UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE
GROHMANN FACULTAD DE CIENCIAS
AGROPECUARIAS
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA EN
INDUSTRIAS ALIMENTARIAS
Practica #9
LIPASA PANCREÁTICA
Alumno: Diego Ismael Barrientos Ríos
Código: 2018-111043
Profesora: MGR. Soledad Bornás Acosta
TACNA – PERÚ
2021
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PRÁCTICA 9
LIPASA PANCREÁTICA
1. INTRODUCCION
Gran parte de los alimentos que ingiere un individuo está constituido por grasas, en
las cuales los triglicéridos representan un 90%. Los triglicéridos al nivel del intestino
proximal se hidrolizan en sus componentes debido a la acción de la lipasa
pancreática, cuya acción se incrementa por la presencia de sales biliares que
favorecen su emulsión. El pH para la lipasa pancreática es aproximadamente 8. Los
triglicéridos se hidrolizan en ácidos grasos, glicerol, mono y diglicéridos.
Todos estos componentes son emulsionados hasta pequeñas micelas (40 a 100Ǻ)
que se absorben fácilmente.
Los aceites son líquidos constituidos básicamente de ácidos grasos insaturados,
como el palmítico, esteárico y el ácido mirístico.
La hidrólisis de los triglicéridos del aceite de oliva usando pancreatina, liberará ácidos
grasos que podrán ser titulados.
2. OBJETIVOS
Demostrar la hidrólisis de los triglicéridos del aceite de oliva por la lipasa
pancreática.
Demostrar la acción activadora de las sales biliares sobre la lipasa
pancreática la importancia del pH.
3. MATERIAL Y METODOS
3.1. MATERIALES
3.1.1. Materiales biológicos
Emulsión de aceite
3.1.2. Materiales de vidrio
Tubos de ensayo
Pipetas
Vaso de precipitación
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3.1.3. Reactivos
Solución de sales biliares
Fenoltaleína 1%
Solución de pancreatina
Hidróxido de sodio 0,1N
Buffer fosfato pH 8
Agua destilada
3.1.4. Equipos y otros
Cocina
Guantes
3.2. METODOS
Mediante la observación y exploración se aplicará el método de titulación que
nos demuestra la cantidad de ácidos grasos libres por acción de la enzima, con
la ayuda del indicador fenoltaleína.
4. PROCEDIMIENTO
4.1. Titulación de ácidos grasos libres.
En 6 tubos de ensayo medir lo siguiente:
1 2 3 4 5 6
Emulsión de aceite 3mL 3mL 3mL 3mL 3mL 3mL
Buffer fosfato pH 8 2mL 2mL
Sales biliares 2mL 2mL
Pancreatina 2mL 2mL 2mL
Pancreatina hervida 2mL 2mL 2mL
Agua destilada 2mL 2mL
Mezclar los sistemas y colocarlos en baño maría a 37°C durante 30
minutos, agitando [Link] de ensayo a intervalos.
Al finalizar el tiempo de incubación, retirar los tubos de ensayo del baño y
agregar a cada uno 3 gotas de fenoltaleina.
Luego realizar la titulación de los ácidos grasos liberados con hidróxido de
sodio 0,1M hasta que aparezca una coloración rosada.
Anotar las cantidades gastadas de la base en mililitros.
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5. RESULTADOS
Esquematizar el procedimiento de los experimentos.
Emulsion de aceite 3 ml
Agua 2.5ml + aceite 0.5ml
Buffer fosfato Sales
H2o destilado
pH 8 biliares
• Se compra capsula de pancreatina en una farmacia, el contenido de la
capsula se disuleve en un vaso de agua para activarla.
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Pancreatina Pancreatina
hervida
• Mezclar los sistemas y colocarlos en baño maría a 37°C durante 30 minutos,
agitando los. Tubos de ensayo a intervalos.
• Al finalizar el tiempo de incubación, retirar los tubos de ensayo del baño y
agregar a cada uno 3 gotas de fenolftaleína.
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PASAR A MATRAZ
Calcular el número de mili equivalentes de ácidos grasos de cada
tubo. Luego interpretar sus resultados.
