UNIVERSIDAD POLITÉCNICA DE CARTAGENA

Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica

Departamento de Ingeniería de los
Alimentos y del Equipamiento Agrícola

CARACTERIZACIÓN DE LA CALIDAD DEL FRUTO

ASOCIADA AL CARÁCTER CLIMATÉRICO EN
LÍNEAS CASI-ISOGÉNICAS DE MELÓN

Noelia Dos Santos Carrillo

2014
 UNIVERSIDAD POLITÉCNICA DE CARTAGENA
Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica
Departamento de Ingeniería de los
Alimentos y del Equipamiento Agrícola

CARACTERIZACIÓN DE LA CALIDAD DEL FRUTO

ASOCIADA AL CARÁCTER CLIMATÉRICO EN
LÍNEAS CASI-ISOGÉNICAS DE MELÓN

Noelia Dos Santos Carrillo

Directores
Juan Pablo Fernández Trujillo
Antonio José Monforte Gilabert

2014
 UNIVERSIDAD POLITÉCNICA DE CARTAGENA
Escuela Técnica Superior de Ingeniería Agronómica
Departamento de Ingeniería de los
Alimentos y del Equipamiento Agrícola

CARACTERIZACIÓN DE LA CALIDAD DEL FRUTO

ASOCIADA AL CARÁCTER CLIMATÉRICO EN
LÍNEAS CASI-ISOGÉNICAS DE MELÓN

Trabajo presentado por NOELIA DOS SANTOS CARRILLO

Licenciada en Ciencia y Tecnología de los Alimentos, para aspirar al Grado
de Doctora por la Universidad Politécnica de Cartagena.

DIRIGIDA por

PROF. DR. ING. JUAN PABLO FERNÁNDEZ TRUJILLO

PROF. DR. ING. ANTONIO JOSÉ MONFORTE GILABERT

2014
CARTAGENA, MURCIA, ESPAÑA
 AGRADECIMIENTOS

A los puntales de mi vida,

mis padres, Fran e Isabel, y
mi hermana, Soraya, sin
duda la mejor parte de mí.
Sin vosotros no soy nadie.

A mi familia, amigos, y a
mis niñas Akira, Misika y
Kai

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XI
 AGRADECIMIENTOS

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XII
 AGRADECIMIENTOS

Caminante no hay Camino, se hace Camino al Andar, ilustrativos versos de

Machado para concluir este larga etapa de mi camino.

No podría dar por finalizado este hito de mi trayecto personal y profesional sin dar
las GRACIAS a las numerosas instituciones que con su apoyo económico me han
brindado la posibilidad de desarrollar de mi carrera profesional en el ámbito de la
investigación científica, pero sobre todo y especialmente he de agradecer a las
numerosas y valiosas personas y profesionales que se han ido cruzando en mi recorrido
estos últimos años, aportándome además de su conocimiento, valía y energía, en
algunos casos su insustituible amistad. No existen metas alcanzadas o dificultades
superadas si no son compartidas con los que te quieren y apoyan, y siempre
agradeciendo en su justa medida a los que a veces y aun sin saberlo fueron un oasis en
mi particular desierto.

GRACIAS a mis amigos, algunos de ellos también compañeros investigadores, por

aportarme las cosas buenas de la vida. Gracias a Elisa por su capacidad de trabajo y su
sonrisa. Gracias a Juan Pablo por su templanza y tranquilidad. Gracias a ambos por
quererme como soy y compartir conmigo el día a día. Gracias a María por su energía y
su alegría. Gracias a Ginés por su saber estar y su elegancia. Gracias a Natalia B. por su
fuerza y seguridad. Gracias a Stelian por su inteligencia y su capacidad de liderazgo.
Gracias a Elena por su entrega a los demás. Gracia a María José por saber escuchar y
aconsejar. Gracias a Nino por su pasión y por saber quién soy. Gracias a Carmen Elisa
por su belleza interior. Gracias Laura por su bondad. Gracias a Mercedes por su lucha.
Gracias a Karmen por su originalidad. Gracias a Inés por sus locuras. Gracias a Pepe
por su generosidad. Gracias Fernanda, Natalia F., Sonia, Gaby, Mariano, Sema, Javi…y
algunos que quedarán en el tintero. Gracias a todos por ser y por estar.

GRACIAS al Dr. Juan Pablo Fernández-Trujillo por su dirección, sus

conocimientos, su tiempo y su valía profesional y mostrarme lo que es la devoción a la
investigación.

GRACIAS al Dr. Antonio José Monforte Gilabert por la codirección de la tesis y

sus aportes científicos en genética tan necesarios para el desarrollo de la misma.

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XIII
 AGRADECIMIENTOS

GRACIAS al Dr. Javier Mauricio Obando-Ulloa por su amistad y compartir

conmigo sus conocimientos reafirmándome en el valor de la constancia y la
perseverancia.

GRACIAS a todo el “Grupo de Poscosecha y Refrigeración” (GPR) de la

Universidad Politécnica de Cartagena (UPCT) y su director el Dr. Francisco Artés
Calero por el apoyo científico y personal durante el desarrollo de mi tesis doctoral.
Gracias a Victor, Javier, Ana C, Stephanie, Mariano, Pedro, Alejandro, Natalia, Javi,
Ginés, Encarni, Marta Patricia, Perla, Paco, por los momentos compartidos.

GRACIAS al Dr. Juan Antonio Martínez López por su ayuda y su conocimiento

compartido durante estos años.

GRACIAS a la Dra. María del Carmen Bueso Sánchez por mostrarme parte de sus
conocimientos de estadística, por las horas compartidas y dedicadas, y especialmente
por su apoyo y valía personal, sin los cuales la llegada a meta de este largo viaje no
hubiera sido posible.

GRACIAS a todos los que han colaborando en las agotadoras e interminables

campañas de melón haciéndolas más llevaderas. Gracias a Claudia, Yineth, Paola,
Pablo, Kos, Mercedes, María José, Madhi, Abimael y Fidencio. Gracias también a los
alumnos Isabel, Pauline, Anais, Inés, Brendan, Melanie, Gäell, Citlalli, y Marisela por
su trabajo.

GRACIAS al Grupo de “Pared Celular y Componentes Bioactivos” del

Departamento de Biotecnología de los Alimentos del Instituto de la Grasa (CSIC) de
Sevilla. Especialmente a las Dras. Rocío Rodríguez Arcos y Ana José Jiménez Araujo,
que llevaron mis diversas investigaciones en dicho centro y fueron un gran apoyo
personal. Gracias a Rafael, Guillermo, José María, Antonio Lama, Fátima y Javier por
vuestra ayuda, vuestro cariño y esos desayunos inolvidables. Gracias a Eduardo, Javier
Casado, Eva, Concha, Paco, Antonio, Víctor por los momentos y risas compartidos.
Gracias a mi amiga Sara por ser y estar en buenos y malos momentos y hacer que mi
vida en Sevilla fuera aun mejor. Gracias a Sevilla y sus rincones especiales por
acogerme y hacerme disfrutar y crecer como persona.

GRACIAS al “Trace Gas Research Group” del laboratorio Life Science Trace Gas
Facility. Molecular and Laser Physics. Institute of Molecules and Material de la
Radboud University Nijmegen de Holanda. Agradecer de manera especial a la Dra.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XIV
 AGRADECIMIENTOS

Simona Cristescu su valioso aporte como investigadora y su apoyo durante mi estancia

en su laboratorio. Gracias a los técnicos Alexandar y Harren que siempre me brindaron
su ayuda con una gran sonrisa. Gracias sobre todo a Elena Crespo por hacer mi estancia
en Nijmegen mucho mejor.

GRACIAS al “Departamento de Genética Vegetal” del Institut de Recerca y

Tecnologies Agroalimentáries (IRTA)” de Barcelona (Cabrils). Agradecer sobre todo a
la Dra. Montse Saladié los conocimientos compartidos y la ayuda prestada en el tanto
desarrollo de mi trabajo como en el ámbito personal. Gracias a Ángel Montejo por la
asistencia técnica y sobre todo por su amistad y compartir conmigo su afición al remo
nocturno.

GRACIAS al “Servicio de Apoyo Tecnológico” (SAIT) de la UPCT. Agradecer

muy especialmente a la Dr. María José Roca sus aportaciones técnicas y científicas y su
gran profesionalidad. Gracias Ana Vanesa, Ana Belén, y Cristina por su trabajo.

GRACIAS al Ministerio de Educación de España (MEC), a la Fundación Séneca

de la Región de Murcia y a la Universidad Politécnica de Cartagena (UPCT) por las
becas y contratos. GRACIAS al Ministerio de Ciencia e Innovación (MICINN) o
actual Ministerio de Economía de Competitividad, Consejería de Educación y Cultura
de la Comunidad Autónoma de la Región de Murcia (CARM), Fondo Europeo de
Desarrollo Regional (FEDER), Unión Europea (UE) por los proyectos y estancias
financiados. Gracias a la empresas AB-BIOTICS S.L y NUNHEMS pos los contratos
en que he participado.

GRACIAS a Semillas Fitó que suministro de semillas de ‘Piel de Sapo’, al IRTA

por las semillas de las NILs, y a Plácido Varó y su equipo (Antonio Gutiérrez, María
José García, Ricardo Gálvez, etc.) del Centro Integrado de Formación y Experiencias
Agrarias (CIFEA) en Torre Pacheco (Consejería de Agricultura de la Región de
Murcia) por el manejo del cultivo en las diferentes campañas de cosecha y por todas las
facilidades y extraordinaria y amistosa acogida que siempre nos han brindado.

GRACIAS a mis padres Fran e Isabel por la educación que me han dado, por los
valores que me han inculcado y por ser firmes bastiones en mi vida. GRACIAS A mi
hermana Soraya por aguantarme y apoyarme.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XV
 AGRADECIMIENTOS

GRACIAS a mis abuelos que aunque ausentes siempre estarán presentes en mis
pensamientos. A toda mi familia, especialmente a mis tíos, Pepe y Nati, y a mis primos
Javi, Jose y Virginia, GRACIAS por quererme y por ser como sois.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XVI
 RESUMEN

RESUMEN

El fruto del melón (Cucumis melo L.) es muy apreciado por los consumidores por su
sabor dulce y aroma agradable y su cultivo es de gran importancia en España y en
particular en la Región de Murcia. C. melo L. se caracteriza por su gran diversidad
genética y de comportamiento fisiológico lo que lo convierte en un modelo ideal para el
estudio del metabolismo y la maduración en frutos carnosos. El objetivo de esta tesis
doctoral fue identificar los Quantitative Trait Loci (QTLs) asociados a parámetros de
calidad del melón y caracterizar algunos de sus efectos, especialmente relacionados a la
producción de compuestos volátiles aromáticos y textura del fruto del melón. También
se estableció la relación entre el comportamiento fisiológico de los frutos y algunas de
sus características. Se utilizaron líneas casi-isogénicas o NILs de melón con distinto
comportamiento fisiológico y obtenidas del cruzamiento entres dos parentales no
climatéricos, el cultivar español ‘Piel de Sapo’ (PS) tipo inodorus y la accesión exótica
coreana tipo conomon PI 161375 ‘Shongwan Charmi’ (SC). Las NILs contenían una
introgresión homocigótica casi única del parental SC en el fondo genético del parental
PS. Los análisis realizados en los frutos de melón han permitido comparar las NILs con
respecto del parental PS y así detectar diferencias mediante diversas técnicas estadísticas
univariante y multivariantes con el fin de poder identificar QTLs de interés en el mapa
genético del melón y localizar aromas discriminantes. El comportamiento climatérico de
la NIL 6M1 y del cultivar ‘Védrantais’ (leve y moderado, respectivamente) estuvo
asociado a una mayor producción de ésteres (acetato y no acetato) y compuestos
derivados del azufre, mostrando una dependencia al menos parcial del etileno para su
síntesis. Aldehídos, alcoholes y cetonas estuvieron asociados al comportamiento no
climatérico del control PS, cultivar ‘Nicolás’ y de las NILs SC10- 2 y SC7-1, mostrado
su carácter etileno-independiente. Se han identificado QTLs asociados a la firmeza de la
pulpa y la producción aromas volátiles en NILs de melón con introgresiones en los
grupos de ligamiento III/VI (comportamiento climatérico) o VII y X (comportamiento
no climatérico). Un QTL (ff7.2) fue mapeado en el LG VII asociado a la mayor firmeza
de la pulpa de la NIL SC7-1 y relacionada con el mayor contenido en componentes
estructurales de la pared celular como galactosa y residuo de α-celulosa. Otro QTL
relacionado a una mayor degradación de pectinas fue asociado a los QTLs del

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XVII
 RESUMEN

climaterio de la NIL SC3-5-1, mientras que otro QTL relacionado con la introgresión
que produce el climaterio (localizada en el LG III) estuvo asociado a la producción de
ésteres. Otros treinta y dos QTLs; doce identificados en el LG VII y veinte en el LG X
fueron asociados a la producción de ciertos aromas volátiles sirviendo como potenciales
biomarcadores de mayor firmeza de la pulpa (especialmente aldehídos producidos vía
aminoacídica) y otras diferencias texturales (especialmente relacionadas con la síntesis
compuestos derivados del azufre y compuestos derivados de la metionina) entre NILs de
melón no climatéricas. Las NILs de melón con distinto comportamiento fisiológico han
resultado de alto interés para dilucidar el carácter etileno-dependiente, etileno-
independiente o solo parcialmente etileno dependiente de aromas volátiles y textura, así
como la interrelación entre dos de lo parámetros más importantes que definen la
características de este fruto y por ende a ampliar el conocimiento acerca del etileno y
sus efectos sobre la calidad global y parcial de la fruta en general y del melón en
particular.

Palabras clave: α-celulosa, ácidos urónicos, alcoholes, aldehídos, aminoácidos, análisis

de componentes principales, análisis de mínimos cuadrados parciales, análisis
multivariante, análisis de múltiples árboles de decisión o random forest, análisis
univariante, azúcares neutros, calidad del fruto, celulosa, cetonas, climatérico,
comportamiento fisiológico, compuestos aromáticos volátiles, compuestos derivados del
azufre, Cucumis melo L., ésteres acetato, ésteres no acetato, etileno, firmeza de la pulpa,
genotipo, grupo de ligamiento, hemicelulosa, líneas de introgresión, líneas casi-
isogénicas, maduración del fruto, marcadores moleculares, no climatérico, pared celular,
precursores aromáticos, ‘Piel de Sapo’, Quantitative Trait Loci, rutas metabólicas,
‘Shongwan Charmi’, textura, xiloglucanos.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XVIII
 ABSTRACT

ABSTRACT

Melon fruit (Cucumis melo L.) is highly appreciated by consumers for its sweet taste
and pleasant aroma, being a crop of great importance in Spain and particularly in the
Region of Murcia C. melo L. is characterized by its great genetic diversity and
physiological behavior which makes it a ideal model for the study of metabolism and
ripening in fleshy fruits. The aim of this thesis was identify Quantitative Trait Loci
(QTLs) associated with melon quality parameters and characterize some of its effects,
especially associated with the production of aromatic volatile compounds and texture of
melon fruit. The relationship between the physiological behavior of the fruit and some
of its characteristics is also established. Near-isogenic lines or NILs of melon with
different physiological behavior and obtained by crossing of two non-climacteric
parents, the Spanish cultivar inodorus type ‘Piel de Sapo’ (PS) and the Korean exotic
accession PI 161375 conomon type ‘Shongwan Charmi’ (SC) were used. The NILs
contained a homozygous introgression almost unique of parental SC in the genetic
background of parental PS. The analyses realized in melon fruits has allowed comparing
the NILs with the parental PS and so detect differences by means of several univariate
and multivariate statistical techniques in order to identify QTLs of interest in the melon
genetic map and locate discriminant aromas. The climacteric behavior of NIL 6M1 and
cultivar ‘Védrantais’ (slight and moderate, respectively) was associated with increased
production of esters (acetate and no acetate) and sulfur-derived compounds, showing at
least a partial ethylene dependence for their synthesis. Aldehydes, alcohols and ketones
were associated with non-climacteric behavior of the control PS, cultivar ‘Nicolas’ and
NILs SC10-2 and SC7-1, shown its ethylene-independent character.
QTLs associated with flesh firmness and aroma volatile production in melon NILs
with introgressions in the linkage groups III/VI (climacteric behavior) or VII and X
(non-climacteric behavior) had been identified. A QTL (ff7.2) located in the LG VII
associated with higher flesh firmness in NIL SC7-1 was mapped and related to the
higher content of cell wall structural components, as galactose and α-cellulose residue.
Another QTL associated with increased pectin degradation was associated to climacteric
QTLs of the NIL SC3-5-1, whereas another QTL related to introgresión which produce
climacteric (located in LG III) was associated to esters production. Other thirty-two
QTLs, twelve identified in the LG VII and twenty in the LG X were associated to the

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XIX
 ABSTRACT

production of certain volatile aromas serving as potential biomarkers of higher flesh

firmness (especially aldehydes produced via aminoacid) and other textural differences
(especially related to synthesis of sulfur-derived compounds and compounds obtained
via methionine) between non climacteric melon NILs. Melon NILs with different
physiological behavior have been results of great interest to elucidate the ethylene-
dependent, ethylene-independent or only partially ethylene-dependent character of
aroma volatiles and texture, as well as the interrelation among two of the most
important parameters that define the characteristics of this fruit, and therefore to
increase the knowledge about the ethylene and its effects on global and partial fruit
quality in general and melon in particular.

Keywords: α-cellulose, acetate esters, alcohols, aldehydes, aminoacids, aroma

precursors, aromatic volatile compounds, cell wall, climacteric, Cucumis melo L.,
ethylene, flesh firmness, fruit quality, fruit ripening, genotype, hemicellulose,
introgression lines, ketones, linkage group, metabolic pathways, molecular markers,
multivariate analysis, near-isogenic lines, neutral sugars, non acetate esters, non
climacteric, partial least squares analysis, physiological behavior, ‘Piel de Sapo’,
principal component analysis, Quantitative Trait Loci, random forest analysis,
‘Shongwan Charmi’, sulfur-derived compounds, texture, univariate analysis, uronic
acids, xyloglucans.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XX
 ÍNDICE

ÍNDICE

AGRADECIMIENTOS ......................................................................................... XI -XVI

RESUMEN ....................................................................................................... XVII-XVIII

ABSTRACT .......................................................................................................... XIX-XX

ABREVIATURAS Y ACRÓNIMOS ........................................................ XXIX-XXXII

ABBREVATIONS AND ACRONYMS .................................................... XXXIII-XXXVI

PUBLICACIONES ....................................................................................... XXXVII-XLIV

Publicaciones presentadas en la Tesis Doctoral ............................................... XXXVII

Otras publicaciones relacionadas con la Tesis Doctoral ......................... XXXVIII-XLIII

OBJETIVOS ..................................................................................................... XLV-XLVI

Objetivo general ..................................................................................................... XLV

Objetivos específicos .................................................................................... XLV-XLVI

CAPÍTULO I

1. INTRODUCCIÓN GENERAL .................................................................... 1-40

1.1 Generalidades ................................................................................................. 3-24

1.1.1 El fruto del melón (Cucumis melo L.). Origen. .............................................3

1.1.2 Descripción botánica ................................................................................... 3-5
1.1.3 Descripción genética .................................................................................. 6-7
1.1.4 Clasificación............................................................................................... 7-11
1.1.5 Aspectos nutricionales ............................................................................. 11-13
1.1.6 Importancia económica ............................................................................ 13-17
1.1.7 Cultivo...................................................................................................... 18-20
1.1.8 Cosecha y conservación ........................................................................... 20-24

1.2 Calidad del fruto del melón........................................................................... 24-29

1.2.1 Azúcares ................................................................................................... 26-28

1.2.2 Ácidos orgánicos ...................................................................................... 28-30

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XXI
 ÍNDICE

1.3 Líneas casi-isogénicas de melón ................................................................... 30-31

1.4 Marcadores moleculares y quantitative trait loci. ......................................... 31-32

1.5 Etileno y tasa respiratoria.............................................................................. 33-40

1.5.1 Comportamiento fisiológico. Frutos climatéricos vs. no climatéricos ..... 36-40

2. COMPUESTOS VOLÁTILES ................................................................... 41-64

2.1 Compuestos volátiles. Generalidades ........................................................... 43-44

2.2 Síntesis de compuestos volátiles y principales enzimas implicadas ............ 44-51

2.2.1 Lipoxigenasa (LOX) .................................................................................... 47

2.2.2 Fosfolipasas .................................................................................................. 48
2.2.3 Hidroxiperoxido liasa (HPL) ...................................................................... 48
2.2.4 Alcohol deshidrogenasa (ADH) ................................................................... 48
2.2.5 Alcohol acil-transferasa (ATT). ................................................................... 48
2.2.6 Aminoácidos como precursores de compuestos volátiles .........................48-51

2.3 Principales compuestos volátiles del melón ................................................. 52-59

2.3.1 Ésteres ...................................................................................................... 54-55

2.3.2 Alcoholes y aldehídos .............................................................................. 56-57
2.3.3 Compuestos derivados del azufre ............................................................ 57-59

2.4 Etileno y producción de compuestos volátiles en melón .............................. 59-62

2.5 QTLs y compuestos volátiles en melón ........................................................ 62-63

3. PARED CELULAR ..................................................................................... 65-92

3.1 Pared celular vegetal. Definición ...................................................................... 67

3.2 Componentes de la pared celular. ................................................................. 67-76

3.2.1 Pared celular primaria .................................................................................. 67

3.2.2 Lámina media ............................................................................................... 68
3.2.3 Pectina, hemicelulosa y celulosa .............................................................. 69-75
[Link] Pectinas ................................................................................................ 69
[Link].1 Homogalacturonanos y ramnogalacturonanos .......................... 69-70
[Link].2 Arabinanos, galactanos y arabinogalactanos ............................. 71-72

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XXII
 ÍNDICE

[Link] Hemicelulosa ................................................................................... 72-73

[Link].1 Xiloglucanos ........................................................................... 73-74
[Link].2 Xilanas ........................................................................................ 74
[Link] Celulosa ........................................................................................... 74-75
3.2.4 Azúcares neutros ...................................................................................... 75-76
3.2.5 Ácidos urónicos............................................................................................ 76

3.3 Degradación de la pared celular. ................................................................... 76-78

3.4 Textura de la fruta ......................................................................................... 78-86

3.4.1 Definición de textura ................................................................................ 78-79

3.4.2 Métodos de medida de textura ..................................................................... 79
3.4.3 Atributos de textura ...................................................................................... 79
[Link] Dureza del fruto entero .......................................................................... 80
[Link] Firmeza de la pulpa ................................................................................ 80
[Link] Jugosidad de la pulpa ............................................................................. 81
[Link] Fibrosidad de la pulpa ............................................................................ 81
[Link] Harinosidad ........................................................................................ 81-82
3.4.4 Textura y degradación de la pared celular ............................................... 82-83
3.4.5 Enzimas de degradación de la pared celular ................................................ 83
[Link] Poligalacturonasas ............................................................................. 83-84
[Link] Pectinmetilesterasas ............................................................................... 84
[Link] Pectato liasas. ..................................................................................... 84-85
[Link] β-galactosidasas .................................................................................... 85
[Link] Xiloglucano endotransglicosilasas. Hidrolasas ..................................... 85
[Link] Expansinas ..........................................................................................85-86
[Link] Otras enzimas......................................................................................... 86

3.5 Etileno y firmeza ........................................................................................... 86-88

3.6 Otros componentes que afectan a la firmeza de la fruta ............................... 88-90

3.7 QTLs y firmeza ............................................................................................. 90-91

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XXIII
 ÍNDICE

CAPÍTULO II

MATERIAL Y MÉTODOS .......................................................................... 93-132

1. Población experimental ................................................................................... 95-96

2. Condiciones climáticas ................................................................................... ....96

3. Preparación del campo y siembra ................................................................. 97-100

3.1 Siembra y riego ...................................................................................... 97-100

3.2 Tratamientos .......................................................................................... 98-100

4. Diseño experimental .................................................................................... 100-103

5. Cosecha ........................................................................................................ 103-104

6. Atributos de calidad no destructivos ............................................................ 104-109

6.1 Peso ............................................................................................................. 104

6.2 Diámetro y longitud .................................................................................... 104
6.3 Escriturado, olor, dehiscencia y apariencia comercial .......................... 104-105
6.4 Densidad ..................................................................................................... 105
6.5 Color de la piel...................................................................................... 105-106
6.6 Textura del fruto entero ........................................................................106-107
6.7 Fotografía digital ..................................................................................107-109

7. Atributos de calidad destructivos .................................................................110-128

7.1 Preparación de muestras ............................................................................. 110

7.2 Toma de muestras de pulpa ........................................................................ 110
7.3 Toma de muestras de zumo .................................................................. 110-111
7.4 Toma de muestras de corteza ...................................................................... 111
7.5 Parámetros morfológicos ............................................................................ 113
7.6 Color de la pulpa y del zumo ...................................................................... 113
7.7 Firmeza de la pulpa ............................................................................... 113-114
7.8 Jugosidad de la pulpa .................................................................................. 114
7.9 Densidad del zumo ..................................................................................... 115
7.10 Jugosidad del zumo................................................................................... 115
7.11 Materia seca ........................................................................................ 115-116
7.12 Parámetros químicos ................................................................................. 116
7.12.1 pH ................................................................................................... 116

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XXIV
 ÍNDICE

7.12.2 Sólidos solubles totales ................................................................... 117

7.12.3 Acidez titulable ............................................................................... 117
7.12.4 Azúcares ................................................................................ ...117-119
7.12.5 Ácidos orgánicos ...................................................................... 119-122
7.12.6 Compuestos volátiles ............................................................. ...122-128
[Link] Determinación de compuestos volátiles en zumo ............... 122-125
[Link] Determinación de compuestos volátiles en fruto entero ..... 125-128

8. Parámetros fisiológicos ................................................................................ 128-130

8.1 Tasa respiratoria y producción de etileno ............................................. 128-130

9. Análisis estadístico....................................................................................... 131-132

RESULTADOS

CAPÍTULO III

DIFERENCIAS AROMÁTICAS ENTRE MELONES CLIMATÉRICOS DE

DOS TIPOS Y NO CLIMATÉRICOS DEL TIPO ‘PIEL DE SAPO’ ... 133-158

Resumen ................................................................................................................. 135

1. Introducción. ................................................................................................ 135-136

2. Material y métodos ...................................................................................... 136-139

2.1 Material vegetal .................................................................................... 136-137

2.2 Manejo del cultivo y diseño experimental .................................................. 137
2.3 Comportamiento fisiológico ....................................................................... 137
2.4 Muestreo de zumo y análisis de compuestos volátiles ......................... 137-138
2.5 Análisis estadístico ............................................................................... 138-139

3. Resultados y discusión ..................................................................................139-141

3.1 Tasa respiratoria y producción de etileno ................................................... 139

3.2 Compuestos volátiles aromáticos ......................................................... 139-141

4. Conclusiones .............................................................................................. 141-142

Agradecimientos .................................................................................................... 142

Literatura citada ............................................................................................... 142-145

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XXV
 ÍNDICE

Literatura citada en tablas ................................................................................ 145-150

Figuras y tablas ................................................................................................ 151-158

CAPÍTULO IV

CELL WALL POLYSACCHARIDES OF NEAR-ISOGENIC LINES OF

MELON (CUCUMIS MELO L.) AND THEIR INBRED PARENTALS WHICH
SHOW DIFFERENTIAL FLESH FIRMNESS OR PHYSIOLOGICAL
BEHAVIOR ................................................................................................. 159-174

Abstract

1. Introduction.

2. Material and methods.

2.1 Plant material and experimental desing.

2.2 Physiological behavior evaluation.
2.3 Sampling and sample preparation for extraction of cell wall material
(CWM).
2.4 Cell wall material isolation.
2.5 Extraction of polysaccharide components.
2.6 Polysaccharide analysis.
2.7 High-performance size exclusion chromatography (HPSEC). Analysis of the
molecular weight (MW) of the polysaccharides.
2.8 Quality traits.
2.9 Statistical analysis.

3. Results.

3.1 Quality, physiological behavior and cell wall material of the parental lines
(PS and SC).
3.2 Cell wall fractions.
3.3 Hemicellulosic fraction and parental lines.
3.3 Cellulosic fraction and parental lines.
3.4 Fruit quality traits of the climacteric NIL SC3-5-1 versus PS.
3.5 Differences between seasons.

4. Discussion.

4.1 NILs (SC3-5-1 and SC7-2).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XXVI
 ÍNDICE

4.2 Differences between seasons.

Associated content.
Author information.
Acknowledgment.
Abbreviations used.
References.
Supplementary figures.

CAPÍTULO V

AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES

AT HARVEST IN NON-CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF
MELON ........................................................................................................ 175-218

Abstract.

1. Introduction.

2. Material and methods.

2.1 Plant material.

2.2 Experimental design.
2.3 Textural traits.
2.4Juice sampling and volatile compounds analysis.
2.5 Statistical analysis and QTL mapping.

3. Results.

3.1 Physiological behavior, textural traits and selection of aroma volatile

compounds.
3.2 Univariate analysis of classes of compounds and QTL mapping.
3.3 Univariate analysis of individual aroma volatile compounds and QTL
mapping.
3.4 Multivariate analysis of classes of volatile compounds.
3.5 Multivariate analysis of individual aroma volatiles.
3.6 PLS-DA of individual aroma volatiles.
3.7 RF of individual aroma volatiles.
3.8 Association among textural traits and aroma volatile compounds.

4. Discussion.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XXVII
 ÍNDICE

5. Conclusions.

Acknowledgments.
References.
References of tables.
Appendix A. Supplementary data

CAPÍTULO VI

DISCUSIÓN GENERAL ............................................................................ 219-228

1. Comportamiento fisiológico en frutos de melón ........................................222-223

2. Textura, fisiología y composición de la pared celular en frutos de melón ..223-224

3. Mapeo de QTLs y caracterización del perfil de aromas del melón ............. 224-226

4. Textura, compuestos volátiles aromáticos y su interrelación ...................... 226-227

5. Implicaciones prácticas de la tesis y potenciales aplicaciones .................... 227-228

CAPÍTULO VII

CONCLUSIONES GENERALES .................................................................. 229-232

LITERATURA CITADA EN CAPÍTULOS I, II, VI, VII ............................. 233-260

SOPORTE FINANCIERO ............................................................................... 261-262

ANEXO ............................................................................................................... 263-268

Capítulo III. Diferencias aromáticas entre melones climatéricos de dos tipos y no

climatéricos del tipo ‘Piel de Sapo’ ................................................................. 265-267

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XXVIII
 ABREVIATURAS Y ACRÓNIMOS

ABREVIATURAS Y ACRÓNIMOS

AA Aminoácido
AAT Alcohol Acil-Transferasa
ACC Ácido 1-Aminociclopropano-1-Carboxílico
ACD Ácidos
ACO ACC Oxidasa
ACS ACC Sintasa
ADH Alcohol Deshidrogenasa
AG Ácido Graso
AHA Alcano Hidrocarbonado Alifático
Ala Alanina
ALC Alcoholes
ALD Aldehídos
AN Azúcares Neutros
ANOVA Análisis de la Varianza
Ara L-Arabinosa
AU Ácido Urónico
β-Gal β-Galactosidasa
CAS Chemical Abstracts Service
CDA Compuestos Derivados del Azufre
CE Conductividad Eléctrica
CEL Celulosa
CET Cetonas
CI Cromatografía de Intercambio Iónico
CLAE Cromatografía Líquida de Alta Eficiencia
CSF Fracción Soluble en Carbonato
CWM Material de Pared Celular
DHL Línea Doble haploide
EA Ésteres Acetato
ENA Ésteres No Acetato
EXP Expansina
FDR Test de Ratio de Falsos Positivos

Caracterización de la Calidad del Fruto asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XXIX
 ABREVIATURAS Y ACRÓNIMOS

Fen Fenilalanina
FF Firmeza de la Pulpa
FJ Jugosidad de la Pulpa
Fuc D-Fucosa
Gal D-Galactosa
GalA Ácido Galacturónico
GC-MS Cromatografía de Gases-Masas
Glc D-Glucosa
HG Homogalacturonanos
HPL Hidroperóxido Liasa
IA Invertasa Ácida
ISF Fracción Soluble en Imidazol
Iso Isoleucina
JD Densidad del Zumo
JJ Jugosidad del Zumo
K1SF Fracción Soluble en Potasio 1 M
K2SF Fracción Soluble en Potasio 4 M
LDA Análisis Discriminante Lineal
Leu Leucina
LG Grupo de Ligamiento
LOX Lipooxigenasa
LRI Índice de Retención Lineal
Man D-Manosa
MAS Selección Asistida por Marcadores
MDS Escalamiento Multidimensional
1-MCP 1-Metilciclopropeno
MEP Metileritritol 4-Fosfato
Met Metionina
MTA Metiltioadenosina
MTL Metanotiol
MW Peso molecular
NID Compuesto No Identificado
NIL Línea Casi-Isógénica
NIST National Institute for Standards and Technology

Caracterización de la Calidad del Fruto asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XXX
 ABREVIATURAS Y ACRÓNIMOS

OTH Otros
PCA Análisis de Componentes Principales
PG Poligalacturonasa
PJ Contenido en Fibra del Zumo
PL Pectato Liasa
PLS-DA Análisis Discriminante de Mínimos Cuadrados Parciales
PME Pectin Metilesterasa
PS Cultivar Español ‘Piel de Sapo’
QTL Quantitative Trait Loci
Ram L-Ramnosa
RF Ramdom Forest ó árboles de decisión
RG Ramnogalacturonano
SAM S-Adenosilmetionina
SC Cultivar Coreano ‘Shongwan Charmi’Accessión PI161375
SFS Sacarosa Fosfato Sintasa
SS Sólidos Solubles
SST Sólidos Solubles Totales
SPME Micro-Extracción en Fase Sólida
TER Terpenos
Tir Tirosina
TR Tiempo de Retención
UA Ácidos Urónicos
Val Valina
VIM Importancia de las Variables en la Medida
VIP Importancia de las Variables en la Proyección
WFH Dureza del Fruto Entero
XG Xiloglucano
Xil D-Xilosa

Caracterización de la Calidad del Fruto asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XXXI
 ABREVIATURAS Y ACRÓNIMOS

Caracterización de la Calidad del Fruto asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XXXII
 ABBREVATIONS AND ACRONYMS

ABBREVIATIONS AND ACRONYMS

AA Aminoacid
AAT Alcohol Acyl-Transferase
ACC 1-Aminocyclopropane-1-Carboxylic Acid
ACD Acids
ACO ACC Oxidase
ACS ACC Synthase
ADH Alcohol Dehydrogenase
AE Acetate Esters
AHA Aliphatic Hydrocarbon Alkanes
Ala Alanine
ALC Alcohols
ALD Aldehydes
ANOVA Analysis of Variance
Ara L-Arabinose
CAS Chemical Abstracts Service
CE Electric Conductivity
α-CEL α-Cellulose Residue
CEL Cellulose
CI Ion Exchange Chromatography
CSF Carbonate-Soluble Fraction
CWM Cell Wall Material
DHL Doubled Haploid Line
EXP Expansin
FA Fatty acid
FDR False Discovery Rate Test
FF Flesh Firmness
FJ Flesh Juiciness
Fuc Fucose
β-Gal β-Galactosidase
Gal D-Galactose
GalA Galacturonic Acid

Caracterización de la Calidad del Fruto asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XXXIII
 ABBREVATIONS AND ACRONYMS

GC-MS Gas-Chromatography Mass-Spectrometry

Glc D-Glucose
HG Homogalacturan
HPL Hydroperoxide Lyase
HPLC High-Performance Liquid Chromatography
HSSE Headspace Sorptive Extraction
IA Acid Invertase
ISF Imidazole-Soluble Fraction
Iso Isoleucine
JD Juice Density
JJ Juiciness
K1SF 1 M Potassium-Soluble Fraction
K2SF 4 M Potassium-Soluble Fraction
KET Ketones
LDA Linear Discriminant Analysis
Leu Leucine
LG Linkage Group
LOX Lipooxigenase
LRI Linear Retention Time
Man D-Mannose
MAS Marker-Assisted Selection
1-MCP 1- Methylcyclopropane
MDS Multidimensional Scaling
MEP Methyleritritol 4-Phosphate
Met Methionine
MTA Methylthioadenosine
MTL Metanethiol
MW Molecular Weight
NAE Non-Acetate Esters
NID Unidentified Compound
NIL Near-Isogenic Line
NIST National Institute for Standards and Technology
NS Neutral Sugars
OTH Others

Caracterización de la Calidad del Fruto asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XXXIV
 ABBREVATIONS AND ACRONYMS

PCA Principal Component Analysis

PG Polygalacturonase
Phe Phenylalanine
PJ Pellet Content of the Juice
PL Pectate Lyase
PLS-DA Partial Least-Squares Discriminant Analysis
PME Pectin Methylesterase
PS Spanish cultivar ‘Piel de Sapo’
QTL Quantitative Trait Loci
RF Ramdom Forest
RG Ramnogalacturonan
Rha L-Rhamnose
RT Retention Time
SAM S-Adenosylmethionine
SC Korean cultivar ‘Shongwan Charmi’ accession PI161375
SDF Sulfur-Derived Compounds
SFS Sucrose Phosfate Synthase
SS Soluble Solids
SST Total Soluble Solids
SPME Solid Phase Micro-Extraction
TER Terpenes
Tyr Tyrosine
UA Uronic Acids
Val Valine
VIM Variable Importance Measures
VIP Variable Importance in the Projection
WFH Whole Fruit Hardness
XG Xyloglucan
Xyl D-Xylose

Caracterización de la Calidad del Fruto asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XXXV
 ABBREVATIONS AND ACRONYMS

Caracterización de la Calidad del Fruto asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
XXXVI
 PUBLICACIONES

PUBLICACIONES

PUBLICACIONES PRESENTADAS EN LA TESIS DOCTORAL.

Congresos.

Capítulo 3 de la Tesis.

Dos-Santos, N., Bueso, M.C., Monforte, A.J., Fernández-Trujillo, J.P. 2013.

Diferencias aromáticas entre melones climatéricos de dos tipos y melones no
climatéricos del tipo ‘Piel de sapo’. VI Jornadas de Introducción a la
Investigación de la UPCT. Cartagena, Murcia, España. Abril 2013. Comunicación
escrita. nº6 pp. 49-51. ISSN 1888-8356.
[Link]

Artículos Incluidos en Revistas SCI (primer cuartil).

Capítulos 4 y 5 de la Tesis.

Dos-Santos, N., Bueso M.C., Fernández-Trujillo, J.P. 2013. Aroma volatiles

biomarkers of textural differences at harvest in non-climacteric near-isogenic lines
of melon. Food Research International 54 (2): 1801-1812.
[Link]

Dos-Santos, N., Jiménez-Araujo, A., Rodríguez-Arcos, R., Fernández-Trujillo,

J.P. 2011. Cell wall polysaccharides of near-isogenic lines of melon (Cucumis
melo L.) and their inbred parentals which show differential flesh firmness or
physiological behavior. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 59: 7773-
7784. [Link]

XXXVII Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
 PUBLICACIONES

OTRAS PUBLICACIONES RELACIONADAS CON LA TESIS DOCTORAL.

Artículos Incluidos en Revistas Indexadas SCI.

Fernández-Trujillo, J.P., Lester, G.E., Dos-Santos, N., Martínez, J.A., Esteva, J.,
Jifon, J.L., Varó, P. 2013. Pre- and Postharvest muskmelon fruit cracking: Causes
and potential remedies. HortTechnology 23: 266-275.

Tijskens, L.M.M., Dos-Santos, N., Jowkar, M.M., Obando, J., Moreno, E.,
Schouten, R.E., Monforte, A.J., Fernández-Trujillo, J.P. 2009. Postharvest fruit
firmness behaviour of near-isogenic lines of melon. Postharvest Biology and
Technology 51: 320-326. DOI:10.1016/[Link].2008.06.001

Moreno, E., Obando, J., Dos-Santos, N., Fernández-Trujillo, J.P., Monforte, A.J.,
García-Mas, J. 2008. Candidate genes and QTLs for fruit ripening and softening in
melon. Theoretical and Applied Genetics 116: 589-602. DOI 10.1007/s00122-007-
0694-y

Artículos Incluidos en Revistas o Boletines (no Indexadas).

Fernández-Trujillo, J.P., Dos-Santos, N., Martínez-Alcaraz, R., Le Bleis, I., 2013.

Non-destructive aroma production of a climacteric near-isogenic line of melon
obtained by headspace sorptive bar extraction technology. Foods 2: 401-404.
doi10.3390/foods2030401 ISSN 2304-8158. [Link]
8158/2/3/401/pdf.

Fernández-Trujillo, J.P., Martínez, J.A., Bueso, M.C., Alarcón, A.L. Varó, P.,
Dos-Santos, N., Obando-Ulloa, J.M. 2011. Identification of quantitative trait loci
using near-isogenic lines of melon. A research review covering potential
applications in fruit quality. Boletín electrónico Universidad Politécnica de
Cartagena. The Technology and Knowledge Transfer e-bulletin. Vol.2, nº4 pp.1-5.
ISSN 2172-
[Link]://[Link]/articulos/Vol2nro42011Bulletin%20UPCT%20Melon
%20Fruit%[Link].

XXXVII Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
I
 PUBLICACIONES

Fernández-Trujillo, J.P., Martínez, J.A., Bueso, M.C., Alarcón, A.L., Dos-

Santos, N., Obando-Ulloa, J.M. 2011. Identificación de poligenes asociados a
atributos de calidad de fruto mediante líneas casi isogénicas. Investigación y
potenciales aplicaciones. Revista digital Horticultura nº296 (Marzo) pp. 82-87.
[Link]
poligenes-asociados-atributos-calidad-fruto-mediante-lineas-casi-
[Link]
[Link]

Congresos, Jornadas, Revistas y Eventos de Difusión Científica.

Fernández-Trujillo, J.P., Dos-Santos, N., Bueso, M.C., Esteva, J., Martínez,

J.A., Monforte, J.A. 2013. Melon fresh fruit quality from field to fork: A
quality-oriented breeding and multivariate perspective. Symposium Quality of
fresh produce, herbs and vegetables–from field to fork. Quality of fresh produce,
herbs and vegetables–from field to fork. Warsaw University of Life Sciences-
SGGW. Varsovia, Polonia, 18-19 Septiembre 2013. Ponencia invitada. Book of
Abstracts pp. 39-40.

Dos-Santos, N., Bueso, M.C., Fernández-Trujillo, J.P. 2013. Differential aroma

volatiles in non-climacteric near-isogenic lines of melon as biomarkers of
differences of flesh firmness at harvest. The First MDPI-Lincoln University
International Conference on Foods. MDPI-AG. Proceedings of the F. Bioact.
Process. Qual. & Nutr. Sciforum Electronic Conferences Series, 2013. Virtual,
10-12 Abril 2013. Comunicación escrita. [Link].
[Link]

Fernández-Trujillo, J.P., Martínez-Alcaraz, R., Le Bleis, I., Dos-Santos, N.

2013. Non-destructive aroma production of a climacteric near-isogenic line of
melon obtained by headspace sorptive bar extraction technology. The First
MDPI-Lincoln University International Conference on Foods. MDPI-AG.
Proceedings of the F. Bioact. Process. Qual. & Nutr. Sciforum Electronic
Conferences Series, 2013. Virtual, 10-12 Abril 2013. Comunicación escrita.
[Link]. [Link]

XXXIX Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
 PUBLICACIONES

Dos-Santos, N., Fernández-Trujillo, J.P. 2012. Validación de un método de

cálculo del volumen en fruto de melón mediante dimensiones obtenidas de
análisis de imagen. V Jornadas de Introducción a la Investigación de la UPCT. V
Jornadas de Introducción a la Investigación de la UPCT. Cartagena, Murcia,
España, Abril 2012. Comunicación escrita. nº5, pp. 54-56. ISSN 1888-8356.
[Link]

Dos-Santos, N. 2012. Parágrafo de opinión en 30 años divulgando horticultura.

Revista Horticultura. Horticultura, nova ágora, s.l. (Ed). Enero-Febrero 2012.
nº300, p.14. D.L. B-25.481/99 / ISSN 1578-
8881[Link]

García-Gutiérrez, M., Dos-Santos, N., Chaparro-Torres, L.A., Fernández-

Trujillo, J.P. 2011. Optimización de un método no destructivo para determinar la
evolución del aroma en postcosecha del fruto de melón entero. VI Congreso
Virtual Iberoamericano de Gestión de Calidad en Laboratorios. En: Alsina, I.,
Martín de la Hinojosa, M.I., Hooghuis de Korver, H. (Coords.). Actas del VI
Congreso Virtual Iberoamericano de Gestión de Calidad en Laboratorios 2011.
Ministerio de Medio Ambiente y Medio Rural y Marino (Eds.). Madrid, España.
Virtual, 1 Febrero-30 Mayo 2011. Comunicación escrita. pp. 101-103. NIPO:
770-11-299-3.
[Link]
cumentos_comunicaciones/Requisitos_Tecnicos_0023.pdf.

Fernández-Trujillo, J.P., Fernández-Talavera, M., Ruiz-León, M.T., Roca, M.J.,

Dos-Santos, N. 2010. Aroma volatiles during whole melon ripening in a
climacteric near-isogenic line and its inbred non-climacteric parents. XXVII
International Horticultural Congress. IHC 2010. Lisboa, Portugal, 22-27 Agosto
2010. Comunicación oral. Abstract book p. 84.
[Link] S02.032. Acta Horticulturae
(ISHS) 934: 951-958. ISSN 0567-7572.

XL Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
 PUBLICACIONES

Fernández-Trujillo, J.P., Dos-Santos, N., Llanos, L., Chaparro-Torres, L.,

Obando-Ulloa, J.M., Alarcón, A.L., Martínez, J.A., Bueso, M.C., Jowkar, M.M.,
Hernández, M.S., Cañizares, X., Jiménez, A., Rodríguez-Arcos, R., Saladié, M.,
Monforte, A.J., García-Mas, J. 2010. Applications of near-isogenic lines of
melon to study and improve postharvest fruit quality. Gordon Research
Conference on Postharvest Physiology. Postharvest quality and sustainability:
Genomics to consumer experience. New Hampshire, [Link], 27 Junio-2 Julio
2010. Póster.

