MANUAL DE LABORATORIO DE BIOLOGIA CELULAR DE EUCARIOTES
PRÁCTICA No. 8
EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN Y LA PERMEABILIDAD DE LA
MEMBRANA
FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA
La membrana citoplasmát-ica, debido a sus propiedades fisicoquímicas, es capaz ele
seleccionar la entrada y salida de sustancias de Ja céJuJa. Este paso de sustancias se puede
llevar a cabo po1· difusión, ósmosis o transporte activo.
Po1· difusión entran y salen gases y otras sustancias de bajo peso molecular, gracias a esta
selección es posible mantener dentro de Jas células moléculas de alto peso molecular como
proteínas o ácidos nucleicos.
Por ósmosis entran y salen solventes (agua) de una región de mayor concentración a una
de menor concentración.
Por medio de transporte activo; la célula obtiene y expulsa sustancias contra un- gradiente
de concentración y con gasto de energía.
COMPETENCIA
Explica la turgencia y la plasmólisis en células vegetales y animales a partir del efecto de
soluciones de diferente concentración mediante un modelo.
l\1ATERJAL POR GRUPO l\1ATERIAL ºPOR EQUIPO
Balanzas granatarias 7 Bolsas semipermeables de celulosa
Torundas (algodón con alcohol) 8 Vasos de precipitados o frascos de
Recipiente RPBI vidrio
Soluciones de NaCl al: 0.85 % y 10 % 14 Cordones o hilos cáñamo
Soluciones de sacarosa al: 0.4 M, 0.8 M, 1.2 M. 3 Pipetas Pasteur
Agua destilada 1 Lanceta
Plantas de E!odea sp. 3 Tubos de ensayo de 70 X 8
4 pipetas seroJógicas de 1 O mL Microscopio compuesto
1 Caja de portaobjetos Papel parafilm
1 Caja de cubreobjetos
34
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOLOGiA CELULAR DE EUCARIOTES
DESARROLLO EXPERIMENTAL
1.- ÓSMOSIS Y DIFUSIÓN
Prepare siete bolsas semipermeables de celulosa de 15 cm de largo en la siguiente forma: a
cada una se. Je amarra por un extremo con hilo cáñamo, luego se les introducen las
siguientes soluciones:
Bolsa 1 - Solución de sacarnsa al 1.2 M, 15 mL
Bolsa 2 - Solución de sacarosa al 0.8 M, 15 mL
Bolsa 3 - Solución de sacarosa a) 0.4 M, 15 mL
Bolsa 4, 5, 6 y 7 - Agua destilada, 15 mL
Después se les amarra el otro extremo y se les pesa en una balanza granataria anotándose
en un cuadro los pesos correspondientes.
Las cuatro primeras bolsas se introducen en vasos de precipitados que contengan agua
destilada; las tres restantes se introducen en recipientes que contengan soluciones de
sacaroswaJ 1.2 M, 0.8 M y 0.4 M respectivamente.
Las bolsas se dejan reposar por 15 minutos; pasando este tiempo se extraen, se secan y se
pcsan.�Los pesos se registran en un cuadro. Lo anterior se repite cada 15 minutos, con los
datos obtenidos se realizará una gráfica considerando los pesos y los tiempos anotados en
el cuadro.
a) ¿Cómo explica usted la diferencia en peso, en )as diferentes bolsas, antes y después del
tiempo transcurrido?
11.- TURGENCIA Y PLASMÓLISIS
Hacer una preparación de Elodea sp. observarla al microscopio, agregar a esta
prepar ación solución salina al 1O % y observar qué ocurre. Hacer esquema.
Sin desmontar la preparación; añadir con la pipeta Pastcur agua destilada por uno de )os
ext remos de la preparación entre por·ta y cubreobjetos. En el otro extremo colocar papel
absorbente para provocar
una corriente de agua y eliminar Ja sal. Observar y hacer el
esquem a correspon
diente.
1-
· ·(,Q ue, observó al agregar la solución salina al 1 O % ?
MANUAL DE LABORATORIO DE BIOLOGIA CELUL/\R DE EUC/\RIOTES
2.- Este fenómeno se conoce con d nomhn.• de:
3.- ¿Qué observ<> al agregar el agua?
4.- ¿Cómo se llama a este fenómeno?
III.- TONICIDAD DE LAS SOLUCIONES SALINAS
En tres tubos de ensayo colocar 2 mL de cada una de las siguientes sustancias: solución de
cloruro de sodio al 1 O %, solución de cloruro de sodio al 0.85 % y agua destilada. Agregar
a cada uno de ellos una gota de sangre (obtenida según instrucciones del profesor). Hacer
una preparación con una gota del contenido de cada tubo.y observar al ·microscopio.
