HONGOS
Reino: fungi
Eucariotas
Heterotrofos
PARED CELULAR
Capa de Capa de estructuras
polímeros
amorfas
Ag de la
pared
Sintetizan glucógeno para almacenar glucosa.
CLASIFICACIÓN
Levaduras
Hongos Hongos dimórficos
filamentosos: setas,
mohos
Unicelulares
Pluricelulares
3-30
Disposición lineal: HIFAS
un
Esféricas, ovoides
Algunas forman
cadenas de
pseudohifas Tabicadas Cenocíticas
MICELIO: conjunto entrelazado de hifas
Reproducción
Sexual
Asexual Esporas sexuales: gametangios. Intervienen 2
células y hay recombinación de material genético
División celular
Zigosporas
Ascosporas. Basidiosporas
Se forma una espora: Se forman Se forman en el
Conidio Paredes muy
gruesas. Se dentro de un extremo de las
saco células
forman por
fusión de 2 longitudinal. especializadas
Bipartición
Gemación
células (asca).
(Basidios)
Se forman División celular Ascomicetos Basidiomicetos
Se mantiene la situadas en los
2 células en la hifa
célula madre y extremos de 2
idénticas a (hongos
se forma otra hifas.
la maadre. filamentosos)
pequeña (gema) Zigomicetos
Artrosporas
Clamidosporas
Esporangioesporas
Extremo Conidioesporas
Formación
r de Se forman dentro de
distal de las Se forman en el
bolsas ovoides un saco (esporangio)
hifas extremo de una hifa
en el extremo en el extremo de una ramificada:
o zona hifa conidióforo
intermedia de
la hifa
Enfermedades producidas por hongos
Infecciones: micosis
Hipersensibilidad Intoxicaciones
Sistémicas
Micotoxicosis Micetismos
Subcutáneas Profundas
Superficiales
Micosis superficiales
Estrato córneo de la piel
Porción suprafolicular del pelo
Mucosas
Uñas
Tiña capilar. Dermatofitos
(Trichophyton, Microsporum,
Epidermophyton)
tiña corporal. dermatofitos
Pitiriasis versicular (Trichophyton,
(Malassezia)
Microsporum y
Epidermophyton)
Candidiasis Candidiasis oral
Micosis subcutáneas
Dermis
Son típicas las micosis subcutáneas en pies de
personas que andan descalzas
Crónicas
Micetoma
Esporotricosis. Se
expande por vías
linfáticas
Cromomicosis
Micosis profundas
Producidas por hongos patógenos
capaes de invadir tejidos profundos,
visceras
Criptococosis Blastomicosis Coccidiomicosis Histoplasmosis
Micosis sistémicas
Inmunodepresión
Cuadros clínicos inespecíficos
Candidiasis
Aspergilosis Zigomicosis
DIAGNÓSTICO DE LABORATORIO
Cultivo
Observación Observación Bioquímica
macroscópica microscópica
Recoger muestras con material estéril
No usar hisopos
No usar medios de transporte
No añadir conservante
Más cantidad de muestra que con bacterias
Antes de realizar el cultivo mirar muestra macroscópicamente (pus,
sangre, necrosis)
Cortar tejidos con tijeras o bisturí e. Inocular. Los trozos se inoculan
Las muestras de uñas se cortan y se pulverizan
Fluidiificar las muestras viscosas
Las muestras muy diluidas concentrar por centrifugación
Cultivos
Tiempo de cultivo: 3 semanas
Los medios de cultivo incluyen antimicrobianos
Ajuste de pH: ácido para evitar crecimiento de bacterias
Medios de cultivo
Sabouraud sin Agar (glucosado o dextrosa) de
antimicrobiano Sabouraud. Standard para aislamiento,
esporulación y conservación
Sabouraud con Generalmente se añade
antimicrobiano cloranfenicol o gentamicina
Para aislamiento
Medio con
Inhibe hongos, por ejemplo los
cicloheximida
saprófitos de la piel
BHIA ( Agar
infusión Para aislar muchos patógenos
cerebro (levaduras, mohos, bacterias)
corazón)
Agar agua. Para hifomicetes de pigmentación
Para identificación oscura
Agar de Staib. Para Cryptococcus neoformans
Agar Urea Christensen. Dermatofitos
CMA con Tween 80. Diferenciar Candidas
MEA. Para Aspergillus, Penicillium
Observación macroscópica
1-Levaduras. En agar Sabouraud:
Orientaciones:
-planas o algo convexas
• colonias con aspecto mucoide:
-Cremosas
Cryptococcus neoformans (por la
-Olor dulzón
formación de cápsula)
-Textura lisa o rugosa
• Micelio aéreo definido:
-generalmente de color blanco
Geotrichum, Trichosporon
• Colonias rojo anaranjadas:
Rhodotorula, Sporobolomyces
(ricas en carotenos)
2- Hongos filamentosos
Dermatofitos
En la superficie tienen plegamientos, surcos radiales, sectorización concéntrica, aspecto de cerebro.
