Febrile Antigens

PRESENTACION Kit Antígenos Febriles

Suspensiones bacterianas coloreadas
Reactivos para la determinación de anticuerpos
frente a antígenos febriles PRUEBAS EN PORTA Y TUBO

Sólo para uso diagnóstico in vitro

FUNDAMENTO MUESTRAS
Los antígenos coloreados CROMATEST son suspensiones Suero claro, reciente.
estandarizadas de bacterias muertas preparadas para la detección Una vez separado, el suero puede guardarse a 2-8ºC durante una
y semicuantificación por aglutinación en porta o tubo de las semana antes del ensayo, o por un período mayor a –20ºC.
aglutininas séricas humanas, un grupo de anticuerpos que se
desarrollan durante algunas infecciones febriles tales como la EQUIPO ADICIONAL
1,2
brucelosis, salmonelosis y ciertas rickettsiosis .
La determinación se efectúa ensayando los antígenos coloreados _
Portas o placas de vidrio.
–somáticos, azules; flagelares, rojos− frente a los sueros _
Palillos desechables.
problema. La presencia o ausencia de aglutinación visible está _ Tubos de ensayo (12 x 100 mm).
usualmente relacionada con la presencia o ausencia del anticuerpo _ Pipetas de volumen variable.
homólogo correspondiente en las muestras ensayadas. _ Solución salina (NaCl 0,9%).
_ Agitador mecánico rotatorio de velocidad variable
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS _ Baño termorregulable (30-50ºC).
Ag Antígeno Febril. Suspensión estabilizada y tamponada de
bacterias muertas y coloreadas. TECNICA
CONTROL + Brucella, Salmonella, Proteus: Suero de animal, que
contiene el correspondiente anticuerpo febril. I. Prueba cualitativa
CONTROL - Aglutinin-Negativo. Suero animal no reactivo. 1. Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente.
2. Resuspender el antígeno con suavidad. Aspirar y vaciar varias
veces el cuentagotas para asegurar su homogeneidad antes
Aviso: Los reactivos de este kit contienen 0,95 g/L azida sódica. Evitar el
contacto con la piel y mucosas. del ensayo.
3. Depositar 50 μL de suero problema en uno de los círculos de la
CONTENIDO DEL ENVASE tarjeta visualizadora. En la detección de anticuerpos anti-
brucela, 20 μL de muestra es suficiente (Nota 1 y Nota 2). En
REF REACTIVOS Kit 2199435 Kit 2199300 círculos adicionales, depositar 1 gota de control positivo y 1
2100050 Brucella Abortus 1 x 5 mL − gota de control negativo.
2104050 Brucella Melitensis − − 4. Añadir a cada círculo 1 gota de la suspensión antigénica,
2106050 Brucella Suis − −
próxima a la muestra a analizar.
2135050 S. Typhi H (d-H) 1 x 5 mL 1 x 5 mL
2139050 S. Typhi O (9, 12-O) 1 x 5 mL 1 x 5 mL 5. Efectuar la mezcla con ayuda de un palillo desechable,
2113050 S. Paratyphi AH (a-H) 1 x 5 mL 1 x 5 mL extendiéndola de forma que cubra por completo la superficie
2117050 S. Paratyphi AO (1, 2, 12-O) − 1 x 5 mL interior de cada anillo. Emplear palillos distintos para cada
2119050 S. Paratyphi BH (b-H) 1 x 5 mL 1 x 5 mL mezcla.
2123050 S. Paratyphi BO (1, 4, 5, 12-O) − 1 x 5 mL 6. Mover la tarjeta a mano o con agitador rotatorio (100 r.p.m.)
2125050 S. Paratyphi CH (c-H) − 1 x 5 mL durante 1 minuto.
2127050 S. Paratyphi CO (6, 7-O) − 1 x 5 mL 7. Observar de inmediato con la ayuda de una luz adecuada, la
2107050 Proteus OX19 1 x 5 mL − aparición de cualquier signo de aglutinación.
2109050 Proteus OX2 − −
2111050 Proteus OXK − − Lectura
2921206 Brucella Control positive 1 x 1 mL − Reacción negativa: Suspensión uniforme sin cambio visible
2921306 Proteus Control positive 1 x 1 mL −
alguno, tal como se presenta en el control negativo.
2921406 Salmonella Control positive 1 x 1 mL −
2929906 Aglutinin-Negative 1 x 1 mL − Reacción positiva: Aglutinación débil o intensa, fácilmente
visible macroscópicamente.
ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
II. Prueba semi-cuantitativa
Conservar a 2-8ºC. No congelar los componentes del kit ya 1. Para cada muestra a analizar, pipetear 80, 40, 20, 10 y 5 μL de
que la funcionalidad del test podría verse afectada. suero en cada uno de los círculos de la placa visualizadora.
Los Antígenos y los Controles son estables hasta la fecha de 2. Ensayar cada una de las diluciones tal como se describe en los
caducidad indicada en la etiqueta. pasos 4-7 de la Prueba Cualitativa (Nota 2).