Dos-Santos, N., Critescu, S., Moreno, E., Monforte, A.J., Fernández-Trujillo,

J.P. 2009. Evaluación del comportamiento fisiológico y aroma del fruto entero
de melón mediante infrarrojo cercano, láser fotoacústico y espectrometría de
masas por reacción de transferencia de protón. V Congreso Nacional de Ciencia
y Tecnología de los Alimentos (CYTA 2009). Libro de Comunicaciones.
Mediprint Ediciones, S.l. Murcia. España, 26-29 Mayo 2009. Comunicación
oral. p. 60. ISBN: 978-84-933078-3-7.

Dos-Santos, N., Obando-Ulloa, J.M., García-Mas, J., Monforte A.J., Fernández-

Trujillo, J.P. 2009. Líneas casi isogénicas de melón aromáticas, climatéricas y
con mayor contenido en ácido ascórbico que el tipo no climatérico ‘Piel de
Sapo’. V Congreso Nacional de Ciencia y Tecnología de los Alimentos (CYTA
2009). Libro de Comunicaciones. Mediprint Ediciones, S.l. Murcia, España, 26-
29 Mayo 2009. Póster. p. 300. ISBN: 978-84-933078-3-7.

Tijskens, L.M.M., Jacob, S., Schouten, R.E., Fernández-Trujillo, J.P., Dos-

Santos, N., Vangdal, E., Pagán, E., Pérez Pastor, A. 2008. Water loss in
horticultural products. Modelling, data analysis and theoretical considerations.
Postharvest Unlimited (POSTDAM 2008). Leibniz-lnstitut frir Agranechnik
Potsdam-Bornim ev. Bornimer Agrartechnische Berichte Heft 64. Postdam,
Berlín, Alemania, 4-7 Noviembre 2008. Comunicación oral. Abstract book, p.
162. Acta Horticulturae (ISHS) 858: 465-472. ISHS 2010. ISSN 0567-7572.

XLI Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
 PUBLICACIONES

Fernández-Trujillo, J.P., Obando-Ulloa, J.M., Moreno, E., Martínez, J.A., Dos-

Santos, N., García-Mas, J., Monforte, A.J. 2008. ¿Son siempre los melones
climatéricos más susceptibles al daño por frío que los no climatéricos. IX
Symposium Nacional y VI Ibérico sobre Maduración y Postcosecha.
PostZaragoza2008. En: Oria, R., Val, J., Ferrer, A. (Eds.). Avances en
maduración y post-recolección de frutas y hortalizas. Ed. Acribia, Zaragoza.
Zaragoza, España, 21-26 Septiembre [Link]ón oral. pp. 567-573.
ISBN: 978-84-200-111-0.

Tijskens, L.M.M., Dos-Santos, N., Obando, J., Moreno, E., Schouten, R.E.,
García-Mas, J., Monforte, A.J., Fernández-Trujillo, J.P. 2008. First attempts of
linking modeling, postharvest behaviour and melon genetics. IV International
Symposium on applications of modelling as an innovative technology in the
agri-food chain. MODEL-IT. En: Barreiro, P., Hertog, M., Arranz, F.J. Diezma,
B., Correa, E.C. (Eds.). Proc. IVth IS on Model-IT. Madrid, España, 9-11 Junio
2008. Comunicación oral. Acta Horticulturae (ISHS) 802: 401-408. ISHS 2008.
ISSN 0567-7572.

Obando-Ulloa, J.M., Jowkar, M.M., Moreno, E., Souri, M.K., Martínez, J.A.,
Dos-Santos, N., Sanmartín, P., Bueso, M.C., Kessler, M., Alarcón, A.L.,
Nicolai, B., Lammertyn, J., García-Mas, J., Monforte, A., Fernández-Trujillo,
J.P. 2008. Near-isogenic lines of melon with different climacteric behavior as a
tool to characterize fruit senescence traits. Cucurbitaceae. IX EUCARPIA
International Meeting on Cucurbitaceae. En: Pitrat, M. (Ed.). Proceedings of the
IXth EUCARPIA meeting on genetics and breeding of Cucurbitaceae. Aviñón,
Francia, 21-24 Mayo 2008. Comunicación oral. pp. 109-113.
[Link]

Eduardo, I., Obando, J., Moreno, E., Fernández-Silva, I., Dos-Santos, N.,
Martínez, J.A., Alarcón, A., Álvarez, J.M., van der Knaap, E., Arús, P., Garcia-
Mas J., Fernández-Trujillo, J.P., Monforte, A.J. 2008. The melon genomic
library of near isogenic lines. A new tool for dissecting complex traits. Mondial
Congress Molecular Mapping & Marker Assisted Selection in Plants. Viena,
Austria, 3-6 Febrero 2008. Póster. Abstract book p. 45.

XLII Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
 PUBLICACIONES

Moreno, E., Obando, J., Dos-Santos, N., Fernández-Trujillo, J.P., Monforte,

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California, [Link], 12-16 Enero 2008. Comunicación oral. Abstract book p.16.

Obando, J., Dos-Santos, N., Eduardo, I., Moreno, E., Martínez, J.A., Alarcón,
A.L., García-Mas, J., Arús, P., Monforte, A.J., Fernández-Trujillo, J.P. 2007.
Aplicación de una colección de líneas casi isogénicas de melón en fisiología
vegetal. XVII Reunión Nacional de la Sociedad Española Fisiología Vegetal y X
Congreso Hispano-Luso de Fisiología Vegetal. Congresos Fundación General de
la Universidad de Alcalá (Eds.). Alcalá de Henares, Madrid, España, 18-21
Septiembre 2007. Comunicación oral. Libro de resúmenes pp. 500-501.
[Link]

Dos-Santos, N., Obando, J., Ostos, I., Melgarejo, LM., Moreno, E., Monforte,
A.J., Fernández-Trujillo, J.P. 2007. Optimización de la extracción de ácidos
orgánicos en pulpa liofilizada de melón y análisis por cromatografía líquida de
alta eficiencia. IV Congreso Virtual Iberoamericano de Gestión de Calidad en
Laboratorios En: Rabasseda, J., Martín de la Hinojosa, M.I. (Coord.), Madrid.
Ministerio de Cultura, Pesca y Alimentación (Eds.). Actas IV Congreso Virtual
Iberoamericano de Gestión de Calidad en Laboratorio 2007. Virtual, 2 de
mayo-30 de junio 2007. Comunicación escrita. pp. 203-211. I.S.B.N 978-84-
491-0796-2.
[Link]
caciones/documentos_comunicaciones/Requisitos_Tecnicos_0039.pdf. En CD.
I.S.B.N 978-84-491-0812-9.

Obando, J., Moreno, E., Eduardo, I., Dos-Santos, N., Martínez, J.A., Alarcón,
A.L., Arús, P., García-Mas, J., Monforte, A.J., Fernández-Trujillo, J.P. 2007.
Aplicaciones pre y postcosecha de una colección de líneas casi isogénicas de
melón. XI Congreso Nacional de la Sociedad Española de Ciencias Hortícolas.
Actas de Horticultura. Albacete, España, 24-27 Abril 2007. Comunicación oral.
48: 736-739. [Link] En CD.

XLIII Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
 PUBLICACIONES

XLIV Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
 OBJETIVOS

OBJETIVOS

Objetivo general.

Identificar si son nuevos y caracterizar el efecto sobre la calidad de algunos

QTLs responsables de los atributos de calidad en melón. Para ello, se ha
desarrollado una colección de líneas casi-isogénicas de melón o NILs a partir del
cruzamiento entre dos parentales no climatéricos: el cultivar español tipo ‘Piel de
Sapo’ (PS) (Cucumis melo var. inodorus) y la accesión exótica coreana PI 161375
‘Shongwan Charmi’ (Cucumis melo var. conomon) (Eduardo et al. 2005; Moreno et al.
2008).
Objetivos específicos.

Determinación de la composición de la pared celular en NILs de melón con

distinta firmeza de la pulpa y comportamiento fisiológico y sus parentales (PS
y SC). Se trata de evaluar las diferencias en composición de pared celular entre la
NIL SC3-5-1 de carácter climatérico, y la NIL no climatérica y de mayor firmeza de
la pulpa SC7-2. Estas NILs contienen introgresiones de PI 161375 sobre el fondo
genético de PS en los grupos de ligamiento III y VII, respectivamente. Esto
contribuirá a la identificación de genes de calidad del fruto de melón relacionados
con su ablandamiento y firmeza.

Evaluación de la producción de compuestos volátiles aromáticos y sus

diferencias en NILs de melón con distinto comportamiento fisiológico
relacionado con líneas de referencia o el parental PS control. Se trata de
identificar los principales volátiles aromáticos producidos por las NILs de melón y
correlacionar diferencias y distinto comportamiento fisiológico (líneas climatéricas
6M1 y ‘Védrantais’ vs. no climatéricas PS y ‘Nicolás’). Esto contribuirá a la
identificación de QTLs del fruto de melón relacionados con la producción de
aromas volátiles y su grado de dependencia del etileno.

Evaluación de calidad textural y aromática en recolección de líneas casi-

isogénicas de melón no climatéricas con diferente textura respecto al parental
PS. Se trata de analizar las diferencias texturales y de producción de compuestos
volátiles aromáticos y su relación en las NILs de melón no climatéricas SC7-1 (con

XLV Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
 OBJETIVOS

mayor firmeza de la pulpa), y SC10-2 (con menor dureza del fruto entero), con
introgresiones en los grupos de ligamiento VII y X, respectivamente. Esto
contribuirá a identificar QTLs y correlacionar atributos de textura y aromas en la
recolección.

XLVI Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

CAPÍTULO I

1. INTRODUCCIÓN GENERAL

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
1
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
2
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

1. INTRODUCCIÓN GENERAL

1.1 Generalidades

1.1.1 El fruto del melón (Cucumis Melo L.). Origen.

La especie Cucumis melo., comúnmente llamada melón, pertenece a la familia

Cucurbitaceae, subfamilia Cucurbitoideae, tribu Melothrieae, subtribu Cucumerinae y
género Cucumis (Robinson y Decker-Walters, 1999). Las cucurbitáceas están asociadas
al origen de la agricultura y las civilizaciones humanas y también están entre las
primeras especies de plantas en ser domesticados en el Antiguo y el Nuevo Mundo
(Bisognin et al. 2002). Dos subfamilias bien definidas, 8 tribus, unos 120 géneros y más
de 800 especies de plantas han sido identificados de la dentro de la familia de las
cucurbitaceas. Junto con el melón, los cultivos más importantes de esta familia basados
en la producción total y en el área de explotación, en todo el mundo, son la sandía
(Citrullus lanatus Thunb.), el pepino (Cucumis sativus L.) y la calabaza (Cucurbita
spp.) (Nuñez-Palenius et al. 2008).
El melón es probablemente originario de África, aunque los últimos estudios
moleculares sistemáticos sugieren Asia como su origen (Tzitzikas et al. 2009).
Importado a Europa desde Persia y el Cáucaso aproximadamente hace 3000 años
(Aubert y Pitrat, 2006), el melón se introdujo en América Central en 1516, en Virginia
en 1609, y en Nueva York en 1629 (Ware y McCollum, 1980). Dentro de las especies
de cucurbitáceas, C. melo es probablemente la más antigua como cultivo de planta
alimenticia en todo el Mar Mediterráneo (Burger et al. 2010). En España, el cultivo del
melón se remonta a la época romana y se considerado como un centro secundario de
diversificación de la especie (Escribano y Lázaro, 2012).

1.1.2 Descripción botánica.

El término melón se refiere tanto a la planta como a la fruta caracterizándose por su

carnosidad y la cual puede considerarse una falsa baya (Bapat et al. 2010). Es una planta
herbácea anual de tallo rastrero con un sistema radicular muy ramificado con un
crecimiento rápido entre los 30-40 cm del suelo donde alcanza su mayor densidad. Las
raíces algunas veces superan el metro de profundidad. Las plantas de melón se
caracterizan por tener comúnmente tallos herbáceos angulosos y recubiertos de

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
3
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

formaciones pilosas, pudiendo ser rastrero o trepador y ayudado por zarcillos en espiral.
El ciclo de cultivo oscila entre 3 y 5 meses.
La mayoría de cultivares de melón son andromonoicos (con flores hermafroditas y
masculinas en la misma planta), pero también se han encontrado formas monoicas
(flores masculinas y femeninas) (Nuñez-Palenius et al. 2008). Las flores tienen la corola
de color amarillo (Krístková et al. 2003) y se agrupan en inflorescencias fasciculadas en
el caso de flores estaminadas (masculinas) mientras que las flores pistiladas (o
hermafroditas, en caso de ser andromonoicas) son solitarias (Lira y Rodríguez-Arévalo,
1999). La polinización es cruzada. Al ser una planta monoica, necesita de polinizadores
para la transportación de los granos de polen hacia los ovarios y aunque algunas veces
se presentan flores hermafroditas, estas tienen un porcentaje bajo de autopolinización o
son incapaces de autopolinizarse (Rashid y Singh, 2000). Las plantas monoicas de
melón producen frutos alargados, mientras que las plantas andromonoicas generan
frutos de forma redonda u ovalada.

Figura 1. Flores hermafrodita (a) y masculina (b) presentes simultáneamente en la

planta de melón (Cucumis melo L.) (Reyes-Carrillo et al. 2009).

Las hojas son simples, de tres o cinco lóbulos, y solitarias en los nudos, y pueden
tener una gran variación en tamaño, color y forma. Los zarcillos nacen en el eje de la
hoja y son simples (sin ramificar) (Nuñez-Palenius et al. 2008). El fruto de melón recibe
el nombre botánico de peponoide y se caracteriza por su gran variabilidad de formas,
siendo los tipos más cultivados los de forma redonda (cantalupensis y reticulatus) y
ovalada (‘Piel de Sapo’). No obstante, es posible encontrar desde formas achatadas
hasta muy alargadas, como los de los de tipo flexuosus, pasando por frutos de forma

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
4
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

aperada o acampanada. La cáscara (epicarpo) es dura y perecedera pudiendo ser lisa o

rugosa y con diversos patrones de coloración de la epidermis (verde oscuro, verde,
amarillo, blanco, etc). Algunos cultivares se caracterizan por suturas longitudinales
sobre la fruta (escriturado), mientras otros carecen de ellas. La superficie de la fruta
puede ser lisa o poseer lenticelas (estructuras que aseguran la entrada de oxígeno, el
intercambio gaseoso entre los tejidos internos y el exterior), que forman una textura
acorchada (Escribano y Lázaro, 2012; Long 2005; Monforte y Álvarez, 2006).
La pulpa (mesocarpo) es carnosa, abundante y dulce, y suele presentase en tres
colores básicos, salmón, verde y blanco aunque existe toda una gama de colores
intermedios. El pedúnculo es corto o largo y algunas veces con una abscisión entre el
pedúnculo y el fruto coincidiendo con la maduración (Krístková et al. 2003; Monforte y
Álvarez, 2006; Nee 1993).
Las semillas están situadas en la parte central del fruto en un hesperidio (tipo de
baya modificada) formado por gajos no separados en los que se alinean todas las
semillas o pepitas. Son fusiformes, aplastadas amarillas, blanquecinas o pardo claro y
el color del margen no se diferencia del centro de la semilla. Varían en número entre
cultivares, pero suelen estar en varios cientos por fruto. Cada semilla consta de varias
capas, el perispermo, el endospermo y el embrión que consta de dos cotiledones grandes
y planos y una radícula pequeña (Krístková et al. 2003; Mello et al. 2001). La longitud
de las semillas varía desde los 5 mm a 8,5 mm de los grupos Conomon y Agrestis y los
9 mm en los grupos Cantalupensis e Inodorus. Los dos primeros grupos han sido
clasificados dentro del tipo semilla pequeña y se caracterizan por tener pelos cortos en
el ovario, mientras que los otros dos grupos son de tipo de semilla larga y tienen pelos
largos en el ovario (Soltani et al. 2010).
Las líneas parentales ‘Piel de Sapo’ (PS) (Cucumis melo var. T111, grupo inodorus)
y el cultivar ‘Songhwan Charmi’ PI 161375 (SC) (Cucumis melo var. conomon),
utilizadas en el desarrollo de la colección de líneas casi-isogénicas (NILs) de melón, y
las propias NILs son plantas hermafroditas o andromonoicas, caracterizadas por existir
flores masculinas y bisexuales. La polinización de los parentales se realizó
manualmente para evitar una polinización cruzada por ser cultivares homocigóticos
(Monforte, comunicación personal). Las NILs sí que se fecundan por polinizadores, por
lo que la mayoría de la polinización es cruzada.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
5
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

1.1.3 Descripción genética.

El melón tiene un tamaño de genoma pequeño, estimado en 450-500 Mbp (1C), un

genoma del cloroplasto estimado en 150 Kpb y un enorme genoma mitocondrial de
2400 kpb. Se ha demostrado la transmisión materna de los cloroplastos y la transmisión
paterna del genoma mitocondrial (Pitrat 2008).
El género Cucumis comprende 32 especies, algunas de ellas cultivables como el
melón y el pepino y el resto de origen silvestre. Cucumis melo junto con otras 29
especies dentro de este género, es una especie diploide con una base de 12 cromosomas
diferentes (n, 2n=24) (ó grupos de ligamiento LG) agrupados en un único conjunto. Las
dos especies restantes Cucumis sativus y Cucumis hystrix Chacravarty tienen un
número básico de 7 cromosomas (n=7) (Dane, 1991; Kerje y Gum, 2000; McCreight et
al. 1993; Moreno et al. 2008). Cucumis hystrix Chacravarty es una rara especie
originaria de Asia y endémica de la provincia de Yunnan en China, y es de particular
interés debido a sus características morfológicas y bioquímicas siendo empleada para
crear híbridos interespecíficos con pepino (Cucumis sativus) (Bisognin et al. 2002;
Chen et al. 1997).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
6
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

Figura 2. Mapa genético del melón (SC x PS, que contiene genes candidatos para la
síntesis de etileno, enzimas de transducción de señales y degradación de la pared
celular. Los genes candidatos están en cursiva en el lado izquierdo de cada uno de los
doce grupos de ligamiento del melón (Moreno et al. 2008).

1.1.4 Clasificación.
Cucumis melo es una especie con un alto nivel de variabilidad molecular y
morfológica tanto a nivel de hojas, planta como de características del fruto (Tzitzikas et
al. 2009). En la actualidad, existen genotipos de diferente forma, tamaño,
comportamiento fisiológico, color, textura, aroma, sabor e incluso forma de

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
7
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

almacenamiento (Obando-Ulloa et al. 2009a; Shalit et al. 2001). Estas diferencias se

manifiestan en el contenido de azúcares solubles, ácidos orgánicos, metabolitos
secundarios, pigmentos, compuestos volátiles aromáticos, acido ascórbico o en el tipo
de maduración y producción de etileno (Bapat et al. 2010). Esta variabilidad
proporciona un tema interesante para la investigación de la base genética y fisiológica
de la apariencia y calidad del fruto de melón, determinada últimamente por el sabor,
especialmente el contenido de azúcar y el aroma (Burguer et al. 2010)
La clasificación del fruto del melón ha ido evolucionando con el tiempo y las
diferentes propuestas de los investigadores. Hoy en día se distinguen dos grandes
subespecies, melo y agrestes que a su vez se agrupan en diversas variedades (Tabla 1).
No obstante, los cultivares de melón occidental modernos tienen una base genética
relativamente estrecha porque pertenecen a un número limitado de variedades
(principalmente inodorus, reticulatus y cantalupensis) (Tzitzikas et al. 2009).

Tabla 1. Clasificación de las especies de melón y sus variedades.

Especie: Cucumis melo

Subespecie: agrestes Subespecie: melo
Variedad Variedad
conomon cantalupensis
makuwa reticulatus
chinensis adana
acidulus chandalak
momordica amer
inodorus
flexuosus
chate
tibish
dudaim
chito

Fuente: Tzitzikas et al. 2009

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
8
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

Otra clasificación más reciente y simplificada es la propuesta por Nesom (2011),

que incluye cuatro variedades [melo (incluyendo la variedad cantalupo], inodorus,
reticulatus y flexuosus)] dentro de la subespecie melo, y siete variedades (agrestis,
chito, conomon, texanus, dudaim, chate y momordica) dentro de la subespecie agrestis.

Descripción general de las variedades cantalupensis, reticulatus e inodorus, según Guis

et al. 1998 y Pitrat et al. 2000.

Cucumis melo var. cantaloupensis Naud. Son plantas andromonoicas

fundamentalmente pero también hay algunas formas monoicas. Los frutos son de
tamaño mediano, con forma redondeada, superficie lisa o rugosa, y con frecuencia
suturas, en caso de escriturado, es escaso. Pulpa anaranjada, aromáticos,
climatéricos y alto contenido en azúcares.

Cucumis melo var. reticulatus. Se trata de plantas andromonoicas con frutos

achatados a ligeramente ovales y tamaño medio. Piel muy reticulada, con o sin
costillas y pulpa desde color verde, blanco a rojo anaranjado. La mayoría son
dulces y tienen un olor almizclado. Aromáticos y climatéricos.

Cucumis melo var. inodorus Naud. Plantas andromonoicas con frutos que van de
redondeados a elípticos. La superficie lisa o rugosa con o sin costillas, pulpa
comúnmente blanca y jugosa, sin el típico sabor almizclado. Tienen por lo general
una madurez tardía y larga conservación debido a la reducción o ausencia de
producción de etileno (no climatéricos) en comparación con cantaloupensis o
reticulatus.

Una de las principales diferencias entre las variedades inodorus y cantalupensis es el

carácter climatérico y no climatérico de sus frutos, respectivamente. Estudios recientes
han demostrado que con la manipulación de unos pocos genes se pueden producir
cambios profundos en el comportamiento climatérico (Moreno et al. 2008; Obando-
Ulloa et al. 2008).
A continuación se describen las principales variedades de melón existentes más
consumidas en los diferentes mercados:
 Los melones reticulados (Cucumis melo L. var reticulatus) conocidos como
cantalupos en Estados Unidos y rockmelon en Australia son los dominantes y más
atractivos para la mayoría de los mercados (Youming et al. 1996). En Estados

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
9
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

Unidos, el consumo de melones reticulados es 4,5 veces superior al de los melones

tipo inodoros. La preferencia por estos melones se debe a sus características
organolépticas. Sin embargo, el potencial de conservación de los melones
reticulados es menor que el de los melones inodoros (Laínez y Krarup, 2008). Son
frutos climatéricos en los que la maduración está muy coordinada por el etileno
con un periodo de almacenamiento relativamente corto (Jeong et al. 2007).

 El melón ‘Charentais’ (Cucumis melo L. var. cantalupensis) es el de mayor

producción en Francia (Aubert y Burger, 2004). Sus frutos son esféricos (10-20
cm de diámetro) con un peso que oscila entre los 0,5 y los 1,5 Kg, la piel es lisa y
verdosa que amarillea con la madurez con líneas longitudinales más oscuras que lo
delimitan en secciones. Se caracterizan por su pulpa anaranjada, siendo muy
apreciados por su sabor fuerte y aromático. Sin embargo, sus propiedades para la
conservación son pobres con un rápido ablandamiento (Goulao et al. 2008) y una
vida útil muy corta (3-4 días), generalmente asociada a una fase climatérica aguda
(Bauchot et al. 1998, Flores et al. 2001a).

 El melón ‘Galia’ (Cucumis melo var reticulatus L. Naud) es el tipo de melón más
cultivado en Israel, tanto para exportación como para la mercado local (Fallik et al.
2001). Son frutos esféricos de 0,9 a 1,4 kg de peso, con cáscara fuerte y reticulada,
de color amarillo-naranja verdoso y con carne de color blanco. Son frutos
climatéricos y por tanto el etileno tiene un papel clave en su maduración. Se
caracterizan por su gran flavor e intenso aroma, sin embargo los frutos
recolectados antes de la madurez tienen una conservación limitada (2-3 semanas)
incluso a bajas temperaturas de almacenamiento (Ergun et al. 2005).

 Los cultivares no climatéricos del grupo Inodorus tipo PS (Cucumis melo L. var.
inodorus) son ampliamente cultivados en España, Brasil, Panamá, Costa Rica,
Honduras y Senegal. La mayoría de este mercado se consume en España, pero
alrededor del 25% de los frutos se exporta a otros países europeos como Holanda,
Inglaterra, Italia o Francia (Obando-Ulloa et al. 2009a). PS es junto con ‘Rochet’
dos de las principales variedades de cultivos comerciales de melón recolectadas
entre junio y septiembre. Los frutos son de forma ovalada, color verde, cáscara
gruesa con la superficie reticular, no aromáticos y con un mesocarpio firme y una
textura crujiente. La pulpa es dulce y con un color que entre el blanco y el amarillo

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
10
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

claro y sus semillas han desarrollado resistencia a Fusarium (Villanueva et al.

2004, Obando-Ulloa et al. 2009a). El melón PS se caracteriza por no tener una
producción autocatalítica de etileno y generalmente tiene una tasa de maduración
lenta asociada con una vida útil prolongada (Pech et al. 2008a).

 El melón ‘Honeydew’ y otras variedades de larga vida como el PS no producen un

estallido grande de etileno, y por lo general no forman una zona de abscisión en la
madurez comercial (Zheng y Wolff 2000). La pulpa del melón ‘Honeydew’
puede ser verde o anaranjada. Los frutos de pulpa lisa anaranjada están cada vez
más disponibles en Estados Unidos debido a su potencial como producto recién
cortado debido a su mayor seguridad microbiológica frente a variedades cantalupo,
así como su capacidad para satisfacer nuevas demandas de los consumidores
(Saftner et al. 2006).

b
a c

Figura 3. Frutos de melón a) ‘Charentais’ (Cucumis melo L. var. cantalupensis). b)

‘Piel de Sapo’ (Cucumis melo L. var. T111, grupo inodorus). c) ‘Galia’ (Cucumis melo
var reticulatus L. Naud).

1.1.5 Aspectos nutricionales.

El melón es un fruto con bajo aporte calórico, graso y de sodio y se ha relacionado

como una buena fuente de ácido ascórbico, pro-vitamina A (β-caroteno), ácido fólico y
potasio y con un alto contenido de azúcares libres y agua (Lester y Crosby, 2002, Li et
al. 2006, Park et al. 2009). El agua es el principal componente de la pulpa de melón
alcanzando hasta el 90% del peso total seguido de los carbohidratos que son el
siguientes componentes en importancia con un 9% del peso total (Duke 2006). En la
población española, la ingesta de melón tipo PS se sitúa en 22,3 g materia
fresca/persona*día, siendo la porción comestible 13,4 g/persona*día. Este consumo,
junto con el de otras frutas y verduras, contribuye a proporcionar una parte importante

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
11
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

(más del 60%) del aporte de polifenoles no extraíbles de la dieta española (Arranz et al.
2010).
El β-caroteno es especialmente útil para el sistema inmune debido a su potencial
antioxidante que genera efectos beneficiosos frente a patologías como el cáncer, en la
reducción de ataques cardíacos, derrames cerebrales, enfermedades cardiovasculares y
trastornos en la visión como la ceguera nocturna y las cataratas (Lester 2006a). El ácido
ascórbico o vitamina C es la vitamina más importante para la salud humana presente en
frutas y hortalizas (Lee y Keader, 2000). Tiene un papel importante en la fisiología y
calidad de productos vegetales y su contenido en los alimentos varía en función de
diversos factores, entre los que se encuentran el genotipo (Dos-Santos et al. 2009). La
vitamina C es otro importante antioxidante que se ha relacionado con el mantenimiento
de un sistema inmunológico saludable, reduciendo la severidad de los resfriados y
actuando en la prevención de enfermedades cardiovasculares. El ácido fólico es una
vitamina que interviene en la construcción de cadenas de proteínas y en la reducción de
homocisteína, un compuesto implicado en la enfermedad cardiovascular. Otros efectos
beneficiosos son la mejora del estado de ánimo, el sueño y apetito. Un aporte adecuado
de esta vitamina es muy importante durante el embarazo para el correcto desarrollo del
feto y la prevención de espina bífida en niños recién nacidos (Lester 2006a).

Tabla 2. Composición nutricional media de 100 gramos de materia fresca de pulpa

de melón ‘Cantalupo’ (Cucumis melo L. var reticulatus) y ‘Honeydew’ (Cucumis melo
L. var. inodorus).

Composición Honeydew Cantalupo

Calorías 36 34
Agua 89,8 90,2
Carbohidratos (g) 9,1 8,8
Azúcares (g) 8,1 7,9
Sacarosa (mg) 2480 4350
Fructosa (mg) 2680 1540
Glucosa (mg) 2960 1870
Fibra (g) 0,8 0,9
Cenizas (g) 0,4 0,7
Lípidos totales (g) 0,1 0,2
Grasa saturadas (g) 0,0 0,1
Grasas monoinsaturadas (g) 0,0 0,0

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
12
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

Grasas poliinsaturadas (g) 0,1 0,1

Proteínas (g) 0,5 0,8
Vitamina A (UI) 50 3382
Ácido Ascórbico (mg) 18,0 36,7
Vitamina E (alfa tocoferol) (mg) 0,0 0,1
Tiamina (mg) 0,0 0,0
Riboflavina (mg) 0,0 0,0
Niacina (mg) 0,4 0,7
Ácido pantoténico (mg) 0,2 0,1
Ácido fólico (ug) 19 21
Minerales totales (g) 0,27 0,32
Sodio (mg) 18 16
Potasio (mg) 228 267
Fuente: USDA. United States Deparment of Agriculture. Nutrient Database 2010.

El potasio (K) es un electrolito importante para la salud siendo fundamental en la

secreción de insulina, reducción de la presión arterial alta, enfermedades coronarias,
derrame cerebral y el endurecimiento de las arterias. Aunque estos fitonutrientes han
sido identificados en melón, poco se sabe de cómo afecta el cultivar, el tamaño del fruto
y el tipo de suelo en su contenido en los frutos poscosecha. Estudios realizados en
varios cultivares de melón indicaron que el genotipo y el tamaño del fruto afecto al
contenido de fitonutrientes, siendo los frutos de mayor tamaño los que mostraron una
mayor concentración de ácido ascórbico, β-caroteno, potasio y ácido fólico (Lester y
Crosby, 2002). Melones obtenidos de plantas cultivadas en suelo arcilloso tuvieron
mejores atributos sensoriales en comparación con los frutos obtenidos de plantas
cultivadas en suelo de arenoso (Belt-Garber et al. 2005).

1.1.6 Importancia económica.

El melón es un cultivo de gran importancia comercial en muchos países del mundo,

y entre ellos los países Mediterráneos. La superficie cultivada y la producción de
melones en todo el mundo se sitúa en torno a 1,3 millones de hectáreas y 26 millones de
toneladas, respectivamente. Su cultivo es frecuente en las regiones templadas debido a
su buena adaptación al suelo y al clima. Se trata de un fruto muy popular en la
temporada de verano, debido a la frescura, suavidad y agradable aroma de la pulpa
(Alsmeirat y El Assi, 2010, Tang et al. 2010).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
13
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

Junto a China, Turquía e Irán, los principales países productores de melón en 2010
(FAO 2010), se sitúan España y Estados Unidos (DESCA 2010). El melón es un
producto bien conocido y aceptado por los consumidores europeos con producciones
importantes en España e Italia entre otros países. En los últimos años la superficie
cultivada de melón y su producción ha ido aumentando. En la Unión Europea la
producción de melón alcanzó 2,3 millones de toneladas en el 2008, creciendo un 4% en
relación al año anterior. La producción en España ascendió a 1,1 millones de toneladas
en el 2008, 653 mil en Italia y 265 mil en Francia. Las exportaciones de melón de la UE
en el 2008, fueron de 32723,1 toneladas, siendo los principales mercados de
exportación: Suiza (18875,5 toneladas), Noruega (5053,8 toneladas), Rusia (3663,9
toneladas) y Croacia (93,6). Asimismo, las importaciones de melón crecieron en el 2008
alcanzando un total de 336,9 mil toneladas, siendo los principales proveedores de esta
fruta a la UE: Brasil (171798 toneladas), Marruecos (56544,6 toneladas), Costa Rica
(50739,4 toneladas), Panamá (19904,6 toneladas) y Honduras (14230,8 toneladas)
(DESCA 2010)
En España el cultivo del melón es de gran importancia, con una producción
constante, aunque según datos recientes de la FAO (2013) ha descendido en los últimos
años (Tabla 3). La superficie cultivada en España supera las 30000 hectáreas, con una
producción anual que supera las 1000 toneladas (Tablas 3, 4, 5 y 6) lo que supone un
4% de la producción mundial. La Región de Murcia, especializada en hortalizas de flor,
hoja y fruto, supera el 20% de estos valores (Tablas 4, 5 y 6), siendo la principal zona
de producción nacional en alcachofa, brócoli, lechuga o melón (Escribano y Lázaro,
2012; FAOSTAT 2013; INFO 2012; MARM 2010). A pesar de ello, las exportaciones
de melón así como de otras cucurbitáceas han sido tradicionalmente modestas en
comparación con otras frutas probablemente debido a problemas de variabilidad en su
calidad y a la estacionalidad de la producción (Dos-Santos et al. 2007).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
14
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

Tabla 3. Superficie cultivada (hectáreas, Ha), producción de melón (toneladas,

TM) y rendimiento (Hg/Ha) en España durante el periodo 2007-2011.

SUPERFICIE
PRODUCCIÓN RENDIMIENTO
AÑO CULTIVADA
(t) (Hg/Ha)
(Ha)
2007 38688 1183154 305819,38
2008 33388 1042439 312219,66
2009 31327 984786 314356,94
2010 30601 626639 204777,29
2011 28561 871996 305310
Fuente: Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación
(FAO 2013). [Link]

Tabla 4. Superficie cultivada y producción de melón (miles de toneladas, t) en

España durante los años 2008-2010.

SUPERFICIE PRODUCCIÓN
(Miles de Ha) (Miles de t)
Definitivo Provisional Avance 2010 Definitivo Provisional Avance 2010
Mes (*) 2008 2009 2010 2009=100 2008 2009 2010 2009=100
4 33,4 31,4 31,1 99,2 1042,40 1007,00
Fuente: Ministerio de Medio Ambiente y Medio Rural y Marino (MARM).
([Link]

Tabla 5. Superficie cultivada de melón en las distintas Comunidades Autónomas de

España durante los años 2008-2010.

SUPERFICIE (Ha)
Comunidad Autónoma Definitivo Provisional Abril 2009=100
2008 2009 2010 2009=2010
Galicia 0 0 0 0,0
Principado de Asturias 0,0
Cantabria 0,0
País vasco 0 0 0 0,0
Navarro 23 0,0
La Rioja 9 10 8 80,0
Aragón 10 2 2 100,0
Cataluña 557 509 498 97,8
Baleares 147 130 200 153,8
Castilla y León 128 114 120 105,3

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
15
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

Madrid 501 1600 1400 87,5

Castilla La Mancha 12368 10566 11301 107,0
Comunidad Valenciana 1572 1385 1641 118,5
Región de Murcia 5475 5500 5500 100,0
Extremadura 3470 3000 2670 89,0
Andalucía 8982 8377 7593 90,6
Canarias 164 170 170 100,0
ESPAÑA (total) 33388 31363 31103 99,2
Fuente: Ministerio de Medio Ambiente y Medio Rural y Marino (MARM).
[Link]

Tabla 6. Producción de melón en las distintas Comunidades Autónomas de España

durante los años 2008-2010.

PRODUCCIÓN (miles de t)
Comunidad Autónoma Definitivo Provisional Abril 2009=100
2008 2009 2010 2009=2010
Galicia 0 0 0,0 0,00
Principado de Asturias 0,00
Cantabria 0,00
País vasco 0 0 0,00
Navarro 0,4 0,00
La Rioja 0,2 0,2 0,2 0,00
Aragón 0,5 0 0,0 0,00
Cataluña 10,5 9,9 0,0 0,00
Baleares 3,8 3,5 0,00
Castilla y León 1,7 1,5 0,00
Madrid 12 25 0,0 0,00
Castilla La Mancha 363,4 348,1 0,0 0,00
Comunidad Valenciana 40,7 39,1 0,0 0,00
Región de Murcia 234,7 235 0,00
Extremadura 86,4 76,5 0,0 0,00
Andalucía 283,8 264,4 0,0 0,00
Canarias 4,2 3,9 0,0 0,00
ESPAÑA (total) 1042,3 1007,1 0,0 0,00
Fuente: Ministerio de Medio Ambiente y Medio Rural y Marino (MARM).
[Link]

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
16
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

Tabla 7. Producción y superficie cultivada de melón en la Región de Murcia en el año

2012.

SUPERFICIE EN
PRODUCCIÓN
Cultivo PRODUCCIÓN
(t)
(Ha)
Melón ‘Galia’ y otros 3125 125000
Melón Verde 1657 58000
Melón Amarillo 892 40150
TOTAL 5674 223150
Fuente: Federación de Cooperativas Agrarias de Murcia (FEOCAM).
[Link]

Alemania, Francia, Reino Unido, Países Bajos, Portugal, Bélgica y Suecia son por
este orden (Fig. 4) los principales países exportadores de la producción de melón en
España (PROEXPORT 2009). En la Región de Murcia, el melón (junto con lechugas,
limón, brócoli y coliflor, vino, uva de mesa, tomate, melocotón, legumbres y hortalizas
congeladas y pimentón) se situó entre los diez productos agroalimentarios más
exportados en 2011, con un valor de 91 millones de euros (INFO 2012).

90000

80000

70000

60000
TONELADAS

50000

40000 81531
64484
30000 59088

20000 46141

10000 36477

0 12943 12937

ALEM ANIA FRANCIA REINO UNIDO PAISES BAJOS PORTUGAL BÉLGICA SUECIA

Figura 4. Principales países exportadores de melón producido en España en el año

2008 (PROEXPORT 2009).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
17
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

1.1.7 Cultivo.

El cultivo del melón es característico de las zonas con climas cálido-secos, aunque
soportan algunas veces climas más templados, aunque no fríos. El melón es una especie
muy exigente en temperatura, variando según cultivar. En el desarrollo de todo el
cultivo del melón la temperatura nunca debe ser inferior a 18ºC. La temperatura óptima
para una buena polinización son los 20-21ºC. La germinación de las semillas se da
cuando el suelo alcanza una temperatura de 20-23°C. Durante el desarrollo vegetativo
de la planta debe mantenerse una temperatura atmosférica de 25-30°C y para la
floración de 20-25°C. En periodo de floración los días largos con temperatura muy alta
tienden a generar mayor número de flores estaminadas (masculinas), mientras que los
días cortos con temperaturas más bajas inducen el desarrollo de flores con ovarios
(Maroto 1994, 1997). Por tanto, el cultivo del melón como el resto de las especies
pertenecientes a la familia de las cucurbitáceas, necesita de una alta intensidad lumínica
para obtener un óptimo rendimiento (Robinson y Decker-Walters, 1997). Las
necesidades lumínicas varían en relación a la etapa de desarrollo del cultivo, situándose
en torno a 10 horas·día-1 en las fases de desarrollo general, cuaje y floración y las 12
horas·día-1 en la etapa de maduración del fruto.
No todos los cultivares de melón son igualmente resistentes a la sequía ni reaccionan
de la misma manera frente a una situación de déficit hídrico. Las necesidades hídricas
del melón tienen que ser especialmente satisfechas durante el periodo de crecimiento y
maduración de los frutos para obtener adecuados rendimientos y calidad, evitando
riegos excesivos. El melón responde al riego incrementando el tamaño de los frutos y el
crecimiento de la planta, mientras que producciones con riegos restringidos generan
frutos con mayor contenido en sólidos solubles. Se debe evitar el estrés hídrico, puesto
que influye en el rajado de los frutos afectando negativamente al crecimiento foliar y
reduciendo la cosecha final. El cultivo se desarrolla en el período estival, cuando la
demanda evaporativa es alta y las precipitaciones son prácticamente inexistentes, por lo
que es preciso recurrir al riego para obtener producciones que permitan una adecuada
rentabilidad económica. La tolerancia a la sal de melón es muy variable y depende de la
variedad y el tipo de cultivo siendo un cultivo potencial para el riego con aguas salinas
(Botía et al. 2005; Gil et al. 2000; Ribas et al. 2000).
Referente a la humedad relativa, el melón es una especie a la que no le favorecen
humedades muy altas, debido a que aumenta la incidencia de enfermedades en el cultivo

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
18
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

Al inicio del desarrollo de la planta la humedad relativa debe ser del 65-75%, en
floración del 60-70% y en fructificación del 55-65% (Maroto 1995).
Se cultiva en varios tipos de suelo, aunque prefiere aquellos de textura media o
arenosos, ricos en materia orgánica, profundos, con buena aireación y pH comprendido
entre 5,6 y 6,8. Deben ser suelos bien drenados, ya que los encharcamientos son
causantes de asfixia radicular y podredumbre en los frutos. En general es una especie de
moderada tolerancia a la salinidad tanto del suelo (CE de 2,2 dS⋅m-1) como del agua de
riego (CE de 1,5 dS⋅m-1), aunque cada incremento en una unidad sobre la conductividad
del suelo dada supone una reducción del 7,5% de la producción (Mendoza et al. 2000;
Robinson y Decker-Walters, 1999). La sensibilidad del cultivo a la salinidad del suelo a
menudo cambia de una etapa de desarrollo a otra (Botía et al. 2005).
Los elementos minerales esenciales para la nutrición de la planta se dividen en
macronutrientes (N, P, S, K, Ca y Mg) y elementos traza o microelementos (Fe, Mn, Zn,
Mo, B y Al). Para la producción del melón y otras cucurbitaceas se emplea una base
fertilizadora con los principales elementos (N:P:K) antes de la plantación (Long 2005).
El 67% de la superficie cultivada de melón en España es fertigada. El exceso de
nitrógeno (N) puede tener un impacto negativo, disminuyendo la producción y la
calidad de la fruta, contaminando las aguas subterráneas, y desde el punto de vista de la
salud, ya que el nitrato se acumula en la pulpa de la fruta. El límite máximo de la
fertilización con N es de 135 a 110 kg⋅ha-1 en las zonas vulnerables, de acuerdo a la
zona de aplicación. Normalmente se superan los límites establecidos, sin embargo según
resultados obtenidos en melones PS (Cucumis melo L., var. inodorous, cv. Sancho)
cultivados en Ciudad Real, se podría obtener un rendimiento potencial del 95% con una
aplicación de N de 93 kg⋅ha-1 (Castellamos et al. 2010).
Son numerosas las plagas y enfermedades causantes de grandes pérdidas en el
cultivo del melón de todo el mundo. Entre los agentes causantes se encuentran bacterias,
hongos y virus, variando su distribución y su impacto a nivel mundial. Entre las
enfermedades importantes causadas por hongos están la marchitez en verde sin que las
hojas amarilleen o desarrollen color y causada por Fusarium oxysporum [Link]. melonis, el
oidio o ceniza provocado por Sphaerotheca fuliginea, la plaga foliar por Alternaria
cucumerina y el chancro gomoso del tallo causado por Didymella bryoniae. Las
enfermedades virales se traducen en importantes pérdidas económicas de los melones y
entre ellas se pueden citar el virus del mosaico del pepino (CMV, Cucumber Mosaic

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
19
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

Virus), virus de la mancha anular de papaya (PRSV, Papaya Ring Spot Virus), virus del
mosaico de la sandía (WMV-2, Watermelon Mosaic Virus-2), virus del mosaico
amarillo del calabacín (ZYMV, Zucchini Yellow Mosaic Virus) y virus del mosaico de
la calabaza (SqMV, Squash Mosaic Virus) (Lecoq et al. 1994) y el virus del cribado del
melón. (MNSV, Melon Necrotic Spot Virus) entre otros.
Los cultivos de melón se ven infestados por especies de insectos como la mosca
blanca (Trialeurodes vaporariorum), pulgón o áfido (Aphis gossypii), minador
(Liriomyza trifolii y Liriomyza huidobrensis) mosca de la fruta, y sus daños pueden ser
causados de manera directa a través de la alimentación de los insectos o bien indirecta a
través de la transmisión de enfermedades virales. Los áfidos o pulgones son conocidos
por transmitir tanto luteovirus (Dogimont et al. 1995) y potyvirus. La mosca de la fruta
del melón (Dacus spp.) causa graves daños a los frutos de melón, que se inicia con la
oviposición de la mosca hembra en frutos inmaduros (Robinson y Decker-Walters,
1999). La araña roja (Tetranychus urticae), orugas (Spodoptera, Chrysodeixis, Heliothis
y Ostrinia) y trips (Frankliniella occidentalis), junto con la mosca blanca, el áfido y los
minadores de la hoja son la principales plagas que afectan a los cultivos de melón en
España.

a b c

Figura 5. Especies de insectos causantes de pérdidas en los cultivos de melón. a)

Mosca blanca (Trialeurodes vaporariorum). b) Araña roja (Tetranychus urticae). c)
Trips (Frankliniella occidentalis). Internet.

