Universidad de Guayaquil
Facultad de Ciencias Químicas
Laboratorio de Análisis Químico Clínico II
Título de Práctica
Determinación del Colesterol
Nombre: Rodríguez Panchana Roberto Grupo: 1 Fecha: /06/2021
Objetivos de la práctica de Laboratorio
Investigar los procedimientos e importancia del estudio del colesterol a nivel sanguineo como sus
sintesis en el cuerpo.
Investigar las concecuencias de niveles altos de creatinina y su relacion con dichas enfermedades.
Comprender la importancia del estudio de la creatinina en el plasma sanguineo y su iportancia en el
metabolismo.
Instrucciones o consideraciones previas
El colesterol es un lípido (grasa). Se forma en el hígado a
partir de alimentos grasos y es necesario para el
funcionamiento normal del organismo. El colesterol está
presente en la membrana plasmática (capa exterior) de
todas las células del organismo. El colesterol se desplaza
por la sangre mediante unas moléculas denominadas
lipoproteínas. Los tres tipos principales son: Las
lipoproteínas de baja densidad (LDL) o “colesterol malo”;
se cree que causan enfermedades arteriales. Las LDL
transportan el colesterol desde el hígado a las células y
pueden causar una acumulación nociva si hay más de lo que las
células pueden usar. Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) o
“colesterol bueno”; se cree que previenen las enfermedades
arteriales. Las HDL se llevan el colesterol de las células y lo
devuelven al hígado donde se descompone y se elimina como
residuo corporal. Los triglicéridos se forman en el hígado y están
presentes en productos lácteos, carne y aceites culinarios. La
obesidad y la alimentación rica en grasas aumentan el riesgo de tener
niveles altos de triglicéridos.
Algunos factores relacionados con el estilo de vida pueden aumentar la
probabilidad de tener colesterol alto. Por ejemplo: una alimentación poco saludable
que contiene muchas grasas saturadas, la falta de ejercicio físico, ser obeso, fumar
y beber grandes cantidades de alcohol. La dosis de alcohol recomendada es 3-4
unidades al día (hombres) y 2-3 unidades al día (mujeres). Los alimentos con alto
contenido de grasas saturadas son: carne roja, salchichas, quesos curados, manteca,
masa pastelera, pasteles, galletas y nata agria. Una serie de enfermedades tratables
también puede provocar colesterol alto en la sangre. Estas enfermedades son:
hipertensión (tensión arterial alta), diabetes, enfermedades del riñón e hígado,
inflamación aguda del páncreas (pancreatitis aguda) e hipoactividad de la glándula
tiroides. Un conjunto de factores de riesgo fijos también puede provocar colesterol alto en la sangre. La
probabilidad de tener colesterol alto es mayor si existen antecedentes familiares de cardiopatías coronarias,
accidentes cerebrovasculares u otras enfermedades relacionadas con el colesterol. La edad, una menopausia
temprana en la mujer y el origen étnico también son factores de riesgo. Si es indio, paquistaní, bangladesí o de
Sri Lanka tendrá mayor riesgo de colesterol alto.
El colesterol-HDL como factor de riesgo cardiovascular
Múltiples estudios han demostrado que existe una relación inversa entre la incidencia de los desenlaces
cardiovasculares y el colesterol-HDL. 1 Un metaanálisis reciente confirmó la independencia de tal
asociació[Link] él se incluyeron 302,430 individuos participantes de 68 estudios con seguimiento a largo plazo.
La mayoría de los participantes son caucásicos de Norteamérica o Europa. Los desenlaces evaluados fueron:
8,857 infartos del miocardio no fatales; 3,928 muertes cardiovasculares y 2,534 infartos cerebrales isquémicos.
