ENZIMAS

Dra. Mariel Sanso

Química Biológica - FCV-UNCPBA
 Catalizadores biológicos

► Las enzimas son catalizadores biológicos.

 Catalizador: agente capaz de acelerar una reacción química, sin
formar parte del producto final.

► No alteran el equilibrio químico de la reacción.

 La reacción avanza en la misma dirección en la que lo haría en
ausencia de enzima, pero más rápido.

► Son proteínas globulares.

Sin embargo, hay algunos ARNs que catalizan su propia síntesis.
Son las ribozimas.
 Características

► Alta especificidad de reacción y de sustrato

• Catalizan una sola reacción o un grupo de reacciones relacionadas

• Especificidad se sustrato elevada o absoluta

► Son susceptibles de ser moduladas por :

• Cambios de pH, temperatura, concentración de sustrato, concentración de

enzima, moduladores.

Nomenclatura.
Comúnmente se las designa añadiendo el sufijo –asa al nombre del sustrato o
de la reacción

.
 Importancia de las enzimas

► Cada paso de una vía metabólica está catalizado por una enzima.

► La cuantificación de la actividad enzimática en fluidos biológicos o

tejidos es importante para el diagnóstico de muchas enfermedades
(lipasa: pancreatitis).

► Muchas fármacos son inhibidores de la actividad enzimática.

► Importantes en la industria.
 Aplicaciones
Aplicación Enzima Usos
Procesamiento de alimentos amilasa Producción de azúcares a
partir de almidón.

papaína Digestión de la carne

Industria de la limpieza proteasas Eliminación de restos
proteicos

lipasas Eliminación de restos

lipídicos

Industria del papel celulasas Degradan celulosa

lignilasas Eliminan lignina
Biología molecular enzimas de restricción Manipulación del ADN-
ARN-ADN polimerasas Ingeniería genética

Bio-remediación hidrolasas, esterasas Degradación de petróleo,

PET

2016. PETasa, degrada el plástico PET. Aislada de Ideonella

sakaiensis, en un basural de Japón.
2018. John McGeehan y Gregg Beckham perfeccionaron la
enzima modificando algunos aa.
 Enzimas en la industria alimenticia
Industria Enzima Usos

Láctea Lactasa| Leche deslactosada.

Quesería Quimosina (renina) Coagulación de las proteínas de la

leche (caseína).

Lactasa-lipasa Influyen en el sabor y aceleran la

maduración

Heladería Glucosa-isomerasa Permite la utilización de jarabes de

alta fructosa.
Lactasa Evita la textura “arenosa” provocada
por la cristalización.

Panificación Amilasa Mejora la calidad del pan.

Proteasa Disminuye la viscosidad de la pasta.

Cervecería Amilasa Licúa la pasta de malta.

Vinificación Pectinasa Mejora la clarificación y extracción de
jugos.
Glucosa-oxidasa Evita el oscurecimiento y los sabores
desagradables.
Glucosa-isomerasa Convierte la glucosa en fructosa
 Reacción enzimática

► Una enzima se une a un ligando llamado sustrato formando un

complejo transitorio (ES) para luego formar el producto

La enzima se une al sustrato mediante enlaces débiles.

 Energía libre de activación

► Una reacción química A ↔ B transcurre a través de un estado de

transición, con mayor energía que la de A o la de B.
► La velocidad de la reacción depende de la diferencia de energía
libre entre A y el estado de transición: Energía libre de Gibbs.
También depende de la temperatura.

∆G= G estado de transición –G sustrato

B
 Energía libre y enzimas

► Las enzimas aceleran las reacciones porque disminuyen la

energía de activación de una reacción química.

► La combinación sustrato-enzima crea un estado de transición de

< E de la que tendría en ausencia de la enzima.

Energía libre

Avance de la reacción
 Apoenzimas / Holoenzimas

► Muchas enzimas necesitan para ser activas de moléculas no proteicas:

 Coenzimas: moléculas orgánicas

 Cofactores: iones metálicos que ceden e- (Cu2+, Mg2+, Fe2+, Zn2+)

Estos pueden unirse a diferentes apoenzimas y sustratos.

activa
 Vitaminas/coenzimas
► Las vitaminas tienen naturaleza química diversa. Algunas no pueden
sintetizarse y deber adquirirse en forma exógena.

► Muchas vitaminas están relacionadas con las coenzimas.

 Sitio activo o catalítico

► Lugar de la enzima donde se fija el sustrato.

