UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE
GROHOMANN
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD –
ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y
BIOQUIMICA
CURSO:
PRACTICAS DE LABORATORIO
TEMA:
RECUENTO DE GLOBULOS ROJOS Y PLAQUETAS
NOMBRE DEL ALUMNO:
VALENCIA VALENZUELA EDWIN FERNANDO
CÓDIGO:
2017-125015
DOCENTE:
Q.F Nelson Arteaga Téllez
2020
RECUENTO DE GLOBULOS ROJOS Y PLAQUETAS
FUNDAMENTO TEORICO:
Los recuentos celulares anteriormente se realizaban con métodos manuales siendo el corazón
de esta prueba los hemocitómetros o cámaras contadoras, hoy en día se emplean equipos
electrónicos que pueden ser semiautomatizados o automatizados.
El principio del recuento celular manual es sencillo y similar para eritrocitos, leucocitos y
plaquetas, solo varían la dilución, el diluyente y el área contada. Hasta hace poco el recuento
se expresaba en cantidad por mm3 , por el volumen obtenido en el hemocitómetro, el cual se
determina mediante medidas lineales y actualmente se expresan en litros (L), pues los equipos
automatizados cuentan una mayor cantidad de células suspendidas en una solución diluyente
isotónica.
Los principios generales de estas mediciones son:
1. Escoger un líquido de dilución que no solamente diluya los eritrocitos hasta cifras legibles,
sino también permita identificarlos de una u otra manera o destruya otros elementos
celulares.
2. Emplear una cámara de recuento de glóbulos o un contador electrónico, que presentan al
observador o al aparato de lectura los glóbulos en forma tal que se pueda establecer el
número de ellos por unidad de volumen de líquido. El contador electrónico de glóbulos evita el
error humano y al contar un mayor número de glóbulos, resulta estadísticamente más preciso.
Recuento manual
Hemocitómetro o cámara de conteo
La cámara de conteo es un aparato de vidrio óptico especial de precisión, se emplea para
contar células o partículas en suspensión. Es una placa rectangular gruesa del tamaño de un
portaobjetos, con dos superficies elevadas separadas por una hendidura en forma de H.
Las prominencias transversales están localizadas a cada lado de la zona rayada. Sobre las
prominencias transversales se coloca un cubreobjetos plano estandarizado y ópticamente
corregido. Entre la superficie inferior del cubreobjetos y la superficie de la zona rayada existe
una profundidad de 0.1 mm. Suelen utilizarse los hemocitómetros con rayado de Neubauer
modificado.
Esta cámara consta de un cuadro primario que mide 3 x 3 mm (9 mm2 ), subdividido en nueve
cuadros secundarios, cada uno de 1 x 1 mm (1 mm2 ). Los cuatro cuadrados secundarios de las
esquinas llamados A, B, C y D que muestra la Figura N o . 11, se emplean para el recuento de
leucocitos y se subdividen en 16 cuadros terciarios respectivamente. El cuadro milimétrico
secundario central E, está subdividido en 25 cuadros cuaternarios, y cada uno de los cuales
mide 0.2 x 0.2 mm. Cada uno de estos cuadros está subdividido ulteriormente en 16 cuadros
más pequeños (quinarios).
El número total de cuadros quinarios suman 400 (25x16). Como regla, cinco de los cuadros
cuaternarios equivalen a 80 de los cuadros quinarios (5x16) que se emplean para el recuento
de eritrocitos y se marcan como 1, 2, 3, 4 y 5
Cámara de Neubauer y un primer plano de las áreas de conteo como se ven en el microscopio.
Los cuadros marcados con una W se emplean para contar leucocitos y los que están marcados
con una R para eritrocitos.
Pipeta para diluir los eritrocitos
La dilución de la muestra se puede hacer con una pipeta de Thoma o por el sistema de dilución
en tubo.