1.- ¿Cómo explica usted lo que sucedió en el tubo que contiene agua y sangre?
2.- ¿Cómo es la solución de NaCI al lO '½, y el :agua destilada en relación con el
protoplasma de las células vegetales y animales utilizadas? ¿Con qué nombre se conoce
este tipo de soluciones?
3.- ¿Qué es isotonicidad?
4.- ¿Qué implicaciones tiene la concentración de las soluciones en las que se manejan
células, si se desea que permanezcan vivas?
PRÁCTICA No. 10
Tejido Conjuntivo III.
Sangre. Elementos Formes. Punción capilar.
Técnica de Coloración de Wright
I. Introducción
�a sangre ha si�o considen1da por muchos autores como un tipo de tejido conjuntivo con substancia
mter�elular Hqmda. Observada macroscópicamente es un líquido de color rojo (rojo escarlata la sangre
_ obscuro la sangre venosa), que cuando se extrae de los vasos donde circula normalmente,
artenal Y roJo
coagula espontáneamente y poco después, el coágulo formado, se retrae y exuda un lí
quido amarillo: el suero sanguíneo. Si antes de coagular la sangre se centrifuga o se impide la
coagulación mediante el empleo de substancias anticoagulantes (citrato de sodio, oxalato de sodio o
de potasio, heparina, etcétera), y se deja en reposo en un recipiente, la sangre se separa en dos capas:
la superior, líquida de color amarillo, llamada plasma sanguíneo; y la inferior roja, que contiene los
elementos formes de la sangre.
Es un fluido ligeramente alcalino (pH 7.4) que representa cerca del 7% del peso corporal. El volumen
total de sangre del adulto promedio es de cerca de 5 litros, circula por todo el cuerpo dentro de los
vasos sanguíneos. La sangre es un tejido conectivo especializado compuesto por eritrocitos, leucocitos,
y plaquetas, que se encuentran suspendidos en un componente líquido, la matriz extracelular, llamada
plasma. Como la sangre circula por todo el cuerpo, es un vehículo ideal para el transporte de materiales.
Las funciones primarias de la sangre son transporte de nutrientes desde el tubo digestivo hacía todas
las células del cuerpo y descarga subsiguiente de los productos de desecho de éstas células en órganos
específicos para su eliminación. Hay otros numerosos metabolitos, productos celulares (como
hormonas y otras moléculas de señalamiento) y electrolitos que se transportan también en la sangre
hasta sus destinos finales. La hemoglobina contenida en los eritrocitos transporta el oxígeno desde los
pulmones para su distribución hacia las células del cuerpo, y el C02 se transporta tanto en la
hemoglobina como en el plasma ( como HC03), para que se elimine en los pulmones. Además la sangre
regula la temperatura corporal y conserva los equilibrios ácido-básico y osmótico de los líquidos
corporales. También participa en el proceso de la coagulación. El plasma es un liquido amarillento en
el que están suspendidos los eleméntos formes, compuestos orgánicos, y electrólitos. Durante la
coagulación algunos componentes orgánicos e inorgánicos dejan el plasma para conformar el coágulo,
el líquido restante, de color pajizo se denomina suero.
Los eritrocitos (glóbulos rojos), son elementos desprovistos de núcleo, flexibles, de color amarillo,
discoidales de contorno circular, que vistos de perfil son bicóncavos (más gruesos en los bordes que
en el centro). Miden 7.2 micras de diámetro y 1.5 micras de espesor en borde. Su número varía según
el sexo: Hombres 5-6 millones de eritrocitos/mm3, Mujeres 4-5 millones de eritrocitos/mm3, son discos
bicóncavos, esta forma brinda a la célula una gran área de superficie en relación con su volumen, con
lo que se aumenta su capacidad para el intercambio de gases. Ya que su función estriba en transportar
oxígeno desde los alvéolos pulmonares hasta la intimidad de los tejidos y además transportar el bióxido
de carbono de los tejidos al exterior.
Los glóbulos blancos o leucocitos, se han denominado así por carecer de color propio, son ele�entos
celulares completos, es decir provistos de núcleo y citoplasma. Se hallan en la sangre en numero
58
inferior a los glóbulos rojos. En sangre periférica se hallan en número de 4,000 a 10,000
Ieucocitos/mm3 •
A diferencia de los eritrocitos, los leucocitos no funcionan dentro de la sangre, sino que la emplea
como un medio para viajar desde una región del cuerpo hacia otra. Cuando llegan a su destino dejan
la sangre, mediante migración entre las células endoteliales de los vasos sanguíneos (diapédesis) entran
en los espacios del tejido conectivo y efectúan su función.