1.1.8 Cosecha y conservación.

La cosecha del melón comienza transcurridos 70-90 días desde la siembra en campo
y son varios los parámetros que se utilizan como indicadores de un óptimo grado de
madurez. Existen ligeras variaciones de estos tiempos en el caso de accidentes
climatológicos que afecten a la floración o al cuajado durante el cultivo.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
20
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

El valor de sólidos solubles totales (SST) totales medido con refractómetro manual o
digital en grados Brix (ºBrix), es un buen índice de madurez mínima en melón.
Numerosos estudios constatan que si el fruto está unido a la planta durante más tiempo
la misma es capaz de llegar hasta el máximo potencial de acumulación de azúcares y
ácidos que contribuyen a incrementar el nivel de sólidos solubles (Flores et al. 2001a).
El potencial máximo de acumulación de sólidos solubles totales depende de la variedad,
y fundamentalmente del estado de cobertura foliar de la misma y del manejo de la
plantación y su estado fitosanitario, así como en factores ambientales (temperatura y
radiación especialmente). Un valor de SST superior a 10ºBrix es el mínimo aconsejable
en el melón tipo PS. Sin embargo, valores entre 12 y 15ºBrix pueden dar un melón de
una calidad óptima porque esta acumulación estará relacionada con el desarrollo de un
sabor (gusto y aroma) adecuado (Fernández-Trujillo, comunicación personal). El fruto
se debe recolectar cuando alcanza el mayor contenido en SST puesto que estos
prácticamente no aumentan una vez el fruto se separa de la planta.
Entre los índices de cosecha está el desarrollo de una zona de abscisión o grado de
separación del fruto del pedúnculo, en los frutos que maduran en la planta. El grado de
separación se denomina “slip”. La separación parcial a total de la zona de abscisión es
un buen indicador de la madurez completa y el tiempo de cosecha. A mayor
desprendimiento, mayor maduración, mayores atributos (sabor, aroma, etc) y menor
conservación en poscosecha (almacenamiento) por lo tanto al momento de la cosecha
determina el tiempo que se necesita almacenar el producto. En Estados Unidos, la
práctica comercial para la cosecha de melón reticulado es esperar hasta que los melones
se desprendan ¾ ó por completo de la planta (Beaulieu et al. 2004). La etapa de
“desprendimiento completo” (full slip) en los melones reticulados es la fase de
maduración en el que el melón se despega fácilmente del pedúnculo y donde la piel
comienza a tener una apariencia ligeramente amarilla en el reticulado.
El cambio de coloración de la corteza del fruto es otro índice de madurez en la
cosecha. Es variable y puede ser verde, verde claro, verde oscuro, amarillo, amarillo
claro, amarillo oscuro. La mancha de color tierra, se utiliza para definir la madurez en
melones tipo PS y se localiza en la parte de la fruta en contacto con el suelo. Su color es
amarillo o de color amarillo-crema en un melón maduro, y el color de verde a blanco
del fondo indica que probablemente el melón PS no haya madurado del todo (Obando et
al. 2008).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
21
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

El desarrollo de un adecuado escriturado en la epidermis de los fruto de melón se

utiliza como indicativo de calidad comercial y madurez en cultivares del grupo Inodorus
(como el tipo PS) (Obando et al. 2007).
La textura de los frutos es otro indicador del grado de madurez. Se emplea un
texturómetro como instrumento de medida siendo los valores idóneos para el transporte
entre 0,5 y 1,5 Kg⋅cm2.
Los melones es mejor cosecharlos con el fresco de las primeras horas de la mañana,
especialmente en el caso de los frutos destinados a la exportación o el almacenamiento a
largo plazo. Una vez cosechada la fruta debe mantenerse en frío (nunca por debajo de
2°C) y lo ideal, es que sea previamente pre-enfriada antes de su introducción en la
cámara, o almacenada en un lugar fresco y con una adecuada humedad relativa del 85-
90%. La fruta almacenada a una temperatura alta y/o con un bajo nivel de humedad
pierden peso rápidamente y su comercialización baja en un plazo de tiempo más corto
(Dimsey 1995; Lester y Burton, 1986).
Para maximizar la vida útil de almacenamiento es importante eliminar el calor del
campo lo más rápido posible. Las salas de refrigeración no son un método efectivo ya
que el proceso es demasiado lento. Antes de la clasificación y embalaje, la fruta debe
ser enfriada a menos de 15°C dentro de las 8 horas siguientes a la cosecha. Los melones
pueden ser pre-enfriados antes de su clasificación y/o inmediatamente después. Los
métodos más eficaces de pre-refrigeración son los sistemas de refrigeración por aire
forzado o el hidroenfriamiento refrigerado. La ventaja de estos métodos son la rapidez y
el manejo de grandes cantidades de fruta. Un método más barato pero menos efectivo de
pre-enfriamiento es la ducha de los melones con agua enfriada por evaporación. La
temperatura de las frutas bajará hasta el punto de rocío hasta eliminar gran parte del
calor inicial del campo Este procedimiento está más adaptados a las zonas interiores de
baja humedad. Por otra parte, un manejo cuidadoso de los frutos es de gran importancia,
ya que los melones se dañan fácilmente, siendo los golpes o heridas focos ideales para
el desarrollo de infecciones y podredumbres. La fruta debe ser cuidadosamente colocada
en las cajas para su transporte, evitando en todo momento movimientos bruscos
(Dimsey 1995).
La mayoría de las pérdidas de fruta de miembros de la familia de las cucurbitáceas
tales como grietas, exudación, sobremaduración, daños por frío con o sin síntomas
asociados decadencia son por alteraciones de la fruta durante la cosecha o después del

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
22
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

almacenamiento en frío. El comportamiento poscosecha del melón y de caracteres

relacionados están por lo general bajo un complejo control genético y fuertemente
influenciado por varios factores ambientales tales como temperatura y tiempo de
almacenamiento, atmósfera que rodea la fruta, humedad relativa y el estrés medio
ambiental (natural o inducido) como el desprendimiento o la radiación ultravioleta
(Fernández-Trujillo et al. 2008).
Los cultivares de melón de la variedad cantalupensis (Cucumis melo L. subsp. melo
var. cantalupensis Naudin) muestran ablandamiento y rugosidad después de unas dos
semanas a temperatura ambiente. El reticulado de la epidermis favorece las altas tasas
de transpiración que contribuyen a una vida de almacenamiento relativamente corta. Se
recomienda un preenfriamiento rápido junto con un transporte y almacenamiento del
melón a temperaturas entre 2 y 7ºC y el 95% de humedad relativa (HR) para su máxima
conservación. Las temperaturas más bajas sólo se puede utilizar durante períodos cortos
de tiempo, porque los frutos son susceptibles al daño por frío Sin embargo, el
almacenamiento de algunos cultivares a 0ºC podría resultar beneficioso ya que podría
disminuir la actividad metabólica y de patógenos, y aumentar el período de
conservación y calidad (Krarup et al. 2009).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
23
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

Figura 6. Diagrama de flujo del manejo poscosecha de melones (Cantwell y

Kasmire, 2007).

1.2 Calidad del fruto del melón.

La calidad sensorial y nutricional de la fruta está altamente determinada por su

contenido en azúcares, ácidos orgánicos, aromas volátiles y textura. Estos atributos
sensoriales se desarrollan fundamentalmente durante la fase de maduración del fruto y
son controlados por vías metabólicas específicas reguladas a nivel molecular mediante
la expresión de genes específicos (Ayub et al. 2008).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
24
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

El melón es una de las frutas preferidas de los consumidores debido principalmente

a su sabor refrescante y dulce y su agradable aroma y en frutos de melón el contenido de
azúcar y ácido en las frutas maduras son factores cruciales que influyen en el sabor y la
demanda de los consumidores (Burger et al. 2003;Tang et al. 2010).
La calidad organoléptica del melón, incluyendo el color de la pulpa, dulzor y aroma,
depende directamente de su composición en metabolitos primarios, isoprenoides y
compuestos volátiles, que en general han sido descritos utilizando una serie de análisis
específicos. Estudios recientes de metabolómica señalan que junto al tomate, el melón
se confirma como una planta modelo alternativa para dilucidar el metabolismo en
general y la maduración en particular de las frutas carnosas (Bernillon et al. 2013).
En frutos climatéricos, tales como el melón, el etileno regula el control de la
mayoría de las rutas metabólicas responsables del desarrollo de la calidad sensorial y la
mayoría de los eventos de maduración (Fig. 7). Sin embargo, existen eventos de la
maduración que no responden a este control del etileno (Ayub et al. 2008). La
acumulación de azúcares y ácidos orgánicos en las vacuolas celulares del mesocarpio
durante la maduración del melón es un proceso independiente de etileno, y su
concentración determina aceptación de los consumidores (Obando-Ulloa et al. 2009a).
En un trabajo previo de Obando-Ulloa et al. (2009a), se han identificado QTLs
relacionados con la producción de azúcares y ácidos orgánicos en NILs de melón. Estos
QTLs pueden ayudar a desarrollar nuevos cultivares de melón, con mayores beneficios
para los consumidores.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
25
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

Figura 7. Representación esquemática de la regulación de la maduración de la fruta

y desarrollo de la calidad sensorial del melón. Las flechas representan: las vías etileno-
dependiente (línea continua) y etileno-independiente (línea discontinua). AAT: alcohol
aciltransferasa; ADH: alcohol deshidrogenasa; PG: poligalacturonasa; XTH:
endotransglicosilasa / hidrolasa; Exp: expansina (Ayub et al. 2008).

1.2.1 Azúcares.

El melón es una fruta muy atrayente para los consumidores por su dulzor,
determinado especialmente por la acumulación de sacarosa durante las etapas finales del
desarrollo del fruto (Dai et al. 2010). El contenido en azúcares juega un papel
importante en propiedades como sabor, apariencia y textura de los frutos. En general,
los cultivos de melón presentan un alto contenido en azúcares, principalmente sacarosa,
glucosa y fructosa que se han descrito como los componentes principales del
mesocarpio en melón, y junto al agua, son parte del contenido de sólidos solubles
totales y de la calidad de la fruta. Estos azúcares y su proporción relativa, en especial
glucosa/fructosa dan el dulzor característico del melón. Si bien el contenido en sólidos
solubles está solo parcialmente correlacionado con el dulzor, y un alto contenido en
SST no siempre define una adecuada calidad del melón, es un criterio fácil de medir y

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
26
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

aplicado a menudo para juzgar la calidad del fruto del melón cosechado. El contenido
en SST está principalmente determinado por el contenido en azúcar, que corresponde
mayoritariamente a fenómenos de acumulación de sacarosa ocurridos durante la
maduración e influenciados por las enzimas que actúan en el metabolismo de la
sacarosa (Beaulieu et al. 2003; Obando-Ulloa et al. 2009a; Zhang y Li, 2005). Por tanto,
la sacarosa es el principal azúcar responsable del sabor dulce, ya que supone el 50% o
más de entre todos los sólidos solubles y se encuentra tanto en la corteza como en la
pulpa del los frutos de melón (Albuquerque et al. 2006).
Dos enzimas, sacarosa fosfato sintasa (SFS) e invertasa ácida (AI) han sido
descritas como determinantes de la acumulación de sacarosa en el melón (Tang et al.
2012). Los incrementos en sacarosa van acompañados por un descenso acentuado en la
actividad enzimática de la invertasa ácida y neutra y un incremento de la actividad de
la enzima SFS y sacarosa sintasa. Una alta actividad de SFS se considera un factor
determinante en la concentración final de sacarosa en los cultivares de melón, y se ha
atribuido una alta acumulación de sacarosa a un gen único recesivo denominado suc
(Beaulieu et al. 2003). Recientes resultados obtenidos en tres genotipos de melón;
‘Flavor Nº.4’ un nuevo genotipo de melón ‘Hami’ y sus parentales ‘Shouxing’ y
‘Suangua’, la acumulación de sacarosa puede ser regulada de dos modos. En un modo,
aumenta la sacarosa con el aumento de la actividad de SFS, mientras que en el otro
modo, la sacarosa aumenta cuando la actividad de AI se mantiene a un bajo nivel (de
Tang et al. 2012). Estos procesos son independientes a la acción del etileno, pero
enzimas involucradas en este fenómeno como la poligalacturonasa (PG) o la
galactosidasa (GAL) son dependientes de la acción del etileno (Pech et al. 2002).
En melón, a diferencia de otras frutas donde la acidez y especialmente la relación
azúcar/ácido es el principal indicador de calidad, existen variedades de melón dulce de
los grupos reticulatus, inodorus y cantalupensis donde el dulzor es el principal
parámetro de calidad. Los genotipos de C. melo que acumulan grandes niveles de ácidos
no acumulan grandes niveles de azúcares (Burger et al. 2003; Cohen et al. 2012). En la
actualidad se han desarrollando cultivares de melón como ‘Flavor Nº. 3’ con una
combinación de los sabores dulce y amargo incrementando la reserva genética del
cultivo y así conducir a una mejora de la calidad del fruto del melón ya que el equilibrio
entre azúcar y acido es un factor importante para el sabor de este fruto (Tang et al.
2010).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
27
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

El metabolismo de carbohidratos en frutas de la familia de las cucurbitáceas ha sido

ampliamente estudiado y dilucidado a lo largo del tiempo, no obstante han sido en
recientes como el de Dai et al. (2010) donde se han identificado los múltiples miembros
de las diferentes familias de genes que codifican las enzimas del metabolismo del
azúcar durante el desarrollo del melón y han permitido describir el patrón de expresión
del desarrollo de la ruta completa del metabolismo del azúcar basado en la
secuenciación profunda de la expresión génica.

Figura 8. Ruta metabólica del metabolismo de los azúcares en frutos de melón

indicando sus correspondientes reacciones enzimática (Dai et al. 2010).

1.2.2 Ácidos orgánicos.

Hay dos tipos de ácidos denominados ácidos alifáticos (cadena lineal) y ácidos
aromáticos. Los ácidos más abundantes en las frutas y verduras son cítrico y málico
(ambos alifáticos). El contenido de ácido de frutas y verduras en general disminuye
durante la maduración. Los ácidos orgánicos aromáticos se producen a concentraciones
muy bajas en varias frutas y verduras, siendo la distribución de los ácidos dentro de un
fruto no uniforme (Vicente et al. 2009).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
28
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

Los ácidos orgánicos juegan un papel esencial durante el desarrollo del fruto como
componentes implicados en la respiración y como precursores de fenoles, aminoácidos,
lípidos y compuestos aromáticos, con un papel crucial en la nutrición y elaboración de
alimentos. En diversos estudios se ha mostrado que la acumulación de ácido en las
frutas está regulada por expresiones coordinadas de diferentes genes del metabolismo
ácido y su actividad enzimática, especialmente en el ciclo de Krebs. Sin embargo, la
información sobre la regulación del metabolismo ácido en el desarrollo de frutos de
melón es escasa. En la relación de azúcar/ácido, los ácidos juegan un papel importante
puesto que un alto contenido de ácidos reduce la calidad de la fruta, pero una moderada
concentración de ácido puede resultar en una fruta más apetecible (Tang et al. 2010,
2012).
Si bien la calidad del fruto de melón está determinada principalmente por el
contenido de azúcar, se trata de una especie con un gran rango de variabilidad genética
y existen genotipos que acumulan altos niveles de ácido en los frutos. La variabilidad
genética en el melón es única en términos de diferencia extrema en el nivel de acidez
entre genotipos amargo y no amargos (Cohen et al. 2012). Los ácidos orgánicos se
acumulan tanto en la corteza como en la pulpa del melón, y tienen valores de acidez
relativos diferentes. En melón climatérico ‘Charentais’ se ha encontrado la
independencia de la evolución de acidez de la pulpa de la acción del etileno. El
contenido en ácidos orgánicos en melón es muy limitado, destacando su contenido en
ácidos cítrico, málico y succínico (Dos-Santos et al. 2007; Obando-Ulloa et al. 2009a).
El ácido cítrico se acumula fundamentalmente en la corteza del melón durante su
proceso de maduración. En estudios previos (Flores et al. 2002), al comparar la
acumulación de este ácido en frutos climatéricos (control) y no climatéricos (obtenidos
mediante transgenia con una oxidasa antisentido -ACO-), no se encontraron diferencias
significativas para la acidez de la pulpa, pero sí de la corteza. Los frutos no climatéricos
acumulaban mayor cantidad de ácido cítrico, con lo se deducía que el etileno actuaba
como regulador de este proceso degradando este ácido. Sin embargo, dicha hipótesis no
se ha confirmado en estudios con NILs de melón con distinto comportamiento
fisiológico y no se puede suponer un menor contenido en ácido cítrico al melón debido
a su potencial carácter climatérico y otros factores como el del tiempo de permanencia
en planta deben ser tenidos en cuenta (Dos-Santos et al. 2007).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
29
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

Los resultados obtenidos recientemente por Tang et al. (2012) en el melón ‘Flavor
nº4’, un nuevo genotipo de melón tipo ‘Hami’ y sus parentales, demuestran que un
aumento probable en el flujo a través del ciclo de Krebs contribuye a la acumulación de
ácido cítrico.
En la actualidad variedades ácidas de melón con un alto contenido en ácido cítrico,
están en boga en el mercado de Reino Unido, resultando de alto interés para ciertos
grupos de consumidores (Lignou et al. 2013).
El estudio e identificación de QTLs relacionados con el metabolismo de los ácidos
orgánicos está en auge en los últimos años. En Obando-Ulloa et al. (2009a) se ha
identificado un QTL asociado al pH (pHqf8.4), mientras que otro QTL en el LG VIII ha
sido considerado responsable de la mayor contribución a la acidez del fruto de melón
(Cohen et al. 2012). Sin embargo, aún queda mucho por avanzar en la identificación de
genes candidatos involucrados en las rutas biosintéticas responsables de la acidez del
melón.

1.3 Líneas casi-isogénicas de melón.

Una genoteca de NILs consiste en una serie de líneas, cada una conteniendo una
introgresión homocigótica del parental donante sobre el fondo genético de parental
receptor, proporcionando todas ellas una cobertura completa o prácticamente completa
del genoma del parental donante. Las poblaciones de NILs han sido usadas para el
estudio de diferentes aspectos de la biología como el contenido en azúcares, vitaminas y
forma y tamaño de los frutos, entre otros, y son una herramienta fundamental para la
investigación de cualquier rasgo o característica medible de interés (Eduardo et al.
2007).
Las líneas casi-isogénicas de melón o NILs resultan del cruzamiento entre dos
parentales no climatéricos (Fig. 9), el parental coreano tipo Conomon ‘Shongwan
Charmi’ (accesión PI 161375) que actúa como donante sobre el fondo genético del
parental español tipo Inodorus ‘Piel de Sapo’ que actúa como receptor (Eduardo et al.
2005).
Las NILs fueron desarrolladas después de varias generaciones de retrocruzamientos
y autofecundación mediante selección asistida por marcadores moleculares
desarrollados previamente y con posición conocida en el mapa genético. Para ello, se
generaron plantas haploides a partir del híbrido F1 polinizando con polen irradiado

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
30
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

gamma, posterior rescate in vitro de embriones, multiplicación in vitro de las plantas

rescatadas, estudio del nivel de ploidía de las plantas por citometría de flujo, y
diploidización mediante tratamiento in vitro con colchicina para la obtención de
individuos doble-haploides (DHL) (Gonzalo et al. 2011; Monforte et al. 2004). Treinta
DHLs se seleccionaron y se retrocruzaron con PS para obtener una población de 30
BC1. La misma se retrocruzó de nuevo con PS para obtener 12 familias BC2. A su vez
esta BC2 se cruzó de nuevo con PS (Gonzalo et al. 2005).
De manera que la mayoría de las NILs contienen un única introgresión homocigótica
del parental SC, en el grupo de ligamiento III de parental PS. Intencionalmente, las
genotecas con introgresiones en el conjunto de NILs tienen un alto porcentaje (en su
mayor parte superior al 95%) del genoma del parental recurrente, cubriendo la mayoría
del genoma de SC (Eduardo et al. 2005, 2007; Fernández-Trujillo et al. 2008; Moreno et
al. 2008; Obando-Ulloa et al. 2009ab).
La distancia genética entre PS y SC es una de las mayores distancias descritas en
germoplasma de melón (Eduardo et al. 2005). Los frutos de PS son largos y ovalados,
de pulpa blanca, piel de color verde con manchas dispersas y con un alto contenido en
azúcar (Eduardo et al. 2007). Los frutos de SC son piriformes, de pulpa verdosa y un
bajo contenido de azúcar (Monforte et al. 2004).
a b
a b

Figura 9. Parentales no climatéricos de las NILs de melón de la campaña 2009. a)

‘Piel de Sapo’ (PS). b) ‘Shongwan Charmi’ (SC).

1.4 Marcadores moleculares y quantitative trait loci.

La elaboración de mapas genéticos permite el uso de la selección asistida por

marcadores (MAS). Se pueden utilizar marcadores estrechamente ligados a los genes o
QTLs de interés en horticultura tales como resistencia a enfermedades, calidad de la

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
31
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

fruta o de la biología floral. Uno de los principales problemas en MAS es el evento de

recombinación entre el gen y el marcador. Los marcadores deben desarrollarse en
diferentes fondos de material genético de elite. Cuando un gen ha sido clonado,
secuencias polimórficas entre los alelos permiten definir marcadores dentro del alelo
(Pitrat 2008).
La contribución de cada gen en el control de rasgos de interés puede ser
cuantitativamente estimada por un método de mapeo de quantitative trait loci (QTL)
(Longhi et al. 2012). Los QTLs son, por definición, genes que alteran
significativamente la molécula objetivo. Si bien el gen responsable es el objetivo, un
adecuado marcador ligado a ese gen es potencialmente valioso para propuestas de
producción. Un requisito previo necesario para el descubrimiento de QTLs es la
existencia de variación genética sustancial en el objetivo que se busca dentro del
germoplasma disponible. En la composición aromática, por ejemplo el contenido de los
principales volátiles puede diferir en varios órdenes de magnitud, en muchas frutas,
sobre todo fresa y melón (Klee 2010).
El desarrollo de mapas saturados de marcadores moleculares ha permitido el análisis
exhaustivo de QTLs en diferentes poblaciones y el desarrollo de poblaciones adecuadas
para el análisis de QTLs, como son las líneas introgresionadas y las NILs (Eduardo et
al. 2007). El melón es la especie más avanzada en genómica entre las cucurbitáceas y se
puede utilizar como un modelo para la familia (Pitrat et al. 2008).
Más de 160 genes cualitativos de melón han sido identificados según la lista de
genes de melón 2011 (Dogimont et al. 2011). Los mapas moleculares de melón se han
utilizado ampliamente para mapear QTLs asociados a parámetros de calidad del melón
como el contenido en de sólidos solubles totales, ácidos orgánicos, azúcares, el peso y
forma de los frutos, el color de la pulpa y del fruto entero, la maduración del fruto, la
resistencia a los daños por frio, la longitud y anchura del ovario y el rendimiento o la
producción de compuestos volátiles. También se han identificado QTLs para resistencia
a virus, hongos y enfermedades. Esto indica que el uso marcadores moleculares y la
información proporcionada por su mapeo podría ser una poderosa herramienta mediante
la selección asistida por marcadores para la mejora del cultivo del melón (Fernandez-
Trujillo et al. 2008; Harel-Beja et al. 2010; Obando-Ulloa et al. 2008; Park et al. 2009).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
32
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

1.5 Etileno y tasa respiratoria.

El etileno (C2H4) es una molécula muy simple con dos átomos de carbono unidos
mediante un doble enlace, y que se encuentra naturalmente en forma gaseosa. Los
primeros indicios acerca de un compuesto gaseoso que afectaba a las tejidos de las
plantas datan del siglo XIX, cuando se observó que las farolas de gas que se empleaban
para la iluminación de la calles, causaban la senescencia y defoliación en los árboles
vecinos. Es ya en el siglo XX (1901), cuando Neljubov identificó el etileno como
agente causal de este efecto, y es reconocido como el descubridor de esta hormona
vegetal (Martínez-Romero et al. 2007).
El etileno es una hormona vegetal importante conocida por regular múltiples
procesos fisiológicos y de desarrollo de las plantas, y participar en las respuestas frente
a estreses bióticos y abióticos, que incluyen la vida útil, almacenamiento y calidad de
las frutas y hortalizas, y el desarrollo de enfermedades. Entre las acciones del etileno, se
pueden citar la estimulación de la germinación de semillas latentes y de la floración,
cambios en la dirección del crecimiento de las plántulas para superar algunos obstáculos
en el suelo, y su importancia en la maduración de los frutos, abscisión de los órganos y
crecimiento de transición entre la fase vegetativa a la fase reproductiva. Los
mecanismos por los que la señal del etileno es percibida y transducida para mediar las
respuestas fenotípicas no se entienden completamente (Reid 2007; Zheng y Wolff,
2000; Ezura y Owino, 2008).
La biosíntesis y percepción de etileno regula la expresión de los genes que
producen los eventos típicos de maduración antes de la senescencia o etapa final del
desarrollo del fruto. Estos cambios reducen la vida útil de frutas y afecta a diferentes
frutas características de calidad (Obando-Ulloa et al. 2009b).
El papel regulador del etileno en la maduración se conoce desde hace más de
cincuenta años e incluye su mediación en la síntesis de etileno, en su percepción por las
células diana a través de receptores del etileno (ETRs), en la señal transducción en
cascada en la que participan reguladores tanto positivos como negativos (CTR, EIN2,
EIN3, etc), y finalmente en la regulación de la expresión de genes diana por factores de
transcripción como factores de respuesta de etileno (FERs) (Bapat et al. 2010).
La ruta de biosíntesis del etileno está bien establecida y se inicia a partir del
aminoácido metionina, y su conversión vía S-adenosilmetionina (SAM) mediante la
adición de la adenina y el consumo de adenosin trifosfato (ATP). La SAM se transforma

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
33
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

a ácido 1-aminociclopropano-1-carboxílico (ACC), con la generación del subproducto

5-metiltioadenosina (MTA), que se recicla a metionina (Met). Así, el etileno se puede
producir con una altas tasa, e incluso con una pequeña cantidad de metionina libre.
Finalmente, (ACC) se oxida hasta etileno. Las dos enzimas clave implicadas en el
proceso son ACC sintasa (ACS) y ACC oxidasa (ACO), catalizando la conversión de
SAM a ACC y del ACC a etileno, respectivamente. El inicio de la producción de etileno
en la maduración climatérica de las frutas se asocia con el aumento correspondiente en
ambas enzimas. La clonación y caracterización parcial de miembros de la las familias de
genes de ACS y ACO indican que los miembros de la familia de genes son regulados
diferencialmente durante la maduración de la fruta. La familia de genes de ACS es más
amplia que la familia de ACO (Lelievré et al. 1997; Martínez-Romero et al. 2007;
Zheng y Wolff, 2000). Hasta la fecha cinco genes de ACC sintasa y tres genes de ACC
oxidasa se han aislado a partir del fruto de melón (Ezura y Owino, 2008).
La supresión de la producción de etileno por bloqueo de la a expresión de la ACS y
ACO se traduce en una fuerte inhibición del proceso de maduración. Frutos de melón
con supresión del etileno, no muestran aumento en el climaterio respiratorio. Sin
embargo, a pesar de la ausencia de etileno. Sin embargo, a pesar de la ausencia de
etileno, la acumulación de ACC y la actividad de ACC sintasa empieza a aumentar al
mismo tiempo que en frutos silvestres, lo que indica que el inicio de la subida
climatérica en el etileno y la respiración no es controlada por el etileno (Pech et al.
2008a).

Figura 10. Ruta metabólica simplificada de la biosíntesis del etileno (Reid 2007).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
34
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

El papel del etileno en los procesos madurativos de frutos climatéricos ha sido

ampliamente estudiado (Flores et al. 2001b) y aunque la ruta de biosíntesis de etileno es
bien conocida (Yang y Hoffman, 1984) el proceso de regulación del período climatérico
de etileno durante el desarrollo y maduración de la fruta es muy complejo (Zheng et al.
2002). Estudios genómicos han revelado que una gran proporción de los genes
relacionados con la maduración (aproximadamente el 40%) dependen de etileno (Page
et al. 2008).
La vida útil de las frutas frescas es un parámetro de calidad de gran importancia para
los consumidores, y en frutas como el melón la producción alta de etileno se ha
relacionado con una duración reducida de vida comercial poscosecha (Obando et al.
2008; Obando-Ulloa et al. 2009bc).
Desde el punto de vista de la agricultura, el etileno confiere tanto efectos positivos
como negativos durante la maduración de las frutas. Entre los efectos positivos, el
etileno estimula la maduración en frutas climatéricas (como la manzana, albaricoque, o
plátano entre otros), lo que resulta en unas buenas características de calidad con el
desarrollo sabores y aromas agradables y un color y textura adecuados. En este tipo de
frutos, los efectos negativos serían una aceleración de la maduración poscosecha, y
reducción de la vida útil de los frutos. En fruta no climatérica (como cítricos, la
berenjena, uva, pimienta, y fresa), si bien no se requiere del etileno para la finalización
de la maduración de estos frutos, su presencia aumenta la susceptibilidad frente a
patógenos, alteraciones fisiológicas, y senescencia, con una reducción neta de la calidad
y vida poscosecha (Martínez-Romero et al. 2007).
Durante los procesos madurativos de los frutos coexisten procesos dependientes,
independientes, o solo parcialmente dependientes de la acción del etileno (Flores et al.
2001ab). En melón hay factores como el peso y tamaño de los frutos, el número de
semillas, el tamaño del mesocarpo y el contenido de carotenoides en la pulpa que son
independientes de la acción del etileno (Ezura y Owino, 2008). La acumulación de
azúcares en la pulpa, especialmente sacarosa, durante a maduración es independiente de
la acción del etileno, pero enzimas involucradas en este fenómeno como la PG o la B-
Gal son dependientes de la acción del etileno (Jones et al. 2001; Pech et al. 2002), y se
ha demostrado que la acumulación de sacarosa en la corteza de melones puede ser
inhibida por la acción de la oxidasa antisentido (ACO), lo que sugiere una influencia del
etileno (Flores et al. 2001a). Como los azúcares, los ácidos orgánicos se acumulan tanto

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
35
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

en la corteza como en la pulpa del melón y tienen valores de acidez relativos diferentes.
Si bien estudios anteriores (Guis et al. 1997) hablan de la independencia de la
acumulación de ácidos orgánicos de la acción del etileno, otros resultados indican que
una parte del metabolismo de los ácidos orgánicos está relacionado con el etileno (Jones
et al. 2001; Flores et al. 2001b). A su vez existen parámetros como el ablandamiento de
la pulpa de melón o la producción de compuestos volátiles, con procesos tanto
dependientes como independientes de la acción del etileno (Shalit et al. 2001; Flores et
al. 2001a). El papel de etileno en la generación de compuestos volátiles, responsables
del aroma característico de melón, es de vital importancia con procesos etileno-
dependientes, como la formación de ésteres, mientras que el último paso de acetilación
de alcoholes presenta componentes tanto dependientes como independientes de la
acción del etileno (Pech et al. 2002; Flores, et al. 2002).

1.5.1 Comportamiento fisiológico. Frutos climatéricos vs. no climatéricos.

En relación a la fisiología de frutas y hortalizas, la importancia de la respiración se

puede juzgar por el hecho de que el potencial de vida útil de los tejidos de la planta o
parte de planta después de la cosecha se ha demostrado estar estrechamente relacionada
con su tasa de respiración o producción de dióxido de carbono (CO2). Del mismo modo,
existe una correlación entre el nivel de etileno producido por la fruta y su tiempo de
conservación y el deterioro poscosecha. Diversos estudios han demostrado que niveles
bajos de O2 y altos de CO2 en el microambiente de la fruta puede retrasar el inicio de la
subida de etileno y respiración y por lo tanto la maduración de la fruta (Vijay et al.
2012).
En la biosíntesis de etileno se distinguen dos sistemas: El sistema 1, corresponde a
etileno basal o una baja producción de etileno en el período pre-climaterio de frutas
climatéricas, y está presente en todo el desarrollo y la maduración de la fruta no
climatérica. El sistema 2, se refiere a una producción masiva auto-estimulada de etileno,
llamado “síntesis autocatalítica” y es específica de frutas climatéricas (Bapat et al.
2010). Por tanto, en función de una subida aguda o no en la biosíntesis del etileno
durante la maduración, se puede hablar tradicionalmente de frutos climatéricos o no
climatéricos (Leliévre et al. 2000). Una definición más compleja habla de climaterio
cuando la maduración del fruto se caracteriza por un incremento de la tasa respiratoria
iniciada por una producción autocatalítica de etileno. La maduración no climatérica está

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
36
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

determinada por una disminución continua de la respiración, de los niveles de etileno y

ausencia del pico de etileno, característico de frutos climatéricos (Moreno et al. 2008).
Este es un concepto fundamental en cualquier discusión acerca del etileno en los
sistemas poscosecha, sin embargo la clasificación de los frutos en ambas categorías
representa una simplificación, ya que existen especies, entre ellas el melón, en que
ambos sistemas pueden ser encontrados. Mientras que los frutos no climatérico tendrían
respuestas relacionadas con la maduración (o no) frente al etileno exógeno, un
mecanismo autocatalítico de regulación de la maduración estaría presente en los frutos
climatéricos (Obando et al. 2007). La coexistencia de variedades de melón con
maduración climatérica y no climatérica, hacen de esta especie un sistema adecuado
para estudiar el control genético de la maduración climatérica (Moreno et al. 2008).

Tabla 8. Frutas clasificadas de acuerdo a su comportamiento respiratorio durante la

maduración.

Frutas Climatéricas Frutas No Climatéricas

Manzana Melones Zarzamora Litchi
Albaricoque Nectarina Cacao Ocra
Aguacate Papaya Carambola Aceituna
Plátano Maracuyá Nuez de la India Naranja
Biribá Melocotón Cereza Chícharo
Arándano azul Pera Arándano agrio Chile pimiento
Fruto del árbol de pan Persimonio Pepino Piña
Chirimoya Plátano macho Dátil Granada
Durián Ciruela Berenjena Tuna
Feijoa Membrillo Uva Frambuesa
Higo Rambután Toronja Fresa
Guayaba Chicozapote Jujuba Calabacita
Jaca Zapote Limón Tomate de árbol
Kiwi Guanabana Limón Mexicano Tangerina y mandarina
Mango Anona Longan Sandía
Mangostán Jitomate Níspero
Fuente: Kader 2007.

Los frutos climatéricos pueden continuar madurando una vez separados de la planta
madre, a diferencia de los frutos no climatéricos que no son capaces de continuar su
proceso de maduración o lo hacen muy lentamente, una vez que se desprenden de la
planta madre (incluso si la fruta ha completado el crecimiento en tamaño). Además,
estos frutos producen una cantidad muy pequeña de etileno endógeno, y no responde al
tratamiento con etileno externo (Prasanna et al. 2007; Vijay et al. 2012). En frutos

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
37
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

climatéricos, la senescencia se alcanza antes que en frutos no climatéricos (Obando-

Ulloa at al., 2009).
Los tejidos vegetativos y los frutos en crecimiento sintetizan pequeñas cantidades de
etileno (0,1-0,2 µl·kg-1·h-1), que aumenta considerablemente (hasta 1000 veces) con el
proceso de maduración de las frutas climatéricas (Mártinez-Romero et al. 2007).

Tabla 9. Productos hortofrutícolas y ornamentales clasificados de acuerdo a su

producción de etileno (C2H4) (µl·kg-1·h-1) a 20ºC.

Producción
Producto Clase C2H4
(µl·kg-1·h-1)
Alcachofa, espárrago, coliflor, cereza, frutos cítricos,
uva, jujuba, fresa, granada, toronja, hortalizas de hoja, Muy baja < 0,1
hortalizas de raíz, papa, la mayoría de flores cortadas.
Zarzamora, arándano azul, melón casaba, melón,
arándano agrio, pepino, berenjena, ocra, aceituna, chile
Baja 0,1 – 1,0
(pimiento picante), persimonio, piña, calabaza,
frambuesa, tomate de árbol, sandía.
Plátano, higo, guayaba, melón Honeydew, lichi, mango,
Moderada 1,0 – 10,0
plátano macho, jitomate.
Manzana, albaricoque, aguacate, melón cantaloupe,
feijoa, kiwi (maduro), nectarina, papaya, melocotón, Alta 10,0 – 100,0
pera, ciruela.
Chirimoya, zapote mamey, maracuyá, zapote. Muy alta > 100,0
Fuente: Kader 2007.
El mecanismo de regulación de la maduración por el etileno varía incluso entre
frutos climatéricos. En frutos de tomate tratados con 1-metilciclopropeno (1-MCP) en
una etapa temprana de la maduración, disminuye la producción de etileno, aunque se
mantiene a un nivel considerable. En cambio, en frutos de melocotón y plátano, no se
observa una reducción de la maduración relacionada con etileno en frutos tratados con
1-MCP, cuando se aplica en el grado de madurez (Hiwasa et al. 2003).
En melón, la tasa de producción de etileno varía en función de sus diferentes
genotipos. En melones de pulpa anaranjada de la variedad cantalupensis, se ha descrito
una explosión en la producción de etileno, que coincide con la madurez del fruto y la
abscisión. Por el contrario, en melones de pulpa verde y blanca Honeydew y otras

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
38
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

variedades de larga vida útil (inodorus) la producción de etileno es menor, y por lo

general no forman una zona abscisión en la madurez comercial (Ezura et al. 2008).
El tratamiento de melones antisentido ACO con etileno, ha permitido la
recuperación completa de la maduración y la determinación de la sensibilidad gradual
de varias vías de la hormona. El nivel umbral de etileno capaz de actividad fisiológica
varía desde 1 µL·L-1 del desverdizado de la corteza, a 2,5 µL·L-1 para el ablandamiento
de la pulpa, deterioro de la membrana y para la separación celular en la zona del
pedúnculo. Los niveles de saturación para el cumplimiento total de la vía son 2,5-5,0
µL·L-1, valores mucho más bajo que el etileno interno encontrado en el pico climatérico
(más de 100 µL·L-1), lo que indica que el fruto desarrolla más de etileno de lo necesario
(Pech et al. 2008a).
a

Figura 11. a) Tasa respiratoria (nmol⋅Kg-1⋅s-1 de CO2 y b) etileno endógeno

(pmol⋅Kg-1⋅s-1 de etileno medidos a 21ºC en distintos frutos de melón de los parentales
no climatéricos PS, SC y la NIL climatérica (SC3-5) (Moreno et al. 2008).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
39
 CAPÍTULO I
1. INTRODUCCIÓN GENERAL

Numerosos estudios llevados a cabo en de melones transgénicos portadores de la

oxidasa antisentido ACO (Flores et al. 2001b; Shiomi et al. 1999; Yamamoto et al.
1995) que actúa bloqueando la síntesis de etileno hasta en un 99,5% (Ayub et al. 1996),
han demostrado que una parte de los procesos madurativos de frutos climatéricos están
regulados por mecanismos independientes de la acción del etileno mientras que otros
son total o parcialmente etileno-dependientes (Jones et al. 2001; Moreno et al. 2008;
Obando-Ulloa et al. 2009b). Las vías de maduración dependientes e independientes del
etileno han sido estudiadas en melón tipo-silvestre y en melón transgénico (AS3), con
una inhibición extrema del etileno. Los frutos transgénicos se caracterizaron por ser más
firmes y mostrar mayores niveles de clorofila y de acidez en comparación con los
silvestres, en cambio no hubo cambios en el contenido de carotenoides en ambos tipos
de melones (Bapat et al. 2010).
El conocimiento actual del etileno y los procesos madurativos de frutas y hortalizas,
apunta claramente a la coexistencia de vías independientes y dependientes del etileno,
en ambas categorías de frutos (climatéricos y no climatéricos). La variabilidad en la
morfología de la superficie y en las características anatómicas de los frutos puede
proporcionar una explicación adicional para las variaciones existentes en el
comportamiento de la maduración, no sólo entre diferentes tipos de frutas, sino también
entre los diferentes cultivares de un fruto, al variar las concentraciones endógenas de
O2, CO2 y etileno (Vijay et al. 2012).
En la actualidad se conoce bastante acerca del papel del etileno en la maduración de
frutas y hortalizas, sin embargo, las interrogantes por resolver aún siguen siendo
numerosas. Nos encontramos ante un complejo campo de investigación en el que hay
que continuar avanzando aprovechando las poderosas herramientas disponibles
actualmente, como el mapeo genético de QTLs y/o las herramientas de bioinformática
que nos ayudarán a dar un salto cualitativo y cuantitativo en la consecución de este
objetivo común a muchos investigadores.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
40
 CAPÌTULO I
2. COMPUESTOS VOLÁTILES

2. COMPUESTOS VOLÁTILES

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
41
 CAPÌTULO I
2. COMPUESTOS VOLÁTILES

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
42
 CAPÌTULO I
2. COMPUESTOS VOLÁTILES

2. COMPUESTOS VOLÁTILES

2.1 Compuestos volátiles. Generalidades.

El sabor o “flavor” es una combinación de aromas, gusto y sensación en boca como

resultado de un equilibrio entre un gran conjunto de metabolitos primarios y
secundarios de azúcares, ácidos orgánicos, compuestos volátiles y aminoácidos libres.
La percepción humana del sabor implica la integración de una cantidad masiva de
información cuantitativa a partir de múltiples sistemas sensoriales. Los seres humanos
tienen 350 genes de receptores olfativos y son estos receptores los que proporcionan la
diversidad de sabores que experimentamos (Klee 2010; Gao et al. 2007).
Los compuestos responsables del sabor se forman generalmente durante la
maduración de las frutas cuando el metabolismo cambia radicalmente y se inicia el
catabolismo de las moléculas de alto peso molecular tales como las proteínas,
polisacáridos, lípidos y se degradan y se convierten en metabolitos volátiles (Aharoni y
Lewinsohn, 2010).
El aroma de la fruta, uno de los parámetros que más influyen en las preferencias del
consumidor, es una compleja mezcla de una amplia gama de compuestos con diferentes
grados de volatilidad. Una importante contribución al olor característico de la fruta y a
la percepción de su calidad general depende de los ésteres y en cierta medida de los
compuestos azufrados (Bauchot et al. 1998; Luchetta et al. 2007; Verzera et al. 2010).
En frutos de melón, el aroma, provocado por la liberación de volátiles, es un factor
esencial de calidad fuertemente vinculado al proceso de maduración y controlado
genéticamente (Gao et al. 2007; Nuñez-Palenius et al. 2008).
Solo en el reino vegetal se ha identificado varios miles de compuestos volátiles en
los tejidos florales, vegetales y de las la frutas, y estos compuestos comprenden un 1%
de los metabolitos de plantas e incluyen terpenoides, fenilpropanoides, bencenoides, y
derivados de ácidos grasos y aminoácidos (Skogerson et al. 2011)
Las clases más importantes de aromas son compuestos derivados de monoterpenos,
sesquiterpenos, lípidos, azúcares y aminoácidos y cada producto se caracteriza por un
aroma distinto en función de la proporción de volátiles clave y la presencia o ausencia
de componentes exclusivos (Pech et al. 2008b). Por ejemplo, en tomate aunque se han
identificado más de 400 compuestos volátiles sólo 30 están presentes a concentraciones
suficientes para afectar al aroma (Gao et al. 2007). Por lo tanto, las estrategias

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43
 CAPÌTULO I
2. COMPUESTOS VOLÁTILES

desarrolladas para mejorar el aroma de los volátiles emitidos por las frutas y hortalizas
incluyen una amplia gama de objetivos que comprende las diferentes vías metabólicas,
los elementos reguladores, como las hormonas, los factores de transcripción y los
mecanismos que intervienen en el almacenamiento o el secuestro de los precursores
volátiles, tales como la glicosilación y almacenamiento en las vacuolas (Pech et al.
2008b).
La presencia y abundancia de compuestos volátiles en la frutas depende de muchos
factores como la variedad, las prácticas culturales, la madurez y el manejo poscosecha.
De todos estos factores, la madurez desempeña un papel crítico en el desarrollo de
compuestos volátiles. Los frutos deben cosecharse en el momento optimo de
maduración si que quiere obtener una buena relación entre desarrollo de aromas, sabor y
madurez (Song y Forney, 2007).
Existe un interés creciente por conocer los marcadores moleculares asociados a
atributos de calidad del melón (entre ellos los relacionados con los aromas y el gusto del
melón) e identificar los QTL asociados al climaterio y la producción de etileno que
están directamente relacionados con la vida comercial del fruto (Moreno et al. 2008;
Obando-Ulloa et al. 2008).

2.2 Síntesis de compuestos volátiles y principales enzimas implicadas.

Los compuestos volátiles metabolizados en aromas son diversos (ácidos grasos,

aminoácidos, fenoles y terpenos entre otros) y siguen diferentes vías bioquímicas como
la vía de la β-oxidación, la vía de los isoprenoides o terpenos, la vía del ácido
siquímico, la vía de la fermentación, entre otras (Fig. 1). Los volátiles se pueden
clasificar como metabolitos “primarios” o “secundarios” según se formen de manera
natural por la acción enzimática sobre tejido intacto o bien sobre tejido dañado,
respectivamente (Li et al. 2006; Song y Forney, 2007; Obando-Ulloa et al. 2010).

Los ácidos grasos (AGs), fundamentalmente de los lípidos de membrana, son

importantes precursores de los compuestos volátiles que participan en el aroma
de las frutas y verduras. Entre los volátiles derivados de los ácidos grasos
insaturados y saturados se incluyen alcoholes de cadena corta, aldehídos,
cetonas, lactonas, ácidos y ésteres generados básicamente por tres procesos; α-

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44
 CAPÌTULO I
2. COMPUESTOS VOLÁTILES

oxidación, β-oxidación y por la vía de la lipooxigenasa (LOX) (Pech et al.

2008b; Schwab et al. 2008).

Del metabolismo de los aminoácidos (AA) se generan compuestos como

alcoholes, aldehídos, carbonilos, ácidos y ésteres, que contribuyen en gran
medida y en algunos casos determinan, el aroma primario de muchas frutas. La
reserva de estos aminoácidos libres de la fruta podría determinar su perfil de
aroma. Tres actividades enzimáticas: aminotransferasa, descarboxilasa y la
alcohol, deshidrogenasa (ADH), intervienen en la síntesis da aromas a partir de
aminoácidos. A pesar de la importancia de la ADH para la biosíntesis de aromas
en la fruta, en la mayoría de las frutas de la especificidad de la ADH no es un
factor limitante, mientras que el paso de la descarboxilación, parece ser crítico
para la liberación de los precursores de los ésteres (Pech et al. 2008b; Pérez y
Sanz, 2008).

Los terpenos volátiles provienen directamente del metabolismo de los hidratos

de carbono y pertenecen a una gran familia de compuestos naturales conocidos
como isoprenoides. La ruta biosintética de los isoprenoides genera tanto
metabolitos primarios como secundarios. Entre los primeros se encuentran el
ácido giberélico y abscísico, clorofilas y carotenoides y otros compuestos
importantes como ubiquinonas o esteroles. Entre los que se consideran
metabolitos secundarios están los terpenoides volátiles. Los terpenos
procedentes de la ruta biosintética del ácido mevalónico y del metileritritol 4-
fosfato (MEP). Los monoterpenos son el principal componente del aroma de las
frutas de la familia de isoprenoides, que junto con diterpenos y tetraterpenos,
proceden de la vía MEP (Pérez y Sanz, 2008). Los terpenos, sesquiterpenos y
triterpenos proceden de la vía del ácido mevalónico a partir de los precursores
difosfato prenil por la acción de las enzimas terpeno sintasas de cuya acción
derivan directamente la mayoría de los terpenos volátiles, mientras que otros se
transforman en compuestos hidroxilados, deshidrogenados o acetilados (Pech et
al. 2008b). Entre los terpenoides se encuentran los pigmentos carotenoides que
se acumulan en los plastidios de las hojas, flores y frutas, donde contribuyen a la
coloración roja, naranja y amarilla. Las dioxigenasas carotenoides catalizan la
rotura oxidativa de los carotenoides, lo que resulta en la producción de

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
45
 CAPÌTULO I
2. COMPUESTOS VOLÁTILES

apocarotenoides, tales como β-ionona, importantes compuestos aromáticos que

poseen bajos umbrales aromáticos. Se han encontrado dioxigenasas que
participan en la formación de compuestos aromáticos importantes en el melón
(Cucumis melo L.) (Aharoni y Lewinsohn, 2010; Schwab et al. 2008).