► Relativamente pequeño.
► Conformación tridimensional altamente específica, formada por
grupos que proceden de diferentes parte de la secuencia lineal de
aa.
Modelos interacción enzima-sustrato
 Repasemos
Puedes entrar a este link para repasar lo que hemos aprendido hasta
ahora:

[Link]
 Zimógeno

► Algunas enzimas se sintetizan como precursores inactivos llamados

zimógenos o proenzimas.
↓
► Se activan por hidrólisis de la cadena polipeptídica (en tiempo y lugar
fisiológicamente apropiados). Muchas veces se transportan y se
activan en lugares lejanos.

► Ejemplos: enzimas digestivas que para evitar su acción degradativa en

el interior de la célula se producen como zimógenos, y se activan
recién en el tracto digestivo.
 Quimiotripsina/quimotripsinógeno

► Enzima: quimiotripsina (hidroliza proteínas en el intestino).

► Zimógeno: quimotripsinógeno. Se sintetiza en el páncreas (alta síntesis de
proteínas).

Quimiotripsinógeno: una cadena

polipeptídica de 245 aa (inactivo)

ruptura de enlaces peptídicos

Quimiotripsina: 3 péptidos unidos x

puentes disulfuro (activa)

* Pancreatitis: destrucción del páncreas y los vasos sanguíneos por activación prematura de
enzimas proteolíticas. Ello ocurriría si el quimiotripsinógeno se activara en el páncreas.
 Procesos enzimáticos en cascada

► En una cadena de reacciones se activan una serie de zimógenos.

► La forma activada de un factor cataliza la activación del factor siguiente.

► Se requieren muy pequeñas cantidades de los factores iniciales.

► Muchas etapas → permite una respuesta rápida frente a un trauma, ej. formación
del coágulo de fibrina.

Coagulación de la sangre
 Efecto del pH y la temperatura sobre la
actividad enzimática

► La mayoría de los enzimas son muy sensibles a los cambios de pH.

► Cambios mínimos del pH óptimo pueden afectar drásticamente su

actividad (A)

A B
► Los aumentos de temperatura, por lo general, aceleran las reacciones
químicas pero, a partir de cierta temperatura crítica se desnaturalizan
(B).
 Cinética enzimática

► La cinética enzimática describe como varía la velocidad de reacción de

una enzima en función de algunos parámetros.

► Las reacciones enzimáticas presentan saturación por sustrato.

 Cuando [S] es pequeña, V es casi proporcional a [S]
 Cuando [S] es elevada, V es prácticamente independiente de [S]

 Vmáx: valor máximo al que

tiende la curva experimental,
es decir la V a la cual todos
los centros activos están
ocupados.

 KM: [S] a la cual la V de la

reacción es la mitad de la
Vmáx.*
Avance de una reacción enzimática (velocidad (V) vs
concentración de sustrato [S]).
 Modelo Michaelis-Menten y KM
Interpretación de la curva (con más detalle):
En el inicio de una reacción enzimática, a concentraciones de sustrato bajas la
velocidad de reacción es proporcional a dicha concentración.
A medida que la concentración de sustrato aumenta la velocidad de reacción
deja de ser proporcional a ésta.
Con un aumento posterior la velocidad de reacción llega a ser totalmente
independiente de la concentración del sustrato y se aproxima
asimptóticamente a un valor máximo que es característico de cada enzima, la
velocidad máxima. La enzima se halla saturada por el sustrato.

► KM (constante de Michaelis-Menten): representa la afinidad que tiene la

enzima por el sustrato.

Valores bajos de KM, representan una alta afinidad y viceversa.

► El valor de KM para una enzima depende de cada sustrato y de

condiciones ambientales, tales como T.
 Enzimas alostéricas

Las enzimas alostéricas además del sitio activo, poseen otro sitio,
llamado alostèrico o de regulación, al cual pueden unirse en forma
reversible:

- Activadores (moduladores +) o inhibidores (moduladores -).

- El propio sustrato.
 Interacciones alostéricas
► La unión de una molécula a un sitio (alostérico) influye en la unión posterior de
otras moléculas a otro sitio (activo) → cambios conformacionales en las otras
subunidades.

Unión cooperativa del sustrato a una enzima alostérica

► El sitio activo vacío en RT tiene una afinidad mayor por el sustrato que los
centros en TT.