Las pipetas de cristal de Thoma constan de un tubo capilar graduado, dividido en 10 partes y
marcado con un 0,5 en la quinta señal y con 1 en la décima, y por encima un ensanchamiento,
bulbo o pera para mezcla, con una perla de cristal en su interior de color rojo indicando su uso
para eritrocitos y blanca para el uso de leucocitos, y por encima del bulbo otro tubo capilar
corto con una marca de 101 grabada en la pipeta para recuento de eritrocitos y de 11 en la de
recuento de leucocitos. El volumen para la pipeta de eritrocitos está constituido por una parte
a nivel de la marca 1 y 100 partes en el bulbo o una parte a nivel de la marca 0,5 y 200 partes
en el bulbo. Cuando la sangre es aspirada hasta la marca de 0,5 y el líquido de dilución hasta la
marca de 101, todas las células sanguíneas se lavan en la ampolla y la dilución resultante en el
mismo es de 1 a 200.
La parte capilar de la pipeta no contiene sangre, sino sólo liquido diluyente; por consiguiente,
no está incluido en el volumen y su contenido debe ser expulsado antes que la suspensión de
eritrocitos se introduzca en la cámara de recuento.
Líquido diluyente
El líquido debe ser isotónico para evitar crenar y lisar los eritrocitos. Debe contener un fijador
para preservar la forma de las células y prevenir la aglutinación y autolisis, y solo si el recuento
no puede ser llevado a cabo dentro de una hora.
Existen diversos tipos de líquidos de dilución utilizados en el Laboratorio. Dentro de los más
comunes se encuentra la solución de Gower y la de Hayem, otros también utilizados con cierta
frecuencia son la solución de Toison y la solución de Daice. Utilizando estas soluciones se evita
la formación de conglomerados y apilamientos de eritrocitos. Los leucocitos no llegan a
destruirse y aunque se cuenten a la vez que los hematíes, no se originará demasiada variación
en el número total de eritrocitos contados.
El recuento manual de eritrocitos tiene un error del 10%, el cual puede deberse a múltiples
causas, algunas de estas pueden ser:
• Errores de extracción: dilución o hemoconcentración de la muestra. Hemólisis o coagulación
parcial.
• Mala homogenización de la muestra.
• Utilización de material mal calibrado, sucio o húmedo.
• Errores de dilución de la muestra.
• Cámara de Neubauer no calibrada, sucia o mojada.
• Llenado incorrecto de la cámara de Neubauer.
• Empleo de cubrehematímetro descalibrado.
• Errores del analista durante el recuento y cálculos realizados.
Debido a esto y al empleo de equipos automatizados, el recuento de eritrocitos manual se
realiza en raras ocasiones y además este puede ser substituido por parámetros eritrocíticos
manuales más exactos, como el microhematocrito y la Hb, pues estos parámetros guardan una
estrecha relación.
La regla del tres:
Está regla sólo es válida para muestras con eritrocitos de morfología normal. El valor de la Hb
debe ser tres veces el del recuento de eritrocitos.
• Recuento de eritrocitos x 3 = Hb
1. Todo el cuadro (3 mm x 3 mm) = Primario
2. Los cuadros A, B, C, D y E ( 1 mm x 1 mm) = Secundarios
3. Los cuadros internos de A, B, C y D (0,25 mm x 0,25 mm) = Terciarios
4. Los cuadros internos de E: 1, 2, 3, 4, 5, etc. (0,20 mm x 0,20 mm) = Cuaternarios
5. Los cuadros internos de 1, 2, 3, 4, 5, etc. (0,05 mm x 0,05 mm) = Quinarios
FUNDAMENTO:
El recuento manual de eritrocitos incluye la aspiración de una cantidad muy exacta de sangre
anticoagulada en una pipeta de Thoma escrupulosamente limpia, posteriormente se diluye la
sangre hasta la señal de la marca de 101 de la misma pipeta con un líquido que es isotónico
respecto a los eritrocitos. Después de efectuar una adecuada mezcla, la solución resultante se
coloca en una cámara de recuento muy limpia (hemocitómetro) y se cubre con cubreobjetos
estandarizado, ópticamente plano y limpio. La cantidad de eritrocitos en un volumen dado se
cuenta sobre la platina de un microscopio de luz.