Del metabolismo de los azúcares, principalmente de la D-fructosa-1,6-difosfato,

se derivan estructuras de furanona como el furaneol (2,5-dimetil-4-hidroxi-
3(2H)-furanona) y sus derivados metoxi, presentes en grandes concentraciones
en el aroma de las fresas (Pech et al. 2008b; Song y Forney, 2007). El furaneol
imparte notas de azúcar caramelizado a altas concentraciones y notas afrutadas
cuando está a más bajas concentraciones. El furaneol es el compuesto más
importante entre las furanonas debido a su bajo umbral aromático (Pérez y Sanz,
2008).

Los compuestos derivados del azufre provienen probablemente de aminoácidos

azufrados, como la cisteína, cistina y metionina, de azúcares reductores y de la
tiamina o vitamina B1 (Obando-Ulloa et al. 2008). Estos son compuestos
responsables de olores tan característico como el olor a ajo (metanotiol), a
cebolla, a patata hervida y a coliflor cocida (Schawb et al. 2008).

Algunos volátiles muy comunes como acetaldehído o etanol que son parte de la
ruta fermentativa pueden proceder del metabolismo de carbohidratos, ácidos
grasos o aminoácidos a la misma vez (Schwab et al. 2008).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
46
 CAPÌTULO I
2. COMPUESTOS VOLÁTILES

Figura 1. Sustratos y rutas metabólicas para la síntesis de compuestos volátiles

(Schwab et al. 2008).

Entre las principales enzimas implicadas en la generación de compuestos volátiles se

encuentran las siguientes:

2.2.1 Lipoxigenasa (LOX).

Cataliza la hidroperoxidación de ácidos grasos poliinsaturados con estructura cis,

cis-pentadieno, siendo el ácido linoleico y linolénico sus principales sustratos en las
plantas y los precursores de la síntesis de aldehídos a través de la vía de la LOX (Pech et
al. 2008b). Aunque la mayoría de las LOXs de las plantas prefieren ácidos grasos libres
como sustratos, se ha demostrado la actividad de algunas LOXs con ácidos grasos
poliinsaturados esterificados en los fosfolípidos o triglicéridos. La vía LOX se reconoce
como responsable de la generación de las notas aromática “verde fresco” en productos
vegetales (Pérez y Sanz, 2008). Algunos genes responsables de la síntesis de los
isoenzimas de la LOX pueden requerir regulación post-transcripcional por el etileno
durante la maduración del fruto y la senescencia (Baldwin et al. 2000; Beaulieu y
Baldwin, 2002; Obando-Ulloa et al. 2009a).

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47
 CAPÌTULO I
2. COMPUESTOS VOLÁTILES

2.2.2 Fosfolipasas.

Involucradas en la formación de ácidos grasos poliinsaturados libres que se

consideran generalmente como sustrato de la LOX (Pech et al. 2008b).

2.2.3 Hidroxiperoxido liasa (HPL).

Enzima que forma hemiacetales muy inestables de hidroperóxidos generados por la

LOX a partir de ácidos grasos poliinsaturados, conducentes a la generación de aldehídos
y enoles (de aldehídos) por disociación espontánea (Pech et al. 2008b). La escisión
catalizada por la HPL tiene lugar entre el carbono que contiene el grupo hidroperóxido y
el carbono etilénico próximo, dando lugar a compuestos carbonílicos de seis u nueve
carbonos y los oxoácidos correspondientes. Productos obtenidos del ácido 13-
hidroperoxilinoleico son el hexanal y el ácido 2-oxo-(Z) dodecenoico (Pérez y Sanz,
2008).

2.2.4 Alcohol deshidrogenasa (ADH).

Interviene en la síntesis de compuestos volátiles de la fruta catalizando la

interconversión de aldehídos a alcoholes y proporcionando sustratos para la formación
de ésteres (Ezura y Owino, 2008; Pech et al. 2008b).

2.2.5 Alcohol acetil-transferasa (AAT).

Es la enzima clave en la bioquímica del aroma con diversos isoenzimas que

participan en la ruta biosintética de aromas volátiles en la fruta por esterificación de los
ésteres volátiles (Ezura y Owino, 2008). La AAT cataliza la transferencia de un acil-
CoA a un alcohol y es capaz de de combinar diferentes alcoholes y acil-CoA
contribuyendo a la síntesis de una amplia gama de ésteres (Pech et al. 2008b; Li et al.
2006).

2.2.6 Aminoácidos precursores de compuestos volátiles.

Muchos aminoácidos son precursores de aromas, tales como leucina, isoleucina,

fenilalanina, valina, serina, treonina y ácido aspártico, y la mayoría de ellos están
naturalmente presentes en los zumos de frutas. Los aminoácidos de cadena ramificada
(leucina, isoleucina y valina) son importantes en la formación de no de alcoholes de
cadena ramificada o alcoholes superiores, pero también aldehídos de cadena ramificada
o ácido, y, lo más importante, ésteres de cadena ramificada (Trinh et al. 2010).

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48
 CAPÌTULO I
2. COMPUESTOS VOLÁTILES

Muchos de los volátiles importantes del aroma de melón derivan de los

aminoácidos, siendo precursores en la síntesis de compuestos volátiles tanto en
variedades aromáticas como no aromáticas de melón. En las variedades aromáticas estos
volátiles son en su mayoría esterificados y sus niveles son generalmente más altos que
en las variedades no aromáticas, donde estos aminoácidos conducen generalmente a la
formación de aldehídos y alcoholes. Recientes estudios en melón, revelan la correlación
entre un grupo de metabolitos que incluyen aminoácidos ramificados y aromáticos con
volátiles o precursores de volátiles y que cuentan con la participación de enzimas
aminoácido transaminasas para el catabolismo de los aminoácidos en compuestos
aromáticos del melón (Bernillon et al. 2013; Gonda et al. 2011).
Los aminoácidos libres, especialmente alanina, valina, leucina, isoleucina, y
metionina (Fig. 2) son los principales precursores implicados en la biosíntesis de
compuestos volátiles en melón, incrementando sus valores en asociación con la
producción de aromas. Estos aminoácidos suelen ser los precursores de la mayoría de
los ésteres que se encuentran en frutos de melón, proporcionando la mitad de la cadena
ramificada de alquilo, que está presente en una proporción significativa de los
compuestos ésteres volátiles. Las síntesis de compuestos volátiles como el 2-metilbutil,
2 metilpropil, acetato de etilo y ésteres de tioeter, en frutos maduros de melón, indica
una abundancia de leucina, valina, alanina y metionina libre, respectivamente. En melón
tipo cantalupo (Cucumis melo var. reticulatus cv. ‘Sol Real’) se han identificado
muchos más compuestos volátiles en los frutos maduros en comparación con frutos
inmaduros, siendo los aldehídos (especialmente <C8) y cetonas, los compuestos
dominantes en las muestras inmaduras, mientras que estos compuestos no fueron
detectados o tan sólo lo fueron en cantidades traza en los frutos maduros (Beaulieu y
Grimm, 2001; Nuñez-Palenius et al. 2008; Song y Forney, 2007).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
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 CAPÌTULO I
2. COMPUESTOS VOLÁTILES

Valina

2-metilpropil éster

Isoleucina

2-metilbutil éster

Leucina

3-metilbutil éster

Metionina
Ester tioeter

Acetato
Alanina

Figura 2. Rutas para la conversión de algunos aminoácidos a ésteres volátiles

(Wyllie et al. 1995).

Los resultados obtenidos en frutos de melón (cv. Makdimon) indicaron unas

concentraciones similares de leucina e isoleucina en toda la fase de maduración. Sin
embargo los ésteres aromáticos formados se caracterizaron por tener esqueletos de

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
50
 CAPÌTULO I
2. COMPUESTOS VOLÁTILES

carbono derivados casi exclusivamente de la isoleucina. Por lo tanto, en algún momento

del proceso de formación del este las enzimas implicadas mostraron una selectividad
por el sustrato extraído de la reserva de aminoácidos. Esta selectividad es probable que
esté determinada genéticamente y tenga una profunda influencia en el perfil de ésteres
volátiles del melón, lo que explicaría en parte la variabilidad de composición de ésteres
encontrada en diferentes cultivares de melón (Wang et al. 1996).
La metionina es usada también por las plantas en la síntesis del etileno. Este proceso
es conocido como el ciclo de Yang o el ciclo de la metionina (Fig. 3). La metionina es
un aminoácido importante para la generación de ciertos compuestos volátiles. La
degradación enzimática de la metionina junto a la de la cisteína, conduce a la formación
de compuestos derivados del azufre alifáticos, tales como tioles o sulfuros (Gunther et
al. 2011; Varlet y Fernández, 2010).

Figura 3. Representación estructural de la biosíntesis de etileno y el ciclo de la

metionina o ciclo de Yang con las correspondientes enzimas implicadas (Van de Poel et
al. 2012).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
51
 CAPÌTULO I
2. COMPUESTOS VOLÁTILES

2.3 Principales compuestos volátiles en el perfil aromático del melón.

En general, la calidad de los frutos de melón se asocia sobre todo con un elevado
nivel de azúcar y un excelente sabor en el tejido mesocárpico (Nuñez-Palenius et al.
2008). Los volátiles aromáticos, así como el contenido de sólidos solubles, pueden
contribuir al dulzor del melón en relación con la percepción humana, y aunque los
aromas de algunos de los compuestos volátiles individuales, especialmente ésteres, a
menudo han sido relacionados con el sabor dulce y las notas afrutadas del melón, el
aroma peculiar del melón no se puede relacionar con un único compuesto (Alsmeirat y
El Assi, 2010; Shalit et al. 2001).
El aroma de melón ha sido ampliamente investigado y aunque más de 240
compuestos volátiles (sobre todo ésteres) se han identificado en variedades de melón
climatérico (‘Galia’ y ‘Cantalupo’) y al menos 42 compuestos en melones no
climatéricos (tipo ‘Rochet’, ‘Piel de Sapo’, ‘Honeydew’ o ‘Casaba’), la literatura posee
en proporción pocos datos cuantitativos. La inmensa mayoría de compuestos
identificados en frutos de melón han sido alcoholes, aldehídos, cetonas, ésteres, y
compuestos azufrados. Entre ellos, el etil isobutirato, etil butirato y metil 2-metilbutirato
aportan una gran parte del aroma afrutado. Según diversos autores, pequeñas cantidades
de ciertos ésteres con contenido sulfuroso, como el 2-(metiltio) etil acetato, tienen un
gran impacto en la nota aromática típica de melones, y junto con los alcoholes y
compuestos carbonílicos, especialmente los que contienen una cadena de nueve
carbonos, son los principales determinantes de la calidad de fruta de melón percibidos
por los consumidores. Estos compuestos dependen fuertemente de la variedad y del
comportamiento fisiológico, siendo los frutos climatéricos de melón de mayor
intensidad aromática y menor vida comercial que los frutos no climatéricos. Se
demuestra por tanto que el que el contenido de compuestos volátiles responsables del
“aroma de melón” es muy variado y es un atributo cultivar-dependiente (Aubert y Pitrat,
2006; Li et al. 2006; Luchetta et al. 2007, Nuñez-Palenius et al. 2008; Obando-Ulloa et
al. 2008, 2010; Verzera et al. 2010).
El desarrollo del aroma del melón está estrechamente relacionado con los cambios
metabólicos que se producen durante la maduración del fruto y representa una
importante característica en la calidad general de la fruta. Sin embargo existe un
conocimiento limitado de la ruta de biosíntesis de aromas (Li et al. 2006).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
52
 CAPÌTULO I
2. COMPUESTOS VOLÁTILES

Los ésteres no están presentes en los frutos verdes de melón, pero a medida que
éstos se aproximan a la maduración, los niveles aumentan rápidamente hasta alcanzar
un 80% del total de compuestos volátiles del fruto maduro. Cuando el fruto comienza a
sobremadurar el nivel de ésteres vuelve a disminuir hasta el 50-60% del total (Monforte
y Álvarez, 2006).
La mayoría de los aldehídos son compuestos que están presentes a niveles altos o
incrementan notablemente durante etapas de crecimiento del fruto para luego disminuir
con el incremento de la madurez de la cosecha. Otros como el acetaldehído y el hexanal
se han descrito como responsables del aroma agradable del melón ‘Cantaloupe’ y sus
altas concentraciones están asociadas a un alto grado de madurez en el melón
probablemente como resultado de la estimulación por el etileno de la actividad LOX
(Obando-Ulloa et al. 2008, 2010).
Entre los diversos cultivares de melón, existen diferencias entre los compuestos
considerados como importantes constituyentes de sus aromas característicos. El melón
no climatérico Honeydew, se caracteriza por un aroma dulce y afrutado y tiene un alto
contenido en aldehídos y alcoholes de nueve carbonos, con una fuerte asociación con
los compuestos aromáticos (Z)-6-nonenal y (Z)-6-nonen-1-ol. En el melón climatérico
Cantalupo, su aroma dulce, floral y afrutado se encuentra asociado
a importantes cantidades de ésteres, especialmente ésteres azufrados, que pueden
contribuir a las notas de almizcle en el aroma del melón, y ésteres de etilo. El cultivar
climatérico tipo Galia destaca por su alto contenido en alcoholes y ésteres de metilo que
le proporcionan un aroma como a pepino (Kourkoutas et al. 2006; Song y Forney,
2007).
La falta de actividad enzimática de la ATT en melones no climatéricos explicaría
porque en los melones no aromáticos, apenas hay cambios en el perfil aromático a lo
largo de la maduración del fruto (Monforte y Álvarez, 2006).
Algunos compuestos volátiles presentes en frutos de melón climatérico (Cucumis
melo L. cv. Kuylin.), como acetaldehído, etanol, acetato de metilo, acetato de etilo,
acetato de propilo, acetato de isobutilo, butirato de etilo, acetato de butilo, etil-2-
metilbutirato, hexil acetato, y (Z)-3-hexenil acetato, aumentan con la maduración del
fruto (Fuggate et al. 2007).
El análisis de las etapas de maduración y los periodos de almacenamiento
de dos cultivares de melón climatérico ‘Charentais’ han revelado que los cambios en el

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
53
 CAPÌTULO I
2. COMPUESTOS VOLÁTILES

patrón de volátiles son los responsables de las diferencias en la calidad del aroma. La
mayoría de los compuestos volátiles analizados estuvieron presentes en ambos
cultivares, pero se detectaron diferencias en su composición y magnitud con la
maduración y almacenamiento, siendo los ésteres el grupo principal (Alsmeirat y El
Assi, 2010).
Durante el almacenamiento de frutos de melón, los ésteres volátiles generalmente
disminuyen o exhiben un aumento transitorio antes de descender después de 5-7 días de
almacenamiento. El porcentaje relativo de los ésteres de acetato disminuye durante el
almacenamiento en muchos cultivares, y esta disminución suele ir acompañada por
aumentos simultáneos de ésteres no acetato (Nuñez-Palenius et al. 2008).
En frutos de melón ‘Hami’ (Cucumis melo. var. reticulatus.) congelados a -18ºC, el
tipo y concentración de ésteres disminuye, mientras que de el alcoholes insaturados y
aldehídos de 6 y 9 átomos de carbono aumenta, haciéndose más intensas las notas de
melón verde. Esto puede deberse a que la actividad enzimática de la LOX se mantiene
alta, catalizando la conversión de los ácidos grasos poliinsaturados (linoleico y
linolénico) a aldehídos y alcoholes.

2.3.1 Ésteres

Los ésteres volátiles contribuyen de manera importante al aroma de las frutas, y

también el sabor de los productos fermentados. Los ésteres son sintetizados a partir de
alcoholes y acetilCoAs a través de la acción de AATs, que catalizan el último paso en la
producción de ésteres (Fig. 4). Se ha demostrado la responsabilidad de una AAT para la
acetilación de alcoholes en el melón (Yahyaoui et al. 2002). Las ADHs realizan la
interconversión de aldehídos en alcoholes proporcionando así los substratos para la
formación de ésteres (Manríquez et al. 2006; Pérez y Sanz, 2008).
Los ácidos grasos (linoleico y linolénico) y los aminoácidos has sido identificados
como los principales sustratos para la síntesis de ésteres, tanto acetato como no acetato
(Rowan et al. 2009; Gonda et al. 2010; Dávila-Aviña et al. 2011). Existe una relación
biogenética bien establecida entre la formación de aromas volátiles y los aminoácidos
libres presentes en la maduración de la fruta. Los ésteres volátiles que contienen una
cadena ramificada de alquilo proceden de aminoácidos, siendo la valina, isoleucina,
metionina y alanina los ácidos aminados postulados como precursores de la mayoría de
los ésteres que se encuentran en frutos de melón. Los ésteres alifáticos son producidos a

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
54
 CAPÌTULO I
2. COMPUESTOS VOLÁTILES

partir de ácidos grasos libres, tales como los ácidos linoleico y linolénico,
proporcionando cadenas lineales de 2, 4 y 6 carbonos predominantemente por β-
oxidación de los ácidos grasos (Youming et al. 1996; Flores et al. 2002; Li et al. 2006;
Song y Forney, 2007).
En melón, los ésteres dominantes son metilbutil, etil, hexil, nonenil y bencil
acetatos, butanoatos, metilpropanoatos y hexanoatos (Song y Forney, 2007).

Figura 4. Formación de ésteres volátiles por acilación de alcoholes y acetil-CoA. La

enzima alcohol acil-transferasa (ATT) cataliza esta reacción (Shalit et al. 2001).

Los melones climatéricos del grupo reticulatus se caracterizan por una actividad
alta de la enzima ATT, siendo insignificante su actividad en melones no climatéricos del
grupo inodorus. Los ésteres de azufre han sido identificados por varios autores como
componentes del perfil de aromas de melón (Cucumis melo var. reticulatus). Entre estos
compuestos se encuentran el etil (metiltio) acetato, etil 3-(metiltio)-propanoato y el 3-
(metiltio) propil acetato como importantes contribuyentes a la percepción general del
aroma de la fruta madura. El etil 3-(metiltio)-propanoato tiene una nota al aroma típico
de melón (Luchetta et al. 2007).
Dos compuestos importantes identificados en el melón climatérico ‘Charentais’ han
sido los acetatos de hexilo y de butilo, con las siguientes rutas biosintéticas:
hexanoato→hexanol→hexanal→acetato de hexilo y la conversión de hexanoato en
butirato por β-oxidación que conduce a la formación de de acetato de butilo través de la
ruta siguiente: butirato→butanol→butanal→acetato de butilo (Flores et al. 2002).
Una combinación de varios ésteres volátiles imparte el aroma característico de los
melones, siendo el isoamilacetato y el de 2-metilbutil acetato los compuestos
prominentes en muchas variedades (Schawb et al. 2008).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
55
 CAPÌTULO I
2. COMPUESTOS VOLÁTILES

2.3.2 Alcoholes y aldehídos.

Otros de los compuestos importantes identificados en frutos de melón son alcoholes

y aldehídos, que se producen a partir de ácidos grasos libres como el linoleico y
linolénico (Figs. 5 y 6) a través de la actividad LOX, o de aminoácidos (como por
ejemplo, el acetaldehído que viene de alanina), o bien por degradación enzimática de los
lípidos. Los ácidos grasos pueden generar compuestos con cadenas más cortas por β-
oxidación. Los aldehídos se reducen a alcoholes en una reacción catalizada por la ADH
que también actúa proporcionando sustratos para la formación de ésteres.

Figura 5. Ruta biosintética de alcoholes y aldehídos insaturados C6 y C9 con el

ácido linolénico como precursor (Ma et al. 2007).

Algunos aldehídos de cadena corta, como el 3(Z)-nonenal, y el 3(Z)-hexenal, se

obtienen de la descomposición de hemiacetales obtenidos a partir del acción enzimática
de la HPL sobre hiodroperóxidos de ácidos grasos En melón, la conversión reversible
de aldehídos a sus alcoholes correspondientes es controlada por el etileno y está
fuertemente inhibida por el antagonista de etileno 1-metilciclopropeno y en las frutas en
el que la producción de etileno ha sido suprimida por un gen antisentido de la ACC
oxidasa. (Flores et al. 2002; Li et al. 2006; Manríquez et al. 2006; Obando Ulloa et al.
2008).
Los alcoholes son menos importantes como moléculas de flavor debido a su altos
umbrales de olor en comparación con sus aldehídos homólogos (Schawb et al. 2008).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
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 CAPÌTULO I
2. COMPUESTOS VOLÁTILES

Figura 6. Ruta biosintética de alcoholes y aldehídos insaturados C6 y C9 con el

ácido linoleico como precursor (Ma et al. 2007).

2.3.3 Compuestos derivados del azufre.

De la degradación enzimática de la cisteína a partir de la metionina se obtiene el

metanotiol o MTL (CH4S), un compuesto derivado del azufre que actúa como
intermediario en la formación de tioésteres y sulfuros (tioéteres) (Fig. 7). La metionina
se puede convertir en metanotiol por vías directas e indirectas. La conversión directa es
posible a través de la actividad de una enzima tal como L-metionina γ-liasa, cistationina
β-liasa o cistationina γ-liasa. La vía indirecta implica una reacción de transaminación
para convertir L-metionina a ácido 4-(metiltio)-2-cetobutanoico (KMBA), que
posteriormente se convierte a metanotiol (Varlet y Fernández, 2010; Vallet et al. 2008).
El metanotiol, clasificado como un tiol, con una acidez débil es un gas incoloro con
un olor similar al de la col podrida. Es una sustancia natural encontrada en numerosos
medios orgánicos, la sangre, el cerebro, y otros animales así como tejidos vegetales. Es
eliminado por heces animales. Se produce de forma natural con la descomposición
bacteriana de las proteínas a partir de metionina y en algunos alimentos, como algunos
frutos secos y queso, proceso que es realizado por diferentes microorganismos
(Wikipedia 2013). El metanotiol se ha identificado en alimentos como el queso o la
langosta contribuyendo al característico aroma a azufre, col y repollo hervido que tanto

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
57
 CAPÌTULO I
2. COMPUESTOS VOLÁTILES

rechazo genera entre los consumidores (Bentley et al. 2004; Singh et al. 2003; Varlet y
Fernández, 2010). Este compuesto ha sido identificado en estudios previos en NILs de
melón (Obando-Ulloa et al. 2010).
Los tioésteres son un grupo muy extendido en la bioquímica. Son compuestos con
un grupo funcional CS-CO-C y son el producto de esterificación entre un ácido
carboxílico y un tiol. Un sulfuro (tioéter) es un anión de azufre en su estado de
oxidación más bajo de 2. Los tioéteres, entre los que se encuentran el trisulfuro dimetil
o el disulfuro dimetil, se caracterizan por generar malos olores (Schawb et al. 2008).
En general los compuestos derivados del azufre se caracterizan por generar aromas
indeseables o poco aceptados por los consumidores como el aroma a ajo, repollo cocido,
mantequilla rancia o huevo podrido (Singh et al. 2003). Sin embargo, existen
compuestos como 1-metilsulfanilbutan-1-ona o el metil 2-metilsulfanilacetato capaces
de generar notas aromáticas a fruta tropical (Flavornet 2013; Pherobase 2013).
Otro compuesto derivado del azufre es la cetona pentano-2,3-diona, obtenida del
metanotiol, vía catabolismo de la metionina (Arfi et al. 2006). Este es un compuesto
característico de productos de la fermentación como el yogur y las leches fermentadas, y
de bebidas alcohólicas como el vino y cerveza (Ott et al. 2000). En general, a este
compuesto se le atribuye notas aromáticas a caramelo, mantequilla, queso, dulce,
afrutado, cremoso y fresco (Pherobase 2013; Thee good scent company database 2013),
sin embargo en productos como el jamón curado francés genera un aroma a rancio
(Buscailhon et al. 1994).
Estudios en diversos cultivares de melón han confirmado la metionina como un
importante precursor en la síntesis de compuestos derivados del azufre, como como S-
metil tiobutanoato, S–metil tioacetato, 3-(metioltio) propanal, etil 2-(metioltio) acetato,
etil 3-(metiltio) propanoato y 3-(metiltio) propil acetato, entre otros y que contribuyen al
aroma del fruto de melón (Gonda et al. 2010, 2013; Song y Forney, 2007).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
58
 CAPÌTULO I
2. COMPUESTOS VOLÁTILES

Figura 7. Degradación enzimática de la metionina y generación de compuestos

derivados del azufre alifáticos (Varlet y Fernández, 2010).

2.4 Etileno y producción de compuestos volátiles en melón.

El etileno es una fitohormona importante en frutos climatéricos, que actúa iniciando

y acelerando los procesos madurativos de los frutos, entre los que se encuentran
cambios en el sabor. Se ha investigado mucho en los últimos años acerca de la relación
existente entre etileno y sabor. El bloqueo en la generación de compuestos volátiles por
inhibición de la enzima clave en la síntesis de etileno (ACC), ha puesto de manifiesto la
importancia del papel que puede desempeñar el etileno en la biosíntesis de aromas
volátiles de las frutas climatéricas (Gao et al. 2008).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
59
 CAPÌTULO I
2. COMPUESTOS VOLÁTILES

Los frutos climatéricos de melón que se distinguen por su fragancia se caracterizan

por sus aromas volátiles como un atributo de mayor calidad. Se cree que
concentraciones más altas de la mayoría de los volátiles, sobre todo ésteres, están
presentes en el melón climatérico Cantalupo, más que en el tipo no climatérico
Honeydew. Los ésteres de acetato son los principales compuestos en las variedades
climatéricas, junto con alcoholes y aldehídos de cadena corta (Alsmeirat y El Assi,
2010).
Los resultados de Shalit et al, (2006) indican que en frutos de melón maduros
pertenecientes al cultivar climatérico Arava, la composición de volátiles difiere en gran
medida de la obtenida de frutos inmaduros del mismo cultivar y de frutos tanto maduros
como inmaduros de un cultivar de melón no climatérico (Cucumis melo var. inodorus
cv. Rochet). Mientras que el cultivar climatérico destaca por su contenido en ésteres,
especialmente acetatos, aldehídos y alcoholes son más comunes en el cultivar no
climatérico (Shalit et al. 2006).
Se ha demostrado que melones climatéricos del grupo reticulatus tienen una alta
actividad de la enzima AAT, siendo esta despreciable en melones no climatéricos del
grupo inodorus (Flores et al. 2002). En melón existen al menos cuatro genes (Cm-
AAT1, Cm-AAT2 Cm-AAT3, y Cm-AAT4) que codifican AATs. Todos menos Cm-
AAT2, son activos en la producción de ésteres y están caracterizados por frutos con una
expresión específica y dependientes del etileno. CM-AAT1 produce una amplia gama
de ésteres de acilo de cadena corta y larga, pero tiene marcada preferencia por la
formación de E-2-hexenil acetato y hexanoato de hexilo. CM-AAT1 juega un papel
importante en la producción de compuestos volátiles que dan el olor característico de
melón. CM-AAT3 es capaz de catalizar la formación de ésteres a partir de una amplia
variedad de sustratos (alcoholes y acil CoA), pero con una preferencia muy fuerte por la
producción de acetato de bencilo. Su máxima actividad es en gran medida del tipo
alcohol bencílico acetil transferasas. Esta actividad es 150 veces mayor que la actividad
de hexanol acetil transferasa y 4 veces mayor que etanol benzoil transferasas. CM-
AAT4 se dedica casi exclusivamente a la formación de acetatos, con sólo tres tipos
actividades de alcohol acil transferasas (hexanol acetil transferasas, (E)-hex-2-enol
acetil transferasas y bencil alcohol acetil transferasas) y con marcada preferencia por el
acetato de cinnamoil. La actividad (E)-hex-2-enol acetil transferasa es alrededor de 40

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
60
 CAPÌTULO I
2. COMPUESTOS VOLÁTILES

veces más que bencil y hexanol acetil tranferasas (Flores et al. 2005; Lucchetta et al.
2007ab).
La producción de ésteres alifáticos, como el acetato de butilo y el acetato de hexilo,
están bloqueadas en frutas ACO antisentido y puede ser revertida mediante tratamiento
con etileno. La reducción de ácidos grasos y aldehídos parece ser esencialmente
dependiente de etileno, mientras que el último paso de acetilación del alcohol tiene
componentes dependientes e independientes de la acción del etileno, seguramente por
una diferente regulación de la AAT (Flores et al. 2002; Li et al. 2006), debido a que
diferentes isoenzimas de AAT catalizan el último paso en la producción de ésteres
(Obando-Ulloa et al. 2009b).
Los ésteres de cadena lineal, junto con ésteres de cadena ramificada derivados de la
valina y la isoleucina son volátiles mayoritarios en frutos de melón ‘Charentais’
(Cucumis melo var. cantalupensis Naud. cv. ‘Védrandais’). Los ésteres son
cuantitativamente los compuestos más importantes y contribuyen de forma importante
al aroma único de frutas maduras de melón.
En melones transformados con una oxidasa antisentido (ACO) se demostró el papel
del etileno en la producción de aromas, con una reducción considerable en la
composición volátil total, siendo los compuestos con mayor poder aromatizante los más
afectados por la transformación. El papel del etileno fue mayor en la ruta que conduce a
la formación de ésteres de etilo con cadenas ramificadas de grupos acilo a partir de
aminoácidos, que en la formación de acetatos con cadenas laterales con mitades de
alcohol (Bauchot et al. 1998; Flores et al. 2005).
En frutos de melón ‘Charentais’ se han identificado dos genes de ADH (Cm-ADH1
y Cm-ADH2), regulados positivamente por el etileno y cuya expresión aumenta con la
maduración del fruto. Las mismas operan preferentemente como reductasas de
aldehídos a alcoholes, sustratos necesarios para la biosíntesis ésteres volátiles en melón.
Ambos genes muestran una fuerte preferencia por aldehídos alifáticos pero Cm-ADH1
es capaz de reducir aldehídos ramificados tales como 3-metilbutiraldehido, mientras
Cm-ADH2 no puede reducir este tipo de sustrato (Manríquez et al. 2006; Pérez y Sanz,
2008).
Los ésteres han sido establecidos como típicos compuestos volátiles de NILs de
melón climatéricas, mientras que los aldehídos son característicos de NILs no-
climatéricas (Obando-Ulloa et al. 2008), con predominio del hexanal y metanotiolato en

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
61
 CAPÌTULO I
2. COMPUESTOS VOLÁTILES

particular (Obando-Ulloa et al. 2010). Por otra parte, las NILs de melón climatéricas
indicaron un aumento más evidente con la senescencia en el contenido relativo de
determinados compuestos aromáticos que las NILs no climatéricas. Sin embargo, una
simplificación del perfil de aromas en NILs no climatéricas debido a la reducción del
contenido relativo de ésteres y aldehídos en comparación con los niveles de estos
compuestos en la cosecha apoyan la hipótesis de una producción de aromas volátiles
etileno-independiente en melón (Obando-Ulloa et al. 2009b).

2.5 QTLs y compuestos volátiles en melón.

En los últimos tiempos se han realizado progresos importantes en la determinación

de las vías responsables de las biosíntesis de compuestos volátiles en plantas, lo que ha
resultado en la identificación de genes que codifican muchos enzimas biosintéticas. La
principal ventaja del análisis de QTLs en comparación con los enfoques anteriores, es
que permite la identificación del loci que, por definición, altera el rasgo objetivo en
poblaciones naturales (y mapeadas). Además, el análisis de QTLs puede contribuir a
aumentar el conocimiento de los mecanismos moleculares que regulan la producción de
compuestos volátiles en las frutas, y que hoy en día son en gran parte desconocidos
(Zorrilla-Fontanesi et al. 2012)
Aunque algunos trabajos sobre QTLs se han hecho en poblaciones de melón,
identificando los compuestos volátiles importantes, el conocimiento de la relación entre
aromas volátiles y el análisis de QTLs es limitado. Resultados previos de Obando-Ulloa
et al. (2008, 2010) indican el potencial existente en las poblaciones de melón para el
mapeo de QTLs asociados a compuestos volátiles aromáticos. En otros cultivos frutales,
tanto climatéricos como no climatéricos, incluyendo manzana, uva, melocotón, fresa o
tomate también se han identificado QTLs asociados a sus aromas característicos
(Dunemann et al. 2009; Eduardo et al. 2013; Klee et al. 2010; Mathieu et al. 2009;
Zorrilla-Fontanesi et al. 2012).
Utilizando NILs de melón no climatéricas, Obando-Ulloa et al. (2010) caracterizó,
salvo algunas de ellas, el perfil de aromas en esta colección principal de NILs. El perfil
estuvo definido por un total de 24 compuestos detectados en PS o en las NILs; tres
ésteres, seis aldehídos, tres alcanos, tres hidrocarburos aromáticos, dos terpenos, dos
cetonas, un alcohol, un compuesto derivado de azufre, un alqueno cíclico ramificado, un

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
62
 CAPÌTULO I
2. COMPUESTOS VOLÁTILES

naftaleno y un éter. Estos resultados permitieron mapear cuatro QTLs en relación a los
LGs IV, VIII y XI asociados con la formación de 3-hidroxi-2,4,4-trimetilpentilo 2-
metilpropanoato, octanal y (Z,Z)-3,6-nonadienal. El mapeo de QTLs requiere de un
análisis exhaustivo de bastantes réplicas tanto de las NILs como del parental, motivo
por el cual los resultados existentes publicados son limitados.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
63
 CAPÌTULO I
2. COMPUESTOS VOLÁTILES

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
64
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

3. PARED CELULAR

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65
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
66
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

3. PARED CELULAR

3.1. Pared celular vegetal. Definición.

La pared celular es una compleja estructura, organizada y dinámica por naturaleza

que actúa como soporte estructural y mecánico de las células que constituyen diferentes
tejidos en las plantas, jugando un papel importante en los cambios de textura (Negi y
Handa, 2008; Stolle-Smits et al. 1999; Vicente et al. 2007). Entre sus componentes se
encuentran muchos polisacáridos, diferentes proteínas y sustancias aromáticas que
definen las características de las células individuales dentro del cuerpo de la planta
(Brummell 2006). Su estructura básica consiste en un núcleo de microfibrillas de
celulosa embebido en redes coextensivas de pectina y hemicelulosa (Bennett 2002).
La integridad de los tejidos de la plantas depende en gran medida de la degradación
de la pared celular primaria (Rose et al. 1998), y de la composición y estructura de los
polisacáridos de la lámina media (Simandjuntak et al. 1996).

3.2 Componentes de la pared celular.

3.2.1 Pared celular primaria.

La pared celular primaria es una compleja estructura de redes presente en las células
de la pulpa de las frutas (Fig. 1). En las plantas, las paredes celulares primarías se
establecen con el crecimiento y aumento de volumen de las células y el cese del
crecimiento de las células indica la formación de la pared celular secundaria y de
grandes depósitos de lignina. Varios tipos de moléculas poliméricas son los
componentes de la pared celular primaria: polisacáridos pécticos, celulosa,
hemicelulosa, y proteínas, así como compuestos fenólicos. Sus características,
contenido y estructura varían en función de la especie, etapa de desarrollo, y la
diferenciación de la célula vegetal y tejidos (Brownleader et al. 1999; Brummell 2006).
La mayoría de las paredes celulares de los tejidos en crecimiento de las frutas
comestibles tienen una arquitectura y composición característica de pared celular
primaria Tipo I, que generalmente se encuentra entre todas las plantas dicotiledóneas y
alrededor de la mitad de las especies monocotiledóneas. Las estructura de estas paredes
tipo I consiste en redes de xiloglucano-microfibrillas celulosa dentro de una matriz de
polisacáridos pécticos complejos. Los homogalacturonanos (HGs) y

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
67
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

ramnogalacturonanos (RGs) constituyen las dos redes troncales más importantes de

polisacáridos pécticos (Peña y Carpita, 2004).

3.2.2 Lámina media.

La lamina media está constituida principalmente por polisacáridos pécticos que se

cree se sitúan entre las células adyacentes actuando como adhesivo intercelular, lo que
permite que las células se mueven en respuesta a fuerzas de compresión. Es una
estructura termolábil y su disolución da como resultado la separación de las células
vegetales (Prasanna et al. 2007; Ratnayake et al. 2003; Rodríguez et al. 2004).

Microfibrillas de celulosa

Xiloglucano (hemicelulosa)

Pectina

Ramnogalacturonano I

Proteína estructural

Proteína soluble

Figura 1. Estructura fundamental de la pared celular primaria constituida por

microfibrillas de celulosa incluidas en redes coextensivas de pectina y hemicelulosa
(Dos-Santos, elaboración propia basado en la figura de Brownleader et al. 1999).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
68
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

3.2.3 Pectina, hemicelulosa y celulosa.

Las pectinas, hemicelulosas y la celulosa son los principales polisacáridos de pared

implicados en las modificaciones de esta durante la maduración y almacenamiento de la
fruta siendo varias las enzimas modificadoras de pared las que contribuyen a los
procesos de solubilización, desesterificación y despolimerización de estos componentes
polisacarídicos (Nishizawa e Ito, 2007; Prassana et al. 2007; Waldron et al. 2003).
Las pectinas y hemicelulosas juegan un papel importante en las propiedades
reológicas de la pulpa de la fruta contribuyendo a su firmeza (Orfila et al. 2007; Saladié
et al. 2007; Simandjuntak et al. 1996).

[Link] Pectinas.

Por lo general, la pared celular de la fruta está altamente enriquecidas en pectinas (a

menudo más del 50% de la pared) y su composición es probable que varíe
considerablemente entre especies (Brummell y Harpster, 2001).
Las pectinas constituyen un grupo de polisacáridos ricos en ácido galacturónico
(GalA), ramnosa (Ram), arabinosa (Ara) y galactosa (Gal) y otros monosacáridos
presentes en menor cantidad (Immerzeel et al. 2006). Estos componentes básicos de las
pectinas generan RGs I y II arabinanos, HGs, galactanos y arabinogalactanos como
componentes estructurales (Brownleader et al. 1999).

[Link].1 Homogalacturonanos y ramnogalacturonanos.

Los HGs junto con los RGs (I y II) son los tres componentes clave de la matriz
péctica de la célula vegetal (Dumville y Fry, 2000; Pérez-Almeida y Carpita, 2006). Los
polímeros lineales de HGs y RGs se denominan poliurónidos y son los principales
componentes de la pared celular de las frutas (Wakabayashi 2000).

Los HGs están constituidos fundamentalmente por cadenas ramificadas de

residuos de α-1-(4)-D-GalA (que pueden ser metil-esterificados o acetilados).

Los RGsI son polímeros constituidos por unidades de ramnosa y residuos de

GalA con cadenas laterales de galactosa y arabinosa que se unen para enmarcar la
ramnosa (Figs. 2 y 3).

Los RGsII son polisacáridos complejos que se encuentran en pequeñas

cantidades en algunas paredes de las células vegetales y están constituidos
fundamentalmente por GalA esterificado (Waldron et al. 2003) y algunos

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
69
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

monosacáridos que raramente se encuentran en otros polímeros, como la 2-O-metil-D-

xilosa (Brownleader et al. 1999).

Ramnogalacturonano I

Figura 2. Detalle de los componentes de la pared (Dos-Santos, elaboración

propia).
Galactano

Arabinano

Arabinogalactano

-
-Ram
a m-GalA
lA-R
- Ra m-Ga
-GalA
a lA -Ram
am-G
m- G alA-R
lA-Ra
- Ra m-Ga
-GalA
R am
GalA-Ram-GalA-Ram-GalA-Ram-GalA-Ram-GalA-Ram-GalA-Ram-GalA-Ram-
Ram-Ga
lA-Ram-G
alA-Ram
-GalA-R
am-GalA
-Ram-G
alA-Ram
-GalA-R
am-GalA
-Ram-

Figura 3. Estructura fundamental de ramnogalacturonano tipo I (RG1) con esqueleto

alterno de unidades de α-D(1→2) ramnosa y α-D(1→2) ácido galacturónico (GalA)
portando cadenas laterales de galactano, arabinano y arabinogalactano (Dos-Santos,
elaboración propia).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
70
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

[Link].2 Arabinanos, galactanos y arabinogalactanos.

Estos polímeros pueden existir en forma libre en la pared celular primaria y/o como
constituyentes de polisacáridos pécticos (Brownleader et al. 1999; Rose et al. 1998).

Los arabinanos (Fig. 4) son cadenas ramificadas de polisacáridos compuestos de

residuos de L-arabinosa con enlaces α-(1→5) que contienen solo cadenas
laterales de L-arabinosa.

Los galactanos (Fig. 4) son cadenas lineales de residuos de D-galactosa unidos

mediante enlaces β-(1→4) y se presentan como cadenas de oligosacáridos
unidas a los residuos de ramnosa de la columna vertebral de los RGs.

Los arabinogalactanos (Fig. 4) son heteropolímeros de D-galactosa y residuos de

L-arabinosa.y existen en las plantas en dos formas estructurales. Los
arabinogalactanos I que son polisacáridos simples compuestos de cadenas β-
(1→4) de D-galactosa con residuos de L-arabinosa y los arabinogalactanos II
que son polisacáridos ramificados formados por D-galactosa β-(1→3) unida a
galactosa β-(1→6) en la posición O-6. Las posiciones O-3 y O-6 de las cadenas
laterales tienen vinculaciones con la L-arabinosa (Prasanna et al. 2007).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
71
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

Homogalacturonano

Ramnogalactutronano I

Principalmente arabinanos, galactanos y

arabinogalactanos (Tipo I).
Arabinano

Galactano

Arabinogalactano (Tipo I)

Figura 4. Estructuras más comunes de polisacáridos pécticos: Homogalacturonano y

ramnogalacturonano I. Ramnogalacturonano posee cadenas de arabinano, galactano y
arabinogalactano (Tipo I). Los residuos de ácido galacturónico de homogalacturonano
pueden ser metil esterificados o acetilados (Harris y Smith, 2006).

[Link] Hemicelulosa.

Las hemicelulosas son polisacáridos (neutros) extraídos por soluciones alcalinas de

los residuos de la pared celular después de la extracción de polisacáridos pécticos
(Prasanna et al. 2007). Estos polisacáridos se encuentran en la pared celular primaria y
secundaria de los tejidos vegetales de plantas monocotiledóneas y dicotiledóneas, y
pueden variar mucho en función del tipo de célula y las especies (Waldron et al. 2003).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
72
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

Las hemicelulosas están constituidas por una columna de β-glucano unida

fundamentalmente a residuos de glucosa, manosa y xilosa (Bennett y Labavitch, 2008).
En la integridad estructural de la pared celular, la matriz hemicelulósica juega un
papel al menos tan importante como de la matriz péctica. En general, las hemicelulosas
principalmente xilanas y xiloglucanos, están conectadas por medio de puentes de
hidrógeno y entrecruzamientos con las microfibrillas de celulosa. La formación de la
red de celulosa-hemicelulosa probablemente da la resistencia (rigidez) a las paredes
celulares (Bennett y Labavitch, 2008; Cheng et al. 2009).

[Link].1 Xiloglucanos.

Los xiloglucanos (XGs) representan una proporción importante de la pared celular

en los vegetales comestibles y frutos de plantas dicotiledóneas (Waldron et al. 2003),
alcanzando de un cuarto a un tercio de los polisacáridos de la pared celular en el melón
(Wakabayashi 2000). Los xiloglucanos (Fig. 5) son los componentes principales de la
pared celular de las hemicelulosas y tienen una estructura de residuos de glucosa unidos
mediante enlaces β-D(1→ 4) que son altamente sustituidos por cadenas laterales de
xilosa unidos mediante enlaces α-D(1→ 6) y a veces ampliadas con galactosa, fucosa o
arabinosa (Brownleader et al. 1999; Brummell 2006). Su despolimerización se ha
observado en las primeras etapas de ablandamiento de los frutos, como el melón
(Bennett 2002; Wakabayashi 2000).
La xilosa y glucosa son los azúcares neutros más importantes de los xiloglucanos y
su contenido disminuye de forma paralela a la reducción del tamaño molecular de los
xiloglucanos (Figueroa et al. 2010). Altos niveles de glucosa, xilosa y galactosa se han
observado en la composición monosacarídica de la fracción de hemicelulosa de melones
climatéricos tipo Galia (Menezes et al. 1997).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
73
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

Figura 5. Estructura molecular del xiloglucano con cuatro unidades de β-D(1→ 4)

glucosa (rosa-naranja), con tres residuos consecutivos sustituidos con unidades de α-
D(1→ 6) xilosa (azul). Cerca de la mitad de estas unidades contienen extensiones de
residuos de β-D galactosa-(1→2) L-fucosa-(1→2)- (mostaza y violeta respectivamente)
añadidos a la primera posición (Pérez-Almeida et al. 2006).

[Link].2 Xilanas.

Las xilanas, además de otros componentes hemicelulósicos, se han encontrado en

diferentes especies frutales, siendo importantes en las paredes celulares primaria y
secundaria de las plantas monocotiledóneas y presentes en pequeñas cantidades en la
pared celular de plantas dicotiledóneas como el melón Sin embargo, estos son
componentes menores y los cambios de estos polisacáridos durante la maduración
siguen siendo relativamente desconocidos (Rose et al. 1998; Waldron et al. 2003).

[Link] Celulosa.

La celulosa (CEL) es el material cristalino, inerte e insoluble de la pared celular que

queda tras la extracción de la hemicelulosa y que se compone principalmente de β-
glucosa (Prasanna et al. 2007). La celulosa (Fig. 6) es un polisacárido de cadena lineal
que contiene de 3000 a 5000 residuos de D-glucosa conectados mediante enlaces β-
(1→4) y aproximadamente entre 30 y 100 de estas cadenas constituyen las microfibrillas
de celulosa. Las microfibrillas son estructuras delgadas y largas que se cruzan entre sí
mediante puentes de hidrógeno interpoliméricos generando una estructura amorfa
(Bennett y Labavitch, 2008; Brownleader et al. 1999). Las microfibrillas de celulosa y
los xiloglucanos interactúan a través de puentes de hidrógenos cruzados responsables

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
74
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

del mantenimiento y la fuerza de la estructura de la red observada microscópicamente

(Brownleader, 1999; Ratnayake et al. 2003). Este entramado de xiloglucano-celulosa
está incrustado en una matriz amorfa de pectina compuesta de poliurónidos junto con un
dominio de otros componentes menos abundantes, como compuestos fenólicos,
proteínas estructurales, enzimas y moléculas que interactúan con receptores (Goulao y
Oliveira, 2008). La ruptura de la matriz de celulosa y xiloglucano puede ser un elemento
clave en la regulación de integridad de la pared (Rose et al. 1998).