Dentro de los leucocitos tenemos:
a) Leucocitos polimorfonucleares
Neutrófilos: Tienen un diámetro aproximado de 12-15µ con un núcleo característico dividido en 2-5
lóbulos, el citoplasma contiene numerosos gránulos finos, llamados específicos que se colorean poco,
además, gránulos azurófilos más grandes y de color rojo a púrpura. Su función principalmente es
durante las reacciones inflamatorias donde juegan un papel muy importante, fagocitando virus Y
bacterias, se diferencian de los macrófagos por no poder regenerar sus lisosomas tras la fagocitosis,
viven aproximadamente una semana.
Eosinófilos: Miden de 12-15µ tienen un núcleo con dos grandes lóbulos unidos por un fino puente de
cromatina, que se presenta en grumos gruesos, muy teñido, el citoplasma está cubierto por gránulos
eosinófilos grandes y homogéneos, su función no se conoce ampliamente. Son móviles y levemente
fagocíticos, fagocitan complejos antígeno-anticuerpo, lo que probablemente ayude a disminuir una
reacción inflamatoria.
Basófilos: Tienen un diámetro de 12-15µ con un núcleo bilobulado o trilobulado, con cromatina en
grumos gruesos fuertemente coloreada. Los gránulos citoplásmicos son basófilos, ocultan el núcleo
pero varían en número tamaño y color. Los basófilos contienen un anticoagulante heparina e histamina
de gran efecto vasodilatador. Son muy importantes en procesos alérgicos ya que son capaces de ligar
inmunoglobulinas IgE, a su superficie; la liberación de las sustancias contenidas en los gránulos puede
llevar a una reacción localizada como el asma bronquial o bien una reacción generalizada y llegar a un
shock anafiláctico.
b) Leucocitos mononucleares
Monocitos: Son células grandes de 12-18µ de diámetro con un núcleo arriñonado o en forma de
herradura con cromatina en grumos finos, a menudo, semejantes a un encaje. El citoplasma azul
grisáceo a menudo tiene vacuolas y gránulos azurófilos. Son células con gran capacidad fagocítica.
Linfocitos: Varían de tamaño de 5-8µ, el núcleo es redondeado o con una leve hendidura, la cromatina
es de grumos gruesos, el citoplasma es azul claro.
El organismo está constantemente amenazado por la invasión de microorganismos patógenos, para
contrarrestar esto ha desarrollado varios mecanismos de defensa, que en conjunto le dan al individuo
cierta inmunidad, donde los linfocitos juegan un papel muy importante. Existen dos poblaciones que
morfológicamente no pueden separarse los linfocitos T y B, responsables de la inmunidad mediada
por células y por anticuerpos respectivamente.
59
Trombocitos o Plaquetas: Son elementos pequeños, de 2 a 3 micras de diámetro de forma redonda
u ovoide, que se hallan en la sangre circulante en cantidad variable entre 250 000 y 350 000 por
mílímetro cúbico de sangre.
Están constituidas por una masa hialina periférica débilmente basófila, el hia16mcro, que contiene una
masa granulosa central, que se tiñe intensamente, el granulómero o cromómcro y que en las
preparaciones teñidas con May Grünwald-Giemsa aparecen en forma de gránulos de color púrpu ra. La
contracción de la estructura fina de la plaqueta proporciona una base mor fológica para su función. La
envoltura de la superficie externa a la membrana plasmática, media las reacci ones de cont act o de
adhesión y aglutinación.
La función de las pla quetas es de actuar en la hemostasi a, es decir, la detención de la hemorragia.
Los valores de referencia para el recuento diferencial en adultos humanos son los siguientes:
Basófilos O - 1 %
Eosinófilos 1 - 4 %
Neutrófilos totales 50- 70 %
Neutrófilos segmentados 45 -65 %
Bandas neutrófilas 2- 7 %
Metamielocitos Guveniles) O-2 %
Linfocitos 18 - 45 %
Monocitos 3 - 1 O %
Plaquetas 150 000-350 000 / mm
Punción capilar
. ,
Existen diferentes métodos para extraer sangre, uno de ellos es la punción capilar. Por _medi o de este
método se obtiene una pequeña cantidad de sangre. Al hacer_ un extendido de ella; p�demos observ�r
las características morfológicas de los elementos formes sanguíneos, así como determm3:1" el porcentaj e
existente de cada uno de los diferentes tipos de leucocitos de la muestra, a éste porcentaje se le con oce
como recuento diferencial.
