PROTOPLASTOS Y ESFEROPLASTOS
Mediante procedimientos de laboratario se puede lograr eliminar total o
parcialmente la pared celular bacteriana. Se denominan protoplastos las células bacterianas
a las que se ha desprovisto totalmente de pared celular, mientras que esferoplastos son
aquellas células bacterianas que poseen restos de pared.
Obtención. Existen dos posibles métodos alternativos:
1. Por destrucción del entramado del PG mediante enzimas líticas (lisozima, peptidasas).
En el caso de bacterias Gram-negativas, previamente hay que desorganizar la membrana
externa para hacerla permeable a estas enzimas. Ello se logra usando el quelante EDTA y/o
sometiendo las células a bajas temperaturas.
2. Por inhibición de la formación de nuevo PG en las células en crecimiento, tratándolas
p. ej., con penicilina. Si se parte de un mutante auxotrofo para un componente del PG basta
hacer crecer a la bacteria en un medio carente de dicho componente.
Estos métodos permiten:
en el caso de Gram-positivas, la desorganización total de su pared, por lo que se
obtienen protoplastos;
en el caso de las Gram-negativas, quedan restos de membrana externa y de
peptidoglucano atrapados en ella, por lo que se obtienen esferoplastos.
En ambos casos, protoplastos y esferoplastos pueden revertir a la forma normal eliminando
el tratamiento (retirando la lisozima, o la penicilina).
Los protoplastos
son osmóticamente
sensibles:
En un medio
hipotónico,
estallan (lisis
osmótica)
En un medio
iso- o
hipertónico se
mantienen.
Protoplastos y esferoplastos son formas osmóticamente sensibles debido
precisamente a que al no existir o estar desorganizado parcialmente el PG, ya no se pueden
contrarrestar las fuerzas de presión osmótica existentes en los medios hipotónicos en que
normalmente se cultivan o suspenden las bacterias. Por lo tanto, si se quieren obtener
suspensiones estables de estas formas, hay que obtenerlas en medios o
soluciones isotónicos o ligeramente hipertónicos, para evitar su lisis:
soluciones de NaCl 0,25-0,5 M;
sorbitol o sacarosa 0,1-0,5 M;
polietilénglicol (PEG) al 7,5%.
En estos medios los protoplastos y esferoplastos poseen formas esféricas,
independientemente de la forma que tuviera la bacteria con pared de que proceden.
Se emplean en varios aspectos de investigación básica:
método suave para luego obtener extractos libres de células y fracciones subcelulares.
en algunas bacterias, método para hacerlas permeables al ADN, en experimentos de
transformación genética.
para realizar fusión entre protoplastos de diferentes cepas de la misma especie e incluso
entre especies distintas. Se trata de un método de obtención de “recombinantes
somáticos” usado para determinados estudios genéticos en bacterias que no tengan
sistemas naturales de transferencia genética.
5 FORMAS L
Son células bacterianas carentes total o casi totalmente de P.C., con formas
pleomórficas, irregulares y globulares, que se producen de forma espontánea en algunas
especies bacterianas (p. ej., Streptobacillus moniliformis) cuando se cultivan en medios a
base de suero (que son hipertónicos).
Las colonias de las formas L naturales son muy características: en “huevo frito”,
bifásicas.
Se pueden obtener de forma inducida formas L en diversas bacterias Gram-positivas
y Gram-negativas, tratándolas con penicilina en medios hipertónicos.
Las formas L inestables se generan por tratamientos breves, y pueden revertir con
frecuencia a la forma normal con pared. Poseen algo de PG, aunque éste se encuentra
alterado respecto al PG de la célula normal.
Las formas L estables se producen por tratamientos más prolongados, y no suelen
revertir al tipo normal. La mayoría carecen totalmente de peptidoglucano.
Así pues, en las formas L el peptidoglucano ha sido eliminado total o parcialmente,
pero de manera que ya no puede servir de aceptor de nuevo PG.