UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA
Calidad, Pertinencia y Calidez
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Y DE LA SALUD
CARRERA DE BIOQUÍMICA Y FARMACIA
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA
INFORME DE PRÁCTICA DE LA ASIGNATURA DE MICROBIOLOGÍA II
Número de la práctica: BF.6.02- 02
Nombre de la práctica: Identificación de Staphylococcus
1. DATOS INFORMATIVOS.
Carrera: Bioquímica y Farmacia
Asignatura: Microbiología II
Ciclo/Nivel: sexto semestre
Paralelo: “A”
Docente: Dra. Carmita Silverio.
Estudiante: Guissella María Córdova Granda
Fecha de práctica: 10 de septiembre del 2020
Fecha de entrega: 02 de octubre del 2020
2. FUNDAMENTACIÓN.
Staphylococcus es un género de bacterias estafilococáceas de la clase Bacilli, son cocos
Gram positivos que poseen tendencia a agruparse en racimos. Tienen una forma esférica
y un diámetro de alrededor de una micra.
Comprende microorganismos que están presentes en la mucosa y en la piel de los
humanos y de otros mamíferos y aves, incluyendo un total de 51 especies, de las cuales
17 se pueden aislar del ser humano.
Las especies que se asocian con más frecuencia a las enfermedades en humanos
son Staphylococcus aureus (el miembro más virulento y conocido del
género), Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus saprophyticus, Staphylococcus
capitis y Staphylococcus haemolyticus.
Staphylococcus aureus se destaca como un importante patógeno humano, produce
infecciones tanto en la comunidad como a nivel hospitalario. En la comunidad, las
infecciones por S. aureus son a menudo agudas, piogénicas y superficiales, aunque
también puede producir, con menor frecuencia, infecciones profundas como
osteomielitis, neumonía y endocarditis aguda.
Staphylococcus epidermidis es integrante de la flora normal de la superficie corporal
donde sobrevive gracias a sus lipasas, mientras S .aureus se encuentra habitualmente a
nivel de la nasofaringe y de zonas húmedas como pliegues inguinales y axilas. A nivel
del vestíbulo nasal anterior la adherencia parece estar mediada por el contenido en ácidos
teicoicos. Se estima que el índice de portación nasal en los adultos es de alrededor del 20-
30%. (Avalos & Soto, 2015)
Catalasa: La catalasa es una enzima que poseen la mayoría de las bacterias aerobias.
Descompone el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. El desprendimiento de
burbujas procedentes del oxígeno indica que la prueba es positiva.
Manitol: Este agar se utiliza para el aislamiento de estafilococos a partir de muestras
clínicas, de cosméticos y de pruebas de límite microbiano, a continuación se indica una
tabla donde se observan las características:
Organismos Resultados del crecimiento
Staphylococcus aureus Colonias amarillas de tamaño medio,
amarillo medio.
Staphylococcus epidermidis Colonias blancas de tamaño pequeño a
medio, rojo medio.
Estafilococos diferentes de S. aureus y Colonias de tamaño pequeño a grande,
S. epidermidis con zonas de color rojo o amarillo,
según la especie.
Micrococos Grandes, de color blanco a anaranjado
Enterococcus, Streptococcus Sin crecimiento a crecimiento muy débil
Bacterias gram negativas Sin crecimiento a crecimiento débil
Tabla N° 01: Identificación de Staphylococcus con manitol.
Novobocina: Es un método sencillísimo para diagnosticar las resistencias a penicilinas y
cefalosporinas. La novobiocina es un curioso y viejo antibiótico natural (obtenido en
1956) al que se reconocen varios tipos de mecanismos de acción, que al haberse aislado
de varias fuentes ha recibido varios nombres.
3. OBJETIVO.
Determinación de las especies de Staphylococcus mediante cultivos e identificación de
pruebas bioquímicas.
4. EQUIPOS, RECURSOS, MATERIALES E INSUMOS.
Materiales Equipos Insumos
Mechero Microscopio Cultivo de bacterias en
Agar Sangre y Agar
MacConkey
Cubreobjetos Pipeteador manual Peróxido de hidrógeno
Portaobjetos Incubadora de laboratorio Cristal-Violeta y Safranina
Caja petri Alcohol-Acetona
Marcador, regla Aceite de inmersión
Asa de platino en punta y
redonda
Tubos de ensayo
Pinza de metal
5. PROCEDIMIENTO.
Pruebas de identificación para Cocos Gram Positivos
• Con las muestras obtenidas proceder hacer una tinción de Gram, para ello se debe
preparar 3 portaobjetos con ayuda de una asa de platino previamente esterilizada
en el mechero hacer un frotis en los portaobjetos de cada una de las muestras y
dejar secar.
• Fijar con alcohol, aplicar cristal violeta por un minuto, lavar con agua, aplicar
lugol, lavar con alcohol-cetona, teñir con safranina o fucsina esperar 1 minuto,
lavar con agua.
• Observar en el microscopio con el objetivo 100x previamente con el aceite de
inmersión.
• Sembrar las muestras obtenidas en Agar Sangre y Agar MacConkey, controlar a
las 24-48 horas el cultivo para revisar si la bacteria ha crecido en el medio.
• Al observar crecimiento en Agar sangre por la presencia de colonias blanquecinas
y por los resultados obtenidos en la tinción de Gram se deduce que es un coco
Gram positivo.
Procedimiento para hacer la prueba de la Catalasa:
• Encender el mechero, después con el marcador señalar con números los dos
portaobjetos, luego añadir 3 gotas de peróxido de hidrógeno alado de los
números.
