & L. Case, C. aplica sobre el extendido safranina, un
(2007) colorante de contraste, para teñir las
porciones de la célula distintas de las
Las endosporas pueden sobrevivir a los endosporas. En un extendido preparado de
asaltos ambientales que matarían modo adecuado las endosporas aparecen
normalmente a las bacterias. Estos estreses verdes dentro de células rojas 0 rosadas.
incluyen temperatura alta, la alta Como las endosporas presentan un índice
irradiación UV, la desecación, el daño de refracción alto se las puede detectar con
químico y la destrucción enzimática. Las el microscopio óptico cuando no están
teñidas pero no se las puede diferenciar de Los flagelos pueden variar en número,
las inclusiones de material reserva sin una desde uno a cientos. Las especies
tinción especial. J. Tortora, G., R. Funke, bacterianas difieren por sus modelos de
B., & L. Case, C. (2007). distribución de flagelos. Las monotricas
(trichous: pelo) tienen un solo flagelo que
se sitúa en un extremo de la bacteria y se
denomina polar. Las bacterias anfitriones
(amphi: en ambos lados) tienen un flagelo
en cada polo bacteriano. En cambio, las
lofotricas (lopho: mechón) poseen un
grupo o penacho de flagelos en uno o
ambos extremos. Por último, en las
bacterias peritricas (peri: alrededor), los
flagelos se distribuyen uniformemente en
Fig. 2. Endospora vista desde un toda la superficie bacteriana. Los modelos
microscopio de transmisión de distribución de los flagelos son útiles
para identificar a las bacterias. Los
Tinción para flagelos
flagelos no son necesarios para la vida
Los flagelos son filamentos proteicos, bacteriana. Su síntesis está regulada por las
helicoidales, delgados y rígidos, de necesidades nutricionales o el estado
longitud y diámetro uniforme, energético y ocurre por la adición de
responsables de la movilidad de la monómeros de flagelina al extremo distal
bacteria. Los flagelos son tan delgados que de los flagelos en crecimiento. La síntesis
no pueden observarse directamente con un del filamento es un ejemplo excelente de
microscopio de campo claro, deben teñirse autoensamblaje, es decir que la
con técnicas especiales para aumentar su información necesaria para construir el
grosor. La estructura detallada de un filamento está en la propia estructura de la
flagelo puede verse solo con el subunidad de flagelina; no colaboran
microscopio electrónico; así es que se ha enzimas especiales u otros factores. Las
demostrado que el flagelo bacteriano está bacterias flageladas pueden buscar
compuesto de tres partes: el filamento, el nutrientes o evitar los tóxicos siguiendo
gancho y el cuerpo basal. los gradientes; la función flagelar se debe a
respuestas quimiotácticas y la energía para
el movimiento proviene de una corriente
de protones. Schaechter M, Medoff G, muy distinto a lo demás, sin embargo la
Eisenstein BI, Guerra H. (1993). práctica y conocimiento de este método es
nula.
Los flagelos bacterianos son estructuras de
locomoción demasiado pequeñas para ser JUSTIFICACIÓN
vistas con un microscopio óptico sin
Una vez que se logre hacer la tinción
tinción. Hay un procedimiento tedioso y
especial en los microorganismos que se
delicado que se basa en el empleo de un
desea analizar podremos observarlos con
mordiente y el colorante carbolfucsina
claridad en el microscopio si se realizó
para aumentar los diámetros de los
adecuadamente todo podremos y sabremos
flagelos hasta que se tornen visibles con el
realizar y describir las características de
microscopio óptico. Con ayudas
esto ya que esto se hace con el fin de ver la
diagnósticas adicionales los microbiólogos
anatomía de estos organismos.
utilizan la cantidad y la disposición de los
flagelos. J. Tortora, G., R. Funke, B., & L. OBJETIVOS
Case, C. (2007).
Generales
Saber hacer la tinción especial de una
manera correcta para no contaminar ni la
muestra y se logre ver en el microscopio.
Específicos
● ver la anatomía externa de estos
organismos y si se logra ver algo
de su estructura interna.
Fig. 3. Flagelos de microorganismos vistas ● Saber hacer una tinción especial de
desde un microscopio de transmisión la mejor manera.