II. Material
A) Cristalería y varios
Frascos goteros
Lancetas
Papel seda
Portaobjetos
Puentes para coloración
Torundas de algodón
Vasos de precipitados.
B) Reactivos y colora ntes
Aceite de inmersión
Alcohol etílico de 96º
Colorante de Wright
Solución reguladora de fosfatos pH 6.4
60
C) Preparaciones histológicas
Frotis de sangre periférica
III. Desarrollo
�) Para es�diar la morfología de los elementos formes de la sangre, obtendremo
esta que temremos con la técnica de coloración de Wrigh s un extendido de
t.
La región a �uncionar no debe encontrarse cianótica ni edematosa ya que es esencial que la sangre
_
pueda fluir libremente para obtener resultados reproducibles que se puedan comparar con los de la
sangre venosa.
La piel frí� Y cianótica e� una fu�nte de errores pues da cifras altas falsas de glóbulos rojos y blancos,
esto se evita dando masaJe a la piel hasta que esté rosada y caliente antes de efectuar la punción.
En esta práctica efectuaremos la punción en el lóbulo de la oreja.
Técnica de obtención de sangre por punción capilar.
1. Limpiar perfectamente la piel con una torunda empapada en alcohol.
2. Puncionar la piel del borde lateral del lóbulo de la oreja con una lanceta desechable estéril con un
movimiento rápido de suficiente profundidad como para producir la salida espontánea de la sangre.
3. Desechar las dos primeras gotas de sangre, puede presionarse ligeramente a cierta distancia de la
herida para obtener algunas gotas de sangre, no es conveniente presionar con fuerza porque esta se
diluirá con líquidos tisulares.
Técnicas para obtención de extendidos de sangre.
1. Colocar en la superficie de un po11aobjetos desengrasado, cerca del extremo del lado derecho una
gota de sangre.
2. Sostener el portaobjetos con que se hará el extendido, justo a la izquierda de la gota de san�e Y
ª'
deslizarlo hasta el borde de la gota. Esta se extiende por capilaridad !º ancho del portaobJetos.
3. Deslizar el portaobjetos con que se hace el extendido hacia la izquierda. El rnov�miento ti� e
; ��
ser rápido pero uniforme. El extendido será grueso o fino, dependi�ndo de la len�1tud o rapi e; e
_
movimiento y también del ángulo entre los dos portaobjetos. Este an�ulo oscilara entre 30-45 · Un
buen extendido será liso, homogéneo, sin ralladuras y con bordes umformes.
61
Pasos para la obtención de un frotis sanguíneo
Tinción del Extendido de Sangre.
Los colorantes de uso corriente para células sanguíneas consisten en mezclas de colorantes ácidos y
básicos.
Inicialmente las investigaciones para este tipo de coloraciones, fueron realizadas por Paul Erlich, cuyos
resultados estimularon investigaciones adicionales, en las cuales se ensayaron mezclas de otros
colorantes ácidos y básicos, y fue Romanowsky quien en 1891 efectuó un adelanto mayor al utilizar
una mezcla de azul de metileno y eosina.
La mayor parte de las coloraciones de uso actual y empleadas para teñir frotes sanguíneos son
modificaciones del colorante de Romanowsky. Las más conocidas son las de Giemsa y Wright y esta
última se emplea ampliamente en el trabajo clínico.
Los colorantes básicos más utilizados en la preparación del colorante de Wright son el azul de metileno
y el azul de metileno policromado que consiste en azul de metileno y violeta de metileno. Cuando se
añaden soluciones de los colorantes básicos a una solución de eosina, colorante ácido, se forma un
precipitado. El precipitado se disuelve en alcohol metílico sin acetona. La solución alcohólica se coloca
sobre el frote y se añade posteriormente agua o una solución amortiguadora de pH 6.4.
La solución alcohólica fija y conserva las células, mientras que la solución amortiguadora, favorece la
disociación del colorante y en consecuencia la tinción diferencial.
En frotis coloreados con el método de Wright, los eritrocitos se tillen de color rosado con la eosina,
los núcleos de los leucocitos se tillen metacromáticamente con azul de metileno y el citoplasma de los
linfocitos y monocitos se tillen de azul con el azul de metileno. Los gránulos citoplásmicos de los
basófilos tienen afinidad hacia el azul de metileno y también son metacromáticos, en tanto que los
gránulos de los eosinófilos tienen afinidad para el colorante ácido. Los neutrófilos recibieron este
nombre porque se consideró que los gránulos se tellían con el colorante neutro.
