Evaluación In Vitro de Fármacos Anti-Inflamatorios
Evaluación In Vitro de Fármacos Anti-Inflamatorios
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UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD DE QUÍMICA FARMACÉUTICA BIOLÓGICA
LABORATORIO DE FARMACOLOGÍA
Profesor
M. en C. Margarita Virginia
Saavedra Vélez
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DURACIÓN: 3 Horas
OBJETIVO
OBJETIVOS PARTICULARES:
ACTIVIDADES
DIAGRAMA
Preparar una solución
madre de 1000 µg/mL del
Fase de Extraer una muestra
sanguínea en un tubo de
Preparar 10 mL de una
solución al 10% de
antiinflamatorio en solución
preparación EDTA. eritrocitos en NaCl 0.9 %.
salina y tomar de esta para
hacer las diluciones
correspondientes.
Se incuban a 56 °C durante 30
Se lee la absorbancia Se calcula el % de Evaluación min los tubos que contenían 0.5
del sobrenadante a 560 hemólisis como un mL de la solución al 10 % de
nm para medir el indicativo de
antiinflamatoria glóbulos rojos con las diferentes
contenido de estabilización de la
por hemólisis sustancias a las mismas
concentraciones del
hemoglobina. membrana. inducida con calor experimento anterior y luego se
enfrían a temperatura ambiente.
OBSERVACIONES
SUGERENCIAS Y LIMITACIONES
CUESTIONARIO
In vitro In silico
Se evitan interferencias de la respuesta
No producen grandes gastos y permiten
del organismo,
progresar intelectualmente sobre el
Hay versatilidad en el diseño
fenómeno.
experimental. Permiten simular situaciones reales,
Se ahorra tiempo y costos.
modificando los valores de las variables
Hay posibilidad de automatización, involucradas en un amplio rango de valores.
Ventajas
robotización, miniaturización.
Reducción del tiempo en cuanto a la
Se puede utilizar material biológico realización de los ensayos
humano Podrían remplazar el uso de animales en la
Hay reducción del número de animales experimentación.
Permiten estimar las propiedades
fisicoquímicas, la permeabilidad digestiva y
de la barrera hematoencefálica y de otros
tejidos.
Simplicidad El acceso a los softwares podría resultar
Dificultad de interpretación de los difícil o un poco caro
resultados El personal debe estar bajo capacitación
Dificultad para extrapolar al hombre constante para poder utilizar este método
No sustituyen del todo los ensayos in El acceso a la tecnología se podría ver
Limitaciones
BIBLIOGRAFÍA
1. GianiI TS, PaoliI S, PrestaI GA, MaiwormI AI, Santos-FilhoI SD, Fonseca AS,
Bernardo-FilhoI M. (2007) Assessment of effects of a formula used in the
traditional Chinese medicine (Buzhong Yi Qi Wan) on the morphologic and
osmotic fragility of red blood cells. Rev. Bras. Farmacognosia, 17(4): 501-
507.
2. MaiwormI AI, PrestaI GA, Santos-FilhoI SD, PaoliI S, GianiI TS, FonsecaII
AS, Bernardo- FilhoI M. (2007). Osmotic and morphological effects on red
blood cell membrane: action of an aqueous extract of Lantana Camara. Rev.
Bras. Farmacognosia,18(1): 42-46.
3. Sridevi G, Sembulingam K, Muhammed I, Srividya S, Prema S. (2015).
Evaluation of in vitro anti-inflammatory activity of Pergularia daemia. W J
Pharm Res, 4(6): 1100-1108.
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LABORATORIO DE FARMACOLOGÍA
Profesor
M. en C. Margarita Virginia
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DURACIÓN: 3 Horas
OBJETIVO
OBJETIVOS PARTICULARES
1. El estudiante aprenderá a inducir anestesia general en ratas utilizando
diferentes anestésicos
2. El estudiante identificará en la rata las diferentes fases de la anestesia
3. El estudiante relacionará la vía de administración con la duración del efecto
farmacológico en seres humanos y en ratas.
ACTIVIDADES
DIAGRAMA
Una vez transcurridos 10 min, se
Los estudiantes serán los sujetos Para poder evaluar la efectividad pinchará con la punta de un palillo
experimentales y se agruparan de de cada sustancia como de dientes la zona en la que se
Anestesia local acuerdo al sexo (hombres y
mujeres) y al anestésico local a
anestésico local se colocarán las
sustancias sobre el dorso de la
colocaron las sustancias y
determinará si se tiene
emplear (hielo, lidocaína, cloruro mano entre el dedo pulgar y sensibilidad. Se repite la prueba a
de etilo). anular. los 20 y 30min post-
administración.