Color: generalmente tienen color blanquecino, amarillento, pero hay excepciones: T. Violaceum es
púrpura oscuro y [Link] tiene el reverso rojo.
Zigomicetos
Colonias grisáceas
Aspecto algodonoso
Hifas cenocíticas
Forman esporangioesporas
Observación microscópica
Fresco:
◦piel
◦Uña
Se coloca muestra en porta y añadir gotas de KOH al 10%, cubrir y mirar
Cerrar un poco el
condensador para
que haya más
contraste
Disuelve la queratina y proteínas
celulares sin atacar la pared de
polisacáridos de los hongos
Tinciones:
• Muestras de tejidos
Colorantes básicos y ácidos
◦Tinción de Giemsa
Micetoma, histoplasmosis, coccidiomicosis,
micosis cutáneas con pus
Polisacáridos y glucógeno
◦Tinción PAS
Las hifas y esporas se tiñen de rosa intenso
Micetoma, coccidiomiiccosis, onicomicosis
Usan sales de plata
Se depositan sobre la pared celular
◦Tinciones argénticas
Las células fúngicas se tiñen de
marrón
Neumocistosis (Pneumociistis
jiirovecii)
• Muestras líquidas:
◦GRAM
Esporas
◦TINTTA CHINA:
Levaduras encapsuladas
Pseudohifas o hifas verdaderas
Pseudohifas + blastoconidios= gro
Candida, pero no especie albicans
Levaduras Esporas
Hifas + clamidosporas = Candida albicans
Hiifas + artroconidios = Trichosporon,
Tinción de Gram se ven Gram +
Geotrichum, Galactomyces
Estimular la formación de hifas, esporas:
Preparar agar de harina de maiz con Tween 80
Con un asa inocular una colonia aislada sobre el agar en 3 líneas paralelas
Colocar un cubre sobre la placa, cubriendo una de las líneas
Incubar a 30ºC 24-48h
Mirar al microscopio
Prueba del tubo germinal
Sólo Candida albicans produce tubos germinales
Extensión filamentosa de la levadura
En ttubo con 0,5ml de suero (conejo, humano) añadir colonia aislada
Incubar 35ºC 2 h
Colocar una gota sobbre porta, tapar con cubre y observar al microsccopio
Hongos filamentosos
Dermatofitos
Trichophyton:
Macronidos: pocos, forma de habanos pared fina
micronidios: muchos diferentes en función de la
especie
Epidermophyton:
Muchos macronidos, en forma de
porra, en racimos, pared gruesa,
Microsporum:
extremos redondeados. Muchas
clamidosporas.
Muchos macroconidios, de pared gruesa y
Sin microconidios
acabados en punta.
Pocos micronidios, alargados y en los laterales
de las hifas
Zigomicetos
Absidia, Rhizopus, Mucor, Saksenaea
Hifas cenocíticas
Esporangios
Estructuras que diferencian géneros de zigomicetos:
rizoide
Esporiangióforo
Columela
Apófisis
Hifomicetos
Aspergillus, Alternaria, Acremonium, Cladophialophora, Cladosporium,....
