DETERMINACION DE CARBOHIDRATOS TOTALES POR EL METODO DE
FENOL – H2SO4 (Dubois et. al) EN UNA MUESTRA DE JUGO PROCESADO
HASBLEIDY VANESA MONTAÑA GUTIÉRREZ.
COD: 117003749
MIGUEL ÁNGEL RAMÍREZ NIÑO
QCO-UIS, MSC-UPRM
UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS Y RECURSOS NATURALES
PROGRAMA DE INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL
LABORATORIO DE QUÍMICA AGROINDUSTRIAL
VILLAVICENCIO-META
2021
DETERMINACION DE CARBOHIDRATOS TOTALES POR EL METODO DE
FENOL – H2SO4 (Dubois et. al) EN UNA MUESTRA DE JUGO PROCESADO
1. OBJETIVOS
1.1 Determinar el contenido de carbohidratos totales en una muestra de jugo o bebida
procesada
1.2 Conocer la técnica de espectroscopia visible como herramienta de análisis químico
de alimentos y su utilización en la preparación de curvas de calibración
2. DATOS
Tabla [Link]ón de la muestra
JUGO HIT DE MORA
MASA TOTAL 509.356 g
MASA TOMADA 4.2000 g
2
Tabla 2. Preparación de la curva de calibración a partir de las soluciones de
calibración de glucosa
CURVA DE CALIBRACIÓN N°1
TUBO CONCENTRACIÓN ABSORBANCIA PROMEDIO
1 0 0,000 0,000 0,000 0,000
2 10 0,176 0,177 0,176 0,176
3 20 0,259 0,259 0,260 0,259
4 30 0,435 0,434 0,434 0,434
5 40 0,563 0,562 0,562 0,562
6 50 0,711 0,711 0,710 0,711
7 60 0,840 0,840 0,839 0,840
8 70 1,000 1,000 1,000 1,000
Tabla 3. Determinación de Carbohidratos totales en la muestra de jugo
JUGO HIT DE MORA
TUBO mL de jugo ABSORBANCIA PROMEDIO
1 0.20 O,315 0,315 0,315 0,315
2 0.30 0,427 0,427 0,426 0,426
3 0.50 0,766 0,766 0,766 0,766
Tabla 4. Determinación de Carbohidratos totales en una solución estándar de
sacarosa
TUBO mL de solución ABSORBANCIA PROMEDIO
de sacarosa
1 0.30 O,210 0,209 0,209 0,209
2 0.30 0,208 0,208 0,209 0,208
3 0.30 0,198 0,198 0,198 0,198
3. CALCULOS
PREPARACIÓN DE LA CURVA DE CALIBRACIÓN A PARTIR DE LAS SOLUCIONES DE
CALIBRACIÓN DE GLUCOSA.
C 1 V 1=C 2 V 2
3
C2V 2
C 1=
V1
#1
Vsolución patrón glucosa= 0.0 ml
Vagua destilada= 2.0 ml
0.0 ml ×100 µg/ ml
C1 = =0 µg/ml
2.00 0 ml
#2
Vsolución patrón glucosa= 0.20 ml
Vagua destilada= 1.8 ml
0.20 ml ×100 µg/ ml
C2 = =10.0 µg/ml
2.00 ml
#3
Vssolución patrón glucosa= 0.40 ml
Vagua destilada= 1.6 ml
0.40 ml ×100 µg/ ml
C3 = =20.0 µg/ml
2.00 ml
#4
Vsolución patrón glucosa= 0.60 ml
Vagua destilada= 1.4 ml
0.60 ×100 µg/ml
C4 = =30.0µg/ml
2.00 ml
#5
Vsolución patrón glucosa= 0.80 ml
Vagua destilada= 1.2 ml
0.80 ml ×100 µg/ml
C5 = =40.0 µg/ml
2.00 ml
#6
Vsolución patrón glucosa= 1.0 ml
Vagua destilada= 1.0 ml
4
1.0 ml ×100 µg/ml
C6 = =50.0 µg/ml
2.00 ml
#7
Vsolución patrón glucosa= 1.20 ml
Vagua destilada= 0.80 ml
1.20 ml ×100 µg/ml
C7 = =60.0 µg/ml
2.00 ml
#8
Vsolución patrón glucosa= 1.40 ml
Vagua destilada= 0.60 ml
