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Métodos de ELISA en Biología Molecular

La prueba de ELISA (Ensayo InmunoAdsorbente Ligado a Enzimas) se desarrolló en la década de 1970 y se basa en la reacción antígeno-anticuerpo. Un antígeno o anticuerpo se fija a una superficie y la muestra problema se añade para permitir la unión. Luego, un anticuerpo o antígeno conjugado con una enzima se une al complejo. La adición de un sustrato produce un cambio de color que indica la presencia de anticuerpos o antígenos en la muestra.

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Métodos de ELISA en Biología Molecular

La prueba de ELISA (Ensayo InmunoAdsorbente Ligado a Enzimas) se desarrolló en la década de 1970 y se basa en la reacción antígeno-anticuerpo. Un antígeno o anticuerpo se fija a una superficie y la muestra problema se añade para permitir la unión. Luego, un anticuerpo o antígeno conjugado con una enzima se une al complejo. La adición de un sustrato produce un cambio de color que indica la presencia de anticuerpos o antígenos en la muestra.

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ELISA

(Enzyme-Linked
ImmunoSorbent Assay)

Ensayo InmunoAdsorbente
Ligado a Enzimas

Noriega Reyes A. Cristyna


ELISA

HISTORIA

1959 Yalowy Berson, precursor de los ensayos


inmunoenzimáticos que fueron descritos originalmente en
1971 por Engvall y Perlmann, y Van Wemeny y Schuurs.
El uso de material radiactivo ha limitado el uso del
radioinmunoensayo, y a la ves a popularizadp el empleo del
inmunoensayo enzimático (EIA), del que hay dos técnicas
principales:
El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas
El ensayo inmunológico multiplicado por enzimas.
Noriega Reyes A. Cristyna
ELISA
La prueba de ELISA se basa en la reacción antígeno-
anticuerpo, uno de los cuales debe ser de reactividad
conocida.
El color se genera por la interacción de un sustrato
cromogénico y una enzima que ha sido acoplada al
anticuerpo detector.
Si debe medirse el anticuerpo, se coloca el antígeno en
la fase sólida, como una capa de captura.
Después de la reacción del antígeno con el suero del
paciente, la capa de detección puede ser un reactivo
antiinmunoglobulina clase específica (IgM o IgG) para
detectar respuesta de anticuerpos clase específicos

Noriega Reyes A. Cristyna


ELISA

Los métodos de ELISA dependiendo


de la actividad enzimática se dividen
en dos tipos:

Competitivos
No competitivos
Noriega Reyes A. Cristyna
ELISA

ELISA COMPETITIVO:

En este método, el anticuerpo de la muestra va a


competir con el conjugado por un número
limitado de sitios de unión del antígeno. Habrá
ausencia de color en una muestra positiva debido
a que el sustrato no encontrará a la enzima
porque el conjugado ha sido desplazado por el
anticuerpo presente en la muestra.
Noriega Reyes A. Cristyna
ELISA

ELISA NO COMPETITIVO:

Consiste en enfrentar la muestra con el antígeno


o anticuerpo que está en la fase sólida. Si una
muestra es positiva se formará el complejo
antígeno-anticuerpo y al agregar el conjugado
reaccionará con el respectivo sustrato
desarrollando color

Noriega Reyes A. Cristyna


ELISA

Dentro de los no competitivos


tenemos:

Los directos que detectan antígenos


Los indirectos que detectan
anticuerpos.
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ELISA

Pasos generales de un ELISA

1. Tapizado del pocillo con el antígeno o anticuerpo


2. Adición de la muestra problema con la mezcla de antígenos o anticuerpos
3. Unión del antígeno o anticuerpo específico al anticuerpo o antígeno
tapizado en el posillo.
4. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de anticuerpo o antígeno no
unido
5. Adición del anticuerpo secundario marcado con la enzima
6. Unión del anticuerpo secundario al antígeno o anticuerpo
7. Lavado del pocillo para eliminar el exceso de enzima no unida
8. Adición del sustrato
9. Unión del sustrato a la enzima
10. Desarrollo del color

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Noriega Reyes A. Cristyna
ELISA Competitiva

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ELISA Competitiva

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ELISA Competitiva

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ELISA Competitiva

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ELISA Competitiva

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ELISA Competitiva

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ELISA Competitiva

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ELISA Competitiva

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ELISA Competitiva

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ELISA Competitiva

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