● Conocer los componentes de la
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA tinta y ver como reacciona con los
microorganismos.
La identificación de los microorganismos
● Conocer los microorganismos que
más pequeños resulta difícil, el saber
por lo general son patógenos
preparar la muestra lleva una variedad de
pasos aún no experimentados aunque no es
(virus) y realizar una investigación RESULTADOS
más profunda sobre ellos.
HIPÓTESIS
Si la tinta puede resaltar los
microorganismos que queremos ver, esta
tinta tiene que ser lo suficientemente
adherible solo a ellos para poder
resaltarlos y que no se quita al retirar el
exceso, sobre todo ya que es a un nivel
microscópico donde es de mucha
importancia que pase la luz del
microscopio rodeando la estructura y
poder identificarlos. Fig. 4 muestra de heces con tinta china
con ampliación de 4x
MÉTODO
El método de este proceso puede variar un
poco dependiendo de la tinta a utilizar en
el caso de la tinta china es primero lavar
perfectamente el área de trabajo y el
material a utilizar, se tomarán las muestras
con ayuda de un asa de nicromo ya
esterilizada por medio de fuego
(normalmente con el mechero) en seguida
se colocan en el portaobjetos y en caso de
que esta muestra sea líquida solo se coloca
una gota de solución salina, colocar el
cubreobjetos sobre la muestra y dejar caer Fig. 5 muestra de heces con tinta china
por las esquinas del cubreobjetos una gota con ampliación de 10x
de tinta china, listo ahora se podrá analizar
con lentes de 4x, 10x y 40x
respectivamente.
tinta china con ampliación de 40x
Fig. 6 muestra de heces con azul de
Fig. 8 muestra de bacteria frankia con
metileno con ampliación de 4x
tinta china con ampliación de 100 x
Fig. 7 muestra de bacteria frankia con
Fig. 9 Bacteria Frankia con azul de
metileno con ampliación de 4x
ANÁLISIS DE RESULTADOS
Gracias a las tinciones realizadas en esta
práctica se pudieron distinguir varios
microorganismos, como en la figura 11
pequeños bacilos.
Se observaron ciertas similitudes como en
la figura 6 a cerca de la muestra de heces
con azul de metileno con una ampliación
de 4x al igual que en la figura 10 de la
bacteria Frankia con azul de metileno con
ampliación de 40x, probablemente con
distintas ampliaciones pero con la
morfología visiblemente similar.
Para la realización de estas muestras
Fig. 10 Bacteria Frankia con azul de primeramente se tuvo que esterilizar el
metileno con ampliación de 40x lazo para que con la ayuda del mismo
tomar un poco de muestra encima de la
placa de vidrio para después calentarlo y
así que puedan morir los microorganismos,
acto seguido se colocó un portaobjetos
para introducir dentro del mismo ya sea la
tinta china o azul de metileno.
Debido a las investigaciones realizadas en
la introducción de la práctica sabemos
diferenciar las distintas diferencias de cada
tinción y para qué nos serviría cada una.
CONCLUSIONES
Las tinciones especiales son muy útiles
Fig. 11 Bacteria Frankia con ampliación como pudimos ver pero no en todas las
de 100x ocasiones, la forma de preparación no es
muy distinta a las otras tinciones solo
varían un poco mas de pasos, la diferencia
de estas es nada más el tipo de
microorganismos en las que se utilizan, se
tiene en cuenta que este al ser tinción
especial debe ser con más cuidado ya que
la colocación de la tinta es de una forma
diferente.
REFERENCIAS
J. Tortora, G., R. Funke, B., & L. Case, C.
(2007). Introducción a la microbiología
(9.a ed.). Ed. Médica Panamericana.
College of Agriculture and Life Sciences.
(2021). Endospora de Bacterias |
Department of Microbiology. Department
of Microbiology.
[Link]
cium/espanol/endospora-de-bacterias/
Schaechter M, Medoff G, Eisenstein BI,
Guerra H. (1993). Microbiología.
Mecanismos de las enfermedades
infecciosas. Ed Panamericana. 2ª ed.
Buenos Aires