PREPARACION DE LOS REACTIVOS Lectura

Como en la Prueba Cualitativa. El título de la muestra
Los Antígenos y los Controles están listos para su uso. corresponde a la máxima dilución que presenta reactividad

QUALITY SYSTEM CERTIFIED LINEAR CHEMICALS S.L. Joaquim Costa 18 2ª planta. 08390 Montgat, Barcelona, SPAIN
ISO 9001 ISO 13485 Telf. (+34) 934 694 990 Fax. (+34) 934 693 435. website [Link]
III. Prueba en tubo
1. Empleando solución salina como diluyente, disponer para cada
CARACTERISTICAS FUNCIONALES
antígeno a ensayar una fila de dobles diluciones de la muestra, _ No esta disponible un Material de Referencia que permita
como sigue:
establecer la sensibilidad de estos reactivos. Es por ello que
Control Control Control Linear Chemicals ajusta la sensibilidad de sus reactivos frente a
Tubo 1 2 3 4 5 6
Susp. + − antisueros específicos y comparando con reactivos comerciales
Sol. Salina de calidad reconocida.
0,95% 1,9 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 _ Efecto prozona: Pueden obtenerse falsos resultados negativos
(mL)
+ + + + + + + + en muestras que contengan un elevado título de anticuerpos.
Suero Una dilución de estas muestras proporcionará un resultado
100 Diluciones seriadas de 1 mL − 2 gotas 2 gotas
(µL) positivo.
Mezclar
_ Los resultados obtenidos con este reactivo no muestran
1,0
diferencias significativas al ser comparados con un reactivo de
2. Agitar la suspensión antigénica apropiada y añadir 1 gota en referencia. Los datos analíticos del estudio comparativo están
cada uno de los tubos de la serie. Mezclar. Las diluciones disponibles bajo solicitud.
finales del suero serán: 1:20, 1:40, 1:80, 1:160, 1:320, 1:640. _ Hemoglobina (<10 g/L), bilirrubina (<20 mg/dL), lipemia (<10
3. Incubar a 37ºC durante 24 horas. (Nota 4) g/L) y factores reumatoideos (<300 UI/mL) no interfieren con el
4. Examinar macroscópicamente la presencia de aglutinación.
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Lectura
Leer en primer lugar los resultados de todos los tubos de _ Tanto en infecciones tempranas como en casos de
control. Una vez examinado el tipo de sedimento, agitar inmunodepresión, pueden darse reacciones negativas.
ligeramente el tubo. _ El tratamiento con antibióticos en enfermos tifoideos, puede
Reacción negativa: En una reacción negativa y en un Control ocasionar la inhibición de las aglutininas somáticas, con la
de suspensión, la opacidad del tubo no se modifica, mostrando consiguiente falta de aglutinabilidad –negatividad falsa− de las
tras su agitación un típico remolino. suspensiones O correspondientes.
_
Reacción positiva: Aglutinación parcial o completa Se han descrito falsas positividades (reacciones cruzadas del
acompañada de aclaramientos variables del sobrenadante. El antígeno brucelósico) en sueros de pacientes infectados con
título del suero corresponde a la máxima dilución del mismo Vibrio (Campylobacter), Pasteurella, Proteus OX19 y Y.
que presenta aglutinación frente a un antígeno bacteriano enterocolitica (serotipo 9), y en sueros de vacunados con V.
determinado. La dilución siguiente debe ser negativa. cholerae.

CONTROL DE CALIDAD NOTAS

Incluir diariamente controles positivo y negativo, así como tubos 1. Los casos de brucelosis crónica no deberán jamás ensayarse
control de las suspensiones para confirmar el correcto con este método. Recurrir a la prueba del Rosa Bengala
funcionamiento del reactivo. seguida de la prueba en tubo.
2. En áreas geográficas con alta prevalencia de anticuerpos
VALORES ESPERADOS febriles, es recomendable diluir la muestra 1:4 en solución
salina (0,95%) antes de realizar el ensayo.
Salmonelas y Brucelas: Títulos superiores a 1/80 (antígenos
3. Las diluciones finales aproximadas son: 1:20, 1:40, 1:80,
somáticos y brucelas) y 1/160 (antígenos flagelares) son
1:160, 1:320, respectivamente.
generalmente indicativos de infecciones recientes.
4. Alternativamente incubar: Antígenos somáticos (O) y Proteus
Proteus: Títulos inferiores a 1/160 no deben ser considerados
a 48-50ºC durante 4 horas.
significativos.
Antígenos flagelares (H) a 48-50ºC durante 2 horas.
Un resultado positivo aislado tiene menor significado clínico que la
demostración de un aumento o disminución del título en muestras
tomadas del mismo paciente en diferentes días.
CAUSAS DE ERROR
SIGNIFICADO CLINICO _ Las suspensiones antigénicas caducadas pueden presentar
Antígenos Febriles es un término referido a un grupo de reacciones negativas falsas.
_ La contaminación bacteriana de las suspensiones, muestras o
suspensiones bacterianas, representativo de un número de
bacterias patógenas para la especie humana y responsables de la solución salina, la congelación de los antígenos y trazas
aparición de infecciones (brucelosis, salmonelosis y ciertas residuales de detergente en los tubos, son causas generales de
rickettsiosis) que cursan con un cuadro febril en el huésped resultados positivos falsos.
infectado. La mejor forma para establecer la etiología de una
enfermedad infecciosa es el aislamiento e identificación del agente
causal de la misma. Sin embargo, estos medios de diagnóstico no
son siempre de fácil aplicación y es ahí donde radica la importancia REFERENCIAS
del uso de las suspensiones bacterianas en la detección de los
1. Felix, A. Trans. Roy. Soc. Trop. Med. Hyg. 37: 321 (1944).
anticuerpos presentes en el suero del paciente (método indirecto
2. Comité mixto FAO/OMS de expertos en Brucelosis. Wld. Hlth.
de diagnóstico).
Org. Tech. Rep. Ser. 148: 1 (1958).
En el diagnóstico clínico, los resultados obtenidos con el uso de los
Antígenos Febriles deben ser considerados siempre en relación a
los hallazgos clínicos y otras pruebas de laboratorio. S2199-2/0704
[Link]

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