Figura 6. Estructura de celulosa unida mediante puentes de hidrógeno. Los puentes

de hidrógeno se representan mediante líneas punteadas. Carbono (•), oxígeno (ο) y
átomos de deuterio (Nishiyama et al. 2002).

3.2.4 Azúcares neutros.

Entre los principales azúcares neutros (AN) constituyentes de la pared celular del
fruto de melón se encuentran la glucosa, galactosa, manosa, xilosa, arabinosa, ramnosa
y fucosa. La galactosa, arabinosa y la ramnosa son monosacáridos pécticos y se han
encontrado como importantes constituyentes de una típica composición en diferentes
cultivares de melón (Rose et al. 1998; Simandjuntak et al. 1996). La fucosa, xilosa,
manosa y la glucosa son monosacáridos hemicelulósicos. La ramnosa es un componente
estructural de los RGs (Immerzeel et al. 2006).
La manosa es especialmente importante para las interrelaciones entre los polímeros
de xiloglucano en las microfibrillas de hemicelulosas y celulosa (Nishizawa e Ito,
2007). La xilosa junto a la glucosa son componentes característicos de los xiloglucanos

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75
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

(Brummell y Harpster, 2001; Figueroa et al. 2010). Las unidades de fucosa han
sido identificadas como componentes de los xiloglucanos (Kurz et al. 2008).
La composición de azúcares neutros de la pared celular varía de fruta a fruta, con
importantes cambios en su composición durante la maduración (Prasanna et al. 2007).

3.2.5 Ácidos urónicos.

Los ácidos urónicos (AU) son compuestos similares a los azúcares, excepto que el
carbono terminal se ha oxidado del alcohol a un grupo carboxil como el caso del GalA.
El ácido D-GalA es un monosacárido de seis átomos de carbono correspondiente a la
forma oxidada de la D-galactosa, que junto con los azúcares neutros, como la L-
ramnosa, L-arabinosa y D-galactosa es el principal componente de las pectinas. Los
residuos de ácido D-GalA están covalentemente unidos para formar una columna
vertebral lineal junto con los azúcares neutros (Yapo et al. 2008).

3.3 Degradación de la pared celular.

Durante la maduración de las frutas los polímeros que constituyen la estructura de la

pared celular son progresivamente modificados dando lugar al desmontaje de la pared
celular primaria y la lámina media y por ende a modificaciones de la textura. Se han
desarrollado extensas investigaciones para elucidar los mecanismos responsables de los
cambios de textura de la pared celular que ocurren durante la maduración poscosecha de
las fruta (Manganaris et al. 2005; Manrique et al. 2004).
La solubilización y despolimerización de los polisacáridos de la pared celular, su
reorganización y la pérdida del contenido de azúcares neutros de las pectinas y las
hemicelulosas son fenómenos que tienen lugar durante la maduración de la mayoría de
las especies frutales (Brummell y Harpster, 2001; Goulao et al. 2010; Rose et al. 1998).
En muchas frutas la solubilización de las sustancias pécticas es un fenómeno
universal que acompaña a la maduración de la fruta al actuar sobre el metabolismo de la
pared celular (Karakurt et al. 2008; Prasanna et al. 2007) mientras que la
despolimerización puede ocurrir solo en algunas especies (Goulao et al. 2010). La
solubilización y despolimerización de las pectinas son dos eventos independientes y la
enzima poligalacturonasa tiene un papel importante sólo en la solubilización de la
pectina, sin intervención en el ablandamiento (Manrique y Lajolo, 2004).

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76
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

La despolimerización de poliurónidos quelantes solubles tiene consecuencias

importantes en la resistencia de las conexiones célula-célula y por lo tanto en el
ablandamiento y textura, pero la gran variabilidad en el grado de despolimerización
entre especies durante la maduración sugiere que la alteración de la adhesión
intercelular es un componente de mayor importancia en los cambios texturales de
algunas especies que de otras. La despolimerización temprana de poliurónidos a
menudo no correlaciona con el ablandamiento durante en la maduración, ya que la más
extensa despolimerización ocurre tardíamente y está normalmente asociada con una
disminución importante en la firmeza (Brummell 2006). En melón, la despolimerización
de la pectina enlazada iónicamente es relativamente pequeña durante la maduración
(Brummell et al. 2004).
Junto con la solubilización de pectinas, la pérdida de azúcares neutros de las
cadenas laterales de las pectinas parece ser un mecanismo común que acompaña a la
maduración en todas las especies frutales. La pérdida de galactosa se ha considerado
como uno de los eventos más importantes que acompaña a la maduración de numerosos
frutas y es una de las modificaciones de la pectina mejor caracterizadas, indicando el
papel dinámico de esta azúcar de la pared celular durante la maduración, pero la
preferencia en la pérdida de azúcares neutros varía de acuerdo con la especie. La
pérdida de galactosa es muy pronunciada en melón (Cucumis melo L.) (Brummell,
2006; Figueroa et al. 2010; Goulao et al. 2008; Pérez-Almeida y Carpita, 2006) y este
proceso junto con la disminución de arabinosa, probablemente derivada de polisacáridos
pécticos, ha sido descrito en numerosas especies de frutas (Manrique y Lajolo, 2004;
Rose et al. 1998; Vicente et al. 2007; Wakabayashi, 2000).
Una asociación temporal entre la solubilización de poliurónidos y la pérdida de la
galactosa se ha observado durante la etapa inicial de maduración de los frutos de melón
(Wakabayashi 2000). En melón se ha descrito una disminución en el contenido total de
poliurónidos, mientras que el contenido poliurónidos solubles aumentó con la
maduración del melón (Simandjuntak et al. 1996). Un descenso en el contenido de
ácidos urónicos se ha descrito en las fracciones pécticas de melón climatérico tipo Galia
durante la maduración (Menezes et al. 1997).
Varios estudios confirman la a contribución de las hemicelulosas al ablandamiento
de la textura en melón reticulado, tomates y otras frutas. Sin embargo, existe un
conocimiento limitado acerca de la despolimerización de hemicelulosa (Cheng et al.

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77
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

2009). En la etapa inicial del ablandamiento de los frutos, la ruptura de las moléculas de
hemicelulosa puede alterar en parte la red de celulosa-hemicelulosa, provocando a su
vez una disminución en la rigidez de la pared celular en los tejidos del fruto (Cheng et
al. 2009).
La disminución o pérdida de niveles considerables de monómeros característicos de
hemicelulosas como glucosa, xilosa y manosa contribuyen a la maduración de los frutos
(Prasanna et al. 2007) fundamentalmente a través de la despolimerización de los
xiloglucanos. En melón tipo Charentais los eventos tempranos de ablandamiento
estuvieron relacionados con el desmontaje regulado de una fracción fuertemente ligada
de xiloglucanos, mientras que los procesos tardíos de ablandamiento estuvieron
asociados al desmantelamiento de pectinas (Rose et al. 1998)
En frutos como fresa pimienta, mango, melocotón y melón se han identificado
cambios asociados a la maduración que envuelven una dramática disminución en la
reducción del tamaño molecular de la hemicelulosa (Bennett y Labavitch, 2008).
En muchos casos, la microfibrillas de celulosa no son desmanteladas durante los
procesos normales de desarrollo de las plantas, incluida la maduración de la mayoría de
frutas, como el melocotón (Bennett 2001, 2002; Manganaris et al. 2006). Por lo que el
desmontaje de la celulosa no es un contribuyente importante en los cambios de la pared
celular durante la maduración (Mbéguié-A-Mbéguié et al. 2009) siendo el
desmantelamiento de la matriz no-celulósica la que resulta en una pérdida aparente de la
organización microfibrilar (Bennett y Labavitch, 2008). Por tanto, a pesar de que la
celulosa es el polisacárido predominante en la pared celular de la pulpa de melón, su
papel en el ablandamiento no está claro. En dos variedades de melón ‘Wasada Uri’ y
‘Prince’ almacenadas a 20ºC los valores de celulosa se mantuvieron constantes durante
el tiempo de almacenamiento (Nishizawa e Ito, 2007).

3.4 Textura de las fruta.

3.4.1 Definición de textura.

Las propiedades texturales de un alimento son un grupo de características físicas

percibidas por la sensación del tacto y que se relacionan con la deformación,
desintegración y flujo del alimento bajo la aplicación de una fuerza, y se miden
objetivamente por las funciones de la fuerza, tiempo y la distancia (Sams 1999).

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78
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

Junto con el sabor y el aroma, una adecuada textura es un parámetro determinante en

las preferencias de los consumidores en la elección de los frutos de melón (Lester
2006b).
La textura ya por sí sola es un parámetro importante a la hora de definir
objetivamente la calidad de una fruta u hortaliza. Los cambios en las propiedades
mecánicas de las frutas han sido ampliamente investigados, tanto sensorialmente como
instrumentalmente, por la necesidad de comprender los procesos biológicos asociados
con el ablandamiento de la fruta, a fin de optimizar el tiempo en que las frutas se pueden
almacenar con fines comerciales y entender las respuestas del consumidor a un producto
biológico que rápidamente se ablanda durante la maduración (Harker et al. 2003; Harker
y Johnston, 2008).

3.4.2 Métodos de medida de textura.

Los métodos de medición de la textura pueden ser sensoriales, mediante un panel

entrenado de catadores o bien instrumentales mediante una amplia gama de técnicas
como compresión, punción, tensión y vibración. Se emplean equipos especialmente
diseñados como texturometros para los ensayos de compresión o penetrómetros para las
pruebas de punción (Chaïb et al. 2007; Harker et al. 1997).
Los atributos de textura son más o menos difíciles de correlacionar con las
mediciones instrumentales. La firmeza en boca está en parte correlacionada con la
medición instrumental de la firmeza de la fruta (Causse 2008).

3.4.3 Atributos de textura.

Desde el punto de vista sensorial, la textura de los alimentos se divide

convencionalmente en tres clases de propiedades: mecánicas, geométricas asociadas a
boca y otra clase que incluye el contenido de agua.
Entre los numerosos atributos que definen la textura de un fruto se pueden citar la
dureza del fruto entero y firmeza que son propiedades mecánicas, la fibrosidad y
harinosidad de la pulpa como propiedad geométrica y la jugosidad de la pulpa que
estaría en relación al contenido en agua (Harker y Johnston, 2008). Entre los atributos
de calidad de consumo de melón habitualmente medidos también sensorialmente se
incluyen una textura de la pulpa firme, crujiente y/o jugosa (Obando et al. 2008).

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79
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

[Link] Dureza del fruto entero.

Para medir este atributo de se emplea un test de compresión que evalúa la fuerza
máxima requerida hasta un valor de compresión predefinido de la fruta (Chaïb et al.
2007; Tijkens et al. 2009). Este límite de compresión se establece dentro de la zona
elástica de la curva de deformación (2-3 mm), especialmente en ensayos de seguimiento
de la dureza durante la maduración.
Esta medida es importante en los melones enteros, puesto que los melones por lo
general, se hacinan en el campo (con o sin sombreado) y en cajas de transporte a la
espera de empacadoras o los mercados locales. Los frutos de melón de NILs se
ablandan de acuerdo a un proceso exponencial y comparten no sólo el mismo
mecanismo, sino también la misma tasa constante de ablandamiento. Sin embargo, el
valor final de la dureza de cada fruto dependerá de su valor inicial de dureza (Tijkens et
al. 2009).

[Link] Firmeza de la pulpa.

Mediante una prueba de punción se determina la resistencia de la pulpa de los frutos

a la penetración. Se emplea un penetrómetro que se basa en la introducción de una
cabeza cilíndrica en la pulpa de la fruta pelada para medir la fuerza máxima de
penetración (García-Ramos et al. 2006; Molina-Delgado et al. 2009). La fuerza máxima
de ruptura en N es lo que se denomina firmeza. Los valores de firmeza entre 4 y 10 N
(valores estándar obtenidos con un penetrórmetro fijado a 7,9 mm) son representativos
de la madurez en una serie de frutos listos para el consumo en el caso de hacerse sobre
los mismos enteros. Otros valores pueden obtenerse si se realiza el ensayo en base a
cilindros de pulpa normalizados (Fernández-Trujillo et al. 2005), lo cual es habitual
cuando las comparaciones se realizan entre variedades con diferentes tamaños y
estructura del fruto.
Sensorialmente la firmeza es la fuerza requerida para comprimir la muestra con los
dientes posteriores en la masticación (Harker y Johnston, 2008). Uno de los cambios
más característicos que ocurren en la maduración de los frutos es el descenso en los
valores de firmeza (Goulao et al. 2008; Prasanna et al. 2007).

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80
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

[Link] Jugosidad de la pulpa.

En un aspecto importante de la textura que a menudo se mide de acuerdo a la

cantidad de zumo liberado durante la homogeneización en relación a la cantidad de
tejido empleado (Harker et al. 1998). Desde el punto de vista sensorial, es la cantidad de
líquido libre liberado de la muestra durante la masticación (Harker y Johnston, 2008).
En melón existe una relación entre la firmeza de la pulpa y la jugosidad, siendo la fruta
con mayor firmeza menos jugosa (Obando et al. 2008).

[Link] Fibrosidad de la pulpa.

Sensorialmente es la cantidad de filamentos presentes en el fruto y que se separan

fácilmente (Harker y Johnston, 2008).

[Link] Harinosidad.

Este atributo se caracteriza por la presencia de una cantidad de pequeñas partículas

grumosas que se hace evidente durante la masticación acompañado de falta de jugosidad
de la pulpa (Fernández-Trujillo et al. 2008; Harker y Johnston, 2008).
En frutos como el melocotón, la harinosidad de la pulpa es la expresión fenotípica
del trastorno conocido como daño por frío, un desorden fisiológico que suele afectar a
frutas de hueso y conservadas durante largos períodos de tiempo en almacenamiento en
frío. Numerosos estudios realizados para entender el mecanismo de harinosidad, indican
que debe atribuirse al desequilibrio entre las enzimas PG (en su forma endo) y
pectinmetilesterasa (PME). Durante la maduración normal de los frutos las pectinas son
degradadas, lo cual contribuye a cambios de textura como el ablandamiento y la
liberación de jugo. Esta degradación ocurre por la acción las enzimas PME que cataliza
la demetilación de las pectinas y la endoPG que reduce a menor tamaño las pectinas
demetiladas en una reacción de despolimerización. Las bajas temperaturas reducen la
actividad de la endo-PG lo cual causa una acumulación de pectinas demetiladas de alto
peso molecular que retienen al agua libre formando geles (Artés et al. 1996, 1998). En
melocotón, la falta de jugo en la harinosidad se debe a la retención del agua en forma de
geles y no a la pérdida de agua por deshidratación. (Artés et al. 1998; Infante et al.
2008; Zhu et al. 2010).
En tomate se ha establecido una correlación entre harinosidad y un pericarpio
espesor formado por células alargadas (Chaib et al. 2007). La harinosidad se ha

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81
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

reportado como un síntoma de daños por frio en tomate con algunos aspectos que son
similares a los que se asocian con el desarrollo de harinosidad en frutos de melocotón
(Rugkonga et al. 2010).
En manzana, la harinosidad se asocia con una resistencia relativamente alta a la
ruptura celular pero una baja adhesión entre células vecinas por disolución de sustancias
pecticas en la lámina media, seguida de la separación celular (Nara et al. 2001).
Sin embargo, los resultados obtenidos en melón indican que el desarrollo de la
harinosidad de la pulpa no requiere de bajas temperaturas, tal como ocurre en ciertos
cultivares de melocotón. Este hecho puede arrojar luz sobre la controversia relativa a la
exigencia o no de la refrigeración para provocar harinosidad en melocotón (Fernández-
Trujillo et al. 2008).

3.4.4 Textura y degradación de la pared celular.

Los estudios realizados en especies modelo como el tomate, fresa o melón han
aportado una cantidad significativa de información sobre la textura y los cambios que se
producen durante la maduración. Sin embargo, los resultados obtenidos en otras
especies y cultivares sugieren que existen diferencias en las que se debe hacer hincapié
y tratar por separado. Lo que ocurre en una especie no se puede trasladar
necesariamente a otra (Goulao et al. 2010).
Antes de la maduración, la fruta presenta una estructura ha rígida, ordenada y con
estructuras celulares bien definidas, sin embargo durante la maduración, la fruta
experimenta una serie de modificaciones en la estructura de la pared celular que afectan
a la textura. La maduración de los frutos se caracteriza por la pérdida de firmeza de la
pulpa (Wakabayashi 2000) y la textura es uno de los parámetros de mayor importancia
para la calidad de productos vegetales como el melón siendo la pared celular es uno de
los componentes que más afecta a sus características (Rodríguez et al. 2004), aunque no
el único (Vicente et al. 2007). La celulosa, la hemicelulosa y las pectinas son los
compuestos de la pared celular cuya su cuantificación son indicativos de la evolución de
la maduración (Villanueva et al. 2004).
Estos cambios en la pared celular son el resultado principalmente de la acción de
enzimas hidrolíticas sobre sus componentes hidrocarbonados, contribuyendo con ello al
ablandamiento y pérdida de firmeza, incremento de la susceptibilidad a patógenos y
deterioro del tejido de los frutos con una textura indeseable para los consumidores y

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
82
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

limitando su manejo poscosecha y vida útil (Bennett 2002; Brownleader et al. 1999;
Brummell y Harpester, 2001; Goulao et al. 2010; Nishiyama et al. 2007; Prasanna et al.
2007). La biosíntesis y percepción de etileno juega un papel importante en el
mantenimiento de la firmeza de los tejidos y en la extensión de la vida útil de la fruta
(Obando-Ulloa et al. 2009c).
Los cambios de la pared celular asociados con ablandamiento de los frutos durante
la maduración se pueden dividir en dos etapas secuenciales. La primera se produce en la
maduración temprana de la fruta y se asocia con el desmontaje de los polímeros de
xiloglucanos por la acción de hidrolasas de la pared celular y, sobre todo por la proteína
expansina. La segunda etapa tiene lugar en la etapa tardía de maduración y está
relacionada con el desmontaje de la red de pectina (Bennett 2002).
El conocimiento de la desorganización de la pared celular durante el desarrollo
madurativo, ha resultado de gran importancia para proporcionar ideas acerca de los
procesos involucrados en el ablandamiento de frutos, tanto climatéricos como no
climatéricos y a su vez su relación con lo procesos regulados por la acción del etileno.
(Bennett y Labavitch, 2008). En frutos climatéricos, cuya textura se altera
considerablemente durante la maduración, una pérdida máxima de firmeza se relaciona
directamente con un rápido aumento de la poligalacturonasa que está directamente
estimulada por la biosíntesis de etileno (Prasanna et al. 2007).

3.4.5 Enzimas de degradación de la pared celular.

Entre las hidrolasas de la pared celular, las enzimas que degradan la pectina son las
principales implicadas en el ablandamiento de los frutas. PG, PME, pectato liasa (PL) y
β-Gal son las principales enzimas implicadas en la modificaciones y desmantelamiento
de las pectinas (Bennett 2002; Prasanna et al. 2007).

[Link] Poligalacturonasas.

Las PGs (poliglicanohidrolasas (1→4-α-D-galacturonico)) son enzimas de tipo exo

ó endo que catalizan la ruptura hidrolítica de las uniones de GalA. El tipo exo (CE
[Link]) elimina solo unidades de GalA desde el extremo no reductor del ácido
poligalacturónico, mientras que el tipo endo (EC [Link]) es la PG específica de la
maduración del fruto siendo la responsable de la despolimerización y solubilización de
poliurónidos y escinde tales polímeros al azar. No obstante, ambos tipos de esta enzima

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
83
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

(exo y endo) se encuentran presentes en fruta. (Flores et al. 2001, 2008; Wakasa et al.
2006).
El principal sustrato de la PG son los HGs que se encuentran en la pared en una
forma altamente metil-esterificada que debe ser de-esterificada para convertirse en un
sustrato disponible para la PG. Un aumento en la actividad de la PG ha sido asociado a
la maduración de los frutos, aunque la cantidad detectada varía ampliamente según las
especies (Brummell y Harpster, 2001). La endo PG degrada los HGs puros a series
homólogas de enlaces simples (1→4) de oligo-α-D-galacturónidos (Dumville y Fry,
2000). Las expresión de los genes de PG que actúan en la degradación de la pared
celular y la pérdida de semi-permeabilidad de las membranas celulares en la
maduración, tiene componentes, tanto dependientes como independientes de la acción
del etileno (Flores et al. 2001, 2008; Wakasa et al. 2006).

[Link] Pectinmetilesterasas.

La PME es una enzima específica para ésteres de galacturónidos y actúa eliminando

los grupos metoxilo de la posición C6 de residuos de GalA de la pectina de alto peso
molecular durante la maduración del fruto por ataque nucleofílico (Brummell y
Haspster, 2001; Manrique y Lajolo, 2004; Prasanna et al. 2007:).
La PME no actúa rompiendo la columna vertebral de los HGs pero desesterifica
parcialmente las pectinas metil-esterificadas en sustratos disponibles para la PG y llevar
a cabo la despolimerización extensa de poliurónidos (Wakabayashi, 2000). Esta enzima
contribuye también a la expansión de las células, así como a la maduración asociada al
desmontaje de la pared celular. La acción de la PME ha sido estudiada en muchos frutos
climatéricos, teniendo un papel importante en los cambios de la pared celular durante la
maduración (Bennett y Labavitch, 2008; Brownleader et al. 1999).

[Link] Pectato liasas.

Esta enzima cataliza la ruptura de las unidades de-esterificadas o esterificadas de

galacturonato por una trans β eliminación de hidrógeno a partir de las posiciones C-4 y
C-5 de GalA. La exo-PL (EC [Link]) actúa desde el extremo no reductor, mientras que
endo-PL (EC [Link]) actúa de forma aleatoria en galacturonanos de-esterificados
(Prasanna et al. 2007). La actividad de la PL y sus genes ha sido detectada en muchas
especies de plantas, a menudo incluyendo secuencias que son expresadas
específicamente en frutas. En frutos climatéricos como el tomate se ha detectado la

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
84
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

expresión de genes PL durante la maduración. En la fresa, un fruto no climatérico la

supresión de la expresión génica de PL dio como resultado frutos más firmes y con
menor hinchazón de la pared celular (Bennett y Labavitch, 2008; Vicente et al. 2007).

[Link] β-Galactosidasas.

La β-Gal (EC [Link]) es una glucosidasa que actúa sobre oligómeros de cadena
corta de las unidades de galactosa. Esta enzima degrada parcialmente los componentes
pécticos y la hemicelulosa de la pared celular y posiblemente está relacionado con el
desglose de los polisacáridos en la sobremaduración del fruto. La β-Gal y un incremento
de su actividad durante la maduración ha sido detectada en una amplia variedad de
frutas. En melón, esta enzima es capaz de atacar polímeros nativos de galactano
(Prasanna et al. 2007). El papel de esta enzima en el desmantelamiento de la pectina
puede ser similar al desempeñado por la PME, favoreciendo la acción de la PG y la PL
sobre el esqueleto de componentes pécticos más complejos como los RGs I y II
(Bennett y Labavitch, 2008). La pérdida de galactanos se ha demostrado que acompaña
o precede incluso el incremento en la solubilización de poliuronidos. La β-Gal
purificada cataliza una aparente disminución en el tamaño molecular de las pectinas in
vitro en frutos de melón (Rose et al. 1998).

[Link] Xiloglucano endotransglicosilasas. Hidrolasas.

Estas enzimas se cree que participan en la maduración regulada de la hemicelulosa y

específicamente en el desmontaje de xiloglucano. Estas enzimas actúan rompiendo los
enlaces internos glucano β-1,4 del xiloglucano y pueden transferir el producto de la
división a otro polímero de xiloglucano u oligosacáridos (Bennett y Labavitch, 2008;
Brummell y Harpster, 2001).

[Link] Expansinas.

Las expansinas (EXPs) son proteínas modificadoras de la pared celular que actúan
cooperativamente con la PG para desmontar las redes de polímeros y contribuir así al
ablandamiento de las frutas. Mientras que la participación de la PG y la EXP en la
maduración asociada al metabolismo de la pared es clara, poco se sabe poco acerca del
modo en que interactúan en el desmantelamiento de la pared celular (Cantú et al. 2007).
Las EXP parecen jugar un papel en el desensamblaje de la matriz hemicelulósica en la
maduración de las frutas y se cree que la función de la EXP es influir en las

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
85
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

interacciones dentro de la red celulosa-hemicelulosa y pueden contribuir a cambios en

esta región de la pared celular incrementando potencialmente la accesibilidad a los
xiloglucanos para el ataque enzimático (Bennett 2002; Salentijn et al. 2003). Las EXP
parecen funcionar mediante la interrupción de puentes de hidrógeno entre los polímeros
de la pared celular en vez de mediante fragmentación de los polímeros (Bennett y
Labavitch, 2008). En tomate, una supresión transgénica de una EXP relacionada con la
maduración resultó en una reducida despolimerización de poliurónidos al final de la
maduración. Esto sugiere que un incremento en la accesibilidad de la PG a los HGs
puede ser un componente clave en los cambios de la pared celular durante la
maduración (Brummell 2006).

[Link] Otras enzimas.

El silenciamiento de la actividad de enzimas del metabolismo de carbohidratos

que producen la formación de n-glicanos libres en el pericarpo de tomate como la alfa-
manosidasa y la β-D-N-acetilhexosaminidasa (beta-hex) produce un aumento de firmeza
del pericarpo del fruto y un aumento de la vida comercial (Meli et al. 2010). La
expresión de los genes que codifican para dichas enzimas depende del etileno y están
moduladas por el gen rin. Sin embargo, el hecho de que algo similar se haya encontrado
en pimiento (Ghosh et al. 2011), induce a pensar en una acción mucho más general de
estas enzimas sobre la textura aún desconocida.

3.5 Etileno y firmeza.

Durante la maduración tienen lugar cambios en la expresión génica

que suponen la aparición de nuevos ARNm, ARNt, ARNr, y poli A+ARN específicos de
la maduración y proteínas, la desaparición de algunos ARNm y la constancia de otros.
Estos cambios durante la maduración del fruto se activan por las hormonas de las
plantas (Prasanna et al. 2007).
El etileno, es una hormona vegetal cuyo papel en los procesos madurativos de frutos
climatéricos ha sido ampliamente estudiado, con procesos tanto dependientes como
independientes de la acción de etileno (Flores et al. 2001, 2008). Durante el
ablandamiento de los tejidos con la maduración coexisten ambos tipos de procesos
(dependientes e independientes), siendo el papel de esta hormona clave en la
maduración de frutos climatéricos (Flores et al. 2001; Obando et al. 2009). En frutos

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
86
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

climatéricos de melocotón, pera y de melón tipo Charentais se ha señalado un

incremento de ablandamiento durante la maduración por el etileno como consecuencia
del el aumento de la actividad de enzimas hidrolíticas de la pared celular (Li et al.
2011).
En melón, su rápido ablandamiento a menudo correlaciona con una producción
autocatalítica de etileno y degradación de los polímeros de la pared celular (Nishizawa
et al. 2009).
La regulación de los niveles de etileno en las frutas y una comprensión de cómo esta
hormona señala el inicio de la maduración son importantes consideraciones en la
regulación de la maduración y mejorar la textura del fruto (Brownleader et al. 1999).
Estudios de genómica han revelado que una gran parte de los genes relacionados con la
maduración (aproximadamente el 40%) dependen de etileno, siendo este un potenciador
que actúa como intermediario de una cadena de reguladores relacionados entre sí (Page
et al. 2008)
Debido a que la maduración y el ablandamiento de frutos climaterios es controlada
por la síntesis de etileno endógeno, se ha presumido que la expresión de los genes que
codifican las la proteínas modificadoras de la pared celular que regulan la maduración
es etileno-regulada. Sin embargo no siempre está claro si los genes que codifican la
acción de estas proteínas son regulados directamente por el etileno o por otras señales
asociadas a la maduración (Bennett y Labavitch, 2008).
En albaricoque, un fruto climatérico, la reducción en la firmeza de la fruta como
resultado de una inhibición del etileno, sugiere su participación como regulador de los
procesos que definen este atributo (Valdés et al. 2009). En otro fruto climatérico como
el melocotón, los resultados obtenidos en diferentes genotipos estudiados (con carne
dura o blanda) indicaron que la producción de etileno pueden no estar directamente
relacionada con los cambios de firmeza de la pulpa durante la maduración, siendo más
probable es una característica cultivar-dependiente (Manganaris et al. 2006).
En melones climatéricos, algunos cultivares mostraron una disminución muy rápida
en la firmeza de la pulpa durante la maduración, limitando su transporte,
almacenamiento y conservación (Nishiyama et al. 2007). La firmeza de los frutos y la
textura afectan a la integridad de las fruta, y la textura es desde el punto de vista del
consumidor el atributo principal de cualidad de la aceptación en el mercado (Goulao y
Oliveira, 2008). La expresión de genes de PGs que actúan degradando la pared celular y

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
87
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

la pérdida de semipermeabilidad de las membranas celulares durante la maduración

tienen componentes dependientes e independientes del etileno y de esta observación, se
dedujo la presencia de los dos sistemas regulatorios en el ablandamiento de la fruta
(Flores et al. 2001). Un rápido aumento en la actividad de la PG suele acompañar a la
maduración normal en muchas frutas (Prasanna et al. 2007). No obstante, en melón, se
ha detectado la liberación de poliurónidos incluso en ausencia de la actividad de endo-
PG (Goulao et al. 2010).
Un estudio con melones tipo ‘Hami’ dio como resultado que la actividad de las
enzimas PME, PG, β-glucanasa y β-GAL fue menor en melones tratados con 1-MCP
que en los controles. Por lo tanto, la menor actividad de estas enzimas de la pared
celular fue responsable de la inhibición de la degradación de pectina y hemicelulosa,
dando como resultado un retraso en el ablandamiento de los frutos de melón ‘Hami’. En
conclusión, el empleo de 1-MCP retrasó y disminuyó el pico de producción de etileno
mediante la reducción de las actividades de las enzimas de la biosíntesis de etileno y
con ello previno el proceso de ablandamiento de la pulpa de melón (Li et al. 2011).

3.6 Otros componentes que afectan a la firmeza de la fruta.

Las propiedades mecánicas de los tejidos vegetales afectan a las modificaciones de
composición y estructura de la pared celular (Waldron et al. 2003). Las alteraciones de
la pared celular implican cambios en la firmeza e hidratación de la pared, en la
permeabilidad de la membrana, con descenso de la integridad de la pared e incremento
de los espacios intercelulares (Tucker y Grierson, 1987). Estudios realizados en frutos
de tomate con un mínimo ablandamiento con la maduración DFD “delayed fruit
deterioration”, demostraron que la pérdida de firmeza es el resultado de múltiples
procesos coordinados, así como de sus tiempos. Además del desmantelamiento de las
redes de polisacáridos en la pared celular primaria y la lámina media por la acción
enzimática y de las proteínas modificadoras de pared, la pérdida de agua por
transpiración y la pérdida de turgencia celular juegan un papel muy importante en
algunos frutos, especialmente las denominadas bayas.
Del mismo modo, estos estudios han demostrado que la cutícula también desempeña
un papel importante sobre las propiedades mecánicas de los tejidos. La influencia de la
cutícula (Fig. 7) sobre la firmeza de la frutos de tomate se debió de forma directa a sus

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
88
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

propiedades estructurales e indirectamente a su capacidad de actuar como barrera

primaria sobre la pérdida de agua (Saladié et al. 2007). La pérdida de firmeza es a
menudo acompañada de una pérdida de turgor celular debido al aumento de las
concentraciones de solutos en el espacio de la pared celular y al debilitamiento de la
pared (Brummell y Haspster, 2001; Rojas et al. 2001).
La regulación de la transpiración de agua en frutos maduros puede representar una
importante estrategia para prolongar la firmeza de la fruta. En tomate, una disminución
en la turgencia celular más o menos en paralelo fue observada a la pérdida de firmeza
asociada a la maduración. Tomates mutantes con una vida útil más larga, mantenimiento
de la firmeza y de la textura y resistencia frente a la infección por patógenos
poscosecha, experimentaron los mismos procesos de degradación de la pared que frutos
con un proceso normal de ablandamiento. Sin embargo, lo niveles altos de turgor celular
en los frutos mutantes frente a los no mutantes apoyan la hipótesis de que el desmontaje
de la pared celular no es la única causa de ablandamiento (Vicente et al. 2007).
Los principales cambios que ocurren durante la degradación de la pared celular y
que afectan a la firmeza de los frutos son la pérdida de turgor junto con la disolución de
la lámina media seguida de la disrupción de la estructura de la pared celular primaria
(Brummell 2006), si bien la contribución relativa de cada evento en la maduración no
está clara y probablemente depende de la especie (Goulao et al. 2010).
Otras modificaciones que acompañan a los frutos durante la maduración son
cambios en los pigmentos, la biosíntesis de aromas, el incremento de ácidos orgánicos,
azúcares y de las concentraciones de algunos iones y la disminución del pH en el
espacio de la pared o en el espacio extracelular periférico al plasmalema de las células
vegetales denominado apoplasto (Almeida y Huber, 1999; Brummell 2006; Brummell y
Harpster, 2001; Prasanna et al. 2007).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
89
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

Figura 7. Componentes de la cutícula y su relación con los componentes de la pared

celular. [Link]/varios/biologia/Temas/tema_5.htm

3.7 QTLs y firmeza.

La existencia de variedades de melón con comportamiento climatérico y no
climatérico hace de esta especie un sistema adecuado para estudiar el control genético
en la maduración del climaterio y los QTLs involucrados en este proceso. Algunos de
los resultados obtenidos están publicados en Moreno et al. (2008). No obstante, el
estudio de QTLs es un procedimiento extendido a otras especies y supone un ejemplo
de cómo el incremento del conocimiento genético y más concretamente de segmentos
de genes asociados a parámetros de calidad puede ayudar a generar frutos con mejores
características tanto para los consumidores como para el mercado como por ejemplo el
tomate o la fresa. Ambos frutos presentan un claro deterioro de la textura que suele ir en
paralelo al aumento del micelio gris provocado por el hongo Botrytis cinérea (Cantu et
al. 2008; Jiménez-Bermúdez et al. 2002; Salentijn et al. 2003).
El tomate es un fruto climatérico sobre el que se investigado mucho en los últimos
años en relación a los genes y encontrar QTLs relacionados con la textura y con los
procesos de ablandamiento durante su maduración (Causse et al. 2002; Page et al. 2008;
Saladié et al. 2007), Causse et al. (2001) identificó QTLs en los cromosomas de tomate
2 (TG484), 5 (CT093, TG318), 9 (H35M51–176C) y 11 (TG046) relacionados con la
firmeza de la pulpa del tomate en recolección. La firmeza fue medida por un grupo de

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
90
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

panelistas entrenados y tuvo un alto porcentaje de variación por el efecto de la línea y

relativamente bajo por efecto del panel.
Los parámetros de textura son muy difíciles de relacionar con medidas físicas,
aunque la firmeza del tomate en boca está en parte relacionada con la medida
instrumental de la firmeza de la fruta. La mejora de la vida comercial del tomate se
obtuvo por el uso de una mutación rin o por el efecto acumulativo de varios genes
mejorando la firmeza de la fruta (Causse et al. 2003)
En un estudio reciente con NILs de tomate introgresionadas con QTLs se ha
identificado una posible implicación de una región específica en el cromosoma 9 para la
regulación del metabolismo de la galactosa en la pared celular. No obstante, se debe
continuar avanzando en el estudio del efecto que tienen los polisacáridos de la pared
celular sobre las propiedades mecánicas de los tejidos (Lahaye et al. 2012).
En fresa (Fragaria x ananassa Duch.), una fruta no climatérica, se han identificado
10 genes que pueden estar asociados con el metabolismo de la pared celular. Se han
desarrollado líneas de fresa transgénicas con inhibiciones antisentido de estos genes y
ello ha demostrado la importancia de los genes del metabolismo en el ablandamiento y
otras propiedades del fruto (Posé et al. 2013; Sesmero et al. 2007) Se encontraron
diferencias sustanciales en la expresión genética de la firmeza en los cultivares de fresa.
En los frutos maduros del cultivar blando, estuvieron incrementados varios genes
posiblemente implicados en la degradación de la pared celular como los genes de PME
(H163 y B8) y PG (B4). La diferencia más pronunciada entre ambos cultivares se
observó en los genes que codifican enzimas que intervienen en la biosíntesis de la
lignina que es una rama de la vía de fenilpropanoides (alcohol deshidrogenasa cinamilo
CAD y cinamoilo CoA reductasa, CCR) (Salentijn et al. 2003). En numerosas líneas
independientes de fresa transgénica la inhibición de la enzima PL dio como resultado
una mayor firmeza de los frutos de fresa maduros y un menor ablandamiento post-
cosecha, sin afectar a otros atributos de calidad. Este hecho se produjo probablemente
debido a la baja solubilidad de la pectina. Este gen es un excelente candidato para el
mejoramiento biotecnológico de ablandamiento de los frutos de fresa (Jiménez-
Bermúdez et al. 2002).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
91
 CAPÍTULO I
3. PARED CELULAR

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
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 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

CAPÍTULO II

MATERIAL Y MÉTODOS

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 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
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 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

MATERIAL Y MÉTODOS

1. Población experimental.

Las líneas casi-isogénicas o NILs de melón han sido ampliamente descritas (Eduardo
et al. 2005; Moreno et al. 2008; Obando et al. 2008) y se desarrollaron en el Laboratorio
de Genética Molecular Vegetal del IRTA-CRAG (Barcelona, España) a partir del
cruzamiento de dos parentales no climatéricos, el melón español Cucumis melo L.
cultivar ‘Piel de Sapo’ T111 (PS) y un melón del tipo Agrestes de la accesión exótica
coreana PI 161375 ‘Shongwan Charmi’ (SC). Se desarrolló una genoteca de NILs de
melón de manera cada NIL contiene una introgresión casi única en la mayoría de los
casos del donante silvestre (SC) en el entorno genético del cultivar (PS). Las NILs
presentaron distinto comportamiento fisiológico y se han empleado para identificar
QTLs o alelos de genes asociados a atributos de calidad del melón (Monforte et al.
2002). La línea casi-isogénica SC3-5-1 contiene introgresiones en homozigosis de de la
accesión coreana PI 161375 en el fondo genético del parental ‘Piel de Sapo’ T111 en los
cromosomas III y VI que por sí solas o en conjunto dan un fenotipo climatérico (Vegas
et al. 2013). Las líneas SC7-1, SC7-2 y SC10-2 fueron desarrolladas inicialmente por
Eduardo et al. (2005) y contienen introgresiones en homozigosis (el 2 en las Fig. 1 y 2)
en los cromosomas VII (Fig. 1) o X (Fig. 2).
CMAGN75

CMAGN30

CMGAN21

CMnew2
CMnew

NILs

SC7-1 2
SC7-2 2 2 2 2

Figura 1. Genotipo gráfico de NILs con introgresión en el grupo de ligamiento VII

(Eduardo et al. 2005).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
95
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

*CSWCT01

*CMGA172

*CMGA165
*CMT134B
CMnew4
NR71

NR67
TJ86

TJ78

NR8
NILs

SC10-2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2

Figura 2. Genotipo gráfico de NILs con introgresión en el grupo de ligamiento X

de melón (Eduardo et al. 2005).

2. Condiciones climáticas.

Las condiciones climáticas fueron medidas en la estación meteorológica de CIFEA

en Torre Pacheco (Murcia) desde el trasplante de las plántulas a campo abierto (abril)
hasta la recolección de los frutos (julio).
En 2006, las temperaturas medias oscilaron entre 17,9ºC (en abril) y 27,8ºC (en
julio). La temperatura media global estuvo en torno a 22,4ºC. La evaporación media fue
de 25,3 mm·m-2 (pico mínimo de 17,2 mm·m-2 en abril), con un valor medio mínimo en
mayo de 21,0 mm
m-2 y máximo en julio de 30,1 mm·m-2. Las precipitaciones
mensuales fueron 44,7 mm en abril, 27 mm en mayo, 1,3 mm en junio y sin
precipitaciones en julio. El total de días con precipitaciones fue de 13, con un pico
máximo de 27,5 mm el 17 abril.
En 2008, las temperaturas medias oscilaron entre 15,9ºC (en abril) y 26,3ºC (en
julio). La temperatura media global estuvo en torno a 20,9ºC. La evaporación media fue
de 25,3 mm·m-2, con un valor medio mínimo en mayo de 21,3 mm·m-2 (pico mínimo de
12,24 mm·m-2) y máximo en julio de 29,0 mm·m-2. Las precipitaciones mensuales
fueron 61,0 mm en mayo, 1,4 mm en junio y 5,5 mm en julio. Sin precipitaciones en el
mes de abril. El total de días con precipitaciones fue de 14, con un pico máximo de 27,5
mm el 8 de mayo.
En 2009, las temperaturas medias oscilaron entre 16,0ºC (en abril) y 28,3ºC (en
julio). La temperatura media global estuvo en torno a 22,6ºC. La evaporación media fue
de 25,3 mm·m-2, con un valor medio mínimo en abril de 16,5 mm·m-2 (pico mínimo de
9,1 mm·m-2) y máximo en julio de 32,1 mm·m-2. Las precipitaciones mensuales fueron
22,5 mm en abril y 6,3 mm en junio. Sin precipitaciones en los meses de junio y julio.
El total de días con precipitaciones fue de 8, con un pico máximo de 13,4 mm el 19 de
abril.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
96
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

3. Preparación del campo y siembra.

El manejo del cultivo, las prácticas de cosecha y de los índices de recolección han
sido previamente descritos (Fernández-Trujillo et al. 2008; Obando-Ulloa et al. 2009;
Fig. 3). La preparación del suelo, fertirrigación, fitosanitarios, control de malezas, y
otras prácticas de cultivo fueron los que suelen utilizarse para el cultivo de melón en las
condiciones del Mediterráneo en Torre Pacheco (Murcia, España) (Obando-Ulloa et al.
2008). El suelo de la parcela estuvo localizado en el CIFEA (Centro Integrado de
Formación y Experiencias Agrarias) y fue clasificado como calcisol háplico. Las
dimensiones del terreno fueron 42 m de largo x 40 m de ancho en 2006 y 50 m de largo
x 42 m de ancho en 2008 y 2009. El marco de plantación fue de 2 x 1. El campo estuvo
dividido en 12 líneas.

3.1 Siembra y riego.

A finales de febrero y principios de marzo se realizó la siembra en semillero y se

distribuyó la materia orgánica, 1,5 kg
m-2 mezcla de gallinaza y vacuno con pase de
fresadora para mezclar con el suelo. En abril se procedió al corte del terreno en mesetas
para melón, colocación del riego localizado a goteo y del acolchado con polietileno
transparente (80-90 galgas de espesor y 1,1 m de ancho). Se trató con un herbicida
selectivo (Oxifluorfen) de pre y post emergencia temprana que actúa sobre los tejidos
meristémicos foliares con acción de contacto preventivo, a una dosis de 750 cm3
ha-1.
En abril (6, 7 y 17 de abril de 2006, 2008 y 2009 respectivamente) y previa colocación
de una manta térmica sobre el terreno y marcaje de campo con tablillas según diseño de
plantación, las plántulas en la fase de dos hojas verdaderas se establecieron en un campo
abierto transcurridos 36 días en 2006 y aproximadamente 45 días en 2008 y 2009 desde
de la siembra. En mayo tuvo lugar la floración de las flores femeninas y la detección de
los primeros cuajes en campo. En 2008 hubo un cuajado deficiente como resultado de
problemas climatológicos (exceso de precipitaciones y bajas temperaturas). En mayo y
junio se eliminaron manualmente las malas hierbas. En junio realizó el marcaje en
campo de los frutos individualmente. Por último se procedió a la retirada de la manta
térmica a los 40-50 días de su colocación.
Para el riego se empleó una manga de riego de 16 mm con goteros integrados a 33
cm de 2 L
h-1 colocando la planta a una distancia aproximada del gotero de 10 cm.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
97
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

Figura 3. a) Colocación de la manta térmica sobre el terreno. b) Disposición de una

plántula de NIL de melón (8M8-3) según previo diseño de plantación y marcaje de
campo y acolchado. c) Distribución de las plántulas y señalización del campo con
tablillas en la campaña 2008. Fotografía tomada por Fernández-Trujillo en el CIFEA.

3.2 Tratamientos.

En 2006 (19 de mayo) se realizó un tratamiento con Imidacloprid 20% p/v SL

(Confidor 20 LS, Bayer CropScience, Valencia, España), un concentrado soluble para
aplicar en pulverización foliar o diluido en el agua de riego para el control de pulgones.
La dosis fue 50-75 cm3·hl-1 según indicaciones del fabricante. La principal enfermedad
que afectó a las plantas en esta campaña fue oídio.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
98
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

En 2008 se realizaron cinco tratamientos con fungicidas e insecticidas entre los

meses de junio y julio siguiendo las indicaciones de los fabricantes. 2 de Junio,
Imidacloprid 20% p/v SL (Confidor 20 LS, Bayer CropScience, Valencia, España;
Couraze, Agrodán, Almansa, Madrid, España; Kohinor, Aragonesas Agro S.A.
(Aragro), Madrid, España), dosis 50-75 cm3·hl-1. Azoxistrobin 25% p/v SC (Ortica,
Syngenta Agro S.A., Madrid, España) es una suspensión concentrada para aplicar en
pulverización foliar para el control de mildiu y oídio, dosis 75-80 cm3·hl-1. 13 de Junio,
Triflumizol 30% WP (Trifmine 30 WP EX, Sipcam Inagra S.A., Valencia, España),
polvo mojable para aplicar en pulverización foliar contra oídios, dosis 80 cm3·hl-1.
Cimoxanilo 2,67% + Fosetil-al 33,3% + Mancozeb 33,3% WG (Almanach, Bayer
CropScience, España) es una triple asociación de fungicidas presentada en forma de
granulado dispersable en agua para aplicar en pulverización foliar el control preventivo
de mildiu, dosis 3,5-4,5 kg·ha-1. 23 de Junio, Fenarimol 12% p/v SC (Rubigan Flow,
Gowan Company LLC., Arizona, [Link]), suspensión concentrada para aplicar en
pulverización foliar en control de oídios, dosis 50 cm3·hl-1. Piridaben 20%. WP
(Sanmite, BASF Española, S.L., Barcelona, España), polvo mojable para aplicar en
pulverización foliar en el control de mosca blanca y larvas y adultos de araña roja, dosis
100 cm3·hl-1. 2 de julio, se repite el tratamiento con Imidacloprid 20% p/v y
Azoxistrobin 25% p/v SC. 7 de julio, se repite el tratamiento con Triflumizol 30% WP.
La solución nutriente para fertirrigación estuvo compuesta por ácido nítrico ácido
fosfórico, nitrato cálcico, nitrato amónico, nitrato potásico, sulfato potásico, fosfato
monoamónico y nitrato magnésico a distintas concentraciones. Se efectuaron 26 riegos
durante 70 h con 3 goteros a 2 l·h-1, para un total de 4200 m3·ha-1.