62
Pasos para la tinción de un frotis sanguíneo con la técnica de Wrigbt.
TÉCNICA DE COLORACIÓN DE WRIGHT.
1. Colocar la película de sangre secada al aire con el lado del extendido hacia arriba sobre un puente
o soporte de coloración. Emplear de preferencia extendidos de sangre fresca.
2. Cubrir el extendido por completo, con un número conocido de gotas de colorante, dejar actuar
durante 5 a 7 minutos para que se fije el extendido.
3. Colocar el mismo número de gotas que se emplearon de colorante de solución amortiguadora o de
agua para diluir el colorante. Mezclar ambas soluciones sobre el extendido soplando sobre el
portaobjetos. Se formará una película verde de aspecto metálico. Se deja actuar el colorante que en
este momento ya se encuentra disociado durante 1 O minutos.
4. Lavar el colorante una vez transcurrido el tiempo de coloración. El lavado debe realizarse con
agua, por flotación, esto es, agregando el agua cuando el portaobjetos todavía está en posición
horizontal, pues de lo contrario, la película de colorante tenderá a precipitarse sobre el portaobjetos
siendo muy difícil su eliminación posterior.
5. Una vez que se ha lavado perfectamente el extendido, se coloca sobre uno de sus bordes en posición
vertical para que se seque. Ya seco se puede observar al microscopio con el objetivo de inmersión.
2) Se realizará la observación microscópica de la laminilla.
r.v. Resultados
1) El alumno observará y analizará el resultado de su coloración.
2) Realizará en el cuaderno de trabajo el esquema de cada uno de los elementos formes sanguíneos
observados al microscopio.
Cuestionario
¿Cuáles son los componentes del colorante de Wright y cómo actúan en la tinción? Puede usar el
reverso de la hoja si le falta espacio.
63
PRÁCTICA No. 11
Sangre.
Punción venosa.
Cuenta de glóbulos rojos y glóbulos blancos.
I. Introducción
Se considera la sangre como un complejo parasistemático con múltiples unidades funcionales, entre
las que cabe diferenciar sobre todo: 1) un sistema eritrocítico, vector de gases, 2) un sistema
leucocitario, destinado a las funciones defensivas, 3) un sistema trombocítico, que interviene, en la
cohibición de las hemorragias, y 4) un sistema plasmático integrado por proteínas, carbohidratos,
lípidos, aniones, cationes, agua etc, cada uno de los cuales está dedicado a la ejecución de determinada
función nutritiva o reguladora de varias funciones a la vez.
Algunas enfennedades afectan en primer lugar a la sangre y a los tejidos formadores de ella, con más
frecuencia todavía, los trastornos de otros sistemas orgánicos producen alteraciones en la sangre. En
consecuencia, y en sentido general los problemas hematológicos son comunes y variados. Por lo tanto,
es evidente que el enfoque de un problema, hematológico debe comenzar en un interrogatorio,
minucioso y un examen físico completo. Sin éstos cualquier tipo de investigación de laboratorio puede
ser inútil, e inclusive, confusa.
Además del interrogatorio y el examen físico, es necesario medir el volumen de glóbulos rojos
sedimentados (hematocrito), realizar el recuento de leucocitos, y fórmula diferencial de éstos, y
examinar con el microscopio el extendido de sangre coloreado. f>uede agregarse la eritrosedimentación
como un indicador útil pero no específico de afecciones agudas o crónicas. Si se sospecha un trastorno
que afecta a la sangre, o si se encuentra alguna anormalidad en los exámenes y pruebas mencionadas
anteriormente, puede ser necesario efectuar estudios adicionales.
Los exámenes hemáticos adicionales que estarían indicados si se sospecha una alteración
hematológica, incluye la medición de la concentración de hemoglobina, recuento de plaquetas,
recuento de reticulocitos y de glóbulos rojos, y cálculo de índices eritrocíticos.
Dependiendo de la etapa del proceso diagnóstico se seleccionan otras pruebas que son: 1) estudio
cuantitativo de la morfología de la médula ósea; 2) anatomía microscópica por medio de biopsia de
médula ósea, ganglios linfáticos, hígado u otros tejidos. 3) anatomía radiográfica del tórax, abdomen
o huesos y otros tejidos según lo sugieran los exámenes realizados hasta ese momento; 4) bioensayo y
análisis clínicos de tejidos o líquidos corporales, incluyendo el plasma y la orina, pero no limitados a
éstos. 5) evaluación de la función fisiológica mediante el seguimiento de sustancias marcadoras.