OBSERVACIONES
No se me dan bien las suturas, el hilo se rompía a cada rato y la aguja al ser recta
a veces no me dejaba realizar los giros necesarios. Esta era mi segunda sutura, la
primera la hice en el laboratorio de morfofisiología, pero fue por medio de una
franela y no con un tejido.
SUGERENCIAS Y LIMITACIONES
CUESTIONARIO
Anestésicos
Locales Generales
Solo actuan en el sitio de Bloquean todo tipo de
administración sin perdida sensaciones con perdida de
de la conciencia la conciencia
Ésteres Inhalantes
Amidas Intravenosos
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3. Realiza un cuadro con las indicaciones, ventajas y desventajas de diferentes anestésicos según su vía de
administración
BIBLIOGRAFÍA
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LABORATORIO DE FARMACOLOGÍA
Profesor
M. en C. Margarita Virginia
Saavedra Vélez
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Bitácora No. 6
Laboratorio de Farmacología
BITÁCORA NO. 6: ABSORCIÓN Y EFECTO FARMACOLÓGICO:
ANSIOLÍTICOS
DURACIÓN: 3 Horas
OBJETIVO
ACTIVIDADES
La profesora nos habló acerca del efecto farmacológico y el propósito de este tipo
de fármacos, así como también como interactuaba en el organismo humano para
absorberse. Vimos los diferentes modelos animales usados para medir diferentes
variables útiles para medir su eficacia.
DIAGRAMA DE TRABAJO
Ratas
adultas
Vía
Vía Oral
Intraperitoneal
n=12
n=12
Valeriana Diazepam
Valeriana Diazepam
Vía Vía
Vía oral Vía oral
intraperitoneal intraperitoneal
OBSERVACIONES
2
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Bitácora No. 6
Laboratorio de Farmacología
para nuestra información el comportamiento reflejo de la rata ante un estímulo que
le hace daño.
Opino que sería difícil identificar las conductas del animal al ser mi primera vez
analizándolo, además de cuantificarlo porque suelen haber conductas que no están
tan marcadas en sus movimientos pero que aún así son gran objeto de estudio.
En cuanto al análisis de datos, fue difícil para mí, debido a que no se me dan bien
las matemáticas. Y que la materia de estadística llevo tiempo sin ponerla en acción.
Además no entiendo aún el uso de este tipo de gráficas dentro del estudio de un
fármaco ansiolítico.
SUGERENCIAS Y LIMITACIONES
Mis limitaciones fueron que no he tenido experiencia con un animal como la rata
dentro del laboratorio, no entiendo ni reacciono al momento sobre sus
comportamientos, así que el análisis de estos efectos ansiolíticos se me hizo difícil,
además que esta materia es necesaria llevarla presencia.
Mi sugerencia sería hacer más interactiva la clase, poniendo a los alumnos a contar
las variables en los modelos y armar juntos una gráfica en clase.
CUESTIONARIO
Diazepam
3
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Bitácora No. 6
Laboratorio de Farmacología
mediador químico de la inhibición tanto en el nivel del botón presináptico
como postsináptico, en todas las regiones del sistema nervioso central.
Alprazolam
Bromazepam
Valeriana
Pasiflora
Logra alcanzar los ocho metros de largo y posee muchas bifurcaciones. Sus
hojas tienen forma de palma, fragmentadas en finos óvalos. Ostenta grandes
y llamativas flores aromáticas de cinco pétalos, de un color crema o rojo, con
filamentos de una tonalidad púrpura. Sobre ellos están los estambres y los
estigmas.
4
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Toronjil
Tila
Árbol de tallo recto con corteza lisa que alcanza alrededor de 18 m de altura.
Sus hojas tienen forma acorazonada, verde oscuras por el haz y verde
azuladas por el envés. Las flores tienen un color amarillento, agrupadas en
racimos. Se usa para bajar los niveles de ansiedad, adelgazar, combatir el
resfriado común y reducir la presión arterial.
Manzanilla
5
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Laboratorio de Farmacología
Número de
asomadas al
compartimiento
blanco.
Tiempo total en el
compartimiento
blanco.
Enterramiento Bastante La rata desarrolla Latencia al
defensivo homogéneo sin memoria enterramiento.
importar la rata. emocional de la Tiempo
Evalúa la prueba, más de acumulativo de
ansiedad dos veces no enterramiento.
generalizada. funciona.