1.40 ml ×100µg/ml
C8 = =70.0 µg/m l
2.00 ml
Grafica 1. Curva de calibracion de patron Glucosa µg/ml
Curva de Calibración
1.2
1
f(x) = 0.01 x + 0.01
0.8 R² = 1
ABSORBANCIA
0.6
0.4
0.2
0
0 10 20 30 40 50 60 70 80
CONCENTRACIÓN µg/ml
Utilizando la ecuación de la recta:
y = mx + b
Dónde:
y: Absorbancia de la alícuota
m: Pendiente de la recta
x: Concentración de la alícuota
5
b: Coordenada de intercepto entre eje y
Despejamos la x:
y -b
x=
m
y -0,0062
x=
0,0141
C 1 V 1=C 2 V 2
C2V 2
C 1=
V1
# 1:
0,315 -0,0062 ug
x= =21,901
0,0141 ml
ug
21,901 × 2,00 ml
ml ug
C 1= =219,01
0,200 ml ml
ug
219,01 × 100 ml
ml ug
C 1= =2190.1
10 ml ml
ug
C 1=2190.1 ×250 ml=547525 ug
ml
547525 ug x 1 g
C 1= =0,548 g
1000000ug
p 0,548 g
% = x 100=13,05 %
p 4.20 g
6
# 2:
0,426 -0,0062 ug
x= =29,773
0,0141 ml
ug
29,773 ×2,00 ml
ml ug
C 1= =198,49
0,300 ml ml
ug
198,49 × 100 ml
ml ug
C 1= =1984,9
10 ml ml
ug
C 1=1984,9 ×250 ml=496225ug
ml
496225 ugx 1 g
C 1= =0,496 g
1000000 ug
p 0,496 g
% = x 100=11,81 %
p 4.20 g
# 3:
0,766-0,0062 ug
x= =53,887
0,0141 ml
ug
53,887 ×2,00 ml
ml ug
C 1= =215,55
0,500 ml ml
7
ug
215,55 ×100 ml
ml ug
C 1= =2155,5
10 ml ml
ug
C 1=2155,5 ×250 ml=538875 ug
ml
538875 ug x 1 g
C 1= =0,539 g
1000000ug
p 0,539 g
% = x 100=12,83 %
p 4.20 g
PROMEDIO DE LAS CONCENTRACIONES DEL JUGO
p 13,05+11,81+ 12,83
% prom= =12,56 %
p 3
DETERMINACIÓN CARBOHIDRATOS TOTALES
12,56 ×509.36 g
Carbohidratos totales= =63,98 g de carbohidratos
100
1 porcion
× 500 ml=2,08 porciones
240 ml
63,98
Carbohidratos totales por porcion= =30,76 g
2,08
DESVIACIÓN ESTÁNDAR
∑( X − X́ )2
δ=
√ n−1
8
( 13,05−12,56 )2 +(11,81−12,56)2+(12,83−12,56)2
¿
√ δ =0,438
3−1
COEFICIENTE DE VARIACIÓN
δ
Cv= ×100 %
X́
0,438
Cv= ×100 %=3,487 %
12,56
ERROR RELATIVO
Valor practico - Valor teórico
Error relativo = x 100 %
Valor teórico
30,76−26
ER= × 100 %=0,18 %
26
DETERMINACIÓN DE CARBOHIDRATOS DE LA MUESTRA DE SACAROSA
#1
0,209−0,0062 ug
X= =14,38
0,0141 ml
C2V 2
C 1=
V1
ug
14,38 ×2,00 ml
ml ug
C 1= =95,86
0,300 ml ml
#2
0,208−0,0062 ug
X= =14,31
0,0141 ml
C2V 2
C 1=
V1
9
ug
14,31 × 2,00 ml
ml ug
C 1= =95,4
0,300 ml ml
#3
0,198−0,0062 ug
X= =13,60
0,0141 ml
C2V 2
C 1=
V1
ug
13,60 ×2,00 ml
ml ug
C 1= =90,67
0,300 ml ml
PROMEDIO DE LAS CONCENTRACIONES
95,86+ 95,4+90,67 ug
prom= =93,98
3 ml
DESVIACIÓN ESTÁNDAR
∑( X − X́ )2
δ=
√
n−1
( 95,86−93,98 )2+(95,4−93,98)2 +(90,67−93,98)2
¿
√ δ =8,253
3−1
COEFICIENTE DE VARIACIÓN
δ
Cv= ×100 %
X́
8,253
Cv= ×100 %=8,78 %
93,98
ERROR RELATIVO
10
Valor practico - Valor teórico
Error relativo = x 100 %
Valor teórico
93,98 - 80,0
Error relativo = x 100% =17,5%
80,0
4. RESULTADOS
Tabla 5. Determinación de carbohidratos totales para muestra de jugo.