El plasma, en el cual están suspendidos los elementos formes, es un líquido amarillento, ligeramente
turbio por la presencia de plaquetas; cuando para obtener el plasma se ha practicado una centrifugación
muy intensa, o en casos de trombopenia el plasma puede ser transparente. En las leucemias, con gran
aumento en el número de leucocitos el plasma puede ser de aspecto lechoso. El plasma sirve ante todo
para mantener las constantes fisicoquímicas de la propia sangre (su viscosidad, hidratación, presión
osmótica, pH, etc.) y además actúa como medio de transporte no sólo de las sustancias alimenticias Y
de desecho, sino del calor, de los múltiples elementos naturales que desempeñan acciones biológicas
65
muy particulares, como son las hormonas' vitaminas· · los ea,it·,cuerpos Y también medicamentos
· · · sulfonamidas, hierro, ele.).
inyectados o ·mgen'dos (d1g1tox111a,
Se denomina suero sanguíneo al líquido que libera el c0 't1 g,rlo de .s·,n
. 1 ªd
< gre n I ret raerse Se trata en rea rd
de I mismo plasma exento de ftbrinógeno. no conteniendo lnmpoco pi aquctas 111. 1cucocltos.•
•
El suero es de color amarillo, límpido y transparente' en cambio ' si el ,suero ha s1·c1o extra,'do después
. ·
de una eom1 da copiosa, · y en depen dencia con sus características
• . ' de tipo i11 d"1v1·dua I , puede presentarse
.
leclioso por 1a presencia • de mnumernbles gotitas de g1rasa (hemoco111·a' s)• El color de 1 suero ('1gua 1 mente
· ··e·
•
. ..
•
,
a 1 de I p Jasma ) puede vanar en ciertos casos patológicos: amarillo (ictéricia) muy pa•r·d I o (anemias y
hemod·1Iuc10nes ), ro31zo 111tox1cacmn sulfamídica), pardo-rojizo (hemólisis intensa), etc.
II. Material
A) Cristalería y varios.
Cámara de Neubauer (hemocitómetro)
Jeringas desechables
Ligaduras
Pipeta de Thoma para glóbulos blancos
Pipeta de Thoma para glóbulos rojos
Torundas de algodón.
B) Reactivos.
Líquido de Turk
Solución salina al 0.85% (isotónica).
III. Desarrollo
1) En esta práctica se realizará el recuento de eritrocitos y leucocitos de una muestra de sangre. Para
tal fin se obtendrá una muestra de sangre mediante una punción venosa.
Punción venosa.
una punción
Cuando se requiere de una cantidad de sangre mayor de 0.5 mi, debe obtenerse a través de
ya sea de una vena o de una arteria, dependiendo del tipo de estudio a realizar.
La punción venosa es importante, por ser este medio la fuente de sangre en cantidad suficiente para
realizar diferentes estudios; y la vía de entrada de diferentes agentes terapéuticos entre ellos la sangre
misma. Comúnmente para obtener la muestra se emplea una vena del brazo.
n venosa.
Técnica para la obtención de una muestra de sangre por punció
der a localizar la vena que se va a
1. Colocar al paciente cómodo, de preferencia sentado, proce
puncionar.
, con una torunda de algodón impregnada
2. Limpiar la piel sobre una vena del pliegue del codo
con alcohol. del
o, aproximadamente a 5 cm p�r encima
3. Aplicar un torniquete en la parte media del braz vece s.
e vigorosamente la mano vanas
pliegue del codo, decir al individuo que abra y cierr obtener.
rdo con la cantidad de sangre por
4. El tamaño de la jeringa debe de estar de acue
aguja de 21 x 32 mm.
Generalmente se utiliza una jeringa de 3 mi con
66
5. Cerciorarse de que tanto la aguja como la jeringa estén estéri·tes y secas, an
., . , . . tes de e,ect
"' uar la
punc1on , constatar que la aguja este bien sujeta a la jeringa y que et em· bO I O se desltce
·
libremente.
6. Con el pulgar de la mano izquierda se pone tensa la piel que se encuentra so bre I a vena.
· · , · • . Con
un movnmento rap1do, se punciona la piel y la vena teniendo el bisel de la agUja · hacia· arn'ba.
. . . ,
7. Exiraer la sangre mediante asp1rac1011 lenta, jalando el émbolo de la jeringa
8. Quitar el torniquete.
9. E�iraer la aguja c�n la jeringa, colocar una torunda con alcohol sobre el sitio de la punción,
misma que debera pennanecer en contacto con la piel aproximadamente 5 minutos de
preferencia con el brazo del paciente flexionado.