Laberinto en Mide la acrofobia Solo está Latencia al
brazos cruzados y la agorafobia. enfocado a fobias, espacio abierto.
La altura puede no una ansiedad Latencia al
ser variable generalizada. espacio cerrado.
mientras sea de Tiempo de
más de 50 cm. permanencia en el
espacio abierto.
Tiempo de
permanencia en el
espacio cerrado.
BIBLIOGRAFÍA
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BITÁCORA NO. 7: ELIMINACIÓN Y EFECTO FARMACOLÓGICO: DIURÉTICOS
DURACIÓN: 3 Horas
OBJETIVO
OBJETIVOS PARTICULARES
ACTIVIDADES
DIAGRAMA DE TRABAJO
OBSERVACIONES
2
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Bitácora No. 6
Laboratorio de Farmacología
sobrante y dicho efecto puede ser aplicado para la presión arterial, insuficiencia
cardíaca y renal y congestión intestinal, entre otras. Así como tienen un amplio
espectro de acción, el uso frecuente de estos fármacos también lidera a un alto
número de enfermedades debido a que este viene a acelerar ciertos pasos de la
excreción de sal.
Se utilizan 50 gramos de jamaica, litro y medio de agua hirviendo, dos litros de agua
fría y 100 gramos de azúcar. Para su efecto diurético basta con tomas dos tazas.
2 tazas – 60,000 gr
X – 300 gr
X= 0.01 tazas
Es metabolizada por el hígado, y suele ser de administración por vía oral o por vía
intravenosa. Suele venir en ampolletas de 20 mg y de 250 mg; así como también en
comprimidos de 40 mg. Tiene una vida media de 1.5 horas con una duración de vía
oral entre 6-8 horas, vía intravenosa de 1-2 horas. Y para la diuresis se tarde por
vía oral entre 5-10 minutos y por intravenosa de 30 min-1 hora.
Vía oral
40 mg – 60,000 gr
X – 300 gr
X= 0.02 mg
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Bitácora No. 6
Laboratorio de Farmacología
SUGERENCIAS Y LIMITACIONES
CUESTIONARIO
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Bitácora No. 6
Laboratorio de Farmacología
3. Elabora una tabla donde describas los diuréticos, su clasificación,
usos, recomendaciones, vías de administración, efectos secundarios y
adversos, contraindicaciones.
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Medicamentos que Tomar con alimento. Oral Mareos. Deben utilizarse con
Ahorradores de K+
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Bitácora No. 6
Laboratorio de Farmacología
Usados para el mal Se sugiere el uso de Oral. Pueden inducir la En pacientes con
de montaña, betabloqueantes respecto a aparición de: enfermedad pulmonar
glaucoma y parasimpaticomiméticos en hiponatremia obstructiva crónica,
epilepsia. pacientes de reciente leve, fosfaturia, depresión y acidosis
diagnóstico con GAA leve- hipercalciuria, hiperclorémica, además de
moderado y en riesgo de hipopotasemia, en pacientes con
pérdida visual significativa. hiperuricemia y hipersensibilidad al
acidosis fármaco.
Inhibidores de la anhidrasa carbónica
metabólica
hiperclorémica
parestesia con
entumecimiento y
hormigueo de la
cara y
extremidades,
malestar general,
depresión, fatiga,
ansiedad,
cefalea,
adelgazamiento y
alteraciones
digestivas
(náuseas,
vómitos,
diarreas).
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BIBLIOGRAFÍA
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La relación entre la vía de administración de anestésicos y la duración de su efecto farmacológico se observa claramente en la diferencia entre anestesia local y general. Por ejemplo, anestésicos locales como la lidocaína, aplicados tópicamente, brindan un efecto rápido pero relativamente corto al bloquear la conducción nerviosa periférica. En contraste, anestésicos generales administrados por vía intravenosa o inhalatoria, como el propofol o el cloroformo, producen una supresión más extensa de la actividad cerebral, llevando a un estado profundo de inconsciencia. Estos enfoques resaltan cómo la vía de administración influencia no solo la velocidad de inicio de los efectos sino también su duración, con administración intravenosa ofreciendo un control más rápido del inicio y duración en comparación con inhalatoria .
La extrapolación precisa de resultados in vitro a escenarios clínicos puede beneficiar el desarrollo de medicamentos al permitir una predicción temprana y más confiable de la eficacia y seguridad de nuevos compuestos. Esto contribuye a la identificación de potenciales efectos adversos antes de los ensayos humanos, lo que puede reducir costos y tiempos de desarrollo. Además, con un control más sólido sobre las variables experimentales, los modelos in vitro ofrecen un análisis cuantitativo de las relaciones dosis-respuesta, optimizando la formulación y dosificación de fármacos basados en pruebas controladas y repetitivas .
