SINTESIS DE FLUORESCEÍNA

EMISIÓN Y ABSORCIÓN DE LUZ

Luisa Fernanda Sierra Montes

Universidad del Quindío, Facultad de Ciencias Básicas y Tecnologías, Programa de Química,

Laboratorio de síntesis orgánica
Fernando Agudelo Aguirre
lfsierram@[Link]

2 de Junio de 2017

RESUMEN
La fluoresceína es un pigmento fluorescente que tiene múltiples aplicaciones en serigrafía,
en microbiología, etc. Ya que se le utiliza como medio de contraste. Se obtiene mediante
una reacción de sustitución electrofílica aromática (S EAr) del resorcinol sobre el anhídrido
ftálico. Además, la fluoresceína es un compuesto que puede utilizarse como indicador
acido-base pues el color de sus disoluciones depende del pH del medio. El proceso
experimental se llevó a cabo al mezclar anhídrido ftálico y resorcinol que después de 30
minutos de calentamiento generó una solución de color roja que posteriormente fue filtrada
obteniendo un filtrado que se somete a la luz, donde se observa el color fluorescente
confirmando la síntesis deseada. Al analizar el respectivo producto utilizando el punto de
fusion y espectro infrarrojo correspondiente, se pudo confirmar la síntesis del producto
deseado por medio de la banda caracteristica correspondiente a el enlace N-H alrededor de
3442 cm-1. Por medio de el punto de fusión se determino el grado de pureza del producto.

Palabras clave: Anhídrido ftálico, resorcinol, fluoresceína, polímeros.

INTRODUCCIÓN
La fluoresceína es una sustancia pulverulenta, de color amarillo rojizo. Es un colorante
orgánico insoluble en agua, soluble enalcohol (etanoico) y aguas alcalinizadas. Su sal
sódica, soluble en agua, es conocida como uranina. 2 Esta sal es ampliamiente utilizada
como marcador fluorescente en diversos ensayos químicos y biológicos, debido a que
exhibe fluorescencia. Pertenece al grupo de las xantinas que produce un
color fluorescente verde intenso en soluciones alcalinas (con pH mayor a 7). Cuando se
expone a la luz, la fluoresceína absorbe ciertas longitudes de onda y emite luz fluorescente
de longitud de onda larga. Es, asimismo, un colorante indicador ftálico que aparece de color
amarillo-verde de la película lagrimal normal, y de color verde brillante en un medio más
alcalino, tal como el humor acuoso, y se usa terapéuticamente como una ayuda para el
diagnóstico de las lesiones corneales y trauma corneal. Los factores que afectan la
fluorescencia incluyen: Concentración de la sustancia; pH de la solución; Presencia de otras
sustancias; Longitud de onda de la luz excitante .A un pH de 8 (mayor alcalinidad), la
fluoresceína alcanza su máxima intensidad. La fluoresceína fue sintetizada por Adolf von
Baeyer en 1871.1 Se prepara a partir de anhídrido ftálico y resorcinol en la presencia de
cloruro de zinc por una reacción de Friedel-Crafts. Su síntesis en el laboratorio es
relativamente sencilla y se realiza fundiendo el anhídrido ftálico y el resorcinol (180-200
ºC) en un crisol con presencia de ZnCl2.

Esquema 1 Estructura de la cumarina (izquierda) y de su derivado la 7-HC (derecha)

La fluoresceína sódica es una xantina dibásica que se utiliza en oftalmología en forma

tópica para las tonometrías y diagnóstico de lesiones coriorretinianas, y en forma oral o
endovenosa como medio de contraste de las angiografías retinianas. Se informaron distintas
reacciones adversas con todas sus vías de administración. Se clasifican en leves, moderadas
y graves, según su intensidad y la necesidad de intervención médica. Con el objetivo de
actualizar la incidencia de reacciones adversas producidas por su uso endovenoso, y la
posibilidad de prevenir dichas reacciones por medio de pruebas cutáneas, se realizó un
relevamiento de las publicaciones sobre el tema. La etiología de dichas reacciones es
desconocida.
PROCEDIMIENTO

0.15 g anhídrido ftálico

0.22 g resorcinol
1 gota de H 2 SO4
Calentar 180°C 30-40 min
BAÑOS
María
Glicerina Enfriar
140°C Acroleína
Arena 300°C 2 mL de H 2 O
 H 2 SO 4 300- 400°C 0.1 mL de HCl