Tabla 1. Solución nutriente utilizada durante la campaña 2008.

Compuesto N P2O5 K2O Mg Ca
A. Nítrico 9
A. Fosfórico 11
N. Cálcico 19 33
N. Amónico 25
N. Potásico 24 83
S. Potásico 65
F. Monoamónico 6 30
N. Magnesio 7 10
UF/Ha 90 41 148 10 33
UF/Ha Unidades fertilizantes por hectárea.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
99
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

En 2009 se efectuaron tres tratamientos con fungicidas e insecticidas entre los

meses de mayo y junio según indicaciones de los fabricantes. 19 de junio, Azufre
micronuizado 80% (Cepsul, Cepsa (Cia. Española Petroleos), S.A. Madrid, España),
para el tratamiento de araña roja y oidio. Maneb 10% (Belpron M10, Probelte, Murcia,
España) para el tratamiento de mildiu. 10 de junio, se repite el tratamiento anterior más
Cipermetrin 0,5% (Cipemor, Agrimor, S.A., Madrid, España) para tratar oruga y
pulgón. 24 de abri, se repite el tratamiento anterior. Las plantas de la línea parental SC
sufrieron de Fusarium sp. en sus raíces.
La solución nutriente para fertirrigación estuvo compuesta por ácido nítrico, nitrato
cálcico, nitrato amónico, nitrato potásico, sulfato potásico y fosfato monoamónico a
distintas concentraciones. Se efectuaron 27 riegos durante 68 h con 3 goteros a 2 l·h-1,
para un total de 4080 m3·ha-1.

Tabla 2. Solución nutriente utilizada durante la campaña de melón 2009.

Compuesto N P2O5 K2O Ca

A. Nítrico 8
N. Cálcico 18 31
N. Amónico 15
N. Potásico 27 95
S. Potásico 40
F. Monoamónico 12 61
UF/Ha 80 61 135 31
UF/Ha Unidades fertilizantes por hectárea.

4. Diseño experimental.

Se siguió un diseño experimental completamente aleatorizado descrito en Obando et

al. (2008). El campo fue dividido en bloques en un diseño completamente al azar dentro
del bloque. En cada bloque los números de réplica de cada línea fueron
aproximadamente los mismos para facilitar la recolección. Por ejemplo, en el bloque 1,
réplicas 1. La plantación fue rodeada por una línea borde de la variedad ‘Nicolás’.
En la campaña 2006, la experiencia constó de 16 líneas codificadas según tabla 3 y
que se identifican con la siguiente terminología: 6Mx-y z, donde x es la línea, y es la
réplica y z el fruto. M es la inicial de lugar de cultivo (Murcia) y el número 6 el año de
la campaña (2006). Los códigos del experimento principal fueron: 6M1 a 6M10 y PS
(6M11) como control y otras NILs codificadas como 6M17 a 6M19 como referencia.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
100
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

Las líneas plantadas y sus réplicas fueron el parental PS, n=21, la NIL SC3-5 (6M10) y
nueve líneas casi-isogénicas más n=7, excepto 6M2, n=5 y 6M8 y 6M9, n=9, un control
de híbrido tipo ‘Piel de Sapo’ variedad ‘Nicolás’, n=7, el parental C. melo var.
cantalupensis Naud, cultivar ‘Védrantais’ habitualmente utilizado por Vilmorin en
Francia, n=7, y tres líneas casi-isogénicas más de la colección de NILs (Eduardo et al.
2005): 6M17 similar a SC6-4, n=1; 6M18 ó SC10-2, n=3 y 6M19 ó SC7-1, n=5. La
línea 6M10 se corresponde a la línea SC3-5 ensayada con anterioridad. Cada réplica
constó de tres plantas (líneas 6M1, 6M3 a 6M15), dos (6M2, 6M17), o dos ó tres
plantas (6M18 y 6M19), en los dos últimos casos por mortandad de plantas en el
semillero. Para el experimento de calidad el número de frutos por réplica fue de dos
(codificados como A o B) para un total de 263 muestras o frutos. Si se recolectaban
frutos de inmadurez o sobremadurez evidente, se tomaban muestras adicionales
(codificadas con letras sucesivas como C, D, ó E) descartando las anteriores que no
cumplían las especificaciones de madurez (Dos-Santos et al. 2007).

Tabla 3. Codificación de las líneas cultivadas en la campaña 2006 (6M1 a 6M10, NILs
del experimento principal). Las de código SC son líneas casi isogénicas obtenidas por E.
Moreno, A. Monforte y J. Garcia-Mas (datos no publicados).

Línea Código
6M1 6M1
SC3-5-7 6M2
SC3-5-8 6M3
PS 6M5z
SC3-5-9 6M4
SC3-5-11 6M6
SC3-5-12 6M7
SC3-5-13 6M8
SC3-5-14 6M9
6M10 6M10
PS cv T111 6M11
‘Nicolás’ 6M14
‘Védrantais’ 6M15
SC10-2 6M18
SC7-1 6M19
z
Este código en un re-análisis de las líneas resultó no tener introgresión en LG III o
LG VI, por lo que se considera similar al parental ‘Piel de Sapo’ y se descartó de
posteriores análisis (Monforte, com. personal).

Se describen aquí los experimentos de 2008 y 2009 con todas las codificaciones de
líneas de ambas campañas. Sin embargo, sólo los resultados de algunas de ellas forman

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
101
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

parte de la presente tesis doctoral. En la campaña 2008 el experimento constó de 15

líneas (Tabla 4), con los siguientes códigos (8Mx-y z) para la experiencia principal,
codificadas con los números 1 al 15: 8M1 a 8M10 y los parentales y PS cv. T111
(8M11) (control), y ‘Shongwhan Charmi’ entrada PI 161375 (SC, 8M12). Otras líneas
codificadas como 8M2 (PI124112), 8M4 (Ginsen Makuwa) correspondieron a
parentales exóticos, y 8M5 a un cultivar comercial tipo ‘Piel de Sapo’ (cv. Medellín) del
grupo Inodorus. Cada réplica constó de tres plantas separadas 1,5 m de las filas (0,36
plantas·m2). La distancia entre repeticiones fue de 3 m. La separación entre filas fue de
2 m. Las líneas plantadas y sus réplicas fueron el parental PS cv T111 (8M11), n=21 y
el parental coreano SC (8M12), n=10, n=7 para las NILs SC3-5-1 (8M1) y SC8-4
(8M10) y cuatro líneas casi-isogénicas más SC12-1 (8M6), SC7-2 (8M7), SC12-3
(8M8) y SC10-2 (8M9), n=6. Se plantaron también tres líneas correspondientes a
parentales exóticos (8M2, 8M4, 8M5), n=6; un control de híbrido tipo Piel de Sapo
variedad ‘Nicolás’ grupo Inodorus, n=6; el parental C. melo var. cantalupensis Naud,
cultivar ‘Védrantais’ , n=6; la variedad ‘Dulce’ n=6 y una línea casi-isogénica más de la
colección de NILs, 8M17, n=1. Para el experimento de calidad el número de frutos por
réplica fue de dos (A y B incluyendo C, D y E en el caso de ser necesario) para un total
de 227 muestras o frutos. La línea 8M3 (Cucumis trigonus) quedó fuera del
experimento por mortandad de las plantas.

Tabla 4. Codificación de las líneas cultivadas en la campañas de melón 2008 y 2009

(8M1, 8M5-8M10 y 9M1-9M10 NILs del experimento principal, respectivamente). Las
de código SC son líneas casi isogénicas obtenidas por Eduardo et al. (2005).

Línea Código Línea Código

SC3-5-1 8M1 SC3-5-1 9M1
P1124112 8M2 SC7-1 9M2
Cucumis trigonus 8M3 SC3-5-8 9M3
Ginsen Makuwa 8M4 SC5-4 9M4
‘Medellín’ 8M5 SC3-5-12 9M5
SC12-1 8M6 SC3-5-3 9M6
SC7-2 8M7 SC7-2 9M7
SC12-3 8M8 SC3-5-14 9M8
SC10-2 8M9 SC10-2 9M9
SC8-4 8M10 SC3-5 9M10
PS 8M11 PS 9M11
PI 161375 8M12 PI 161375 9M12
‘Dulce’ 8M13 ‘Galia’ 9M13
‘Nicolás’ 8M14 ‘Nicolás’ 9M14
‘Védrantais’ 8M15

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
102
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

En la campaña 2009 el experimento constó de 14 líneas (tabla 4) con los siguientes

códigos (9Mx-y z) para el experimento principal: 9M1 a 9M10 y los parentales SC
(9M12) y PS cv T111 (9M11), este último como control. Cada réplica constó de seis
plantas contiguas en de dos filas. La distancia entre repeticiones fue de 3 m. La
separación entre filas fue de 2 m. Las líneas plantadas y sus réplicas fueron el parental
PS cv T111 (9M11) empleado como control, n=9 y el parental coreano SC (9M12),
n=6; para las NILs SC7-1 (9M2), SC3-5-8 (9M3), SC5-4 (9M4), SC3-5-12 (9M5=6M7)
y SC3-5-3 (9M6=6M6), n=3; n=4 para SC3-5-14 (9M8=6M9) y SC10-2 (9M9=8M9);
n=10 para SC3-5 (9M10=6M10) y n=7 para SC7-2 (9M7=8M7); n=6 para el control de
híbrido tipo Piel de Sapo variedad ‘Nicolás’ (grupo Inodorus) y n=1 para el melón
‘Galia’ Cucumis melo var. reticulatus. Para el experimento de calidad el número de
frutos por réplica fue de dos (A y B incluyendo C, D y E en el caso de ser necesario)
para un total de 160 muestras o frutos

5. Cosecha

Los frutos fueron cosechados en 2-3 semanas del mes de Julio (del 20 Junio a 20
Julio en 2006, del 7 al 16 de julio en 2008 y del 8 al 27 de julio en 2009). La cosecha
fue realizada por dos personas durante las primeras horas de la mañana (6:30-10:00
a.m.) de acuerdo con los índices de madurez descritos para estas líneas (Tijskens et al.
2009) dependiendo de su carácter climatérico o no climatérico. Para las variedades
climatéricas es conveniente realizar una recolección diaria y marcar las plantas con
frutos susceptibles de ser recolectados al día siguiente.
Los índices mínimos de cosecha fueron, un fruto sano, bien formado y libre de
defectos, firme, con epidermis seca con el escriturado lignificado, alta densidad de
acuerdo a la experiencia del cosechador, color de la piel, debilitamiento del tallo y de la
hoja más cercana del pedúnculo suberificado de la fruta, y coloración amarillenta de la
cama. Los índices de cosecha más comunes para el NILs no climatéricas y PS fueron el
desarrollo de escriturado en la piel y a veces el desarrollo de anillos anulares,
escriturado partiendo en zona radial de las proximidades del pedúnculo, o de color
amarillo alrededor de la parte suberificada del pedúnculo. Para NILs climatéricas
(dehiscentes de forma más o menos acelerada en el tiempo) los índices de cosecha,
fueron el desarrollo y la dehiscencia de la fruta (aproximadamente 1/2 a 3/4 de grado de
separación del pedúnculo o slip en la cosecha), la textura del fruto entero y la textura
estilar final, coloración amarillenta de la piel (incluyendo la de la zona de la cama), las

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
103
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

fisuras o grietas en el historial de cada NIL, y la emisión de volátiles detectado por la

nariz humana (Obando-Ulloa et al. 2009).
Las principales pérdidas en la cosecha se debieron a rajado de los frutos, escaldadura
solar, sobremaduración y daños causados por animales (ratas, conejos y pájaros).
Una vez recolectados, los frutos se cargaron en cajas de polietileno evitando la
sobrecarga de las mismas y los golpes y roces que pudieran dañar los frutos. Las cajas
con frutos se transportaron en furgoneta hasta la Planta Piloto de Tecnología de los
Alimentos de la UPCT (Cartagena), donde se procedió a la limpieza, estabilización
térmica a 23ºC y clasificación de los frutos para las distintas experiencias. Los frutos
recolectados destinados al experimento de calidad que no podían ser analizados en el
día se almacenaron en una cámara a 10 ± 1ºC (máximo de una semana en 2006 y de un
día en 2008 ya que la recolección en este año fue extremadamente escalonada). Los
frutos destinados a experiencias de refrigeración se almacenaron en una cámara a 8 ±
0,6ºC durante 27-28 días, cubiertos con láminas de plástico no herméticas.

6. Atributos de calidad no destructivos.

6.1. Peso

El peso de los frutos (en gramos) se midió con una balanza de precisión de 0,1 g y
máximo de 16 kg Sartorius CP16001S (Goettingen, Alemania).

6.2 Diámetro y longitud.

El diámetro máximo de los frutos y su longitud en cm (desde el pedúnculo hasta la

parte más distal del centro máximo ecuatorial) se midió con un calibre electrónico
digital de 0-600 mm (Tornero, Kalkum Ezquerra S.L, La Rioja, España).

6.3 Escriturado, olor, dehiscencia y apariencia comercial.

La evaluación del escriturado de la piel se basó en una escala visual obtenida tras
fotografía digital (Olympus C5050Z, Tokio, Japón) de muestras de frutos que mostraba
diferentes grados de escriturado. Los valores de escala según las fotos fueron: 0, nada;
1, muy ligero; 2 ligero; 2,5, ligero a medio; 3, moderado; 3,5 moderado a severo; 4,
severo; 5, muy severo.
La presencia ó ausencia de olor en los frutos fue evaluada por la misma persona
entrenada, donde cero fue ausencia y uno presencia de aroma.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
104
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

La clasificación de la apariencia comercial fue realizada por la misma persona

entrenada y se basó principalmente en cuatro categorías (extra, primera, segunda y no
comercial), en función de factores externos como inmadurez en áreas locales, cicatrices,
golpes, etc. La categoría extra incluye frutos sin defectos, la categoría primera y
segunda admiten un máximo de área con defectos del 5% ó del 5% al 10%
respectivamente, y los frutos no comerciales son aquellos que no tienen el área del
pedúnculo entera ó con más de un 10% de área con defectos.

6.4 Densidad

La densidad del fruto (kg⋅m-3) se determinó según el método de desplazamiento del

agua basado en el principio de Arquímedes. Se empleó una balanza digital de 0,1 g de
precisión (Sartorius CP16001S) y dos contenedores cónicos herméticos de un volumen
de 10,7 L (Repli S.L., Rubí, Barcelona, España) previamente calibrados con agua
destilada. Las tapas tenían dos perforaciones de 1 cm de diámetro. La temperatura del
o
agua (en C) se midió con un termómetro digital Checktemp1 pocket (Hanna
Instruments, Bilbao, España) con sonda de acero inoxidable y ± 0,3oC de precisión. La
densidad del agua se estimó mediante regresión a partir de datos de Singh y Heldman
(1998) según la ecuación: = -0,0051·T2 + 0,0057· T + 1000,2 (kg·m-3), para valores de
temperatura entre 10 y 30oC. Posteriormente los frutos se secaron con papel absorbente
para eliminar el exceso de agua.

6.5 Color de la piel.

Se realizaron dos medidas de color sobre la piel del fruto con un colorímetro de 8
mm de diámetro (CR-300, Minolta, Ramsey, NJ, [Link]). El color característico de la
piel (normalmente verde) se midió en tres puntos equidistantes del fruto y con ausencia
de manchas o cicatrices que pudieras interferir en los resultados. También se midió el
color en tres puntos de la cama ó zona en contacto con la tierra durante el desarrollo del
fruto (más claro por la menor luz recibida). El colorímetro se calibró previamente sobre
superficie blanca tomando como referencia el iluminante C (observador 0o para el
colorímetro Minolta CR-300), representativo de luz en días nublados, y fue programado
para efectuar tres disparos por medida mostrando el valor promedio. Los resultados se
expresaron en las coordenadas del espacio de color C.I.E (Comisión Internacional de
Iluminación) L*, C*, h* (luminosidad, croma y ángulo de tono).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
105
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

Para medir la evolución del color de la piel durante la maduración del fruto, las medidas
se efectuaron siempre sobre los mismos puntos previamente seleccionados y señalados
con líneas mediante marcador permanente (Sharpie, [Link]) y situando el colorímetro
tangente a las misma.

a b

Figura 4. Representación gráfica de las coordenadas C.I.E L*C* h. a) Valores del

ángulo del tono (h). b) luminosidad (L) y croma (C). Internet.

6.6 Textura del fruto entero.

Se midió (en N·mm-1) la textura (también llamada dureza) lateral y distal del fruto
entero de melón. La dureza lateral se determinó en la zona ecuatorial del fruto y la
dureza distal se midió con el fruto colocado en vertical con ayuda de un soporte
cilíndrico que sirvió de apoyo para la base del fruto. Se empleó un test de compresión
del fruto hasta 2,2 mm (en 2006) y 2 mm (en 2008 y 2009), utilizando una célula de
carga de 1 kN (2006) y doble recorrido (0-200, 200-2000 kN en 2008 y 2008),y dos
platos de compresión de 100 mm Ø o cuadrados, comandados por una máquina de
ensayos electromecánica de 5 kN de bastidor (ELIB-5K S.A.E. Ibertest, Daganzo de
Arriba, Madrid, España), previamente calibrada. La velocidad de la prueba fue de 15
mm·min-1 con retorno automático a la posición de ciclos de compresión. Los gráficos de
fuerza-distancia se obtuvieron con el software Wintest® Elec-met v. 2.9.70 (Ibertest) y
se guardaron en un archivo de Microsoft Power Point 2000 hasta su análisis. La dureza
se obtuvo de dividir la fuerza en Newton (N) entre la deformación en mm exactamente
medida (Fernández-Trujillo et al. 2005; Tijskens et al. 2009).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
106
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

Figura 5. Ejemplo de gráfica fuerza-distancia de la dureza lateral medida en el fruto

entero de melón 9M11-6A (control PS). En el eje de ordenadas la fuerza en Newton
(N), en el eje de abscisas la deformación en mm.

6.7 Fotografía digital.

Para los experimentos de calidad se tomaron al menos seis fotografías digitales de

cada fruto y doce fotografías digitales para los experimentos de seguimiento (punto
inicial poscosecha y punto final de seguimiento). Se hicieron cinco fotos de cada fruto
entero de melón; tres fotos girando el fruto sobre sí mismo en horizontal e incluyendo
una foto de la zona de la cama, y dos fotos del fruto colocado en posición vertical con
ayuda de un soporte e incluyendo una fotografía de la zona peduncular y otra de la zona
basal. Se tomó también una fotografía de cada fruto cortado longitudinalmente en
mitades (una mitad mostrando la piel y otra la pulpa) y siempre colocando las mitades
con la misma orientación y posición. En los casos en que se consideró oportuno
(desórdenes fisiológicos, inmadurez, daños mecánicos, etc.) se tomaron fotos de detalle.
Previamente a la toma de fotografías, los frutos se secaron con papel absorbente con
el objetivo de minimizar los brillos causados por el exceso de agua. Seguidamente, se
situaron sobre un fondo de papel negro (2008 y 2009 referencia) ó azul (2006
referencia) montado sobre un atril de 64,5 cm de alto. Se utilizaron soportes cilíndricos
(de 2-3 cm de altura y 5-6 cm de diámetro) para evitar el desplazamiento de los frutos.
Las fotos se tomaron usando como referencia una escala de 50 cm y para la
identificación de cada fruto se emplearon etiquetadoras de precios de mercado con
cuatro dígitos, donde se marcaba la campaña, la NIL, la réplica y el fruto. El equipo
básico de fotografía consistió en una cámara digital de 5.0 mega pixels (Olympus
C5050Z, Tokio, Japón) con accesorio macro y para filtros. Se empleó un filtro azul
(Jessop 80A 55-mm) que junto con la velocidad lenta del flash evitaba el amarillo

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
107
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

dominante de los focos. Se usaron dos focos Scanlite (Elinchrom, Profot AG, Suiza)
con lámparas halógenas foto-ópticas de 300 y 600 W (Osram, Regensburg, Alemania)
con brazos ajustables y paraguas blancos para filtrar la luz. La cámara se montó sobre
un trípode situado perpendicularmente a 51,2 cm del fondo. Las especificaciones para la
toma de fotografías fueron; posición manual (M), abertura de diafragma f8, opción
macro, ausencia de flash, balance automático de blancos, color sRGB, ISO 64 y
velocidad desde 1/10 a 1/15. La velocidad dependió del color del fondo (azul o negro),
de la distancia de los focos y del tipo de fotografía (pulpa o fruto entero). Las
velocidades fueron 1/13 para pulpa y 1/10 para fruto entero en 2006, 1/15 para pulpa y
1/13 para fruto entero en 2008 y 1/10 para pulpa y 1/13 para fruto entero en 2009. La
longitud focal fue 11,9 mm (en 2006 y 2008) y 12,1 mm (en 2009). Para los detalles se
empleó la opción supermacro ó zoom. En las campañas 2008 y 2009 se incorporó la
mejora de un mando a distancia. Las fotografías se almacenaron en formato JPG de alta
resolución (2560×1920 pixels) y se utilizó un ordenador personal (Optiplex Gx280,
Dell, España) y un software de imágenes (Microsoft Office Picture Manager SP3,
Adobe Photoshop CS 8.0.1, Adobe ImageReady CS 8.0.1, [Link]) para la visualización
o retoque.

Paraguas

Lámparas halógenas
Trípode

Cámara
Fruto

Regla

Fondo Negro
Atril

Figura 6. Equipo de toma de fotografías digitales según montaje de Fernández-

Trujillo en la planta piloto de tecnología de alimentos de la Universidad Politécnica de
Cartagena.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
108
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

Zo n a
Pedúncu lar

Zona de la cama
Año campaña
Fruto
Etiqueta
Réplica
Línea
Figura 7. Fotografía de un fruto entero de melón de la línea PS (6M11-16A) y
descripción de la nomenclatura de la etiqueta.

Zona de la cama Zona opuesta

Figura 8. Fotografía de las mitades de un fruto de melón de la línea PS (6M11-

11A).

Figura 9. Pulpa de melón de las NILs 6M1 (1), 6M2 (2), 6M3 (3), 6M4 (4), 6M5
(5), 6M6 (6), 6M7 (7), 6M8 (8), 6M9 (9), 6M10 (10) y del parental 6M11 o PS
(11).
Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
109
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

7. Atributos de calidad destructivos.

7.1 Preparación de muestras.

Las muestras se obtuvieron de frutos recolectados en el mismo día ó almacenados a

10ºC no más de 3 días. Tras medición de los atributos de calidad no destructivos, los
frutos entraron en la línea de trabajo para la toma de muestras y medición de atributos
de calidad destructivos. Cada fruto de melón se cortó longitudinalmente en mitades y se
realizó el examen interno y la fotografía de la pulpa (véase en apartado 6.7). Para la
toma de muestras se seleccionó la mitad con mejores características y se cortó en varias
secciones semiesféricas y perpendiculares a la longitud del fruto.

7.2 Toma de muestras de pulpa.

Se tomó tejido de la zona ecuatorial de la pulpa (evitando la zona seminal y cercana

a la corteza) en forma de cilindros de 20 mm de alto x 15 mm de diámetro con
descorazonadores de manzana de acero inoxidable de 15 mm Ø (Valira, Reus,
Tarragona, España ó Alexalo 8005, Aleissi SCCL, Canovelles, Barcelona, España). Se
pesaron entre 35-50 g con una balanza digital de precisión de 0,01 g (ST3100 Gram
Precision, Mississauga, Ontario, Canada). Se congelaron inmediatamente en nitrógeno
líquido y se almacenaron en bolsas con cierre de alambre de 180 mL (Nasco whril-pak,
Nasco, Fort Atkinson, WI, [Link]). Las muestras se conservaron a -80ºC en
ultracongeladores (Thermoforma y Thermoscientific 86C, Thermo Electron Co.,
[Link]) (Dos-Santos et al. 2007).

7.3 Toma de muestras de zumo.

El zumo de melón se obtuvo de los cilindros de pulpa con extractores de zumo

manuales idénticos (Simplex Super, Italia). Posteriormente el zumo se filtró mediante
una gasa de cuatro capas colocada sobre un embudo. El zumo filtrado se guardó en
viales de 15 mL (Deltalab S.L.U., Rubí, Barcelona, España) y 1,5 mL (Eppendorf AG,
Hamburgo, Alemania) en un congelador de -25ºC (Liebherr Premium no frost A++
GNP 3376, Alemania) hasta posterior análisis de densidad, jugosidad, acidez titulable,
ácidos orgánicos y azúcares (Fernández-Trujillo et al. 2005).
Los aromas volátiles se midieron a partir de una solución preparada a partir del
zumo filtrado y una disolución saturada de cloruro cálcico dihidratado empleada para
retener los volátiles. Para la disolución se pesaron 197,35 g de CaCl2 x2H2O (Panreac
Química S.A., Castellar del Vallés, Barcelona, España) que se añadieron poco a poco a

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
110
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

un vaso de precipitado con aproximadamente 150 mL de agua mQ (conductividad 18

Ω·cm; sistema 56 MilliQ, Millipore, Milford, MA, [Link]) a 20ºC y agitación
constante. Finalmente se añadió el volumen restante de agua mQ hasta completar los
200 mL previamente medidos en un matraz. La disolución se conservó a 4ºC hasta su
uso.
Para preparar 25,2 mL de solución de zumo con cloruro cálcico, se prepararon unos
30 mL de zumo según metodología descrita. Se tomaron 18 mL con pipeta de 25 mL de
un solo uso adaptada a un controlador (Biohit Midi Plus, Biohit PLC, Helsinki,
Finlandia) y se midieron 3 min con cronometro digital con alarma desde la preparación
del zumo. Transcurrido este tiempo se agregaron 7,2 mL de la disolución de cloruro
cálcico previamente atemperada a 20ºC. La solución se homogenizó y se transfirió a
viales de 15 y 5 mL (Deltalab) previamente etiquetados e identificados con rotulador
permanente (Sharpie). Finalmente las muestras se almacenaron a -80ºC en
ultracongeladores (Thermoforma y Thermoscientific 86C) hasta posterior análisis.

7.4 Toma de muestras de corteza.

En las campañas 2006 y 2008 se tomaron algunas muestras de corteza de melón para
diferentes análisis. Se emplearon peladores de cáscara de manzana de acero inoxidable
sobre zonas sin defectos y evitando la zona de la cama. Se pesaron entre 15-20 g de
corteza de melón con balanza digital de 0,01 g de precisión (ST3100 Gram Precision) y
se congelaron rápidamente mediante inmersión en nitrógeno líquido. Se guardaron en
bolsas con cierre de alambre de 100 mL (Nasco whril-pak) previamente etiquetadas y se
almacenaron a -80ºC en ultracongeladores (Thermoforma y Thermoscientific 86C)
hasta posterior análisis.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
111
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

ENTRADA DEL FRUTO EN LA

LÍNEA ANOTACIÓN
Temperatura ambiente (20ºC) o atemperado en caso de haber
estado en cámara a 10ºC
ENTRADA
Fecha
Verificar medición de: 00/00/09
• Atributos iniciales morfológicos (hoja)
o Textura fruto entero (máquina ensayos IBERTEST)
o Foto fruto entero: Todos de una vez (distinta velocidad
pulpa). Ver protocolo cámara fotográfica
o Color de epidermis y de fondo.
Colorímetro (ILUMINANTE C):
- Color Epidermis y de Fondo CORTE SECADO
- Fecha 00/00/09
- Línea/Fruto/Réplica 8Mx-Ri Cuchillo afilado Papel absorbente para quitar jugo
Sección longitudinal

COLOR PULPA: Colorímetro

BANDEJA TOMA DE MUESTRAS Indicar:
o Color Pulpa
Etiqueta: Pegar a Bandeja.
o Fecha 00/00/00
MARCAR Y COLOCAR: o Línea/Fruto/Réplica 9Mx-Ri
o Fecha 00/00/09
o Línea/Fruto/Réplica
9Mx-Ri
INSPECCIÓN FRUTO
p Anotación Hoja:

MMIIITTTAAADDDEEESSSM
MEEELLLÓ
ÓN
Ó N
N
 1 BOLSA PULPA: 40-50 g o Daños calidad (MODELO)
 BOLSAS (2-3 por bandeja) +1
o Fecha 00/00/09
o Fecha 00/00/00 o Línea/Fruto/Réplica
o Línea/Fruto/Réplica 9Mx-Ri 9Mx-R

1 (m) viales aromas calcio (6). FOTO DIGITAL DE SECCIONES
(1 bolsa por muestra)  1 PLATO DE PLÁSTICO.
P=Pulpa

1 (g) viales zumo puro (añadiendo). E= Epidermis P E

1(m) pulpa. (1 bolsa por muestra)  1 EMBUDOS FILTRACIÓN e= etiqueta de registro

1 (p) corteza: ZUMO. e
(solo M1, M7, M9, M10, M11, M12)
 3 VASOS PRECIPITADO:
 AROMAS ZUMO CALCIO (6) 100mL
2 viales- aromas (15 mL) 2 RECIPIENTES DE
LÍNEA

4 viales- tapón verde (5mL) ALUMINIO

Homogeneizado 50 mL BOLSA Viales
(36 mL zumo + 14,4 mL CaCl2) • Pulpa. corteza y zumo -80ºC
• Corteza (solo para M1,
M7, M9, M10, M11, M12) o Volátiles
 ZUMO puro (4)
1 vial- zumo (12 mL)
3 viales- EPPENDORFF original 2 mL

 1 BOLSA CORTEZA (sel. 20 g, n=5, fruto A): Viales zumo a -25ºC

M1, M7, M9, M10, M11, M12 (30 muestras). o Ácidos

2 Cilindros
o Textura
Congelar PULPA en N2 líquido;
almacenar a -80ºC para liofilizar

Figura 10. Ejemplo de diagrama de flujo seguido en la planta piloto de Tecnología

de Alimentos de la UPCT para el análisis de calidad y toma de muestras de NILs de
melón y sus parentales en la campaña 2009 (Dos-Santos, elaboración propia).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
112
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

7.5 Parámetros morfológicos.

El espesor de la corteza y de la pulpa en mm se midió en la zona ecuatorial de los

frutos con un calibre electrónico digital de 0-150 mm (Sesa Tools, S.A, Guipuzcoa,
España). Ambas variables permiten una estimación de la porción comestible de los
frutos de melón sin semillas.

7.6 Color de la pulpa y del zumo.

Se midió el color de la pulpa con un colorímetro (Minolta CR-300), según

metodología anteriormente descrita. Para medir el color del zumo recién exprimido se
empleó el accesorio CR-A70 (Osaka, Japón) y un tubo limpio de vidrio transparente
para colocar en dicho accesorio con un volumen de zumo mínimo para superar la
apertura de medición del mismo.

7.7 Firmeza de la Pulpa.

La firmeza de la pulpa (en N) se midió en cilindros de 20 mm de alto x 15 mm de

diámetro obtenidos con descorazonadores de manzana de acero inoxidable (según
metodología descrita en el apartado 6.6). Se eliminó cualquier inclinación de los
cilindros con ayuda de bisturís (similares a los de medicina) y se realizó un ensayo de
punción con una sonda de 1,6 mm TG83 (Ibertest) adaptada al equipo de textura (ELIB-
5K) con una célula de carga de 200 N. La precarga inicial fue de 1 N y el test de
punción del fruto llegó hasta punto de ruptura, fijándose un máximo en la carrera del
equipo suficiente para obtener el máximo (Fig. 11) pero evitando el llegar a niveles de
riesgo de deterioro del equipo por contacto del punzón con la placa inferior, aunque el
cilindro tenía 10 mm de largo. Este valor se fijaba en 4 mm lo que además reducía el
tiempo de análisis.

Figura 11. Representación gráfica de la firmeza de la pulpa en N de un fruto de una

NIL de melón de la campaña 2008. En el eje de ordenadas la fuerza en N, en el eje de
abscisas la deformación en mm.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
113
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

a b

Figura 12. a) Equipo de medición de textura ELIB-5K. b) Detalle de la sonda TG83

para medir la firmeza de la pulpa con punzón de 4,6 mm de diámetro montado sobre
una célula de carga calibrada de doble recorrido de 2 kN (0-200, 200-2000 N).

7.8 Jugosidad de la pulpa.

La jugosidad se obtuvo pesando una cantidad exacta de cilindros de pulpa (aprox. 60

g en 2006 y 200 g en 2008 y 2009) y el volumen de zumo obtenido con una balanza de
precisión (ST3100 Gram Precision). El zumo se obtuvo exprimiendo la pulpa con una
prensa manual de aluminio (Super Simplex) y filtrando con una gasa de cuatro capas
(75 × 75 mm) colocada sobre un embudo. El volumen final se pesó en un vaso de
precipitado de plástico previamente tarado. Los resultados se expresaron como
porcentaje resultante de dividir el peso del zumo por el peso total de la pulpa. El zumo
se guardó en viales de 12 mL (Deltalab) y de 1,5 mL (Eppendorf AG) a -25ºC (Liebherr
Premium no frost A++ GNP 3376) para posteriores análisis (densidad, jugosidad del
zumo, acidez titulable, azúcares, ácidos orgánicos, etc).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
114
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

7.9 Densidad del zumo.

La densidad del zumo se determinó pesando con balanza de precisión digital de

0,00001 g (BP 211D Sartorious, Goettingen, Alemania) un 1 mL de zumo previamente
descongelado y atemperado en baño de agua hasta a 20ºC medidos con termómetro
digital (Checktemp1 pocket Hanna Instruments).

7.10 Jugosidad del zumo.

La jugosidad se midió en 1,5 mL de zumo de melón almacenado a -25ºC en viales

Eppendorff previamente descongelados y atemperados a 20ºC. Se centrifugaron
(microcentrífuga 5415D Eppendorf AG, Hamburgo, Alemania) durante 20 min a 14000
rpm y se eliminó la fracción sobrenadante con ayuda de pipeta Pasteur. El peso (en
gramos) de los viales etiquetados (P1), los viales con zumo atemperado (P2) y los viales
centrifugados sin sobrenadante (P3) fue medido en una balanza de precisión (ST3100
Gram Precision). La jugosidad se expresó como porcentaje de jugo según la siguiente
ecuación: Jugosidad= ((P2 - P3)/(P2 - P1))·1000 g·kg-1

7.11 Materia seca.

El proceso de liofilización sobre muestras de pulpa de melón conservadas a -80ºC.

se llevo a cabo siguiendo metodología ampliamente descrita en Dos-Santos et al.
(2007). La pulpa se trituró dentro de las bolsas de almacenamiento (Nasco) con un
martillo de cabeza plástica Palmera (Herramientas Eurotools S.A., Vitoria, España). El
producto en polvo se vació sobre recipientes alimenticios de aluminio (Albal, Bilbao,
España; ITS, Apeldoorn, Holanda) de varias dimensiones (75 mm de diámetro superior
x 60 mm de diámetro inferior x 40 mm de altura; 74,3 x 50,4 x 51,05 y 60 x 45 x 45
mm). La liofilización se llevó a cabo en tandas de 50-60 muestras en la cámara de
refrigeración RC300 del liofilizador Supermodulyo (Thermo Savant, Thermo Electron
Corporation, Holbrook, NY, [Link]) dotada con una bomba de vacío VLP285 (Thermo
Savant) (alrededor de 2,4 kg de producto máximo por tanda, unos 2-2,2 kg de agua que
tras pasar a hielo es necesario sublimar máximo por tanda, más unos 0,1-0,2 kg por
escarchado del equipo al colocar las muestras).
El proceso comenzó con la colocación de las muestras y tres termopares de tipo E
(cromo/constantano) en los cuales se colocó un cilindro de melón del tipo ‘Piel de Sapo’
(previamente obtenido de melones comerciales) como referencia de las temperaturas del
refrigerador. La luz de la habitación permaneció apagada y la cámara se cubrió con

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
115
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

terciopelo negro fijado al lateral con Velcro® adhesivo para evitar la degradación de
compuestos sensibles a la luz. Una vez estabilizada la temperatura del producto
congelado en el equipo, se conectó la bomba de vacío. La temperatura del condensador
fue de -60ºC durante el proceso y tenía una capacidad de condensación de hielo según el
fabricante fue de 0,5 kg·h-1. El proceso de liofilización comenzó cuando las muestras en
la cámara de refrigeración adquirieron una temperatura de -35ºC, temperatura a la cual
se conectó la bomba de vacío para tener una presión de condensación que osciló entre
0,1 a 0,12 mbar y nunca sobre 0,1333 mbar (0,1 torr.). El proceso continuó conforme se
incrementaba gradualmente la temperatura de las bandejas de liofilización, siempre
tratando de tener un gradiente de temperatura entre estas y las muestras de 5ºC de
acuerdo con las instrucciones de Virtis (2008). El fluido de intercambio de calor de las
bandejas fue aceite de silicona Baysilone M5 (Swantek, Kendal, Cumbria, Inglaterra)
que permite variaciones de temperatura de ± 1ºC dentro de la cámara (Thermo) para
facilitar la salida del vapor de las muestras hacia el condensador. El proceso completo
por tanda tardó cerca de 7 días con una temperatura final de 20ºC, con cambio de
temperatura en un tiempo máximo tal que la muestra alcanza la temperatura de las
bandejas (hasta 3 días a veces).
Los recipientes con muestra fueron retirados inmediatamente del equipo para evitar
su rehidratación. El material liofilizado se pesó en balanza de precisión (ST3100 Gram
Precision) en bolsas con cierre zip (60 x 10, China) previamente taradas y etiquetas y se
almacenaron a -25ºC en contenedores herméticos (Rubbermaid Iberia S.A., Zaragoza,
España y Aramis, Cerdanyola del Vallés, Barcelona, España). La materia seca se
cálculo como sigue: 100-[(Peso Inicial - Peso final) / (Peso Inicial ×100].

7.12 Parámetros químicos.

7.12.1 pH

El pH del zumo se midió con un pHmetro portátil (Checker Hanna Instruments Ltd,
Leighton, UK) previamente calibrado con tampones de pH 4.0 y 7.0 (Crison
Instruments S.A, Alella, Barcelona, España) a 20ºC.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
116
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

7.12.2 Sólidos solubles totales.

El contenido en sólidos solubles totales (SST) (en ºBrix) se midió (previa

calibración con agua destilada) con un refractómetro manual a 20ºC (Atago N-1E,
Tokio, Japón) en la campaña 2006 y un refractómetro digital de mano (Pocket, Atago
PAL-1, Tokio, Japón) en las campañas 2008 y 2009.

7.12.3 Acidez titulable.

La acidez titulable (AT) se determinó en 5 mL de zumo diluido con agua destilada

hasta un volumen final de 40 mL. El zumo se descongeló y atemperó previamente hasta
20ºC en un baño de agua a temperatura ambiente durante 5 min. Se añadió NaOH
factorada 0,1 N hasta pH 8,1 con un valorador automático (Metrohm SwissMade
716DMS, Herisau, Suiza). Los resultados de AT se expresaron en mmol H+·L-1
(Fernández-Trujillo et al. 2005) y en porcentaje del ácido predominante, en este caso
ácido cítrico (para calcular la relación de dividir SST entre AT ó índice de madurez).

7.12.4 Azúcares.

Previamente al análisis de azúcares (y ácidos orgánicos), las muestras de zumo de

melón almacenado a -25ºC (Liebherr Premium no frost A++ GNP 3376) fueron
atemperadas a 20ºC en baño de agua y centrifugadas a 12000 rpm durante 15 min a 4ºC
en una centrífuga (modelo 5415D, Eppendorf) para eliminar la parte fibrosa. El
sobrenadante fue filtrado con filtros físicos Oasis™HLB (500 mg, 6 mL, Waters
Corporation, Milford, MA, [Link]) previa activación de los mismos y filtros químicos
no estériles de 0,45 µm de tamaño de poro y 13 mm Ø (Millex-HV PVDF Durapore
Millipore, Billerica, MA, [Link]).
El contenido en azúcares de las muestras de la campaña 2006 fue determinado por
cromatografía líquida de alta eficiencia (CLAE). La concentración de azúcar soluble fue
determinada en una alícuota de 15 µl de muestra empleando una columna de alto
rendimiento (4,6 x 250 mm) (Waters, [Link]) con un detector IR Mod 2414 (Waters,
[Link]), a una longitud de onda de 512 nm. El tiempo de corrida fue de 10 min con una
velocidad de flujo de 2 mL·min-1. Se empleó como fase móvil una solución de
Acetonitrilo (C2H3N) y agua mQ (conductividad 18 Ω·cm) en una combinación 80:20
v/v-isocrático. Los azúcares glucosa, fructosa y sacarosa se identificaron en
comparación con los tiempos de retención usando patrones externos (Sigma) desde 25 a
100000 ppm. Se verificó la ausencia de otros azucares como maltosa y lactosa. El peso

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
117
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

molecular de cada compuesto se empleó para transformar los resultados originales de la

composición µg·mL-1 de zumo fresco exprimido a µmol·g-1 de peso de fruto fresco
(Obando-Ulloa et al. 2009a). El dulzor fue calculado como equivalentes de sacarosa
(Saceq) según la fórmula Saceq=1×[Sacarosa]+ 0,74×[Glucosa] + 1,73×[Fructosa]
(Baldwin et al. 1998).
La composición de azúcares en zumo de melón de las muestras de las campañas
2008 y 2009 fue determinada por un sistema de cromatografía iónica (CI). Las muestras
se filtraron previamente según metodología descrita. Se inyectaron 10 µL de muestra
diluida 1:200 a 1:400 v/v de muestra en combinación con la fase móvil utilizada (NaOH
80 mM, preparada con agua desionizada ó agua DI H2O, tipo I, conductividad 18 Ω·cm
y previamente desgasificada). El equipo constó de un módulo cromatográfico con
detector PAD, válvula de inyección y termostatización Metrohm (871 Advanced
Bioscan, Metrohm AG, Herisau, Suiza), célula de detección Varicell (Metrohm) con
electrodo de trabajo en oro, bomba isocrática de alta presión para el canal PAD (818 IC,
Metrohm) y automuestreador automático (863 Compact Autosampler, Metrohm). El
flujo de trabajo fue de 0,9 mL·min-1 a 32 ± 0,1ºC y una presión de 10 Mpa. Se
emplearon columnas Metrohm específicas para la determinación de carbohidratos
Metrosep Carb 1-150 (150 x 4 mm) y Metrosep Carb 1-250 (250 x 4,6 mm), con
guardacolumna Metrosep Carb1 Guard. El uso de dos columnas optimiza una mejor
separación de la glucosa y la galactosa sí esta aparece. Se usaron patrones externos de
glucosa, fructosa, xilosa y sacarosa (Sigma) desde 100 a 1000 ppm para la
cuantificación de los azúcares. Bajo condiciones estándar, el límite de detección para
estos azúcares fue de 0,02-0,1 mg·L-1 (ppm). Se verifico la ausencia de otros azucares
como ramnosa, arabinosa y galactosa. El peso molecular de cada compuesto se empleó
para transformar los resultados originales según Obando-Ulloa et al. (2009). El dulzor
fue calculado como equivalentes de sacarosa (Saceq) según la fórmula de Baldwin et al.
(1998).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
118
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

Figura 13. Sistema Metrohm de cromatografía iónica con cuatro canales de

separación. Equipo localizado en el Servicio de Apoyo de Investigación Tecnológica
(SAIT) de la UPCT.

7.12.5 Ácidos orgánicos.

La composición de ácidos orgánicos de las muestras de la campaña 2006 fue

determinada en pulpa liofilizada de melón previa extracción de los mismos.
El proceso de extracción ha sido ampliamente descrito en Dos-Santos et al. (2007).
Se tomó 1 g de tejido y se pesó en tubos de centrífuga de 15 mL de polietileno
(Beckman Instruments, Inc. Fullerton, CA, [Link]) con una balanza de precisión digital
(BP211D Sartorious). Se añadieron 10 mL de fase móvil refrigerada a 4ºC mediante
pipeta dosificadora automática digital de 2,5 a 25 mL (Brand GMBH+CO KG,
Wertheim, Alemania). La fase móvil fue una solución de KH2PO4 50 mM (Panreac,
Montcada, Barcelona, España), a pH 3,0 con ácido sulfúrico (pureza 96%, Panreac), en
combinación de agua mQ y metanol (99:1 v/v) de calidad para CLAE (Labscan Ltd,
Dublin, Irlanda). La fase móvil fue previamente filtrada con membrana amicón de 35
µm y desgasificada durante 15 min con un sistema de ultrasonidos (Ultrasons, Selecta,
Barcelona, España). La gradilla de muestras se introdujo en un recipiente de poliuretano
hermético (Komax, Biokips, Corea), con hielo para su homogeinización y se colocó en
un agitador (Orbital SSL1 Stuart, Barloworld Scientific Limited, Staffordshire, UK) a
800 rpm (1710 gn) durante 30 min. Se trabajó en una cámara a 8ºC con la luz apagada.
A continuación los tubos se centrifugaron a 18000 rpm (38465 gn) durante 15 min a 4ºC
en centrífuga (Avanti J25, Beckman) con rotor de 24 tubos de capacidad (tipo JA25.1,
Beckman) previamente equilibrados. En caso de observar una capa fibrosa en la

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
119
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

superficie del sobrenadante se retiró manualmente con la punta de una pipeta Pasteur.
Posteriormente se tomó 1 mL de muestra y se filtró según metodología descrita con
filtros físicos (Oasis HLB Waters Corporation) y filtros químicos (Millex, Millipore).
Los viales Eppendorf se almacenaron a -25ºC en un congelador (Liebherr Premium no
frost A++ GNP 3376) hasta posterior análisis por CLAE. Posteriormente se prepararon
viales de tapón roscado con agujero CC-8-SC (Chromacol LTD, Trumbull, CT, [Link])
con 1 mL de muestra y se procedió a su análisis.