- En el primer matraz hubo 3,8 ml de ácidos grasos liberados, tiene más que
todos ya que tiene todas las condiciones para que trabaje la enzima.
- En el segundo matraz hubo 0,5 ml, no hubo mucho porque la pancreatina
fue desnaturalizada debido a que se hirvió. Se puede decir que hay una
pequeña cantidad de ácidos grasos, por el mecanismo que hemos
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utilizado (agitar).
- En el tercer matraz hubo 2,3 ml de ácidos grasos liberados, pero en menor
cantidad que el primero matraz, las sales biliares ayudan a la degradación
de los lípidos en pequeñas micelas y activan la enzima, pero no tanto
como el buffer fosfato.
- En el cuarto matraz hubo 0,6 ml, ya que la pancreatina se desnaturalizó,
hay más liberación que el segundo matraz porque estuvieron presente las
sales biliares.
- En el quinto matraz solo por la enzima activa hubo 1 ml de ácidos grasos
liberados. Significa que la enzima trabajo, pero en malas condiciones.
- En el sexto matraz hubo 0, 2 ml de ácidos grasos liberados menos que todos
porque no cuenta con condiciones para su degradación y la enzima fue
desnaturalizada.
6. CONCLUSIONES
Se demostró mediante los experimentos del hidrolisis de los triglicéridos por
la enzima lipasa pancreática en sus condiciones óptimas. Un pH 8.
Se demostró la activación de las sales biliares ante la usencia del PH optimo,
ya se pudo lograr el hidrolisis de los ácidos grasos, más si es importante el
pH óptimo para que se lleve a cabo de una forma adecuada, ya que sin el
pH adecuado se trabaja de una forma mínima.
7. CUESTIONARIO
7.1. ¿Encontró hidrólisis de aceite de oliva en ausencia de sales biliares?
Explique
Si, los triglicéridos (TAG), La grasa que entra al duodeno contiene un 70% de
TAG, siendo el resto una mezcla de productos parcialmente hidrolizados.
Las sales biliares reducen el tamaño de las gotas de grasa, pero la que hace el
hidrolisis en si es la lipasa pancrática en los enlaces estar de los TAG. Por ello
en nuestro experimento aun sin la presencia de las sales biliares se dio en
pequeña cantidad la liberación de ácidos grasos.
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7.2. ¿Es esencial para la digestión la función de sales biliares en el tracto
digestivo? ¿Sería normal la absorción de lípidos en esas condiciones?
La separación mecánica de los lípidos de los demás nutrientes comienza en el
estómago por efecto de los movimientos peristálticos. Dicha acción continúa en
el duodeno a donde llega una grosera emulsión de grasa que se irá hidrolizando
gracias a la acción combinada de las lipasas pancreáticas y de las sales biliares.
El tamaño de las partículas de grasa se reduce hasta los 500-1000 Ä. La acción
detergente de las sales biliares es previa a la acción de la lipasa pues deja las
partículas grasas con mayor superficie por unidad de volumen con lo que facilita
la acción de las enzimas pancreáticas.
7.3. Comente el rol del ATP y Mg en la beta-oxidación de los ácidos grasos.
El rol de ATP Y MG se da en la activación para la b-oxidación, ya que para la
activación es una reacción de que consume dos enlaces de alta energía del ATP.
Donde se tiene que activar los ácidos grasos en Acetil coenzima A, para continuar
con la degradación de este en energía.
7.4. ¿Cómo realizaría usted la misma práctica con otra metodología?
En lugar de usar la pancreatina también podríamos usar enzimas creadas
artificialmente.
7.5. ¿Cómo se inhibe la reacción enzimática? Explique.
La desnaturalización de la enzima.
8. BIBLIOGRAFIA
A. Farrán-Codina (2020), Las grasas en la alimentación. Pediatría
integral.
[Link]
05/las-grasas-en-la-alimentacion/
B. Devlin, T. M. 2004. Bioquímica, 4ª edición. Reverté, Barcelona. ISBN
84-291-7208-4