Calentar 10 min

Filtrar

Residuo Filtrado

Secar Desechar

Pesar IR
PF

RESULTADOS Y DISCUSIONES
La síntesis de la fluoresceina se realizó de manera sencilla; en primer lugar se adicionó 0,15
g de anhidrido ftálico y 0,22 g de resorcinol, estas dos sustancias se maceraron hasta formar
una solución homogénea incolora; se adicionó una gota de ácido sulfurico al tubo y una
parte de la mezcla sólida se torno de color café oscuro, la mezcla se llevó a calentamiento
en ácido sulfúrico debido a la elevada temperatura a la que se debe calentar y el ácido
sulfurico es el único que soporta esta temperatura sin descomponerse o cambiar de estado;
al cabo de 30 minutos se produjo una solución roja y con desprendimiento de gases
amarillos. Despues se filtró y se procedió a observar el filtrado bajo luz observando la
fluoresceína (Imagen 1)

1
2

Imagen 1. [Link]ína en medio ácido 2. Fluoresceína en medio básico

La fluoresceina se obtiene mediante una sustitución electrofilica del resorcinol sobre el

anhidrido ftalico, el resorcinol presenta estas estructuras resonantes:

De donde se observa claramente el sitio para la sustitución aromatica electrofilica, donde el

resultado final es el rápido equilibrio entre la forma lactoide y cinoide de la fluoresceina.
 Esquema 1. Mecanismo de reacción para obtenera la Fluoresceína

Posteriormente al disolverla en una solución de NaOH, la fluoresceina tiene cambie la

estructura de tal manera que genera la coloración caracteristica.

La reacción entre el anhídrido aftálico y el resorcinol, produce el pigmento fluoresceína el

cual se produce mediante una sustitución electrofílica aromática, en donde el electrófilo es
el anhídrido aftálico, el cual porta dos moles para formar la fluoresceína. Para que la
reacción se produzca la mezcla se deja calentar por un tiempo moderado y con la ayuda de
un catalizador acido (H2SO4) hace que esta reacción se lleve a cabo mas rápidamente. Al
someter la fluoresceína a cambios de pH y una radiación ultravioleta se observa un cambio
en la absorción y el color de la muestra esto debido a que puede haber un cambio
estructural en la molécula.

Análisis IR
 Esquema 5 Espectro infrarrojo de la Fluoresceína

Los dobles enlaces aromáticos corresponden aproximadamente a 11/2 enlaces, más que
dobles enlaces verdaderos, y su menor traslape ocasiona que sean menos rígidos y sus
frecuencias de absorción sean menores pues se presentan alrededor de 1600 cm -1. Se
pueden observar en los espectros en 1692 cm-1 para el producto.

En la región de 3300 a 3100 cm -1 se encuentran las tensiones del enlace en alquenos, en

1704 cm-1 se encuentra una banda pequeña perteneciente al carbonilo de cetona, en 1600
cm-1 se encuentra la banda característica Compuestos Aromáticos y en 1325 - 1100 cm -1 se
encuentra la presencia de Alcoholes y Éteres.

Punto de fusión

El punto de fusión teórico de la 3-carbetoxicumarina está entre 313.5-314.5°C, al

compararse con el punto de fusión teórico de 315  °C es una propiedad física que confirma
que el producto obtenido fue el esperado siendo la diferencia entre el punto de fusión
teórica y experimental mínima, adicional a esto se pudo determinar el grado de pureza del
producto debido a que el rango de punto de fusión es de 1 °C
Con respecto al porcentaje de rendimiento de 75,2 %, un porcentaje bueno que indica que
las condiciones utilizadas fueron las apropiadas, la perdida de producto se debe a errores
indeterminados difícilmente controlados.
CÁLCULOS
Anhídrido ftálico Resorcinol
%pureza=98% %pureza=98%
Peso inicial= 0.15 mL Peso inicial= 0,22mL
Peso molecular= 148,1142 g/mol Peso molecular= 110,1 g/mol
Moles de anhídrido ftálico

ftalico∗98
∗1mol anhidrido ftalico
100
0,15 g anhidrido
148,1142 g anhídrido ftálico