JUGO HIT DE MORA
PROMEDIO %P/P CARBOHIDRATOS DESVIACIÓN COEFICIENT ERROR
TOTALES POR ESTANDAR E DE RELATIVO
PORCIÓN VARIACIÓN
12,56 % 30,76 g 0,438 3,487 % 0,18 %
Tabla 6. Determinación de carbohidratos de la muestra de sacarosa
MUESTRA DE SACAROSA
PROMEDIO DESVIACIÓN COEFICIENTE ERROR
CONCENTRACIÓN ESTANDAR DE RELATIVO
VARIACIÓN
ug 8,253 8,78 % 17,5%
93,98
ml
5. ANALISIS DE RESULTADOS
En la práctica de laboratorio se buscó determinar por medio del método FENOL – H2SO4 (Dubois
et. al) la cantidad de carbohidratos totales contenidos en una muestra de jugo. A partir de ello se
utilizó la marca de jugos hit sabor a Mora, el cuál según su etiqueta contenía 26 gramos de
hidratos de carbono de los cuales en azúcares hubo en cantidad 22 gramos.
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El fin del procedimiento experimental, fue enfocar a las propiedades químicas del producto, es
decir, lo que es la cantidad de concentración en glucosa, la capacidad de absorbancia y del mismo
modo por medio del espectrofotómetro dar con los valores habituales para desarrollar la curva de
calibración que reflejaría a nivel general las capacidades y concentraciones aportadas por los
azúcares reductores en la muestra.
Todos los carbohidratos tanto oligosacáridos como polisacáridos pueden ser determinados, ya que
bajo hidrólisis ácida producen monosacáridos. La adición de algunos ácidos minerales a las
soluciones acuosas de carbohidratos, como el ácido sulfúrico al igual que el fosfórico y el
clorhídrico, pueden provocar la deshidratación de los carbohidratos con la eliminación de tres
moles de agua Con esta reacción se forman derivados del furfural, y el 5-hidroximetilfurfural
(HMF) , el cual es de gran importancia como precursor de otras biomolecular útiles en la industria
alimentaria y energética En el caso de pentosas, se produce una deshidratación a furfural y en las
hexosas a HMF La presencia del fenol y su interacción con el HMF facilita la formación de
complejos que permiten la coloración de la solución y en consecuencia facilitan la cuantificación
de los carbohidratos a través de la espectrofotometría.
Era de importancia adicionar primero al que al ácido sulfúrico ya que este permitiría arrojar
mejores resultados, debido a que por el fenol genera la reacción colorimétrica y el ácido sulfúrico
la hidrólisis.
Siendo así, gracias a los procedimientos anteriores, se encontró la concentración total de azúcar
en el jugo (Tabla No.5) y la concentración total de azúcar en glucosa (tabla No. 6).
6. CONCLUSIONES
El método de fenol-ácido sulfúrico ha sido uno de los métodos más utilizados en investigaciones
alrededor del mundo para la determinación de carbohidratos totales.
Las lecturas de absorbancia por espectrofotometría UV en el método de determinación de
carbohidratos totales se pueden realizar satisfactoriamente con la hidrólisis de los azúcares a
furfural o sus derivados utilizando solamente ácido sulfúrico concentrado.
7. BIBLIOGRAFIA
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