Podés acceder mediante este link a una explicación animada:

[Link]
 Cinética no Michaeliana

► Las enzimas alostéricas no obedecen a la ecuación de Michaelis-

Menten

 El gráfico de V frente a [S] es una curva sigmoidal.

En la cinética sigmoidea,
pequeñas variaciones en la concentración de sustrato se traducen en
grandes variaciones en la velocidad de reacción.
 Inhibición enzimática irreversible

El inhibidor queda covalentemente unido a la enzima o ligado muy

fuertemente a ella.

Ejemplos.
Compuestos organofosforados de insecticidas inhiben la acetilcolinesterasa (A).
La penicilina inhibe la enzima que forma el peptidoglucano de la pared bacteriana
(B).

A B
 Inhibición enzimática reversible
► Inhibición competitiva.
- Un inhibidor, similar al sustrato, se une al centro activo, impidiendo
la unión del sustrato
- La unión del sustrato y el inhibidor son mutuamente excluyentes.
Puede superarse aumentando la concentración del sustrato.

► Inhibición no competitiva.
- El inhibidor y el sustrato se unen simultáneamente a la enzima, pero
en distintos sitios.
 Regulación de la actividad enzimática
I) Inhibición por retroalimentación o feed-back

En algunas vías metabólicas, cuando la cantidad de producto final

excede las necesidades, el producto final inhibe su propia síntesis,
inactivando la enzima que cataliza la 1ª. etapa.
► Ejemplo. Síntesis de aa

► En otros casos, la enzima es estimulada por compuestos del medio

(por ej. el sustrato). Son reversibles.
 Regulación de la actividad enzimática (cont.)

II) Modificaciones covalentes

► La actividad de muchas enzimas está regulada por modificaciones
covalentes reversibles, inserción de un pequeño grupo, por ejemplo,

Fosforilación o
metilación

glucógeno fosforilasa: síntesis y degradación del glucógeno.

 Enzimas constitutivas e inducibles

► Constitutivas
La cantidad de enzima en las células permanece estable. Los
procesos de síntesis y degradación enzimática se mantienen más o
menos constantes.

► Inducibles
La síntesis se activa o deprime de acuerdo a los requerimientos
celulares en un momento dado (ej. enzimas del metabolismo de la
glucosa).
 Clasificación de las enzimas según la reacción
catalizada

Deshidrogenasa Hexoquinasa

Anhidrasa carbónica
Tripsina

Triosa-P-isomerasa DNA-ligasa
 Deficiencias enzimáticas y enfermedades

- La fenilcetonuria es una enfermedad genética y hereditaria. Para

detectarla se realizan exámenes en el neonato. Quienes la padecen no
pueden metabolizar con normalidad el aminoácido fenilalanina (no la
convierten en tirosina) y ésta se acumula en sangre.

¿De qué enzima carecen o tienen deficiencia los enfermos?

- Algunas personas son intolerantes a la leche porque no pueden digerir

la lactosa.

¿Qué enzima está involucrada? ¿Qué reacción cataliza?

 PCR
La PCR (reacción en cadena de la polimerasa) es una
reacción enzimática que amplifica in vitro millones de
veces una secuencia especifica de ADN.

Esta técnica revolucionó la biología molecular y fue

desarrollada en 1985 por Kary Mullis (logro por el que
recibió el Premio Nobel de Química en 1993).

► Enzima: Taq polimerasa. Puede funcionar a temperaturas muy altas ya

que fue originalmente aislada de una bacteria termófila, Thermus
aquaticus.

¿Qué relación tiene esta técnica

con el COVID-19?
 PCR- componentes

Además, del ADN molde, los primers, los

dNTPs, la Taq polimerasa y el agua se
deben agregar iones de magnesio a la
solución de PCR.

¿Qué función tendrá el Mg2+? tendrá el Mg 2+?

 COVID, polimerasa y antivirales

El coronavirus, para poder proliferar rápidamente en las células de las

personas infectadas, debe duplicar rápidamente su material genético, una
larga cadena de ARN. Lo hace mediante una polimerasa.

El Remdesivir es una droga antiviral que

bloquea dicha enzima.

Actualmente, mediante estudios 3D de esta

enzima, se busca descubrir nuevas drogas
inhibitorias.

. Polimerasa del coronavirus y

¿En qué parte de la estructura tridimensional ARN duplicado (rojo y azul).
de la enzima harán hincapié estos estudios? (30-Apr-2020 - Max-Planck-Institut)