¿ 0,00 09925 mol anhídrido ftálico

Moles de resorcinol

resorcinol∗98
∗1 mol resorcinol
100
0 , 22 g =0,00195 8 2 mol resorcinol
110,1 g resorcinol

Reactivo límite: anhídrido ftálico

Anhídrido ftálico y resorcinol: relación 1:2

ftalico∗2 mol resorcinol

0,0009925 mol anhidrido =0.001985 mol resorcinol
1 mol anhídrido ftálico

resorcinol∗1 mol anhídrido ftálico

0,0019582 mol =0,0009791 mol ahídrido ftálico
2 mol resorcinol

Masa teórica:

ftálico∗1mol fluoresceina
∗332,3038 g fluoresceina
1mol anhídrido ftálico
0,00 09925 mol anhídrido =0,3 208 g fluoresceina
1mol fluoresceina

Porcentaje de rendimiento:

0,248 g experimental
% de rendimiento= ∗100 %=75,2%
0,3 298 g teórico

CONCLUSIONES
 Se pudo obtener la fluoresceína a partir del resorcinol y el anhídrido ftálico de manera
sencilla por medio de calentamiento prolongado con la ayuda de un catalizador (ácido
sulfúrico).
 Se pudo obtener un porcentaje de rendimiento de 75,2% el cual es un rendimiento medio,
esto debido a que durante la remoción del solido se pudo perder una gran parte del
producto.
 Se pudo observar que al cambiar el pH de la solución, en el respectivo espectro un cambio
en la absorción

CUESTIONARIO

1. Consulte la estructura de al menos otros dos pigmentos fluorescentes.

2. ¿Por qué es diferente el color de la disolución de fluoresceína en medio ácido,

básico y neutro? ¿Qué cambios estructurales se producen en la molécula a
consecuencia del medio ácido o básico?

La diferencia es por el cambio de pH que adquiere la disolución al agregarle una

sustancia, y de ahí se refleja el cambio en el ultravioleta. Lo que puede suceder es que
puede haber una sustitución nucleofílica lo cual puede producir el cambio estructural.

3. Investigue qué es un espectro de absorción y uno de emisión.

 Espectro de absorción: es cuando a un átomo es excitado con una determinada
cantidad de energía para ir de un nivel inferior a un nivel superior con lo cual emite
longitud de onda y una frecuencia que es representativa de ese elemento.
Espectro de emisión: El espectro de emisión atómica de un elemento es un
conjunto de frecuencias de las ondas electromagnéticas emitidas por átomos de ese
elemento, en estado gaseoso, cuando se le comunica energía.

4. ¿En qué difiere el color de las disoluciones observadas a simple vista de aquellas
observadas bajo luz ultravioleta? ¿Cómo se nombra tal propiedad de las sustancias?

La diferencia de color es producida porque la luz del ambiente tiene diferente

energía que la luz UV, emitiendo así luz con diferente frecuencia.
Tal propiedad se conoce como fluorescencia, que caracteriza a las sustancias que
son capaces de absorber energía en forma de radiaciones electromagnéticas y luego
emitir parte de esa energía en forma de radiación electromagnética de longitud de
onda diferente

5. Observando los espectros UV-Vis obtenidos, ¿en qué difieren? ¿Tal diferencia es
observable a simple vista?

Estos difieren en la irradiación con la radiación electromagnética del intervalo que

va de 300nm a 800nm. Los espectros obtenidos son una gráfica de las longitudes de
onda que la molécula absorbe, pero el color que observamos es en realidad la
combinación de aquellas longitudes de onda que la molécula nos devuelve. La
radiación absorbida por la molécula le provoca una transición electrónica, que es un
cambio en forma por la molécula y tamaño de su nube de electrones. Posteriormente
la molécula regresa a su estado inicial, o basal, disipando la energía recibida,
vibrando, rotando deformándose o emitiendo luz, este último fenómeno permite
obtener los espectros de emisión de la molécula.

ANEXOS

o Especto UV-VIS de la fluoresceína en MEDIO ACIDO

o Especto UV-VIS de la fluoresceína en MEDIO BASICO
Bibliografía
1. B. Walter. Manual de Química orgánica. 19 Edición (Reverté S.A). p.779
2. L.G. Wade. JR. Química Orgánica. Quinta edición (Pearson) p.984
3. Agudelo A, Fernando. Heterociclos. Síntesis orgánica. 2015. Pag 146-148