UNIVERISIDAD DE SONORA

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS QUIMICO BIOLOGICAS

QUIMICON EN ALIMENTOS

REPORTE DE LABORATORIO DE QUIMICA ANALIICA II

ESPECTROSCOPIA DE FLUORESCENCIA

PRACTICA NUMERO 8

ROSARIO ABIGAIL OROZCO LUCERO

HERMOSILLO SONORA

7 DE ABRIL 2021
OBJETIVOS
- Conocer el funcionamiento y operación del espectrofluorómetro.
- Determinar la concentración de salicilato de sodio en una muestra problema mediante
el uso de espectroscopia fluorescencia.
INTRODUCCION
La fluorescencia es un proceso de emisión de luz por átomos y moléculas excitadas al absorber
luz o radiación electromagnética. Cuando los átomos o moléculas excitadas se relajan al estado
fundamental, liberan el exceso de energía en forma de fotones. Esta emisión de fluorescencia
que tiene lugar en millonésimas de segundo induce modificaciones en las propiedades de los
compuestos fluorescentes que pueden ser medidas, tales como la vida media, rendimiento
cuántico, entre otras.
La espectrometría de fluorescencia o fluorometría es un tipo de espectroscopía que permite
analizar y medir la fluorescencia de una muestra. Los fluorímetros son los dispositivos que
permiten medir los parámetros de la fluorescencia de una muestra como su intensidad y la
distribución de longitudes de onda del espectro de emisión después de la excitación por una
fuente de luz monocromática de alta energía. En los fluorímetros pueden usarse filtros y
monocromadores. Mediante un sistema de monocromadores es posible seleccionar el rango
de longitudes de onda de interés.

MATERIALES Y PROCEDIMIENTO
a) Equipo
• Espectrofluorómetro.
• 1 computadora portátil por equipo
b) Materiales
• 1 celda de cuarzo para fluorescencia de 1 cm
• 5 tubos de ensayo de 15 x 125 mm
• 1 gradilla
• 2 pipetas volumétricas de 1 mL
• 2 pipetas volumétricas de 2 mL
• 2 vasos de precipitados de 50 mL
• 6 pipetas Pasteur
• 1 pipetor o jeringa adaptada para pipetear
• 1 piceta con agua destilada • Sanitas para celdas
c) Reactivos
• Solución de salicilato de sodio 4.00 x 10-5 M
• Solución problema
PROCEDIMIENTO
1. Nos aseguramos de que el espectrofluorometro estuviese encendido 10 minutos antes
de las mediciones.
2. Lavamos las celdas cuidadosamente y agregamos el blanco para ajustar a cero.
3. Preparamos las soluciones estándar de salicilato de sodio, después de colocar 15 ml de
agua y 15 ml de la solución madre en vasos de precipitados.
4. Después de tener listos los tubos con las soluciones, seleccionamos la opción de
“barrido” y fijamos el monocromador a 000 y las anchuras de rendija de los
monocromadores de excitación y de emisión a 3 nm y registramos el espectro de
excitación.
5. Anotamos los máximos de excitación encontrados, además de anotar el máximo de
emisión encontrado y el valor de intensidad de fluorescencia
1. Para comprobar que los datos eran correctos, fijamos el monocromador de emisión a
la longitud de onda obtenida en el paso anterior y registramos el espectro de
excitación.
6. Leímos la intensidad de fluorescencia de los 5 tubos y de una solución problema.
RESULTADOS
1 Anotar los valores máximos de excitación y emisión, así como la intensidad de
fluorescencia en la siguiente tabla:

2. Anotar los valores de intensidad de fluorescencia de cada disolución en la siguiente

ANALISI DE DATOS
1 Graficar intensidad de fluorescencia vs. concentración para las soluciones estándar y
calcular la ecuación de la regresión lineal.

Soluciones estándar y = 4E+09x + 12818

120.000
100.000
80.000
60.000
40.000
20.000
0
0,00E+00 5,00E-06 1,00E-05 1,50E-05 2,00E-05 2,50E-05 3,00E-05 3,50E-05 4,00E-05 4,50E-05
Concentración
 2 Determinar la concentración de salicilato de sodio en la solución problema.

