Universidad de Guayaquil
Facultad de Ciencias Químicas
Bioquímica y Farmacia
Informe de Laboratorio Inmunología
N° 11 ANALISIS DE AlFAFETOPROTEINA POR TECNICA ELISA
Nombre: Semestre: Sexto
Docente: QF. Lourdes Suarez Camacho Grupo: 2B
Objetivos de la práctica de laboratorio
Determinación cuantitativa de la concentración de AlfaFetoproteína (AFP) en suero humano
mediante el inmunoensayo enzimométrico de microplacas.
Marco Teórico.
La AFP (alfafetoproteína) es una prueba que se utiliza principalmente para medir los niveles de
alfafetoproteína en la sangre de una mujer embarazada. La prueba revisa el riesgo del bebé de
tener ciertos problemas genéticos y defectos de nacimiento. Una prueba AFP generalmente se
realiza entre las semanas 15 y 20 del embarazo.
La AFP es una proteína que producen los bebés en desarrollo. Normalmente, algo de AFP pasa
del bebé al torrente sanguíneo de la mujer embarazada. Ciertas condiciones pueden hacer que el
cuerpo de un bebé libere más o menos AFP. Durante el embarazo, si sus niveles de AFP
sanguíneo son más altos o más bajos de lo normal puede ser un signo de que:
El bebé tiene un riesgo alto de tener un trastorno genético como: Un defecto del tubo neural, lo
cual es un problema serio que causa desarrollo anormal del cerebro o espina dorsal de un bebé en
desarrollo.
Síndrome de Down, un trastorno genético que causa discapacidades intelectuales y otros
problemas de salud
Su fecha estimada de parto es equivocada. Los niveles de AFP normalmente se elevan o
disminuyen en ciertos puntos del embarazo, por ello, un nivel anormal de AFP puede significar que
la fecha de nacimiento de su bebé es antes o después de la fecha estimada. Ésta es la razón más
común de niveles anormales de AFP
Usted tiene un embarazo múltiple con más de un bebé. Cada bebé produce AFP, por ello sus
niveles de AFP sanguíneo serán más altos con dos o más bebés. (Salazar G, 2018)
La prueba de sangre de AFP se usa durante el embarazo para examinar el riesgo de defectos
de nacimiento y trastornos genéticos, como defecto del tubo neural o síndrome de Down. LA
prueba no diagnostica ninguna afección. Si sus resultados de prueba AFP no son normales,
significa que usted necesitará más pruebas para averiguar su bebé tiene un problema de salud.
Para las personas que no están embarazadas, una prueba de AFP puede utilizarse para ayudar
a diagnosticar ciertos tipos de cáncer que pueden causar niveles altos de AFP en adultos. Cuando
la prueba se usa de esta forma, se llama prueba de marcador tumoral AFP.
FUNDAMENTO
Los reactivos esenciales requeridos para un inmunoensayo enzimométrico incluyen anticuerpos
altamente afines y específicos (enzima e inmovilizados), con reconocimiento de epítopes
claramente diferenciados, en exceso, con antígenos nativos. De acuerdo con este procedimiento,
la inmovilización tiene lugar durante el ensayo en la superficie de los pocillos de la microplaca a
través de la interacción de streptadivina que recubre el pozo y el anticuerpo anti-AFP monoclonal
marcado con biotina agregado en forma exógena. Al mezclar el anticuerpo marcado con biotina
monoclonal, el anticuerpo marcado con enzima y el suero que contiene el antígeno nativo, da lugar
a una reacción entre el antígeno nativo y los anticuerpos, sin competencia u impedimentos
estéricos, para formar un complejo soluble tipo sándwich.
Simultáneamente, el complejo es depositado en el pozo a través de la reacción de alta afinidad
de la estreptavidina y el anticuerpo marcado con biotina.
Después de lograr el equilibrio, la fracción anticuerpo unido se separa del antígeno no ligado
mediante decantación o aspiración. La actividad enzimática en la fracción de anticuerpo unido será
directamente proporcional a la concentración del antígeno nativo. Al utilizar varias referencias de
sueros de valores conocidos de antígenos, se genera una curva de dosis respuesta a partir de la
cual se evalúa la concentración de antígeno de una muestra desconocida. (F., 2009)
Reactivos de laboratorio
1. Alfafetoproteína (AFP) – 1ml/vial- Iconos A- F Seis (6) viales de antígeno CEA de
referencia en los niveles de 0 (A), 5 (B), 25 (C), 50 (D) 250 (E) y 500(F) ng/ml
2. Reactivo enzimático AFP- 13 ml
3. Concentrado de solución de lavado
4. Sustrato A– 7 ml/
5. Sustrato B – 7 ml/vial
6. Solución de parada – 8ml
Materiales de laboratorio.
1. Placa: 96 micropocillos
2. Papel de cocina
3. Micro pipetas
4. Viales
5. Tubos recolectores
Equipos de laboratorio
Espectrofotómetro
Procedimiento
Resultados obtenidos
CALIBRADORES CONCENTRACIÓN
ESTANDAR ng/ml
CALIBRAD
OR F 500 2.672
CALIBRAD
OR E 250 1.99
CALIBRAD
OR D 50 0.594
CALIBRAD
OR C 25 0.335
CALIBRAD
OR B 5 0.098
CALIBRAD
OR A 0 0.011
PACIENTE 33,2 0.42
3.000 CALIBRADORES VS CONCENTRACIÓN
2.500
2.000
1.500
1.000
0.500 PACIENTE
0.000
0 100 200 300 400 500 600
El paciente presentó valores normales de AFP en plasma entre 33, 2 ng/ml.
Valores por encima de 100 o 300 ng/ ml de AFP indican algún tipo de carcinoma normalmente
del tipo hepatocelular.
Conclusión
Estas pruebas tienen una alta capacidad diagnóstica y poder predictivo para la ocurrencia de
esta patología en embarazadas con factores de riesgo. Por lo tanto, en concentraciones anormales
de este marcador en gestantes con fetos sin defectos congénitos, debe orientar al clínico a la
prevención y detección oportuna tanto de PP como de otras complicaciones e integrarlos a la
asesoría de riesgo, para evitar las secuelas de las mismas.
Recomendaciones
Tener cuidado a la hora de manipular material como agujas
Leer cuidadosamente la práctica antes de realizarla
No contaminar las sustancias reactivas.
Desechar los productos usados como residuos bio-peligrosos.
No mezclar componentes de lotes diferentes.
Bibliografía
Prueba de AFP (alfafetoproteína). (s. f.). Recuperado 22 de septiembre de 2022, de
[Link]
Salazar G, Faneite P, Pineda F. Capacidad de la alfa-fetoproteína en suero materno como
marcador predictivo de parto pretérmino. Rev Obstet Ginecol Venez 2009;69 (4):219-25.