El porcentaje de hemólisis se calcula midiendo la absorbancia del sobrenadante a una longitud de onda específica, en este caso 560 nm, lo que proporciona un indicativo de la cantidad de hemoglobina liberada debido a la ruptura de las membranas eritrocíticas. Este porcentaje permite evaluar la eficacia del fármaco en la estabilización de membranas celulares; un menor porcentaje de hemólisis implica una mayor capacidad del compuesto para proteger las células del estrés fisicoquímico .
El diseño experimental que incorpora la variación de temperatura y concentración iónica es fundamental en estudios de farmacología in vitro para simular condiciones que afectan la estabilidad celular y observar cómo los fármacos pueden mediar en esas condiciones adversas. Estas variaciones permiten evaluar la eficacia protectora de los fármacos bajo diferentes niveles de estrés fisicoquímico, lo cual es esencial para determinar la potencial utilidad terapéutica de los medicamentos en condiciones fisiológicas similares, mejorando así la validez externa de los hallazgos .
La validación de modelos in vitro podría mejorar su aceptación en la farmacología experimental al proporcionar evidencia de que dichos modelos son predictivos y fiables para evaluar la actividad farmacológica. La validación comprendida de pruebas rigidizadas y comparativas con métodos in vivo puede clarificar la relación entre condiciones in vitro y efectos clínicos humanos, estableciendo estándares científicos que validen los resultados. Al reducir las incertidumbres y demostrar reproducibilidad, los modelos in vitro validados podrían incrementar la confianza regulatoria y ser incorporados en procesos oficiales de registro farmacéutico, superando límites actuales .
La evaluación de hemólisis inducida con solución hipotónica es crucial en el ensayo de actividad antiinflamatoria in vitro porque permite observar la capacidad de un fármaco para estabilizar la membrana celular de los eritrocitos. Esta prueba simula un ambiente de estrés osmótico donde la estabilidad de la membrana se compromete, representando una situación en la que los antiinflamatorios deben proteger las células para evitar su desintegración. La reducción del porcentaje de hemólisis cuando se evalúan diferentes concentraciones de un fármaco indica su potencial efecto protector y estabilizador de membranas .
El uso de un control negativo es fundamental en los experimentos in vitro para establecer un punto de referencia que permita medir los efectos netos del fármaco en estudio. En los experimentos con eritrocitos, se establece un control negativo utilizando una solución fisiológica isotónica que no induce hemólisis, lo que permite comparar la estabilidad de la membrana en condiciones normales versus condiciones desafiantes o de estrés. Este control es esencial para validar la confiabilidad del ensayo y asegurar que los resultados sean atribuibles a las acciones del fármaco, no a variables externas .
Los modelos in silico ofrecen la ventaja de ahorrar tiempo y costos al facilitar la automatización y miniaturización de ensayos, así como la simulación de situaciones reales mediante la modulación de variables, lo que puede reducir el uso de animales en la experimentación. Sin embargo, sus limitaciones incluyen la necesidad de validación formal, ya que todavía no son totalmente aceptados legalmente. También presentan desafíos de acceso a tecnología y requieren capacitación continua del personal, además de un coste potencialmente alto .
En experimentos de evaluación antiinflamatoria in vitro, medir la absorbancia implica primero incubar la mezcla de reactivos, incluyendo los eritrocitos y el fármaco a diferentes concentraciones, seguido de centrifugación para obtener el sobrenadante. La absorbancia de este sobrenadante se mide a 560 nm para determinar la cantidad de hemoglobina liberada debido a la hemólisis. Este procedimiento es crucial porque proporciona datos cuantitativos sobre la capacidad del fármaco para proteger la membrana celular, con menores valores de absorbancia indicando una mejor actividad estabilizadora del fármaco .
Los eritrocitos juegan un papel clave como modelo in vitro en la evaluación farmacológica debido a su simplicidad y fácil obtención. Ofrecen un excelente sistema para estudiar la interacción de fármacos con la membrana celular, particularmente en pruebas de hemólisis que reflejan la capacidad del fármaco para estabilizar estructuras celulares bajo condiciones de estrés osmótico o térmico. Este modelo facilita la identificación de propiedades antiinflamatorias y estabilizadoras de membranas de nuevos compuestos .