Hifas tabicadas
Cortos y agrupados como cojines: esporodoquios
Tienen conidióforos
Largos y agrupados como árboles: sinemas
Masas mucosas
Se ve con pocos aumentos
Disposición de Los conidios
Cadenas
Bioquímica
Cultivo de identificación para [Link] en medios cromogénicos:
CHROMOagar Candida: colonias de [Link] verde esmeralda, [Link] azul
oscuro con halo púrpura marrón, [Link] rosa con borde blanco,[Link] violeta
Cultivo de [Link] en medio fluorogénico:
Se añade un componente en el medio Se hidroliza por una enzima del
hongo Se produce un metabolito fluorescente Ver con luz UV
Sistemas rápidos de identificación: Bacticard Candida
PRO: sustrato para enzima L- prolina aminopeptidasa
MUGAL: sustrato para enzima beta-galactosaminidasa
1. Colocar 1 gota de fluido hidratante sobre cada círculo
2. Se inocula una porción de colonia aislada en cada círculo con la varilla aplicadora
3. Dejar la tarjeta a Tra ambiente 5 minutos
4. Añadir 1 gota del revelador del círculo PRO y esperar 30 segundos:
A. Rojo: +
B. Sin cambio de color: -
5. Añadir 1gota del revelador en el círculo MUGAL y ver color en la oscuridad con una lámpara
UV
A. Azul fluorescente: +
B. Sin fluorescencia: -
6. Si ambos son + es [Link]
Identificación de Crytococcus neoformas
Ureasa
1. Pasar aplicador impregnado en agar ureasa Christensen sobre 2-3 colonias
aisladas
2. Introducir el aplicador en un tubo con 3 gotas de cloruro de benzalconio al 1%
y presionar contra el fondo del tubo
3. Tapar el tubo
4. Incubar a 45ºC
5. Mirar el tubo a los 10, 15, 20 y 30 minutos de incubación
6. Rojo; prueba +
No hifas + ureasa positivo= Cryptococcus
Hifas + artroconidios+ ureasa positivo= Trichosporon
Hifas + artroconidios + ureasa negativo= Geotrichum
Nitratos
1. Se pasa aplicador con algodón sobre 2-3 colonias aisladas
2. Introducir el aplicador en un tubo vacío y presionar contra el fondo
3. Incubar tubo con aplicador a 45ºC 10 minutos
4. Quitar el aplicador
5. Añadir al tubo 2 gotas de alfanaftilamida y 2 de ácido sulfanílico
6. Volver a introducir el aplicador en el tubo
7. Color rojo en torunda +
Fenol oxidasa
Cultivo en medio TOC
Colonias marrón oscuras -negras
Dermatofitos
Ureasa
+ T. mentagrophytes
• T. rubrum
Auxonograma (levaduras)
Usar varios medios de cultivo con
Prueba Capacidad de
microbiológica levadura de asimilar
diferentes carbohidaratos y producros
nutrientes de un
nitrogenados
medio de cultivo
Sembrar colonia aaislada
Antifúngicos y sensibilidad a los mismos
Fluconazol
5-fluorocitosina
Anfotericina B
Antifúngicos Itraconazol
Ketoconazol
Posaconazol
Voriconazol
CLSI-M27-A3. Levaduras. Método de microdilución
CLSI CLSI-M44-A3. Levaduras. Método de difusión en disco
CLSI-M38-A2. Hongos filamentosos método de microdilución
Antifungigrama
Sensititre
Métodos comerciales
Fungitest
CLSI-M27-A3. Levaduras. Método de microdilución
Placa con 96 pocillos
Preparar diluciones de los antifúngicos
Colocar las diferentes diluciones en los pocillos (1 en cada)
Dejar 2 pocillos sin antifúngico para control (crecimiento y esterilidad)
Disolver colonia aislada en suero salino
Añadir una cantidad determinada en cada uno de los pocillos (la misma en
todos) salvo en 2
Incubar a 35C (Candida spp 48h y Cryptococcus spp 72h)
Lectura por espectrofotometría
El CLSI proporciona tablas para interpretar el resultado
CLSI-M44-A3. Levaduras. Método de difusión en disco
Preparar placas petri con agar Mueller-Hinton + glucosa 2% + azul de metileno 0,50microg/ml
Preparar una disolución de las levaduras en suero fisiológico
Sembrar una cantidad determinada de la disolución de colonia en la placa
Colocar discos impregnados con fluconazol sobre cada inóculo
Incubar la placa a 35ºC durante 20-24h para Candida spp y 48h para Cryptococcus spp.
En el resultado ver si hay halo o no
CLSI-M38-A2. Hongos filamentosos método de microdilución
Se usa para los géneros: Aspergillus, Fusarium, Rhizopus, para Pseudallescheria
boydii y Sporothrix Schenckii.
Es igual que el M27-A3, pero hay que cumplir unas condiciones:
Salvo en el género Fusarium el inóculo se prepara a partir de un cultivo de PDA
incubado durante 7 días a 35ºC, para inducir la formación de conidios o
esporangioesporas.
Para el género Fusarium se parte de un cultivo en PDA de 48-72h a 35ºC y después a
25-28ºC hasta el séptimo día.
Sensititre
Placas con diluciones seriadas de 6 antifúngicos (anfotericina B, fluconazol, itraconazol,
ketoconazol, 5-fluorocitosina y voriconazol) y un indicador colorimétrico.
Se introduce el inóculo en los pocillos
Se incuba 24h a 35ºC
Lectura visual con escala de referencia que viene con el dispositivo
Fungitest
Microplaca con 6 antifúngicos (anfotericina B, fluconazol, itraconazol, ketoconazol, 5-
fluorocitosina y miconazol)
r
Viene con 2 concentraciones diferentes de cada antifúngico
Inocular
Incubar
Lectura:
Azul: no hay crecimiento
Rosa: hay crecimiento
Azul-azul: el antifúngico ha inhibido el crecimiento
Rosa-azul: hay crecimiento lento
Rosa-rosa: el antifúngico no ha inhibido el crecimiento