El recuento eritrocitario total sólo se calcula exactamente cuándo se tienen en cuenta las
dimensiones hemocitómetro–cubreobjetos y las diluciones de la pipeta. Es decir, que se
calcula mejor el número de eritrocitos por milímetro cúbico de sangre cuando se tiene en
cuenta el área contada, la profundidad de la cámara y la dilución según la fórmula siguiente:
N = Número de células contadas
Volumen = lado por lado x profundidad = mm3
Dilución = 1:200 ó 1:100 Material e instrumentos
• Sangre con EDTA
• Boquilla
• Pipeta de Thoma para eritrocitos
• Agitador para pipetas de Thoma
• Cámara de Neubauer
• Cubrehemocitómetro
• Microscopio Reactivos
• Líquido de Hayem
PROCEDIMIENTO:
1. Recolectar 5 mL de sangre venosa en un tubo con EDTA y mezclar por inversión.
2. Con la pipeta en posición horizontal aspirar sangre hasta la marca de 0,5. El exceso de
sangre se elimina tocando la punta de la pipeta con una gasa.
3. Limpiar la sangre adherida a las paredes externas de la pipeta con una gasa procurando no
tocar la punta de la pipeta.
4. Introducir la pipeta en forma vertical en el líquido de Hayem y aspirar diluyente hasta la
marca de 101. Si se aspira más diluyente se desecha todo el contenido de la pipeta en un
recipiente con cloro y se inicia nuevamente con el paso 2.
5. Retirar el adaptador de la boquilla obturando con parafilm la punta de la pipeta para evitar
la pérdida de líquido, colocar parafilm en el extremo opuesto a la punta y manteniendo la
pipeta siempre en posición horizontal se coloca en el agitador mecánico durante 3 ó 4
minutos.
6. Colocar el cubreobjetos sobre las dos superficies elevadas de la cámara para cubrir las dos
cuadrículas.
7. Desechar las primeras 4 ó 6 gotas de la pipeta para eliminar el diluyente que queda en el
capilar y que no diluye la muestra.
8. Cargar ambos lados de la cámara manteniendo la pipeta en un ángulo de 45°, tocar con la
punta el borde del cubreobjetos donde se junta con la superficie elevada de la cámara. El
hemocitómetro se llena por capilaridad, el flujo de llenado debe ser constante y sin que este
llene la hendidura en forma de H de la cámara.
9. Colocar el hemocitómetro en la platina del microscopio y dejar reposar de 3 a 5 minutos,
para dar tiempo a que las células se distribuyan y se asienten en el fondo de las cuadrículas.
10. Con el objetivo de 10X, se localiza el cuadro central E y se comprueba que las células estén
distribuidas uniformemente.
11. Una vez enfocado el cuadro central con el objetivo 40X, se cuentan los cuadros marcados
del 1-5 mostrados en la Figura No. 11.
12. Se comienza a contar las células contenidas en el cuadro cuaternario superior izquierdo
marcado como No. 1 y se sigue el orden establecido de los números marcados en la Figura No.
11.
13. El conteo se lleva a cabo de la siguiente manera: se cuentan las células rojas dentro del
recuadro y las que tocan las líneas triples superiores e izquierdas; discriminando las células
moradas que se encuentran fuera y tocando las líneas triples inferiores y derechas marcadas
con una (X), como lo muestra la figura No. 12.
14. Se anotan separadamente el número de eritrocitos de cada cuadro cuaternario contado y
se suma el resultado de los 5 cuadros.
15. Calcular la cuenta total de eritrocitos/mm3 , empleando la fórmula siguiente:
N = Eritrocitos contados
5 = Cuadros cuaternarios contados
(0.2)2= área de cuadro cuaternario
0.1 = altura de la cámara
200 = dilución de la muestra
Factor = 10 000 (depende de la dilución empleada)
16. Lavar las pipetas de Thoma una vez con agua corriente y tres veces con agua destilada.
17. El hemocitómetro y los cubreobjetos deben limpiarse sumergiendo en agua tibia y nunca
secados con gasa o pañuelos para evitar que se rayen. Una vez limpios deben dejarse al aire
antes de guardarse.
BIBLIOGRAFIA:
[Link]
content/Portal2015/Licenciaturas/qfb/manuales/17Manual_Hematologia.pdf
[Link]
count/basics/definition/sym-20050858