10. Quitar la aguja de la jeringa y depositar la sangre en un tubo de ensaye, deslizándola
suavemente por las paredes del tubo con anticoagulante. Mezclar perfectamente invirtiendo el
tubo suavemente, aproximadamente 40 veces.
Dilución de la sangre y recuento de eritrocitos.
1. Colocar en el extremo superior de la pipeta de Thoma para glóbulos rojos una ligadura con
boquilla
2. Aspirar la sangre y llevarla hasta la marca de 0.5 ó 1.0, según convenga.
3. Limpiar la sangre del exterior de la pipeta con un trapo, evitando que éste absorba la sangre del
interior de la pipeta.
4. Si al aspirar la sangre se pasa de la señal de 0.5 ó 1.0 pero no más de 2mm, puede hacerse retroceder
hasta la marca golpeando suavemente la punta de la pipeta sobre papel humedecido.
5. Sumergir la punta de la pipeta en el líquido de dilución (solución salina isotónica) y manteniéndola
en posición vertical, aspirar hasta la señal de 1 O 1.
6. Cuando esté llena, poner la pipeta en posición horizontal y tapar la punta con un dedo antes de
quitar la ligadura
7. Colocar la pipeta en posición horizontal en el agitador automático y agitar durante un minuto.
8. Cerciorarse de que la cámara de Neubauer esté perfectamente limpia y seca, colocándola en
posición horizontal.
9. Retirar la pipeta del agitador y colocar un dedo en el extremo superior de esta. Tirar las 4 primeras
gotas del contenido de la pipeta. . , , ..
. perm1�r que
[Link] la punta de la pipeta en el borde del cubreobjetos que esta sobre la camara
ente tres mmutos
el líquido fluya por capilaridad dentro de la cámara. Dejar reposar aproximadam
antes de efectuar el conteo.
ícula central de la cámara (ver
11. Proceder a contar los glóbulos rojos al microscopio en la cuadr
esquema).
67
Pipetas para dilución
de eritrocitos y leuco
citos
Pipetas de Thoma para la dilución de eritrocitos y leucocitos
,, � -
(Lt:) \.\
'i:) '0,\'
Cámara de Neubauer
Para sacar el número total de eritrocitos por mm 3 de sangre se utiliza la siguiente fórmula:
eritrocitos/mm 3 = No. de células contadas XI O X dil X 400/80. Esta fórmula resulta de los siguientes
razonamientos:
a) Considerando que contamos en la cuadrícula central (E), los cuatro cuadros de los extremos y
el central, el número de eritrocitos en la cuadrícula será:
520 cels. - 80 cuadros
X cels. - 400 cuadros
X= 520 X 400 / 80 = 2600 cels.
b) Estas células se encuentran en un volumen de 0.1 mm3 •
Los registros deben hacerse en células / mm3, por lo tanto:
2600- 0.1 mm3
X cels. - 1.0 mm3
X= 2600 cels. X 1.0 mm3/0. l mm3 = 26000 cells/mm3•
68
c) Recordando que se empleó sangre diluida 200 veces:
26000 cels. -1
X cels. -200
X= 26000 X 200/1 = 5'200000 eritrocitos/1111113 de sangre
Interpretación del recuento de eritrocitos:
Valores de referencia:
En el hombre 4.5 -6.0 X 106/mm3 de sangre En la mujer de 4.0 -5.5 X 106/mm3 de sangre
Valores anormales:
Cuando los eritrocitos están aumentados a este fenómeno se Je conoce como policitemia, puede
deberse a deshidratación, afecciones cardiacas crónicas, intoxicaciones agudas o fibrosis
pulmonar.
Cuando están disminuidos se conoce como oligocitemia, y se puede presentar en anemias,
leucemias y después de una hemorragia.
areas en donde se cuentan glóbulos blancos
3mm
¿
... B 1mm
IL..11..
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3mm 1mm
r-1 - í 1mm
a re:as en donde se cuentan eritrocitos
Cuadrícula de la Cámara de Neubauer
Dilución de la sangre y recuento de leucocitos
1. Colocar en el extremo superior de la pipeta de Thoma para glóbulos blancos una ligadura con
boquilla.
2. Aspirar la sangre con la pipeta de Thoma para glóbulos blancos hasta la marca de 0.5 ó 1.0 según
convengan.
3. Los puntos 3 y 4 son i guales que para la dilución de eritrocitos.
5. Sumergir la punta de la pipeta en el líquido de dilución (líquido de Turk) y manteniéndola en
posición vertical, aspirar hasta la señal de 11.