• Esterilizar el asa de platino en el mechero, y tomar de la muestra 1 de la caja
Petri de Agar Sangre y tomar una pequeña cantidad de colonias y ubicar en el
portaobjetos donde dice uno, y así sucesivamente con las siguientes muestras.
Procedimiento para hacer la prueba de la Coagulasa:
• Con las 3 muestras del paciente que se le sacaron sangre se las ubico en un tubo
con anticoagulante de citrato de sodio y se las procedió a centrifugar, cuyo
resultado será plasma citratado.
• Coger 3 tubos de ensayo y rotular, y en cada uno de ellos ubicar las muestras de
plasma citratado, aproximadamente 500 microlitros.
• Colocar los tubos en la gradilla, se esteriliza el asa, y con las colonias que se
desarrollaron en el Agar sangre tomar un pequeña cantidad de colonias que se
desarrollaron y ubicar en los tubos según corresponda.
• Ubicar los tubos en la incubadora por 24 horas a 37°C.
Procedimiento para hacer la prueba de Manitol:
• Previamente tener el medio de cultivo de forma inclinada preparado en los tubos
de ensayo, rotular los tubos de ensayo desde el 1 hasta el 3.
• Esterilizar el asa de platino en punta, coger la muestra uno sembrada en Agar
Sangre, pasar por el fuego la boca del tubo de ensayo, se pincha con el asa el
medio de cultivo y se estría en la parte superior donde hay la sustancia gelatinosa,
el mismo procedimiento para la muestra 2 y 3.
• Ubicar los tubos en la incubadora por 24 horas a 37°C.
Procedimiento para hacer la prueba de la Novobiocina:
• Usar el Agar Sangre previamente colocado en la caja Petri.
• Tomar el Asa redonda, coger una pequeña cantidad de la muestra 1 de las colonias
sembradas en Agar Sangre, y sembrar en la caja Petri que contiene el Agar sangre
lo más estriado posible de forma vertical, horizontal y una de forma recta.
• Se hace el mismo procedimiento con la muestra 2 y la muestra 3.
• Con ayuda de la pinza de metal, previamente esterilizada tomar un disco de
antibiótico manitol y se lo coloca encima donde se realizó la siembra, de
preferencia en el centro.
• Por cada disco sembrado se debe esterilizar la pinza en el mechero de bunsen.
• Hacer lo mismo con la muestra 2 y 3.
• Ubicar los tubos en la incubadora por 24 horas a 37°C.
6. RESULTADOS.
Pruebas Catalasa Coagulasa Manitol Novobiocina
Bioquímicas/
Muestras
Muestra 1 + + + +
Muestra 2 + - + -
Muestra 3 + - + +
Tabla 2: Pruebas bioquímicas de staphylococcus.
La muestra 1: es la bacteria Staphylococcus aureus porque tuvo como resultado una
coagulasa positiva, en las pruebas de manitol según revisión bibliográfica debe de ser un
crecimiento de colonias amarillas, y un color amarillo medio, finalmente esta bacteria es
sensible al antibiótico novobiocina con un halo de 17 mm.
Figura 1: coagulasa positiva. Figura 2: manitol positivo. Figura 3: Novobiocina positivo.
La muestra 2: es la bacteria Staphylococcus epidermidis porque tuvo como resultado una
coagulasa negativa, y en las pruebas de manitol se observó colonias blanquecinas de
tamaño pequeño-medio, con una coloración de rojo medio, esta bacteria es resistente al
antibiótico novobiocina ya que tuvo un halo de 10 mm.
Figura 4: coagulasa negativa. Figura 5: manitol positivo. Figura 6: Novobiocina negativo.
La muestra 3: es la bacteria Staphylococcus epidermidis porque tuvo como resultado una
coagulasa negativa, y en las pruebas de manitol se observó colonias blancas de tamaño
pequeño-medio, con una coloración de rojo medio, esta bacteria es sensible al antibiótico
novobiocina ya que tuvo un halo de 20 mm.
Figura 7: coagulasa negativa. Figura 8: manitol positivo. Figura 9: Novobiocina positiva.
7. CONCLUSIÓN.
En conclusión se identificó mediante las pruebas bioquímicas los estafilococos y sus
especies, ya que cada una de las pruebas nos dan resultados y depende de eso se determina
a que grupo pertenece; en este caso se obtuvo como resultado Staphylococcus aureus y
Staphylococcus epidermidis.
8. RECOMENDACIONES.
• Para identificar cocos Gram positivos luego de haber hecho la siembra en Agar Sangre
se determina si pertenecen a Staphylococcus si la catalasa es positiva, caso contrario
serían Streptococcus.
• Si es positiva la catalasa automáticamente se deben hacer las pruebas de coagulasa,
manitol y novobiocina para identificar si es o no resistente a ciertos antibióticos.
• En este caso Staphylococcus aureus de la muestra 1 y Staphylococcus epidermidis
de la muestra 3 es sensible a novobiocina por ende se puede tratar a los pacientes con
penicilinas o cefalosporinas, mientras que Staphylococcus epidermidis de la muestra
2 es resistente a los antibióticos antes mencionados, por ende l paciente no se
recomienda dar antibióticos como penicilinas o cefalosporinas.
9. BIBLIOGRAFÍA.
Alcalá, L., Marín, M., & Mena, A. (2015). Diagnóstico microbiológico de la infección por
Clostridium difficile. Sociedad Española de Enfermedades Infecciosas y Microbiología
Clínica, 4-54.