CUESTIONARIO
1. Indicar las principales diferencias entre un espectrofluorómetro y un
espectrofotómetro ultravioleta-visible.
El espectrofotómetro se utiliza para capturar y evaluar el color de casi cualquier cosa, incluidos
líquidos, plásticos, papel, metal y telas. Y el espectrofluorometro es utilizado para detectar
espectros, que son longitudes de onda específicas de radiación electromagnética también en
fluorescencia se requiere de fuentes más potentes que en UV-Vis.
2. ¿Por qué la técnica de fluorescencia es más sensible que ultravioleta-visible?
Debido a que la intensidad de la fuente de luz que se utiliza en fluorescencia es mayor que en
UV-Vis, es por esto que no se necesita una gran cantidad de concentración del analito.
3. ¿Por qué la técnica de fluorescencia es más selectiva que ultravioleta-visible?
Debido a que son muy pocos los compuestos que emiten luz al ser excitados, por lo que esta
técnica no puede ser utilizada en una gran cantidad de compuestos (analitos).
4. ¿Por qué la técnica de fluorescencia es menos versátil que ultravioleta-visible, es
decir, se pueden determinar una menor cantidad de analitos con fluorescencia
comparada con ultravioleta-visible?
Porque se utiliza un haz de luz, por lo general luz ultravioleta, que excita los electrones de las
moléculas de ciertos compuestos y provoca que emitan luz de una menor energía,
generalmente luz visible (aunque no necesariamente).
5. Las longitudes de onda de emisión y excitación de un átomo coinciden, sin embargo,
en el caso de moléculas la absorción y la emisión (fluorescencia) no coinciden.
Explique este hecho.
Las moléculas presentan más de una manera de desprenderse de energía. Una de ellas es la
relajación vibracional que ocurre por el estiramiento de los enlaces. Debido a que una porción
de la energía se pierde en esta relajación vibracional en forma de calor el fotón emitido para
que la molécula regrese a su estado basal tendrá menor energía.
 6. Definir rendimiento cuántico.
El rendimiento cuántico o la eficacia cuántica de la fluorescencia es simplemente la relación
entre el número de moléculas que emiten fluorescencia respecto al número total de moléculas
excitadas. Las moléculas altamente fluorescentes, por ejemplo, la fluoresceína, tienen
eficiencias cuánticas que, en ciertas condiciones, se aproximan a la unidad. Las especies no
fluorescentes tienen eficiencias que son prácticamente cero.
7. ¿Por qué es más conveniente medir la radiación emitida a un ángulo de 90º con
respecto al haz incidente?
Para evitar que la luz cause ruido sobre la medición
8. La intensidad de fluorescencia se expresa en unidades relativas o unidades
arbitrarias, debido a que las mediciones no son reproducibles de equipo a equipo.
Explique este hecho.
Esto es debido a que esta técnica tiene una gran sensibilidad, entonces las unidades de
intensidad pueden variar cuando se transfiere de un equipo a otro.

CONCLUSION
Aprendimos el fundamento de la espectroscopia de fluorescencia y de espectrofluorometro,
así como también sus diferencias y a reforzar el aprendizaje de las curvas de calibración. Nos
dimos cuenta de que son muy similares estos dos tipos de espectroscopias sin embargo se
utilizan diferente.
REFERENCIAS

• Sedano Pérez, R., Martín Collado, E., Díez Rubio, E., & Moreno Guerra, C. (2019).
Espectrometría de fluorescencia. Universidad Autónoma de Madrid.
[Link]
A/laboratorio/Espectrometria_de_Fluorescencia.htm

• [Link]

• [Link]
archivos/fundamentos/SEMINARIO%[Link]
• University of Colorado at Boulder. (s.f). UV-Visible and Fluorescence Spectroscopy.
Organic Chemistry at CU Boulder.
[Link]