Proceso de liofilización
Proceso
Tandasdedeliofilización
± 60 muestras
Tandas de ± 60 muestras El proceso se lleva a cabo con
iluminación fluorescente y
manteniendo muestras en hielo

Moldes con 35-40 g de pulpa de

melón
E
X
T Homegenizar en un agitador con hielo.
Homegenizar en un30agitador
8000 rpm durante min. con hielo.
R
8000 rpm durante 30 min.
A
C
C 1 g pulpa liofilizada
I
Ó + 10 mL Fase Móvil
N Centrifugar a 18,000 rpm (38465 gn).
Centrifugar a 18,000 rpm (38465 gn).
15 min a 4ºC
15 min a 4ºC
Retirar capa fibrosa
Tomar 1 mL (x4) de
extracto
Batería 24 muestras
Recoger en Eppendorf
Gradilla con tubos de centrífuga sobre recipiente
Gradilla 48 Eppendorf en hielo
con hielo
Filtrar Tandas de 24-28 viales

Almacenar a -25ºC
Tomar 1 mL (x4) de extracto
1

27
Figura 14. Proceso de extracción de ácidos orgánicos en muestras de pulpa
liofilizada de melón para posterior análisis por cromatografía iónica de alta eficiencia
(Dos-Santos et al. 2007).

Se inyectó una alícuota de 10 µL de muestra en un sistema CLAE de cuatro canales

(Merck KgaA, Darmstadt, Alemania). Se empleó una columna de 4 x 250 mm con un
tamaño de partícula de 5 µm (Lichrospher, 60RP SelectB Merck KGaA, Darmstadt,
Alemania). La presión de trabajo fue 45 kg·cm-2 y la temperatura de la columna de 30ºC
con un flujo de 0,3 mL·min-1. El tiempo de corrida fue de 50 min a una longitud de onda
de 210 nm. Los ácidos orgánicos succínico, fumárico, glutámico, cítrico, isocítrico,
ascórbico, láctico, pantoténico, oxalacético, oxálico, aspártico, quínico y DL-málico se
identificaron por comparación de los tiempos de retención con los patrones desde 0,04 a

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
120
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

145,82 mmol·L-1 (8,20 a 19,93 ppm) (Merck KgaA, Darmstadt, Alemania y Sigma-
Aldrich Corporate, St. Louis, Mo, [Link]) (Dos Santos et al. 2007).
La composición de ácidos orgánicos de las campañas 2008 y 2009 fue determinada
en zumo de melón mediante dos métodos (I y II) en un equipo CLAE. Se emplearon dos
métodos para evitar los problemas derivados de la coelución de picos ó límites de
detección del equipo.
Método I: Se inyectó una alícuota de 10 µL de una disolución 1:10 v/v (a veces
1:20) de muestra en combinación con agua desionizada ó agua DI H2O. Se trabajó con
una columna REZEX ROA Organic Acid (300 x 7,8 mm, Phenomenex Inc, CA,
[Link]) con precolumna a Tª ambiente (AJO-4490-S, Phenomenex Inc). La fase móvil
utilizada fue H2SO4 0,005 N a un flujo de trabajo de 0,5 mL·min-1. La temperatura de
las muestras fue de 5ºC y se leyeron una longitud de onda de 210 nm. Se empleó un
detector de matriz de fotodiodos de 190 a 400 nm (modelo 2996, Waters) conectado a
un CLAE (Alliance 2695, Waters). Los ácidos orgánicos oxálico, cítrico, tartárico,
ascórbico, succínico y fumárico, se identificaron por comparación con los tiempos de
retención usando patrones externos desde 50 a 500 mg·L-1 (ppm) (Sigma-Aldrich
Chemical Co., Madrid, España). Bajo condiciones estándar, el límite de detección para
estos ácidos fue de 0,046-789,39 mg·L-1 (ppm) (factor de dilución x10 ó x20). El peso
molecular de cada compuesto se empleó para transformar los resultados originales de la
composición µ g·mL-1 de zumo fresco exprimido a µ mol·g-1 de peso de fruto fresco
(Obando-Ulloa et al. 2009a).
Método II: Se inyectó una alícuota de 10 µL de una disolución 1:10 de muestra en
combinación con agua desionizada. Se trabajó con una columna LUNA C18 (5 µm, 250
x 4,6 mm, Phenomenex Inc) con precolumna a Tª ambiente (AJO-4287-S, Phenomenex
Inc). La fase móvil empleada fue agua desionizada en combinación de metanol y ácido
trifluoroacético 97,7:2.2:0,1 v/v/v con un flujo de 0,7 mL·min-1. Las muestras a 5ºC se
leyeron a 210 nm usando un detector de matriz de fotodiodos de 190 a 400 nm (modelo
2996, Waters) conectado a un CLAE (Alliance 2695, Waters). Los ácidos orgánicos
málico, láctico y pantoténico se identificaron por comparación con los tiempos de
retención usando patrones externos desde 50 a 1.000 mg·L-1 (ppm) (Sigma-Aldrich
Chemical Co). Bajo condiciones estándar, el límite de detección para estos ácidos fue de
0,700-2187,040 mg·L-1 (ppm) (factor de dilución x10).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
121
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

Figura 15. Cromatógrafo líquido de alta eficiência (Waters Alliance 2695). Equipo
localizado en el Servicio de Apoyo a la Investigación Tecnológica (SAIT-UPCT).

7.12.6. Compuestos volátiles.

[Link] Determinación de compuestos volátiles en zumo.

Las muestras se tomaron de los viales almacenados a -80ºC de 12 y 5 mL (Deltalab)

de zumo con cloruro cálcico saturado preparados según la metodología descrita
anteriormente (véase apartado 7.3).
La metodología para la determinación de compuestos volátiles en zumo ha sido
ampliamente detallada en Dos-Santos et al. 2013 (véase apartado 2.4, capítulo 5). La
composición en aromas volátiles del zumo de melón fue determinada por cromatografía
de gases-masas (CG-MS) (Muriel et al. 2004; Obando-Ulloa et al. 2008). Se empleó un
cromatógrafo gases HP 6890N GC series II (Hewlett-Packard, Agilent Technologies
Inc, Palo Alto, CA, [Link]) acoplado a un detector de masas HP 5975 MSD con un
cuadrupolo hiperbólico monobloque recubierto de oro y detector multiplicador de
electrones dínodo de alta energía (HED) (Hewlett-Packard). Para las muestras de las
campañas 2008 y 2009 se aplicó además un sistema de bloqueo del tiempo de retención
(RTL) fijando una presión constante de trabajo en el equipo de cromatografía y
calibrando el tiempo de retención del patrón interno a 18,5 min. Con esto se consiguió
que los tiempos de retención de los compuestos que eluyeron para una misma columna
y metodología de análisis de CG-MS fueran los mismos.
Los viales con muestras de zumo de melón se atemperaron en un baño de agua a
35ºC durante 15 min y tenían un volumen total de 10 mL a diferencia de otros métodos
(Obando-Ulloa et al. 2008) donde se habían usado viales del doble de volumen. Una

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
122
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

alícuota de de 2,32 mL de muestra se introdujo en viales de cristal de 10 mL para SPME

(Cooler VT-32, Gerstel, Alemania). Como patrón interno se añadieron 10 µL fenil etil
alcohol 0,01% v/v (preparado con agua desionizada ó tipo I) previamente atemperado,
(muestras de 2006) y 20 µL de fenil etil alcohol al 0,05% v/v (muestras de 2008 y
2009). Los viales se agitaron manualmente y se taparon con tapones magnéticos
metálicos de encapsulado (Gerstel) con septums de silicona (Alltech Associates, Inc.,
Deerfield, IL, [Link]). Se cerraron herméticamente con encapsulador. Una tanda de
muestras se colocó en el portamuestras para su análisis y el resto se conservaron en
refrigeración a 4ºC y se añadieron paulatinamente para su análisis puesto que tenían una
vida útil limitada a temperatura ambiente de 12 h. Previamente al análisis, la fibra
SPME de 1 cm de largo con 50-30 µm de divinilbenceno/carboxeno sobre revestimiento
de polidimetilsiloxano (57329-U, DVB/CarboxenTM/PDMS Stable FlexTM Fiber,
Supelco, Bellefonte, PA, [Link]) fue acondicionada a 250ºC durante una 1 h mediante
introducción en el injector a la profundidad suficiente. Los compuestos volátiles fueron
separados con una columna capilar HP-5MS (Agilent 19091S-433) de 30 m x 250 µm y
un tamaño de partícula de 0,25 µm, conteniendo fenil metil siloxano al 5% como fase
estacionaria. El tiempo de incubación de las muestras fue de 2 h a una temperatura de
35ºC para la formación del espacio de cabeza. La aguja penetraba 22 mm (muestras
2006) y 21 mm (muestras 2008 y 2009) en el espacio de cabeza del vial y se mantenía
30 min a 35ºC absorbiendo los volátiles. Tras la extracción, tuvo lugar la desorción de
los compuestos de la fibra en el inyector del cromatógrafo de gases 6890N. El tiempo
de desorción fue de 3 min.
Para las muestras 2006 se fijaron los siguientes parámetros: El inyector operó en
modo splitless con una temperatura inicial de 280ºC. La presión fue de 79,427 KPa
(11,53 psi), y un flujo total de 54,4 mL·min-1. El gas portador fue helio con un flujo de
1,5 mL·min-1. La temperatura del horno fue de 35ºC, seguida de una rampa de 2ºC·min-1
hasta 75ºC, y luego a 50ºC·min-1 hasta alcanzar una temperatura final de 250ºC que se
mantuvo durante 5 min. Se empleó una camisa (liner) de entrada de cristal
(SPME/direct, Supelco) de 78,5 mm × 6,5 mm × 0,75 mm de diámetro interno. La
temperatura del detector fue de 230ºC. El tiempo de análisis captando datos para el
cromatograma fue de 27,5 min, con un tiempo total de 50-55 min por muestra. Los
espectros de masas se obtuvieron mediante ionización electrónica a 70 eV y un rango de
espectros de 40-450 m/z.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
123
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

Para las muestras 2008 y 2009 los parámetros fueron los que siguen: El inyector
operó en modo splitless con una temperatura inicial de 260ºC. Se trabajó a presión
constante de 92,53 kPa (13,43 psi) y un flujo total de 44,5 mL·min-1. El gas portador fue
helio con un flujo de 1,7 mL·min-1. La temperatura del horno fue de 35ºC, seguida de
una rampa de 2ºC·min-1 hasta 75ºC, y luego a 50ºC ·min-1 hasta alcanzar una
temperatura final de 200ºC que se mantuvo durante 5 min. El tiempo de equilibrio fue
de 0,5 min con un tiempo de enfriado de 0,10 min. Se empleó una camisa de entrada de
cristal (SPME/direct. Supelco) de 78,5 mm × 6,5 mm × 0,75 mm de diámetro interno.
La temperatura del detector fue de 260ºC. El tiempo de análisis captando datos para el
cromatograma fue de 27,5 min, con un tiempo total de 37,5 min por muestra. Los
espectros de masas se obtuvieron mediante ionización electrónica a 94 eV y un rango de
espectros de 40-450 m/z durante 30 min.
La metodología para la identificación de los compuestos volátiles en zumo ha sido
ampliamente detallada en Dos-Santos et al. 2013 (véase apartado 2.4, capítulo 5). Los
cromatogramas y los espectros de masas fueron evaluados usando el software
ChemStation (G1701DA D.02.00.275, Agilent Technologies Inc. [Link]). Los
compuestos volátiles se identificaron tentativamente por comparación de sus espectros
de masas obtenidos con el espectrómetro de masas (5973 Network Mass Selective
Detector, Agilent Technol.) acoplado al cromatógrafo de gases, con aquellos incluidos
en banco de datos del Instituto Nacional de Estándares y Tecnología (NIST05a.L,
versión de búsqueda 2.0 y por comparación con los tiempos de retención linear (LRI) ó
índices de Kovats recogidos en la literatura (véase tabla 3 y tabla suplementaria 1,
capítulo 5) o en la base de datos NIST ([Link]
Se obtuvieron los números CAS (Chemical Abstracts Service) de los volátiles de de
la base de datos NIST05a.L de la Chemstation y de diversas fuentes de información
(véase tabla 3 y tabla suplementaria 1, capítulo 5). Los compuestos fueron nombrados
según nomenclatura de la International Union of Pure and Applied Chemistry (IUPAC).
Los volátiles fueron clasificados en diez clases de compuestos (ácidos, alcanos,
alcoholes, aldehídos, cetonas, compuestos derivados del azufre, ésteres acetato, ésteres
no acetato, otros, terpenos) y todas las áreas de los compuestos se añadieron a la clase
correspondiente y los porcentajes se basaron en el área total de los compuestos
identificados.
Para los compuestos volátiles individuales, el área de cada compuesto se normalizó
de acuerdo con el estándar interno y los resultados se expresaron como porcentaje del

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
124
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

área normalizada de cada compuesto dividido por recuento de área total de los
compuestos identificados.
Se descartaron las variables que representaron compuestos volátiles con una
presencia por debajo del 25% de los frutos y del 50% de las réplicas analizadas en todas
las líneas de melón. Los compuestos volátiles tales como derivados de silanos y
siloxanos, o compuestos orgánicos volátiles asociados con la contaminación, la
composición del plástico de los viales, y la fibra del equipo se descartaron.
Se incluyeron las notas aromáticas descriptivas de los compuestos volátiles y que
fueron obtenidas de diversas bases de datos (Pherobase, The Good Scent Company
Database y Flavornet and Human Odor Space, principalmente) y de una exhaustiva
revisión bibliográfica. Del mismo modo, los principales precursores implicados en la
síntesis de los compuestos volátiles aromáticos identificados y sus metabolismos han
sido descritos procedente de numerosas fuentes bibliográficas (véase tabla 3 y tabla
suplementaria 1, capítulo 5).

Figura 16. a) Cromatógrafo de gases 6890N de Agilent. b) Detalle del

portamuestras. Equipo localizado en el SAIT-UPCT.

[Link] Determinación de compuestos volátiles en fruto entero.

En las campañas 2008 y 2009 se llevaron a cabo sendos experimentos para medir la
evolución de la composición aromática con el tiempo en frutos enteros de melón. Se
emplearon tres genotipos de melón (parentales y una NIL climatérica) con tres
repeticiones por genotipo de fruta y una sola réplica.
La metodología ha sido descrita en Fernández-Trujillo et al. 2010. Las muestras se
tomaron el día de la cosecha (día 0) y tras varios días a 20ºC y 95% HR. El fruto entero
de melón se colocó en contenedores herméticos de 5283 cm3 de volumen libre exacto

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
125
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

(nominal 5 L), 180 mm de diámetro y 245 cm de alto (Sunbox Distribución SL,

Granollers, Barcelona). Se emplearon barras Gerstel PDMS de 0,5 mm de espesor, 10
mm de longitud y 24 µL de volumen (Gertsel GmbH, Mülheim y der Ruhr, Alemania)
previamente acondicionadas en tubos Gerstel limpios de desorción térmica a 300°C y
53,8 mL·min-1 de flujo de helio durante 1 h. El acondicionamiento se realizó en tandas
de seis barras y se emplearon unas sesenta barras por experimento. Las barras fueron
adheridas magnéticamente con pinzas (Gerstel) en la parte interna superior del
recipiente hermético durante 1 h. Para evitar cualquier transferencia de aromas la
manipulación de las barras con las pinzas se realizó siempre con guantes. Transcurrido
este tiempo, las barras se retiraron con las pinzas y fueron devueltas a sus viales
originales, etiquetados y almacenados en bolsas ZIP, dentro de contenedores de plástico
herméticos (Curver Rodex SA Zaragoza, España) que contenían sílica gel. Las barras se
guardaron a 4ºC durante tres meses antes de la transferencia a un tubo de desorción
térmica para el análisis de GC-MS según metodología derivada de Raffo et al. (2008).
Los parámetros de ajuste y puesta a punto del método y la regeneración de la barras se
hicieron según las recomendaciones de Gerstel. Las barras con aromas se introdujeron
automáticamente en el dispositivo de desorción térmica (UDT), para ser desorbidas en
splitless pero con un flujo de desorción alto en el liner (de Gerstel CIS4/Unidad de
desorción de barras rellena de lana de cuarzo desactivada) del portal de inyección con
temperatura programable (PTV) donde los analitos fueron atrapados criogénicamente
antes de la posterior detección de los compuestos orgánicos adsorbidos en el
recubrimiento de PDMS por el GC-MS.
Los análisis se realizaron en un cromatógrafo de gases 6890 (Agilent Technologies),
equipado con un sistema de enfriado de inyección (CIS4 PTV inyector) GERSTEL
(Gerstel GmbH & Co. KG, Mülheim y der Ruhr, Alemania) y un muestreador MPS 2
(GERSTELMultiPurpose) con la opción de una unidad de UDT (GERSTEL Twister) y
un detector selectivo de masas 5975 (Agilent Technol.).
Se utilizó helio de grado cromatográfico como gas portador. Para la UDT los
parámetros utilizados fueron los siguientes: para el programa de desorción de 40 a
250ºC (5 min) a 300ºC·min-1; volumen del gas portador 45 mL·min-1. La configuración
de la UDT fue en modo splitless con una temperatura de transferencia fija de 300ºC y el
modo de muestra estándar. La entrada trasera (CIS4) trabajó en modo de ventilación de
solvente a una temperatura inicial de 250ºC, 8,60 psi de presión, flujo de solvente 50
mL·min-1, presión de ventilación de 7,25 psi, flujo de purga 9,2 mL·min-1 y un flujo

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
126
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

total de 13,3 mL·min-1. Los parámetros de refrigeración criogénica fueron; enfriamiento

del PTV a -100ºC con un tiempo de equilibrado con nitrógeno líquido de 0,5 min, 0,1
min de tiempo de enfriamiento y 30 min de tiempo de espera criogénica. El programa de
temperatura de refrigeración criogénica fue como sigue; la temperatura de inyección
alcanzó los 250ºC a 10 ºC·s-1, y un tiempo de espera de 3 min. Se empleó una columna
capilar ultra inerte HP-5MS (Agilent Technol.) (0,25 mm x 30 m de largo x 0,25 µm).
Las condiciones cromatográficas fueron las siguientes: Retraso del solvente de 0,10
min; modo split (10:1); programa de temperatura del horno con un tiempo de equilibrio
de 0,50 min y una rampa de 60ºC a 240ºC a 3ºC·min-1. Se evitaron las altas
temperaturas del horno para evitar el deterioro de la columna. La columna operó a
presión constante a 7,25 psi, con un flujo nominal inicial de 0,9 mL·min-1 y una
velocidad promedio de 35 cm·s-1.
Los cromatogramas y espectros de masas fueron evaluados utilizando el software
ChemStation (G1701DA, Agilent) según la metodología descrita en el análisis de
aromas en zumo de melón. La línea de transferencia, la fuente, y las temperaturas
cuadrupolo se establecieron, respectivamente, a 280, 230 y 150ºC.
Los espectros de masas fueron analizados en el rango de 30-400 m/z amu durante 60
min. La tasa de adquisición fue de cuatro scan·s-1. Las identificaciones se llevaron a
cabo mediante la comparación de los índices de retención lineal (LRI) (calculado en
relación con una serie homóloga de n-hidrocarburos) y los espectros de masas de la IE
con datos publicados, o con datos de compuestos auténticos (de Sigma-Aldrich). La
cuantificación de los picos identificados se llevó a cabo en el modo de escaneo
completo y se determinó si el área del pico fue de alrededor de 3 veces la línea de base.
Solo se consideraron los compuestos reportados que tuvieron una calidad de
identificación de espectro mayor de 60% en la base de datos de integración NIST. Para
suprimir los compuestos no asociados a aroma de melón, se realizó una búsqueda
profunda en la literatura y en internet. Los niveles de los compuestos volátiles se
expresaron en porcentaje de la superficie total registrada en cada cromatograma y los
datos se promediaron.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
127
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

a b

Recipiente metálico Guantes

barra

Cierre hermético
Tapa metálica
Pinzas
Caja de viales con barras

Bolsas con cierre zip

Figura 17. a) Material necesario para la toma de muestras de aromas en fruto entero
de melón. b) Detalle de un vial portando una barra (twister) para la absorción aromas.

Figura 18. Twisters™ de un cm de largo recubierto de PMD (Imagen proporcionada

por GERSTEL, Inc) (Skogerson et al. 2011).

8. Parámetros fisiológicos.

8.1 Tasa respiratoria y producción de etileno.

La tasa respiratoria (CO2) y la producción de etileno (C2H4) se midió en frutos

individuales utilizando contenedores herméticos de volumen 10,4 L (ERZ-10 Repli
S.L., Rubí, Barcelona) en 2006, y 5 L (180 mm diámetro x 245 cm altura (Sunbox
Distribution SL, Granollers, Barcelona, España) en 2008 y 2009, previamente
calibrados con agua destilada. Se midió el peso y la densidad de de cada fruto según
metodología anteriormente descrita. Otros contenedores de diferentes volúmenes (entre
1 y 4 L) se emplearon dependiendo del tamaño del fruto. Las tapas de los contenedores
tenían dos carriles de pared hermética de 14,73 mm Ø x 20,85 mm largo provistos de
dos caños de ¾ de pulgada donde se adjuntó un tubo interior de silicona de 0,210 mm
de diámetro (0,311 cm Ø externo, 0,21 cm Ø interno). Cada tubo tenía dos llaves de
paso (Discofix-3, B, Braun Melsungen AG, Suiza), que fueron cerradas herméticamente
tras poner la tapa. Las muestras de gas fueron tomadas por tabiques situados en estas

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
128
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

llaves de paso. Se midió la producción de etileno de cada fruto después de al menos 30

min dentro un contenedor a 18,6 ±1,1ºC. Este tiempo fue fijado por ensayos
preliminares para evitar el efecto inhibitorio del CO2 sobre la producción de etileno tras
una hora o más de acumulación en el que el C2H4 ya no era detectable. Los frutos se
dejaban acumulando gas dentro de los contenedores hasta alcanzar una concentración
mínima del 0,25% y máxima de 0,5% de CO2. Transcurrido el tiempo correspondiente,
30 min para C2H4 y entre 1,5 y 4 h para CO2 (en función de la NIL y del espacio de
cabeza de los contenedores) se tomaban dos muestras de 1 mL de gas con una jeringa de
un mililitro (Tenemo, Lovaina, Bélgica) para el análisis del espacio de cabeza. Las
jeringas se pinchaban inmediatamente sobre una tapa de goma sintética para evitar
pérdidas y a continuación 0,5 mL de muestra fueron inyectados en el cromatógrafo de
gases correspondiente.
La tasa de producción de etileno (C2H4) en 2006 y 2008 se midió en un
cromatógrafo de gases (Thermo Trace Gas 2000, Ródano, Milán, Italia) conectado a un
ordenador bajo sistema operativo Windows 98 con software Thermo (Chrom-Card 32-
bit, Trace OCX, versión 4.2). El equipo constaba de un detector FID, un inyector split-
splitless y una columna capilar (GS-Q de 30 m × 0,530 mm, J&W Scientific, Agilent
Technologies Inc., [Link]). El volumen de inyección fue de 1 uL. La temperatura del
horno fue de 60ºC durante 2,2 min y luego se incrementó hasta 80ºC con una rampa de
80ºC·min-1. El tiempo de equilibrio fue de 0,5 min con una presión de 10,15 psi (70
Kpa). La temperatura del detector FID fue de 250ºC y la temperatura de entrada de
200ºC. El cromatógrafo de gases operó en modo split con un flujo de 90 mL·min-1
(relación de split de 15 en 2006 y 10 en 2008). Se trabajó con un flujo de gases
constante de 6 mL·min-1 como resultado de una mezcla de aire sintético (350 mL·min-1),
H2 (35 mL·min-1), N2 (gas inerte) (30 mL·min-1) y He (4 mL·min-1 en 2006 y 12
mL·min-1 en 2008). El rango de señal fue de 1. El tiempo medio de análisis fue 2,5 min.
En 2009 se la tasa de producción de etileno se midió en un cromatógrafo de gases
(Agilent 7890A GC System, Agilent Technologies Inc., [Link]) conectado a un
ordenador bajo sistema operativo Windows Vista con software de Agilent (Agilent
Chemstation Rev. B.03.02, [Link]). El equipo constaba de un detector FID, un inyector
split-splitless y una columna capilar (GS-Q de 30 m × 0,530 mm, J&W Scientific,
Agilent Technologies Inc., [Link]). El volumen de inyección fue de 1 uL. La
temperatura del horno fue de 60ºC durante 1,25 min y luego se incrementó hasta 80ºC
con una rampa de 80ºC·min-1 y 0,5 min de tiempo de equilibrio del horno. La presión

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
129
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

fue de 10 psi. La temperatura del detector FID fue de 250ºC con un flujo constante de
gases resultado de una mezcla de aire sintético (350 mL·min-1), H2 (35 mL·min-1), N2
(gas inerte) (30 mL·min-1). La temperatura de entrada fue de 200ºC con una presión de
10,385 psi. El cromatógrafo de gases operó en modo split con un flujo de 160 mL·min-1
(relación de split de 10). El gas portador fue helio con un flujo de 16 mL·min-1. El
tiempo medio de análisis fue 1,5 min. La señal FID fue de 50 Hz/.004 min.
En todas las campañas se usaron septums de 17 mm de silicona (BTO, Teknokroma,
Barcelona, España) y se e cambiaron aproximadamente cada 30 pinchazos o cuando fue
necesario (una obstrucción en la jeringa indicaba la necesidad de cambiarlos).
La tasa respiratoria (CO2) se midió (en 2006, 2008 y 2009) con dos cromatógrafos
Thermo Trace GC 2000 (Ródano, Milán, Italia) con detector TCD y columnas de
relleno de 2 m de longitud (Porapak N 80/100, Agilent J&W, [Link]). Las condiciones
de trabajo fueron 100ºC de temperatura del horno durante tres min y unas condiciones
post corrida de 160ºC durante 0,5 m con una presión de 10,15 psi (70 Kpa). La
temperatura del inyector y del detector TCD fue de 150ºC. El flujo portador fue
constante (20 mL·min-1) y consistió en 10 mL·min-1 de N2 como gas inerte y 30
mL·min-1 de He como referencia. El rango de señal fue de 1. El tiempo total de análisis
fue 1,8 min con un tiempo máximo de equilibrado del horno de 0,4 min. Se emplearon
septums de teflón (CC-12-ST2/P, Teknokroma) que se cambiaron diariamente o cuando
fue necesario.
Cada día y tras el equilibrado de los cromatógrafos se pincharon al menos dos
estándares de CO2, O2 y C2H4 de 2 ±0,04%, 10 ±0,1% y 1 ±0,1 ppm, respectivamente
(Air Liquide, Murcia), para verificar la calibración de las columnas. El coeficiente de
variación fue sobre 7% para CO2 y 4,9% para C2H4 con un límite de detección de 0,04
ppm para etileno y 0,05% para la tasa respiratoria. Este método permitió detectar
niveles de etileno de hasta 0,025 µL C2H4·kg-1 fruta.
Los cálculos de la tasa respiratoria (mg de CO2·Kg-1·h-1) y de la producción de
etileno (µL de C2H4· Kg-1·h-1) fueron calculados según método estático de (Kader 2000)
y programados en una hoja de cálculo en Microsoft Excel® 2000 (Fernández-Trujillo,
no publicado). El peso y la densidad del fruto, el tiempo de permanencia en el
contenedor hermético, la temperatura, el factor del gas, el área del cromatograma y la
presión atmosférica (760 mm para Cartagena) fueron los datos necesarios para el
cálculo.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
130
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

9. Análisis estadístico.

La metodología del análisis estadístico ha sido ampliamente detalla en Dos-Santos

et al. 2013 (véase apartado 2.5, capítulo 5). Los resultados fueros sometidos a
numerosos análisis estadísticos univariante y multivariante en el entorno del software
libre R versión 2.14.1 (2011-12-22) (R Foundation for Statistical Computing, Viena,
Austria) y los paquetes FactoMineR (Husson et al. 2012), caret (Kuhn 2013) y
randomForest (Liaw y Wiener, 2002) para análisis de componentes principales (PCA),
análisis discriminante de mínimos cuadrados parciales (PLS-DA) y random forest (RF)
respectivamente.
Todos los compuestos volátiles para cada línea de melón se sometieron a análisis
exploratorio de datos para detectar posibles valores atípicos o anómalos utilizando
gráficos de caja-bigote y también gráficos de probabilidad normal para detectar
posibles desviaciones de la normalidad. En el caso de ser necesario, se utilizó la familia
Box-Cox de transformaciones para estimar las transformaciones de la normalización de
cada variable univariante. Esta transformación se hizo para obtener residuos a partir del
análisis de la varianza (ANOVA) lo más cerca a la distribución normal como sea
posible (Box y Cox, 1964). Con el fin de aplicar este tipo de transformación en los casos
con valores cero en los datos de entrada, se añade una constante para todos los datos
observados.
Se realizó un ANOVA de una vía con el factor línea (ej. PS o SC7-1, etc). También
se aplicó el test de tasa de falso descubrimiento (FDR) (Benjamini y Hochberg, 1995)
para corregir los valores de P primos para la prueba múltiple. Cuando la línea fue
significativa para P ≤ 0.05, el mapeo de QTLs se llevó a cabo de acuerdo con Obando
et al. (2008) mediante el establecimiento de diferencias significativas entre PS y cada
NIL o línea según la prueba de Dunnett en P = 0,05. Los QTLs fueron mapeadas en la
región LG previamente flanqueado por los marcadores moleculares (Eduardo et al.
2005).

Con el fin de aplicar diferentes análisis estadísticos multivariante para las variables
volátiles individuales, los valores cero se sustituyen por el valor distinto de cero mínimo
observado en el conjunto de datos y se realizó una transformación logarítmica (base 2)
(Mathieu et al. 2009). Se utilizó PCA para un análisis descriptivo con el fin de
determinar la estructura de los datos y detectar los datos de valores atípicos. Otras
técnicas multivariante y métodos de clasificación empleados fueron PLS-DA y RF.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
131
 CAPÍTULO II
MATERIAL Y MÉTODOS

Estos métodos de clasificación son enfoques bien establecidos para manejar conjuntos
de datos de grandes dimensiones y proporcionar las variables de medida de importancia
para determinar la contribución de los compuestos volátiles aromáticos en la
clasificación. Para PLS-DA, se examinó un total de dos componentes y cuatro criterios
para medir la influencia de los compuestos volátiles de aroma en la clasificación. El
primer criterio selecciona los volátiles más discriminantes según las dos primeras
componentes (más del 50% de variabilidad explicada es decir, la distancia desde el
origen superior a 0,7). Estas variables son importantes para describir la variabilidad en
el conjunto de datos (Obando-Ulloa et al. 2008). El segundo criterio fue importancia de
la variable en la proyección de puntuaciones (VIP) superior a un determinado umbral.
El tercer criterio, importancia de las variables en la medida (VIM), se calculó sobre la
base de sumas ponderadas de los coeficientes de regresión absoluta, donde los pesos son
una función de la reducción de las sumas de cuadrados a través del número de
componentes PLS. Por último, el cuarto criterio consiste en la selección de los
principales compuestos que muestran pesos de carga absolutos superior a uno de los dos
componentes PLS-DA (Quintás et al. 2012).
RF es un método de clasificación basado en una colección de árboles de decisión
utilizando muestras del conjunto de datos aplicable a un gran número de variables de
entrada. El análisis de RF proporciona dos medidas de importancia variable útil para
cuantificar la contribución relativa de cada variable a la clasificación (Liaw y Wiener,
2002). El primero (RF1), se basó en descensos medios en la precisión y el segundo
(RF2), se basó en el descenso de las medias en el índice de Gini. El escalamiento
multidimensional (MDS) se utiliza para visualizar la disimilitud RF gráficamente.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
132
 CAPÍTULO III
DIFERENCIAS AROMÁTICAS ENTRE MELONES CLIMATÉRICOS DE DOS TIPOS Y NO
CLIMATÉRICOS DEL TIPO ‘PIEL DE SAPO’

CAPÍTULO III
DIFERENCIAS AROMÁTICAS ENTRE
MELONES CLIMATÉRICOS DE DOS TIPOS Y
NO CLIMATÉRICOS DEL TIPO ‘PIEL DE
SAPO’

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
133
 CAPÍTULO III
DIFERENCIAS AROMÁTICAS ENTRE MELONES CLIMATÉRICOS DE DOS TIPOS Y NO
CLIMATÉRICOS DEL TIPO ‘PIEL DE SAPO’

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
134
 CAPÍTULO III
DIFERENCIAS AROMÁTICAS ENTRE MELONES CLIMATÉRICOS DE DOS TIPOS Y NO
CLIMATÉRICOS DEL TIPO ‘PIEL DE SAPO’

Diferencias Aromáticas entre Melones Climatéricos de Dos

Tipos y Melones No Climatéricos del Tipo ‘Piel de Sapo’
Noelia Dos-Santos1, Mari Carmen Bueso2, Antonio José Monforte3 y Juan Pablo Fernández-Trujillo1,*
Equipo Multidisciplinar de Investigación en Calidad Postcosecha Orientada a
Mejora Genética y Biotecnología
1
Universidad Politécnica de Cartagena (UPCT). Paseo Alfonso XIII, 48.
ETSIA e Instituto de Biotecnología Vegetal. 30203. Cartagena (Murcia).
Dpto. Ingeniería de Alimentos y del Equipamiento Agrícola. Teléfono: 968 325436. E-mail:
[Link]@[Link].
2
UPCT. Dpto de Matemáticas Aplicada y Estadística. C/Doctor Fleming s/n. ETSII. 30202 Cartagena.
3
IBMCP Instituto de Biología Molecular y Celular de Plantas. CSIC/Universidad Politécnica de
Valencia. Ciudad Politécnica de la Innovación - Edificio 8E Ingeniero Fausto Elio, s/n. 46022 Valencia,
España.
como la 2-butanona (mayor contenido en
Resumen. Existen diferentes cultivares PS). Existe una influencia genética de la
de melón aromáticos y climatéricos o no variedad en diferencias en biosíntesis y
debido a diferencias en producción de rutas metabólicas de aromas volátiles,
etileno durante la maduración especialmente en ésteres no acetato en
poscosecha. Los volátiles del parental variedades climatéricas con muy alta
‘Piel de Sapo’ (PS) y de una variedad producción de etileno.
comercial (‘Nicolás’) sirvieron de
referencia de no climatéricos, mientras
1. Introducción.
que la línea casi-isogénica 6M1 y la línea El comportamiento fisiológico de los
‘Védrantais’ fueron líneas aromáticas y frutos de melón como climatéricos o no
climatéricas. El carácter climatérico se climatéricos está determinado
caracterizó por el contenido en ésteres genéticamente aunque el control genético
(acéticos y no acéticos) y compuestos de la transición climatérica todavía no
derivados del azufre, con mayor está completamente determinado (Vegas
contenido en ésteres no acéticos (metil 2- et al. 2012).
metilbutanoato) en ‘Védrantais’. Los El aroma de la fruta es uno de los
melones no climatéricos se diferenciaron parámetros que más influyen en las
por un alto contenido en aldehídos como preferencias del consumidor y es el
el 2-metilpropanal (mayor contenido en resultado de una compleja mezcla con
‘Nicolás’), terpenos, alcoholes y cetonas, una amplia gama de compuestos con

135
 CAPÍTULO III
DIFERENCIAS AROMÁTICAS ENTRE MELONES CLIMATÉRICOS DE DOS TIPOS Y NO
CLIMATÉRICOS DEL TIPO ‘PIEL DE SAPO’

diferente grado de volatilidad. Una variabilidad en aromas (Obando-Ulloa et

importante contribución al aroma al. 2008). Igualmente existe interés por
característico de la fruta y a la percepción verificar si existen algunos aromas
de su calidad general depende de los diferentes entre tipos no climatéricos
ésteres y en cierta medida de los ‘Piel de Sapo’ con fines de mejora
compuestos azufrados (Bauchot et al. genética.
1998; Lucchetta et al. 2007; Verzera et al. La coexistencia de variedades de
2010). En melones climatéricos, el aroma melón con maduración climatérica y no
debido a los volátiles es un factor climatérica dentro de la especie, hacen
esencial de calidad vinculado al proceso que sea un sistema adecuado para
de maduración y está controlado estudiar el control genético de la
genéticamente (Dos-Santos et al. 2007; maduración climatérica (Moreno et al.
Gao et al. 2007; Nuñez-Palenius et al. 2008). En Obando-Ulloa et al. (2008),
2008). solamente se consideró un perfil de 29
Existe un interés creciente por aromas volátiles comunes para
conocer marcadores moleculares diferenciar entre NILs climatéricas y no
asociados a atributos de calidad del climatéricas, ‘Vedrantais’ y ‘Nicolás’,
melón, como el aroma, e identificar los además de otras líneas. En el presente
Quantitative Trait Loci (QTLs) asociados trabajo evaluamos todos los aromas
al climaterio y la producción de etileno detectados con microextracción en fase
que están directamente relacionados con sólida (SPME) para verificar mayores
la vida comercial del fruto (Moreno et al. diferencias y rutas metabólicas asociadas.
2008; Obando-Ulloa et al. 2008). En
trabajos previos con líneas casi 2. Material y métodos.
isogénicas (NILs) de melón (Ferrer et al.
2.1 Material vegetal.
2007; Obando-Ulloa et al. 2008) hemos
determinado que la presencia de un QTL Los frutos procedieron de una

en el grupo de ligamiento III produce colección de líneas casi-isogénicas ó

frutos aromáticos y con pulpa de un NILs de melón ampliamente descrita

aroma retronasal diferenciado del tipo (Eduardo et al. 2005; Moreno et al. 2008;

‘Piel de Sapo’ (PS) no climatérico. Sin Obando et al. 2008). El material vegetal

embargo, dentro de los melones consistió en dos tipos no climatéricos: un

climatéricos verificamos que hay parental tipo español ‘Piel de Sapo’

136
 CAPÍTULO III
DIFERENCIAS AROMÁTICAS ENTRE MELONES CLIMATÉRICOS DE DOS TIPOS Y NO
CLIMATÉRICOS DEL TIPO ‘PIEL DE SAPO’

(Cucumis melo var. inodorus Naud cv. 2.3 Comportamiento fisiológico.

T111) y un melón híbrido var. ‘Nicolás’ La tasa respiratoria (TR) y la
(Syngenta Seeds). Respecto a los tipos producción de etileno (PE) se determinó
climatéricos fueron: C. melo var. tras la cosecha en al menos cinco frutos
cantalupensis Naud, cv. ‘Védrantais’ y la individuales de diferentes réplicas según
línea casi-isogénica 6M1, con dos Fernández-Trujillo et al. (2008).
introgresiones (grupos de ligamiento III y
VI) de la accesión coreana PI 161375 5.2.4 Muestreo de zumo y análisis de
(SC) (C. melo L. cv. ‘Shongwan Charmi’ compuestos volátiles.
ssp grupo conomon) en el fondo genético Los volátiles de zumo de melón se
del tipo PS (Eduardo et al. 2005; Moreno analizaron por cromatografía de gases-
et al. 2008). espectrometría de masas (GC-MS) según
metodología adaptada de Obando-Ulloa
2.2 Manejo del cultivo y diseño
et al. (2008). El zumo de melón se
experimental.
preparó con una solución saturada de
Las frutos de melón se recolectaron cloruro cálcico para bloquear las
de plantas cultivadas en el Centro
reacciones enzimáticas en el zumo
Integrado de Formación y Experiencias (Buttery et al. 1987) y se almacenó en
Agrarias (CIFEA) de la Consejería de
arcones congeladores a -80ºC, ambas
Agricultura de la Región de Murcia en condiciones conservan mejor los
Torre Pacheco (Murcia) según manejo de
compuestos volátiles. Posteriormente, el
cultivo, prácticas de cosecha e índices de zumo previamente atemperado, se vertió
recolección previamente descritos
en un vial de vidrio de 10 ml (Gerstel,
(Fernández-Trujillo et al. 2008; Obando- Alemania) y se añadió patrón interno (10
Ulloa et al. 2009). Tres fueron las plantas
µ l de fenil-etil alcohol 0,01% v/v, Merck,
por réplica y el número de frutos España) como control. Los volátiles se
recolectados fue de n=7, salvo para PS
analizaron por micro-extracción en fase
con n=21. Se siguió un diseño sólida (SPME). Se empleó un
experimental aleatorizado previamente
cromatógrafo de gases HP 6890N GC
descrito en Obando et al. (2008). serie II (Hewlett-Packard, Agilent
Technologies Inc, Palo Alto, CA,
[Link]) acoplado a un detector de masas
HP 5973 (Hewlett-Packard). Se empleó

137
 CAPÍTULO III
DIFERENCIAS AROMÁTICAS ENTRE MELONES CLIMATÉRICOS DE DOS TIPOS Y NO
CLIMATÉRICOS DEL TIPO ‘PIEL DE SAPO’

una columna de 78,5 mm × 6,5 mm × normalización de áreas respecto al

0,75 mm diámetro interno (SPME/direct, estándar interno.
Supelco, Bellefonte, PA, [Link]). El Los resultados de volátiles aromáticos
flujo total fue 54,4 mL·min-1. Los individuales se normalizaron con el

cromatogramas y los espectros de masas estándar interno y los resultados se

fueron evaluados manualmente usando el expresaron como el porcentaje de área

software ChemStation (G1701DA normalizada de cada compuesto dividido

D.02.00.275, Agilent Technologies Inc, por el recuento de área total de los

[Link]). Los picos se identificaron con el compuestos identificados. Las celdas

espectrómetro de masas (5973 Network vacías eran consideradas

Mass Selective Detector, Agilent automáticamente como datos ausentes

Technol.) acoplado al cromatógrafo de para el análisis estadístico. Los tiempos

gases por comparación de espectros con de retención de una serie de alcanos de

el banco de datos del Instituto Nacional cadena lineal (C6-C20) suministrados por

de Estándares y Tecnología (NIST05a.L, Sigma se usaron en condiciones idénticas

versión de búsqueda 2.0) (Obando-Ulloa para calcular los índices de retención

et al. 2008). lineales para todos los compuestos

Los volátiles se clasificaron en diez volátiles identificados y su comparación

tipos de compuestos volátiles: alcoholes con los datos reportados en la literatura

(ALC), aldehídos (ALD), cetonas (CET), por la base de datos del National Institute

terpenos (TER), ésteres acéticos (EA), of Standards and Technology (NIST;

ésteres no acéticos (ENA), compuestos [Link]

derivados del azufre (CDA), ácidos [Link]).