6. Los puntos 6, 7, 8, 9 y 1O, son iguales que para eritrocitos.
11. Proceder a contar el número de leucocitos al microscopio en la cuadrícula de la cámara de
Neubauer los cuadros A, B, C y D (ver esquema)
La fórmula para encontrar el número de Ieucocitos/mm 3 de sangre es la siguiente:
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Leucocitos/mm3 = No. de células contadas X dil X l O/No. de cuadros contados.
La cual proviene de la siguiente deducción:
a) Si contamos por ejemplo 32? células en los cuatro cuadros de los extremos (A,B,C,D) y
recordamos que cada cuadro tiene un volumen de 0.1 mm 3 , en los cuatro cuadros tenemos: 0.4
mm3 y los resultados se reportan en mm3 por lo tanto:
b) 320 cels. - 0.4 mm3
X células -1.0 mm3
X= 320 cels. X 1.0 mm 3/0.4mm3 = 800 cels./mm 3
c) Recordando que se empleó sangre diluida 10 veces tendremos:
800 cels. -1
X cels. -10
X = 800 X 10/1 = 8000 cels./mm3
Interpretación del recuento de leucocitos:
Valores de referencia:
adultos femeninos y masculinos 4000 a 11OOO/mm3
gestantes nonnales en los últimos períodos, de 7000 18000/mm3
El recuento varía con el estado fisiológico del paciente y con la hora del día.
1. Las cifras más bajas se encuentran por la mañana y luego aumentan progresivamente hasta media
tarde.
2. Aumentan después de los ejercicios vigorosos y de los baños con agua fría.
Valores Anormales:
1. Cuando están incrementados, se denomina leucocitosis, la que consiste en la elevación total del
número de leucocitos o en el porcentaje de un tipo determinado.
2. Si están disminuidos se denomina leucopenia, la cual a menudo va acompañada de una disminución
en los polimorfonucleares, de los cuales resulta una linfocitosis relativa.
A lgunas de las enfermedades que producen leucopenia son:
1) Infecciones bacterianas: tifoidea, paratifoidea y brucelosis.
2) Infecciones virales: gripe, sarampión, rubéola.
3) Enfermedades causadas por protozoarios: paludismo, fiebre recurrente, Kala-azar.
IV. Resultados
Anotar en su cuaderno de trabajo tos cálculos y valores obtenidos en su recuento de glóbulos rojos Y
blancos.
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Problemas
1) Conté 300 l�ucocitos en tres de las cuatro cuadrículas de la cámara de Neuba
. uer (de 0.1mm3), si aforé
a 0.2 de la pipeta de Thoma para globulos blancos, ¡,Cuántos leucocitos por mrnJ tiene
la muestra? ¿Cuál
es su diagnóstico de la muestra?
2) ¿Cuántos erih·ocitos habré contado en 5 de los 25 cuadros de la cuadricula para contar eritrocitos si
habiendo realizado una dilución l :200 tuve 6 500 000 eritrocitos/mmJ?
3) Si aforé la pipeta de Thoma para glóbulos rojos en la marca de 0.2 ¿Qué dilución realicé?
4) Si en una muestra de sangre detenniné 11 000 leucocitos/mm3 , suponiendo que encontré el mi,..mo
número de células en las 4 cuadrículas para el recuento de leucocitos y aforé en la marca de 0.5 ¿Cuántas
células conté en cada cuadrícula?
5) Se contaron 450 leucocitos en 3 cuadrículas de la cámara de Neubauer, si se realizó una dilución 1: 10
¿Qué alícuota se tomó para hacer esa dilución y cuántos leucocitos/mm3 tiene esa muestra?
6) Si deseo hacer las siguientes diluciones con la pipeta de Thoma para eritrocitos ¿qué alícuotas
debo tomar? Dil: 1 :200, 1: 1000, 1 :500, 1:400.
7) Si conté 12000 eritrocitos en los nueve cuadros totales de la cuadrícula de la cámara de
Neubauer y realicé una dilución con la pipeta de Thoma hasta el aforo de 0.4. ¿Cuántos
eritrocitos por mm3 tiene la muestra de sangre? ¿Cuál sería su apreciación de esa muestra?
8) Conté 500 leucocitos en las cuatro cuadrículas para contar leucocitos, e hice una dilución
_ _
I :20 con Turk. Realicé también una cuenta diferencial y el resultado fue: 42% de Neutrofilos,
50% de Linfocitos, 2% de Eosinófilos, 5% Monocitos y 1 % Basófilos. ¿Qué cantidad por
mm3 hay de cada tipo de leucocito?
V. Conclusiones
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