Algunas de estas propiedades potencialmente antiaterosclerosas, también se han puesto de manifiesto in vivo
con infusiones de HDL. Estas evidencias, además de la protección que se logra en modelos animales
genéticamente modificados, permite plantear a las HDL como un objetivo primario en la prevención de la
aterosclerosis coronaria. Algunos estudios epidemiológicos han demostrado una reducción importante en el
riesgo cardiovascular asociado a elevaciones del colesterol HDL, principalmente en prevención secundaria. En
consecuencia, elevar las concentraciones de las HDL a través de medidas higiénicas como el ejercicio
aeróbico, la pérdida de peso y eliminar el tabaquismo, es ampliamente recomendado para reducir el riesgo
coronario
Clínica
La determinación de colesterol en forma aislada tiene utilidad diagnóstica limitada. Se ha visto que el
colesterol es uno de los factores contribuyentes a la formación de ateromas dado que las complicaciones
arterioscleróticas prevalecen en individuos hipercolesterolémicos. Estudios epidemiológicos demuestran que el
riesgo de contraer enfermedad cardíaca coronaria para individuos de más de 40 años con colesterolemia menor
a 2,10 g/l es 3 veces menor que entre individuos con más de 2,30 g/l y 6 veces menor que entre individuos con
más de 2,60 g/l.
FUNDAMENTOS DEL METODO
El esquema reaccional es el siguiente:
ésteres de colesterolipasa colesterol+ ácidos grasos
→
colesterol +O 2 CHOD colesten−3−ona+ H 2 O2
→
colesterol +O 2 CHOD colesten−3−ona+ H 2 O2
→
Reactivos de Laboratorio:
Reactivo A: solución de 4-aminofenazona 25 mmol/l.
Reactivo B: solución de fenol 55 mmol/l.
Reactivo C: suspensión conteniendo lipasa fungal 300 U/ml, colesterol oxidasa (CHOD) 3 U/ml y
peroxidasa (POD) 20 U/ml.
S. Standard: solución de colesterol 2
Concentraciones g/l.
Lipasa ≥ 6000 U/L
CHOD ≥ 60 U/L
POD ≥ 400 U/L
4-AF 1,25 mmol/L
Fenol 2,75 mmol/L
pH 7,4 ± 0,1 (a to amb.)
CONDICIONES DE REACCION
Longitud de onda 505 nm
Temperatura de reacción 37°C
Tiempo de reacción 15 minutos
Volumen de muestra 20 µl
Volumen de Reactivo de 2 ml
Trabajo
Volumen final de reacción 2,02 ml
Los volúmenes de Muestra y Reactivo pueden
aumentarse o disminuirse proporcionalmente (Ej.:
10 ul de Muestra + 1 ml de Reactivo de Trabajo o
50 ul + 5 ml
Equipos
- Espectrofotómetro Uv-vis.
- Baño de agua a 37 ° C.
Materiales de Laboratorio
Pipeta automática de volumen variable (100-1000 µl).
Tubos de ensayo (12 x 100 mm).
Gradilla.
3 cubetas de caras paralelas (1 cm).
Reloj cronómetro.
Punta para pipeta color amarillo (2-200 µl).
Punta para pipeta color azul (50-1000 µl).
Papel absorbente.
Actividades por desarrollar/ técnica operatoria
Marcar 3 tubos con B (Blanco), St (estándar) y No. de muestra
Blanco Estándar Muestra
Estándar - 20µL -
Muestra - - 20µL
Reactivo de 2mL 2mL 2mL
trabajo
Incubar 15 minutos en baño de agua a 37o C o 30 minutos a temperatura
ambiente (25o C). Leer en fotocolorímetro con filtro verde (490-530 nm) o en
espectrofotómetro a 505 nm, llevando el aparato a cero con el Blanco.
Resultados obtenidos:
N/A
Conclusiones
La importancia del examen de creatinina un medio para medir el funcionamiento de los riñones en el proceso
de filtración de los desechos de la sangre, los riñones deben estar en óptimas condiciones para filtrar la
creatinina en la sangre, además de detectar problemas en su funcionamientos diagnostica enfermedades renales
como resultado del análisis anormales de creatinina en sangre o de la tasa de filtrado glomerular estimada.
Recomendaciones :
- Identificar cada muestra o tubo antes de realizar los análisis.
- Controlar el tiempo de cada análisis para un mejor rendimiento en el laboratorio.
- El área de trabajo como los equipos a utilizar debes estar limpios y estandarizados.
Bibliografía
Acevedo, M. K. (2012). Relación colesterol total a HDL y colesterol no HDL: los mejores indicadores lipídicos de
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Armesto, R. A. (2017). Lípidos, colesterol y lipoproteínas. Galicia Clínica, 72(1), 7-17.
Eblen-Zajjur, A. &.-Z. (2011). . Cálculo de la concentración de colesterol de la lipoproteína de baja densidad: análisis de
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