(ACD), alcanos (ALC) y otros (OTH) en

2.5 Análisis estadístico.
un formato especialmente diseñado en el
Se determinó el poder discriminante de
software Excel por Fernández-Trujillo
los aromas volátiles entre las cuatro
(datos no publicados) que añade las áreas
líneas consideradas mediante diversos
de todos los compuestos volátiles
análisis estadísticos multivariante;
identificados al tipo de compuesto
análisis de componentes principales
correspondiente. Los resultados se
(PCA), análisis de escalamiento
expresaron en porcentaje respecto al área
multidimensional (MSD), random forest
total de compuestos identificados previa
(RF) y análisis de mínimos cuadrados

138
 CAPÍTULO III
DIFERENCIAS AROMÁTICAS ENTRE MELONES CLIMATÉRICOS DE DOS TIPOS Y NO
CLIMATÉRICOS DEL TIPO ‘PIEL DE SAPO’

parciales (PLS-DA) entre otros, según 2008; Ferrer et al. 2007; Moreno et al.
metodología descrita (Fernández-Trujillo 2008), las líneas se clasificaron en tres
et al. 2009; Obando-Ulloa et al. 2008). Se categorías: No climatérica (PS y
empleó el programa JMP® v5.1.2 para ‘Nicolás’), climatérica leve (6M1) y
Windows (SAS Institute Inc. NC, climatérica moderada (‘Védrantais’).
[Link]) y el lenguaje R en el entorno de
3.2 Compuestos volátiles aromáticos.
programación R v2.11.0 (2010-04-22). Si
se encontraban diferencias significativas Ésteres acéticos y no acéticos y
por ANOVA usando la línea, las compuestos derivados del azufre fueron
diferencias entre NILs y PS fueron los compuestos mayoritarios de las líneas
evaluadas por el test de Dunnett a P = climatéricas 6M1 y ‘Védrantais’,
0,05, usando JMP (Obando et al. 2008; mientras que aldehídos, alcoholes,
Obando-Ulloa et al. 2009). El elipsoide cetonas y terpenos fueron mayoritarios en
alrededor de cada centroide en los las líneas no climatéricas PS y ‘Nicolás’.
gráficos PLS-DA (score plot) se calculó La estadística multivariante (PLS-DA) de
para un intervalo de confianza del 95% los grupos de volátiles, indicó que las dos
con el paquete de elipses (Versión 0.3-4) líneas no climatéricas estuvieron muy
en lenguaje R (R Foundation for próximas entre sí, con mayor contenido
Statistical Computing, Viena, Austria). en aldehídos en el cultivar de referencia
Para los gráficos de correlaciones de no climatérico ‘Nicolás’. Las líneas
PLS-DA, los círculos interno y externo climatéricas estuvieron más alejadas entre
de las figuras representan coeficientes de sí, con mayor contenido en ésteres no
correlación r=70% y r= 100% (o r2 del acéticos en el cultivar climatérico
50% y 100%), respectivamente. ‘Védrantais’ (Fig. 2).
El eje PLSDA1 (60% de la varianza

3. Resultados y discusión total explicada) discriminó las líneas

climatéricas (por su contenido en ésteres
3.1 Tasa respiratoria y producción de
acetato y derivados azufrados) de las no
etileno.
climatéricas (mayor contenido en
Según los niveles de producción de cetonas, alcanos, alcoholes, terpenos y
etileno (C2H4) y de la tasa respiratoria otros) (Fig. 2). El eje PLSDA2 (7,1% de
(CO2) (Fig. 1), y de datos previamente la varianza total explicada) discriminó
publicados (Fernández-Trujillo et al. entre líneas, especialmente las líneas

139
 CAPÍTULO III
DIFERENCIAS AROMÁTICAS ENTRE MELONES CLIMATÉRICOS DE DOS TIPOS Y NO
CLIMATÉRICOS DEL TIPO ‘PIEL DE SAPO’

climatéricas (6M1 más asociada a (estaciones, método de cultivo), de

derivados azufrados y ‘Védrantais’ a acuerdo con los resultados en frutos de
ésteres no acetato). ‘Nicolás’ presentó frambuesa (Paterson et al. 2013).
más niveles de aldehídos que PS (más Respecto a aromas volátiles
asociado a alcoholes) (Fig. 2). La individuales (Tabla 1a; Fig. 3), las líneas
inmensa mayoría de compuestos climatéricas mostraron diferencias entre
identificados en frutos de melón han sido sí. La NIL 6M1 (climaterio leve) destacó
alcoholes, aldehídos, cetonas, ésteres, y por su contenido en nueve compuestos
compuestos azufrados. Estos compuestos ésteres acetato (2-feniletil acetato, 3-
dependen fuertemente de la variedad y acetilopropil acetato y 2-
del comportamiento fisiológico, siendo metilbutilacetato) principalmente,
los frutos climatéricos de melón de mayor mientras que ocho compuestos
intensidad aromática y menor vida discriminaron el cultivar ‘Védrantais’
comercial que los frutos no climatéricos. (climaterio moderado), sobre todo ésteres
Se demuestra por tanto que el que el no acetato como metil 2-metilbutanoato,
contenido de compuestos volátiles butil propanoato y 2-metilpropil
responsables del “aroma de melón” es propanoato (Tabla 1a). Ésteres de cadena
muy variado y es un atributo cultivar- lineal, junto con ésteres de cadena
dependiente, incluso teniendo similar ramificada derivados de la isoleucina
comportamiento fisiológico (Aubert et al. fueron volátiles mayoritarios en las
2006; Li et al. 2006; Luccheta et al. 2007; líneas climatéricas de acuerdo con
Nuñez-Palenius et al. 2008; Obando- (Bauchot et al. 1998). Estos ésteres junto
Ulloa et al. 2008, 2010; Verzera et al. a otros, son cuantitativamente los
2010). Los ésteres han sido establecidos compuestos más importantes y
como típicos compuestos volátiles en contribuyen de forma importante al
NILs climatéricas de melón mientras que aroma único de frutas maduras de melón
los aldehídos son característicos de NILs climatérico (Flores et al. 2005). El
no climatéricas (Obando-Ulloa et al. carácter climatérico estuvo fuertemente
2008). asociado a la producción de ésteres y
No es descartable una interacción compuestos derivados azufrados, lo que
entre genotipo x ambiente variable con revela su dependencia al menos parcial de
las campañas, o la presencia de QTLs la acción del etileno. La catálisis de la
muy dependientes del ambiente enzima alcohol acetil transferasa (a partir

140
 CAPÍTULO III
DIFERENCIAS AROMÁTICAS ENTRE MELONES CLIMATÉRICOS DE DOS TIPOS Y NO
CLIMATÉRICOS DEL TIPO ‘PIEL DE SAPO’

de alcoholes procedentes de aldehídos) y dimetiylciclohexan-1-ol). El control PS

la producción de derivados azufrados a destacó por su mayor contenido en
partir de metionina explicarían en parte cetonas como la 2-butanona, procedente
este comportamiento (Luchetta et al. de butano-2,3-diona y acetona; (Min
2007ab; Varlet y Fernández, 2010). Los 2012) y el 2-metilpropanal discriminó
ésteres (acéticos y no acéticos) parcialmente ‘Nicolás’ de PS (Tabla 1a;
identificados en las líneas climatéricas Fig. 3). Este último es el precursor de los
6M1 y ‘Védrantais’ se caracterizan por 2-metilpropil ésteres procedentes de la
generar principalmente notas aromáticas valina (Wyllie et al. 2005). Las notas
afrutadas, florales, verdes, frescas, etéreas aromáticas a afrutado y malta (junto a
y dulces (Tabla 1b). La NIL 6M1 destacó floral y chocolate) caracterizaron en
también por su contenido en un general a los compuestos volátiles
compuesto derivado del azufre, el 3- identificados en ‘Nicolás’ y PS (Tabla
metilsulfanilprop-1-ene, que genera notas 1b). El metanotiol, un compuesto que
aromáticas a aliáceas como el ajo y la actúa como precursor de compuestos
cebolla (Tablas 1ab). En general, aunque derivados del azufre, ha sido identificado
depende de su concentración, los en las dos líneas no climatéricas Nicolás’
compuestos derivados del azufre se y PS (Tabla 1b). Este compuesto
caracterizan por producir aromas también ha sido identificado en estudios
indeseables o poco aceptados por los previos en NILs de melón (Obando-Ulloa
consumidores como el aroma a ajo, et al. 2010) y en otros en alimentos como
repollo cocido, mantequilla rancia o el queso o la langosta contribuyendo al
huevo podrido (Singh et al. 2003). Sin característico aroma a azufre, col y
embargo, algunos de estos compuestos repollo hervido (Singh et al. 2003; Varlet
derivan en aromas indeseables en y Fernández, 2010).
procesado excesivo de ciertos productos
(ejemplo calentamiento demasiado 4. Conclusiones
tiempo), mientras que en procesado a
Parece existir alguna diferencia
cortos tiempos generan notas dulces.
genética asociada a un mayor grado de
Las dos líneas no climatéricas
climaterio y de ésteres no acetato como el
tuvieron un comportamiento similar en
metil 2-metilbutanoato en ‘Védrantais’
contenido en volátiles (Tabla 1a; Fig. 3),
respecto a la línea casi-isogénica 6M1. La
con alto contenido en alcoholes (ej. 3,5-

141
 CAPÍTULO III
DIFERENCIAS AROMÁTICAS ENTRE MELONES CLIMATÉRICOS DE DOS TIPOS Y NO
CLIMATÉRICOS DEL TIPO ‘PIEL DE SAPO’

NIL climatérica estuvo asociada a un C. Miranda, M.J. Ferrer y M.A. Quesada

mayor contenido en ésteres acéticos y al SAIT-UPCT la asistencia técnica.
como el 2-metilbutilacetato. Las
Literatura Citada
concentraciones de aldehídos como el 2-
metilpropanal en el cultivar ‘Nicolás’ y Aubert, C., Pitrat, M. 2006. Volatile

cetonas como la 2-butanona en el parental compounds in the skin and pulp of

‘Piel de Sapo’, estuvieron asociadas al Queen Anne’s pocket melon. J.

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discriminaron ligeramente entre las líneas Bauchot, D.A., Mottram, D.S., Dodson,
PS y ‘Nicolás’, lo que soporta también A.T., John, P. 1998. Effect of
una componente genética que podría aminocyclopropane-1-carboxylic
integrarse a la mejora del aroma de los acid oxidase antisense gene on the
melones tipo ‘Piel de Sapo’. La formation of volatile esters in
introgresión que produjo climaterio leve cantaloupe Charentais melon (cv.
en 6M1 estuvo muy asociada a un QTL Védrantais). J. Agric. Food Chem.
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respectivamente; UE-FEDER), CARM Melgarejo, L.M., Moreno, E.,
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(Fund. Séneca, Región de Murcia). J.P. 2007. Optimización de la
NDSC agradece la beca predoctoral FPU- extracción de ácidos orgánicos en
MEC AP2006-01565. Agradecemos a pulpa liofilizada de melón y análisis
Semillas Fitó el suministro de semillas de por cromatografía líquida de alta
PS, al IRTA-CRAG las de las NILs, y a eficiencia. En Rabasseda, J. Martín
Plácido Varó y su equipo del CIFEA de la Hinojosa, M.I. (Coord.). Actas
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DIFERENCIAS AROMÁTICAS ENTRE MELONES CLIMATÉRICOS DE DOS TIPOS Y NO
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148
 CAPÍTULO III
DIFERENCIAS AROMÁTICAS ENTRE MELONES CLIMATÉRICOS DE DOS TIPOS Y NO
CLIMATÉRICOS DEL TIPO ‘PIEL DE SAPO’

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149
 CAPÍTULO III
DIFERENCIAS AROMÁTICAS ENTRE MELONES CLIMATÉRICOS DE DOS TIPOS Y NO
CLIMATÉRICOS DEL TIPO ‘PIEL DE SAPO’

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150
 CAPÍTULO III
DIFERENCIAS AROMÁTICAS ENTRE MELONES CLIMATÉRICOS DE DOS TIPOS Y NO
CLIMATÉRICOS DEL TIPO ‘PIEL DE SAPO’

Figuras y Tablas.

A
800 100 800 100
PS ´Nicolás´
90 90
700 700
80 80
600 600
70 70
TR ( nmol kg-1 s-1 )

500 500

PE ( pmol kg-1 s-1 )

60

TR ( nmol kg-1 s-1 )

PE ( pmol kg-1 s-1 )
60

400 50 400 50

40 40
300 300
30 30
200 200
20 20
100 100 10
10

0 0 0 0
0 5 10 0 5 10
Tiempo (días) Time ( (días)
Tiempo d)

800 200 1200 300 B

´Védrantais´
6M1 1100
700
1000 250
600 150 900

s )
TR ( nmol kg-1 s-1 )

PE ( pmol kg-1 s-1 )

TR ( nmol kg-1 s-1 )

-1 -1 -1-1
800 200
500
PE ( pmol kg
700
400 100 600 150
500
300
400 100
200 50 300
200 50
100
100
0 0 0 0
0 5 10 0 5 10
Tiempo (días) Tiempo (días)

Figura 1. Tasa respiratória (CO2) y producción de etileno (C2H4) (TR, ■ y PE, □),
respectivamente; media ± DE) durante la maduración postcosecha a 21ºC. A. Líneas no
climatéricas PS y ‘Nicolás’. B. Líneas climatéricas NIL 6M1 (climaterio leve) y
‘Védrantais’ (climaterio moderado).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
151
 CAPÍTULO III
DIFERENCIAS AROMÁTICAS ENTRE MELONES CLIMATÉRICOS DE DOS TIPOS Y NO
CLIMATÉRICOS DEL TIPO ‘PIEL DE SAPO’

A B

Figura 2. Discriminación de las diferentes líneas en función de las dos primeras

componentes del análisis discriminante de mínimos cuadrados parciales (PLS-DA) para
grupos de compuestos (izquierda) en las variedades de melón en estudio: Línea casi-
isogénica (NIL) 6M1 (
), los cultivares ‘Nicolás’ (
) y ‘Védrantais’ (*) y el control
parental PS (). A. Centroides de las diferentes líneas y elipsoide al 95% de intervalo de
confianza. B. Correlaciones entre los grupos de compuestos y las dos primeras
componentes. Abreviaturas; Alcoholes (ALC), aldehídos (ALD), cetonas (KET),
terpenos (TER), ésteres acetato (EAC), ésteres no acetato (ENA), compuestos derivados
del azufre (CDA), ácidos (ACD), alcanos (AHA) y otros (OTH) (derecha).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
152
 CAPÍTULO III
DIFERENCIAS AROMÁTICAS ENTRE MELONES CLIMATÉRICOS DE DOS TIPOS Y NO
CLIMATÉRICOS DEL TIPO ‘PIEL DE SAPO’

A B

Figura 3. Discriminación de las diferentes líneas en función de las dos primeras

componentes del análisis discriminante de mínimos cuadrados parciales (PLS-DA) para
compuestos aromáticos individuales en las variedades de melón en estudio: Línea casi-
isogénica (NIL) 6M1 (
), los cultivares ‘Nicolás’ (
) y ‘Védrantais’ (*) y el control
parental PS (). A. Centroides de las diferentes líneas y elipsoide al 95% de intervalo de
confianza. B. Correlaciones entre los grupos de compuestos y las dos primeras
componentes. Los números del gráfico de la derecha corresponden a los volátiles más
discriminantes incluidos en el análisis, numeración según Tabla 1

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
153
 CAPÍTULO III
DIFERENCIAS AROMÁTICAS ENTRE MELONES CLIMATÉRICOS DE DOS TIPOS Y NO CLIMATÉRICOS DEL TIPO ‘PIEL DE SAPO’

Tabla 1a. Compuestos aromáticos probables identificados en el espacio de cabeza de los frutos de las líneas climatéricas NIL 6M1 y
cultivar ‘Védrantais’ y las líneas no climatéricas cultivar ‘Nicolás’ y del control parental ‘Piel de Sapo’ (PS).

TR LRI. LRI.
NÚMERO CAS NOMBRE IUPAC IDN (min) Cal. Ref. Ref.1 PS ‘Nicolás’ 6M1 ‘Védrantais’
ALCOHOLES
000137-32-6 2-metilbutan-1-ol 36 3,337 s.d 722 1 0,00 0,00 0,09 * 0,04 *
000071-23-8 Propan-1-ol 10 1,555 s.d 548 1 0,08 0,00 * 0,00 * 0,01
005441-52-1 3,5-dimetilciclohexan-1-ol 112 13,535 996 n.e - 0,33 0,26 0,09 * 0,04 *
000591-23-1 3-metilciclohexan-1-ol 92 10,502 941 n.e - 0,23 0,14 0,05 * 0,01 *
001193-81-3 (2-metilciclohexil) metanol 128 16,669 1045 n.e - 0,76 0,60 0,24 * 0,08 *
000104-76-7 2-Ethylhexan-1-ol 125 15,781 1031 1039 1 1,13 1,18 0,25 * 0,19 *
1,7,7-trimetilnorbornan-2-ona
000076-22-2/000464-49-3 165 21,091 1156 1151 1 0,82 0,83 0,25 * 0,14 *
/(1R, 4R) 1,7,7-trimetilnorbornan-2-ona
ALDEHÍDOS
000078-84-2 2-metilpropanal 7 1,573 s.d 552 1 0,00 0,11 * 0,01 0,02
CETONAS
000078-93-3 Butan-2-ona 12 1,748 s.d 591 1 0,16 0,00 * 0,00 * 0,02 *
000078-59-1 3,5,5-trimetilciclohex-2-en-1-ona 131 17,257 1053 1118 1 0,00 0,00 0,00 0,04 *
007371-86-0 4-acetiloxipentan-2-il acetato 182 21,655 1193 n.e - 0,03 0,00 0,85 * 0,35 *
COMPUESTOS DERIVADOS DEL AZUFRE
010152-76-8 Sulfuro alíl metil 156 20,871 1142 697 1 0,04 0,09 2,48 * 0,55 *
004455-13-4 Etil-2-metilsulfanilacetato 102 12,979 986 996 1 0,02 0,00 0,01 0,76 *
000074-93-1 Metanotiol 2 1,245 s.d 464 1 0,29 0,34 * 0,04 *
ÉSTERES ACETATO
000628-66-0 3-acetiloxipropil acetato 153 20,653 1128 n.e - 0,00 0,00 0,11 * 0,04 *
000624-41-9 2-metilbutil acetato 77 7,676 886 901 1 0,21 0,18 16,61 * 9,00 *
003681-71-8 [(Z)-hex-3-enil] acetato 121 14,453 1011 1016 1 0,00 0,00 0,14 5,01 *
000103-45-7 2-feniletil acetato 192 22,179 1263 1257 1 0,18 0,42 2,27 * 0,87 *
000140-11-4 Bencil acetato 168 21,419 1177 1165 - 0,31 0,48 4,60 * 4,17 *
000142-92-7 Hexil acetato 122 14,945 1018 1017 1 0,02 0,02 3,91 * 10,18 *

154 Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
 CAPÍTULO III
DIFERENCIAS AROMÁTICAS ENTRE MELONES CLIMATÉRICOS DE DOS TIPOS Y NO CLIMATÉRICOS DEL TIPO ‘PIEL DE SAPO’

ÉSTERES NO ACETATO
000868-57-5 Metil-2-metilbutanoato 49 4,195 790 780 1 0,00 0,01 0,80 * 1,19 *
000623-42-7 Metil butanoato 35 3,082 724 724 1 0,00 0,01 0,30 * 0,00
017094-21-2 Metil-2-metil-3-oxo-butanoato 146 19,650 1091 n.e - 0,00 0,00 0,16 * 0,00
000540-42-1 2-metilpropil propanoato 73 7,197 874 868 1 0,00 0,00 0,07 * 0,18 *
000590-01-2 Butil propanoato 86 9,029 915 910 1 0,00 0,00 0,04 0,13 *
002311-46-8 Propan-2-il hexanoato 194 22,396 1297 1019 1 0,00 0,00 0,37 * 0,01
000109-21-7 Butil butanoato 198 13,771 997 997 1 1,96 1,75 0,43 * 0,42 *
TERPENOS
000470-82-6 1,8,8-trimetil-7-oxabiciclo [2-2-2] octano 124 15,570 1028 1038 1 0,02 0,02 0,15 * 0,28 *
OTROS
079637-11-9/000629-20-9 Etenilbenceno 78 12,685 981 988 1 4,34 3,03 1,34 * 0,63 *
El asterisco * indica diferencias significativas con el parental PS según test Dunnett a P = 0,05. Chemical Abstracts Service (CAS); International Union of Pure and
Applied Chemistry (IUPAC); Número identificativo de cada compuesto (IDN); Tiempo de Retención Promedio en minutos (TR PR min); Tiempo de Retención Lineal
calculado (LRI Cal.); Tiempo de Retención Lineal Referenciado (LRI Ref.); Referencia LRI ref. (Ref.1); No encontrada (n.e); Sin dato (s.d); Ref.1, (1): National Institute
of Standards and Technology (NIST; [Link]

155 Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
 CAPÍTULO III
DIFERENCIAS AROMÁTICAS ENTRE MELONES CLIMATÉRICOS DE DOS TIPOS Y NO CLIMATÉRICOS DEL TIPO ‘PIEL DE SAPO’

Tabla 1b. Principales precursores y notas aromáticas de los compuestos aromáticos probables identificados en el espacio de cabeza de los
frutos de las líneas climatéricas NIL 6M1 y cultivar ‘Védrantais’ y las líneas no climatéricas cultivar ‘Nicolás’ y del control parental ‘Piel de
Sapo’ (PS).

NOMBRE IUPAC IDN PRECURSORES Ref.2 NOTAS AROMÁTICAS Ref.3

ALCOHOLES
Malta, balsámico, vino, cebolla madura, mantecoso; Whisky, fusel, vino,
2-metilbutan-1-ol 36 AA Iso 1 2, 3
alcohólico
Afrutado, plástico, picante, rancio; Alcohólico, terroso, fermentado, fusel con
Propan-1-ol 10 AA Tre 4, 5 matiz de nuez, cacahuete, así como matices afrutados de manzana, pera y 2, 3, 6
chicle; Floral, dulce
3,5-dimetilciclohexan-1-ol 112 Ciclohexano 41 n.e
3-metilciclohexan-1-ol 92 AGs Ac. Linolen. 7,8 Seco, disolvente, humedad, ron, fusel, afrutado 3
(2-metilciclohexil) metanol 128 n.e n.e n.e
2-Ethylhexan-1-ol 125 AG 9 Fruta cítrica, fresco, floral, dulce aceitoso, menta 3
1,7,7-trimetilnorbornan-2-
ona 3, 11,
165 n.e 10 Fuerte olor aromático picante penetrante; Alcanfor; Alcanfor
/(1R, 4R) 1,7,7- 12
trimetilnorbornan-2-ona
ALDEHÍDOS
2, 13,
2-metilpropanal 7 AA Leu/Val 13 Verde, picante, malta, quemado, tostado, afrutado; Malteado, chocolate; Malta
14
CETONAS
Acetona/2- Chocolate, químicos, gas, etéreo, queso, mantequilla; Verde, aldehído, recién
Butan-2-ona 12 15, 39 2, 38
butanol pintado, etéreo
3,5,5-trimetilciclohex-2-en-
131 Terpenos V. Meval. 40 Alcanfor 16
1-ona

4-acetiloxipentan-2-il
182 n.e - n.e
acetato

156 Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
 CAPÍTULO III
DIFERENCIAS AROMÁTICAS ENTRE MELONES CLIMATÉRICOS DE DOS TIPOS Y NO CLIMATÉRICOS DEL TIPO ‘PIEL DE SAPO’

COMPUESTOS DERIVADOS DEL AZUFRE

3-metilsulfanilprop-1-ene 156 AA Met 14, 17, 18 Aliáceas, ajo, cebolla; Ajo 3, 19
Etil (metiltio) acetato 102 AA Met 14, 17, 18 Afrutado, Pepino 3, 20
Metanotiol 2 AA Met 17, 21 Aceite vegetal, aliáceas, huevo, cremoso con matices salados 3
ÉSTERES ACETATO
3-acetiloxipropil acetato 153 AA Ala 22 Comida asada 38
20, 22, 23, Herbácea, etéreo, ron, fruta fermentada, plátano; Dulce, plátano, afrutado,
2-metilbutil acetato 77 AA Iso/Ala 2, 3
24, 25 maduro, bosque, y tropical con notas afrutadas
Dulce, verde, afrutado; Fresco, verde, dulce, afrutado con matices de
[(Z)-hex-3-enil] acetato 121 AG Ac. Linol. 26, 27 2, 3
manzana, pera y melón
2-feniletil acetato 192 AA Trip/Fen/Iso 22, 28 Aroma de pétalos de rosa 28
Floral, quemado, calabacín cocido, dulce, afrutado, floral, jazmín; Plástico, 2, 21,
Bencil acetato 168 AA Fen 29
verde 30
Afrutado, picante, herbal, vino dulce, gomoso, tabaco, acidulado, cítrico,
2, 30,
Hexil acetato 122 AG Ac. Linolen. 23, 24 verde, hierbas; Manzana, cereza, pera, floral; Manzana, cereza; Dulce, graso,
31, 32
fresco, pera
ÉSTERES NO ACETATO
Manzana, frutas, alcohol, solvente, chicle; Etérea, afrutado, tutti frutti y
Metil-2-metilbutanoato 49 AA Iso 22, 23, 29 2, 3, 32
maduro con un matiz graso, verde; Afrutado, dulce, manzana
Acre, etéreo, frutal, perfumado y fusel con una nota fermentada, cremosa; 3, 30,
Metil butanoato 35 AA Iso 22
Acre, perfume, fermentado; Afrutado, manzana 32
Metil-2-metil-3-oxo-
146 AA Iso 22 n.e
butanoato
Afrutado, dulce, ron, bosque, picante, goma de mascar, bosque con un matiz
2-metilpropil propanoato 73 AA Cis/Met 33 3
tropical
Butil propanoato 86 AA Cis/Met 33 Dulce, bosque, plátano, maduro, tutti-frutti, lifting, brillante, cereza, ron 3
Propan-2-il hexanoato 194 n.e n.e Afrutado, piña, frambuesa 3
Butil butanoato 198 AA/ AG Ala 22 Fresco, dulce, afrutado 2
TERPENOS
1,8,8-trimetil-7-oxabiciclo
124 Terpenos 34, 35 Eucalipto, hierbas, alcanfor, dulce, mentol 3
[2-2-2] octano

157 Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
 CAPÍTULO III
DIFERENCIAS AROMÁTICAS ENTRE MELONES CLIMATÉRICOS DE DOS TIPOS Y NO CLIMATÉRICOS DEL TIPO ‘PIEL DE SAPO’

OTROS
Etenilbenceno 78 Etilbenceno 36 Dulce, balsámico, floral, plástico; Balsámico, gasolina 3, 12

Chemical Abstracts Service (CAS); International Union of Pure and Applied Chemistry (IUPAC); Número identificativo del compuesto (IDN); Referencia precursores
(Ref.2); Referencia notas aromáticas (Ref.3); Ácidos Grasos (AG): Ácido Linolénico (Ac. Linolen.), Ácido Linoleico (Ac. Linol.); Aminoácidos (AA): Alanina (Ala),
Cisteina (Cis), Fenilalanina (Fen), Isoleucina (Iso), Leucina (Leu), Metionina (Met), Treonina (Tre),Triptófano (Trp), Valina (Val); No encontrado (n.e); Vía del
mevalonato ([Link].).

158 Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
 CAPÍTULO IV
CELL WALL POLYSACCHARIDES OF NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON (CUCUMIS
MELO L.) AND THEIR INBRED PARENTALS WHICH SHOW DIFFERENTIAL FLESH
FIRMNESS OR PHYSIOLOGICAL BEHAVIOR

CAPÍTULO IV

CELL WALL POLYSACCHARIDES OF NEAR-

ISOGENIC LINES OF MELON (CUCUMIS
MELO L.) AND THEIR INBRED PARENTALS
WHICH SHOW DIFFERENTIAL FLESH
FIRMNESS OR PHYSIOLOGICAL BEHAVIOR

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
159
 CAPÍTULO IV
CELL WALL POLYSACCHARIDES OF NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON (CUCUMIS
MELO L.) AND THEIR INBRED PARENTALS WHICH SHOW DIFFERENTIAL FLESH
FIRMNESS OR PHYSIOLOGICAL BEHAVIOR

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
160
 ARTICLE

[Link]/JAFC

Cell Wall Polysaccharides of Near-Isogenic Lines of Melon

(Cucumis melo L.) and Their Inbred Parentals Which Show
Differential Flesh Firmness or Physiological Behavior
Noelia Dos-Santos,† Ana Jim
enez-Araujo,‡ Roc
io Rodr
iguez-Arcos,‡ and J. Pablo Fern
andez-Trujillo*,†
†
Department of Agricultural and Food Engineering, Technical University of Cartagena (UPCT), Campus Paseo Alfonso XIII, 48, ETSIA
and Institute of Plant Biotechnology, E-30203 Cartagena (Murcia), Spain
‡
Department of Food Biotechnology, Instituto de la Grasa, Advanced Scientific Research Council (IG-CSIC), Apartado 1078, E-41012
Sevilla, Spain
bS Supporting Information
ABSTRACT: We characterized differences in cell wall material and polysaccharide structures, due to the quantitative trait loci
associated with higher flesh firmness in a nonclimacteric near-isogenic line (NIL) SC7-2, and with the climacteric behavior of the NIL
SC3-5-1, using their nonclimacteric inbred parentals, “Piel de Sapo” (PS) and PI 161375 (SC). PS was firmer and had a higher
ripening index and greater hemicellulosic content than SC, with its lower wall material yield, and uronic acid, neutral sugar, cellulose
and free sugar content and higher pectic content. SC3-5-1 showed lower uronic acid values, a higher soluble solid content, and similar
flesh firmness to PS. SC3-5-1 yielded mainly high molecular weight polysaccharides in the imidazole-soluble fraction than PS. SC7-2
showed greater flesh firmness, a higher neutral sugar (especially galactose and mannose) and uronic acid content, together with a
larger cellulose and R-cellulose residue than PS. SC7-2 also contained more polysaccharides of low molecular weight in the first pectic
fraction and shifted toward higher molecular weights in the main peak of the 4 M potassium-soluble fraction compared with PS.
KEYWORDS: Cucumis melo L, chemical fractionation, glycosidic composition, fruit ripening, flesh firmness, climacteric behavior

’ INTRODUCTION while softening is a determining factor in the quality and postharvest

The cell wall is a complex and dynamic structure which acts as life of fruit.4,9 The softening process has ethylene-dependent and
a structural and mechanical support for the plant body and plays independent components,13,14 but rapid melon softening often
an important role in fruit textural changes,1,2 being a key but not correlates with autocatalytic ethylene production and the degra-
unique component of fruit texture characteristics.3 The degree of dation of cell wall polymers.15 Endopolygalacturonase (PG, EC
primary cell wall degradation is an important factor in fruit tissue [Link]), one of the enzymes responsible for polyuronide depo-
lymerization and solubilization during ripening, shows the genetic
integrity that is affected by the composition and structure of middle
expression of different subunits that are either dependent or
lamella polysaccharides, the cuticle and the turgor generated
independent of ethylene action.13,16 Cell wall-modifying en-
within the cell walls by osmosis.4
7
zymes are synthesized by a large family of genes that plays an
The pectins, hemicellulose and cellulose, are the main cell wall
important role in fruit metabolism during melon ripening. For
polysaccharides susceptible to solubilization, depolymerization
example, pectin methylesterase (PME) contributes to the action
and de-esterification by different cell-wall-modifying enzymes of polygalacturonase, converting methyl-esterified pectins into
during fruit ripening and storage.8
10 Overall during melon substrates upon which these enzymes could act.17
ripening there is a shift to a lower-molecular-mass distribution Candidate genes for several quantitative trait loci (QTL) as-
of hemicellulose polymers and a substantial degree of solubiliza- sociated with fruit softening have been identified in melon.18
tion and depolymerization of pectins, especially the water-soluble Previous results indicate that certain near-isogenic lines (NILs)
pectins.5 Cell wall changes associated with fruit softening during of this collection undergo a similar softening process, although
ripening can be divided into two sequential stages. The first the initial value of whole fruit firmness and variability in the
occurs during early fruit ripening and is associated with the senescence end point are critical.18
20 Therefore, study of the
disassembly of xyloglucan polymers through the action of cell cell wall composition of both NILs and its parentals at this point
wall hydrolases and, especially, expansin proteins. The second may help us to characterize the possible effect of the QTL on the
stage occurs in the late stage of ripening and is related to disassembly cell wall during ripening. Our null hypothesis is that melon QTLs
of the pectin network. These processes occur in a temporal associated with differences in texture and climacteric affect cell
overlap, but in some climacteric melons, such as “Charentais”, wall composition.
pectin disassembly occurs late in ripening and after xyloglucan
disassembly, while polygalacturonases appear to be present during Received: September 10, 2010
pectin disassembly, albeit at very low levels.5,11 Accepted: May 24, 2011
Texture is one of the most important quality parameters and is Revised: May 19, 2011
partly responsible for consumer preferences of edible fruit,12 Published: May 24, 2011

r 2011 American Chemical Society 7773 [Link]/10.1021/jf201155a | J. Agric. Food Chem. 2011, 59, 7773–7784
Journal of Agricultural and Food Chemistry ARTICLE

’ MATERIALS AND METHODS and K4SF were neutralized with glacial acetic acid (Merck) to pH 6. The
final R-CEL obtained and the four fractions (ISF, CSF, K1SF and K4SF)
Plant Material and Experimental Design. The plant materials were dialyzed in dialysis tubing of molecular weight cutoff (MWCO)
used were melon near-isogenic lines or NILs and their nonclimacteric 12000 Da (cellulose membrane, Sigma Chemical CO., St. Louis, MO)
parentals, the Spanish melon Cucumis melo L. cv. “Piel de Sapo” (PS) and against water. Conductivity was measured (Hanna Instruments HI
the Korean accession PI 161375 “Shongwan Charmi” (SC).21 The NILs 8819N, Ann Arbor, MI) checking that the washing water reached a
evaluated were the climacteric NIL SC3-5-1 and the nonclimacteric NIL conductivity below 100 μS/cm. Fractions were frozen at
25 °C and
SC7-2. Both NILs contain introgressions of SC into PS genetic back- lyophilized (Flexi-Dry MP Freeze-Dryer, FTS Systems Inc., Stone
ground according to the first number, which refers to the linkage group Ridge, NY) for glycoside analysis.
with the introgression18,21 (A. J. Monforte, Institute of Molecular and Polysaccharide Analysis. The glycosidic composition of the
Cellular Biology of Plants, Valencia, Spain, personal communication). different fractions was determined by acid hydrolysis with 2 N trifluoro-
The fruits were harvested in two consecutive seasons (2008 and 2009). acetic acid (Sigma-Aldrich, Chemie GmbH, Steinheim, Germany)
Crop management, harvest practices and other details have been reported (121 °C, 1 h),27 derivatization to alditol acetates and quantification by
previously.14,22 The field was divided into blocks in a completely gas chromatography.28
randomized design within each block. The distance between rows was A HP 6890 Plusþ gas chromatograph (Hewlett-Packard, Palo Alto,
2 m and between plants 1.5 m. Each replicate consisted of three plants CA) fitted with a 30 m  250 μm  0.20 mm capillary column (SP-2330,
separated 1.5 m from the other replicates (in 2008) or six plants (three in Supelco, Bellefonte, PA) was used. The carrier gas was helium with a
two adjacent rows) with the same separation between replicates (in constant flow equal to 2.2 mL/min, pressure 21.5 psi (148.24 kPa).
2009). Fruit were harvested throughout both seasons according to the Injection was performed in splitless mode. The oven temperature was
maturity indices previously described.14 The quality traits reported held at 50 °C for 2 min after injection, then programmed to 180 at
below were evaluated in both seasons using at least two fruits per 35 °C/min, held at 180 °C for 5 min, and then immediately increased to
replicate as follows: In season 2008, SC n = 10, in PS n = 21, in SC3-5-1 220 at 5 °C/min, and held at 220 °C for 22 min. Total run was 40.7 min.
n = 7 and in SC7-2 n = 6. In season 2009, SC n = 6, in PS n = 9, in SC3-5-1 The injector temperature was 250 °C, flame ionization detector (FID),
n = 9 and in SC7-2 n = 7. 300 °C. Neutral sugars (NS) L-rhamnose (Rha), D-fucose (Fuc), L-arabinose
Physiological Behavior Evaluation. Respiration rate and ethy- (Ara), D-xylose (Xyl), D-mannose (Man), D-galactose (Gal) and D-glucose
lene production were measured at harvest (optimum stage of maturity) (Glc) were identified. myo-Inositol was used as internal standard.
in at least five individual fruits of different replicates according to The residue of the R-cellulose fraction after trifluoroacetic acid
Fern
andez-Trujillo et al.23 hydrolysis was treated with 72% H2SO4 (Panreac) for 2 h according
Sampling and Sample Preparation for Extraction of Cell to Jim
enez et al.26 to quantify its cellulose content. The glucose in the
Wall Material (CWM). In cell wall experiments, four lines were hydrolysates was colorimetrically quantified by the anthrone assay.29
analyzed, with three replicates per line and year. Depending on the fruit Uronic acids (UA) were quantified by the m-hydroxybiphenyl method.30
size, two to eight selected fruits per replicate were used for obtaining the The absorbance values of standards and samples were measured at 630
fresh melon flesh as follows. Fruits were peeled, and the seeds and and 540 nm, respectively, in a microplate reader (MPM 600; Bio-Rad
placental tissue were removed with a stainless steel knife. The flesh was Laboratories, Inc., Hercules, CA).
cut into pieces, weighed and stored in zip closure bags in a freezer at High-Performance Size Exclusion Chromatography (HPSEC).

25 °C. Analysis of the Molecular Weight (MW) of the Polysacchar-
Cell Wall Material Isolation. CWM was obtained by adapting the ides. The method used for HPSEC analysis was that described by
methodology of Selvendran24 to melon fruit. Samples were first ex- Jim
enez et al.25 with slight modifications. Polysaccharidic fractions (ISF,
tracted with 96% v/v ethanol (four volumes per unit of flesh fresh CSF, K1SF and K4SF) from the 2009 season were analyzed for MW
weight). Samples were ground with a mixer (Orione Mod 0.7 kg, Sirman determination after desalting with PD-10 columns (Supelco). The MW
spa, Venice, Italy), homogenized (Ultraturrax T25 Janke and Kunkel, was measured in Jasco equipment (LC-Net II ADC, Kyoto, Japan) with a
Ika-Labortechnik, Funkents€ort, Germany) and filtered, and the remain- refractive index detector (Jasco RI-1530) and injection valve (Rheodyne,
ing pellet was treated again with 80% v/v ethanol. Subsequently, the loop 20 μL, Cotati, CA). Two different columns in sequence were used:
pellet was washed with acetone until it became white and finally air-dried TSKgel GMPWxl and TSKgel G3000PWxl (300  7.8 mm i.d., Tosoh
and stored at
20 °C until analysis. An aliquot of the ethanol-soluble Bioscience LLC, King of Prussia, PA) after calibration with 250, 110, 70,
fractions was kept at 4 °C until subsequent analysis. 40, 6 kDa and glucose (Fluka, Buchs, Switzerland). Blue dextran was
Extraction of Polysaccharide Components. Cell wall poly- used to test the void volume (V0) of the column. The elution buffer was
saccharides were fractionated into four groups and the final R-cellulose 0.05 M tris
hydrochloric acid and 0.2 M sodium chloride at a flow rate
residue (R-CEL). The first two extracts were two pectic fractions: the 0.4 mL/min. Fractions of 250 μL were collected using a Redifrac fraction
imidazole-soluble fraction (ISF) and carbonate-soluble fraction (CSF). collector (Pharmacia Biotech, Uppsala, Sweden). Fractions were assayed
The next two were the hemicellulosic fractions: the 1 M potassium- for NS by the Dische method,29 and absorbance values were measured at
soluble fraction (K1SF) and 4 M potassium-soluble fraction (K4SF). 630 nm in a microplate reader (MPM 600, Bio-Rad). Peaks above
One gram of CWM was sequentially extracted according to Jim
enez 250 kDa or below 6 kDa were considered to be of high and low MW,
et al.25,26 with slight modifications in the solutions and concentrations respectively, throughout the manuscript.
used: (a) 0.5 M imidazole/hydrochloric acid, 10 mM in metabisulfite Quality Traits. The weight, equatorial and longitudinal diameter of
(Fluka puriss, Buchs, Switzerland) (two times, 250 mL) for 4 h at room each individual fruit was measured according to Fern
andez-Trujillo
temperature in the first extraction and 18 h in the second, and washed et al.31 and Obando et al.22 Whole fruit hardness (in N/mm) was measured
with distilled water (250 mL) (ISF); (b) 0.05 M sodium carbonate at a selected point of the equator of the fruit by a compression test of
(Sigma, Barcelona, Spain), 20 mM in sodium borohydride (Panreac, 2 mm deformation according to Tijskens et al.20 Flesh firmness was
Barcelona, Spain) (two times, 250 mL) for 18 h at 4 °C and 4 h at room measured in cylinders (20  15 mm) by using a 1.6 mm wide probe
temperature and washed (CSF); (c and d) 1 and 4 M potassium adapted to a testing machine.31 Flesh juiciness, juice density and total
hydroxide (Merck, Darmstadt, Germany), 10 mM in sodium borohy- soluble solids (in °Brix) were measured according to Obando et al.22
dride (Panreac) (two times, 250 mL) for 18 at 4 °C, 4 h at room Flesh juiciness and the pellet content of the juice after centrifugation are
temperature and washed (K1SF and K4SF). The fractions CSF, K1SF expressed in grams of juice per kg fresh weight or juice, respectively.

7774 [Link]/10.1021/jf201155a |J. Agric. Food Chem. 2011, 59, 7773–7784

Journal of Agricultural and Food Chemistry ARTICLE

Table 1. Fruit Quality Traits of the Parental Lines and NILs Table 2. Cell Wall Material (CWM) Composition of the
of Melon Obtained from Two Consecutive Seasons (2008 and Parental Lines and NILs of Melon Obtained from Two
2009)a Consecutive Seasons (2008 and 2009)a
parental soluble flesh whole fruit pellet content of flesh parental line yield of
line solids firmness hardness the juice juiciness or NIL CWMb free sugarsb NSc UAc CELc
or NIL (°Brix) (N) (N/mm) (g/kg) (g/kg)
Season 2008
Season 2008 PS 0.86 acd 5.90 a 68.11 abd 201.15 a 271.67 a
PS 9.60 a 7.30 a 83.36 ac 28.94 a 355.77 a SC 0.67 b 5.22 a 61.51 b 159.53 b 209.30 b
SC 7.76 a 6.97 ab 24.79 bc 26.33 a 326.93 b SC3-5-1 0.80 c 5.95 a 47.16 c 170.80 c 222.78 c
SC3-5-1 10.81 b* 6.23 b 28.91 b 40.95 b* 356.15 a SC7-2 0.95 d 4.84 a 77.52 d 220.59 d 288.23 a
SC7-2 9.15 a 11.51 c* 58.19 c 30.04 a 327.34 a
Season 2009
Season 2009 PS 0.93 a 9.27 a 56.30 a 157.68 a 178.01 a
PS 11.92 a 5.66 a 64.04 a 22.82 a 295.81 a SC 0.54 b 3.83 b 42.93 b 108.72 b 132.43 b
SC 5.32 b 6.21 a 13.99 b 39.53 b 435.44 b SC3-5-1 1.01 a 10.01 a 68.05 c 144.43 a 210.10 c
SC3-5-1 13.53 c* 6.22 a 32.55 b 46.83 b* 276.36 a SC7-2 1.04 a 9.98 a 95.70 d 179.62 c 255.97 d
a
SC7-2 12.01 a 9.21 b* 54.98 c 30.54 a 161.12 c* Results were analyzed per individual season. b Results are expressed in
a g/100 g of fresh weight and are the average value of three replicates.
Results were statistically analyzed per individual season. Means of each c
attribute followed by different letters in the same column (a
d) are Results are expressed in mg/100 g of fresh weight and are the average
significantly different according to the LSD test (p-value = 0.05). The value of three replicates. Means of each attribute followed by different letters
NIL means followed by an asterisk are significantly different from PS in the same column (a
d) are significantly different according to the LSD
according to the Dunnett test (p-value = 0.05). test (p-value = 0.05). The NIL means followed by an asterisk are sig-
nificantly different from PS according to the Dunnett test (p-value = 0.05).
Statistical Analysis. Quality traits and cell wall components data
were subjected to univariate analysis of variance using cultivar as a single Table 3. Neutral Sugar Composition Cell Wall Material of the
factor. If means within the cultivars were significantly different, they Parental Lines and NILs of Melon Obtained from Two
were separated by a Tukey
Kramer HSD test (quality traits) and LSD
Consecutive Seasons (2008 and 2009)a
test (cell wall components) at p = 0.05. All the comparisons of quality
traits of the NILs were made with PS, using JMP 5.1 software (SAS neutral sugarsb
Institute Inc., Cary, NC), according to a Dunnett test (p = 0.05), because
they share the same genetic background. parental line
or NIL Rha Fuc Ara Xyl Man Gal Glc

’ RESULTS Season 2008

PS 2.9 ab 2.6 a 5.2 a 8.4 ab 4.5 ac 25.4 a 18.1 a
Quality, Physiological Behavior and Cell Wall Material of
the Parental Lines (PS and SC). PS showed higher soluble solid SC 3.3 ab 2.5 a 8.6 b 9.6 ab 4.2 a 18.7 b 11.4 b
levels and a greater pellet content proportion in the juice SC3-5-1 2.5 a 1.9 a 4.1 a 7.2 a 3.1 b 14.9 b 13.4 b
compared with SC. The same was true for whole fruit hardness SC7-2 4.0 c 4.0 b 5.2 a 10.6 b 5.0 c 32.4 c 16.3 ab
(>70% higher in PS than SC), but flesh firmness values were Season 2009
similar (Table 1). The respiration rate and ethylene production
PS 1.7 a 1.4 a 5.3 a 9.4 a 3.5 a 13.1 a 21.8 a
pointed to nonclimacteric behavior in both parentals (data not
SC 2.0 a 1.0 a 7.7 b 8.4 a 4.7 ab 10.3 b 7.8 b
shown).
The CWM of the replicates of all lines was combined every SC3-5-1 1.9 a 1.2 a 5.4 a 9.5 a 4.5 ab 15.7 c 31.9 c
year for subsequent extraction because of the sparse differences SC7-2 3.9 b 2.1 b 7.5 b 16.8 b 5.8 b 27.5 d 30.5 c
a
detected between replicates (data not shown). Cell wall compo- Results were analyzed per individual season. b Results are expressed in
nents and CWM yield were higher in PS than in SC (Table 2). mg/100 g of fresh weight and are the average value of three replicates.
Glucose and galactose were the main neutral sugars in cell wall Means of each attribute followed by different letters in the same column
(a
d) are significantly different according to the LSD test (p-value = 0.05).
material in both parentals while the highest values of the rest of
sugars corresponded to xylose and arabinose. PS showed higher
values of Glc and Gal and lower values of Ara and Rha than SC weight above 250 kDa or below 6 kDa in ISF were lower
(Table 3). The characterization of pectic and hemicellulosic (or undetectable) in PS than in SC (Figure 2). In CSF, the
fractions reported below outlines the main differences between parentals had high UA values and significant amounts of
parentals (Tables 4 and 5). arabinose, galactose and rhamnose, homogalacturonans being
Cell Wall Fractions. Pectic Fraction and Parental Lines. The the main components of this fraction. SC showed higher Rha
ISF and CSF of the parental lines were rich in pectic poly- and Ara values than PS (Figure 3). In the CSF, a dense gel was
saccharides (UA, Gal and Ara). Overall, the parental lines showed formed when the HPSEC elution buffer was added.
similar profiles in the pectic fractions and similar HPSEC results, Hemicellulosic Fraction and Parental Lines. The K1SF and
with some exceptions. K4SF showed higher percentages of glucose and xylose (Figures 4
In ISF, PS had a higher fucose (25
50%) and xylose (18
49%) and 6). In general, in both lines the percentage of uronic acids
content than SC (Figure 1). Polysaccharides with a molecular (30
53% in K1SF and 14
18% in K4SF) was lower in
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Table 4. Relative Percentage (%) of Polysaccharides in Pectic and Man (13
48%) values and a very low Ara content compared
[Imidazole-Soluble Fraction (ISF) and Carbonate-Soluble with SC (81
172% higher in SC than PS). Rha content was
Fraction (CSF)] and Hemicellulosic [1 M Potassium-Soluble lower in PS than SC only in 2009 (Figure 4). The peak below
Fraction (K1SF) and 4 M Potassium-Soluble Fraction (K4SF)]. 6 kDa present in SC was absent from PS, and this parental had a
Fractions of Cell Wall Material and Percentages of the Sum of group of intermediate molecular weight polysaccharides (110 to
Pectins and Hemicelluloses (∑P þ ∑H) in the Parental Lines 70 kDa) absent from SC (Figure 5). In K4SF, Glc, UA, Xyl and
and NILs of Melon Obtained from Two Consecutive Seasons Gal were the main components, with no differences between
(2008 and 2009) parentals, while Rha and Man had a lower and higher content in
PS than in SC, respectively. Fucose was present in substantial
hemicellulosic percentages (in some samples higher than 5% of CWM in K4SF)
pectic polysaccharides polysaccharides (Figure 6). The main peak ranged between 70 and 110 kDa in
both parentals. In PS this peak was wider than in SC and broadened
parental line or ISF þ CSF ∑P þ ∑H K1SF þ K4SF ∑P þ ∑H
due to a higher molecular weight. PS had more polysaccharides
NIL (%)a (%)b (%)a (%)b between 6 and 40 kDa with a higher peak close to 6 kDa than SC
(Figure 7).
Season 2008
Cellulosic Fraction and Parental Lines. No differences be-
PS 13.8 44.0 17.6 56.0 tween parentals were found as regards the predominance of the
SC 5.1 54.3 4.3 45.7 R-CEL fraction in the cell wall structure (77
87% overall). In
SC3-5-1 10.8 40.4 16.0 59.6 this fraction, cellulose was the major component (>86%). Galactose,
SC7-2 9.3 40.5 13.7 59.5 glucose and uronic acids were the main noncellulosic compo-
Season 2009
nents, indicating the presence of xyloglucans. PS showed more
Gal (around 24%) and Man (52
66%) and less Ara (38
104%)
PS 7.0 45.4 8.4 54.6
and Glc (around 25%) than SC. Both parentals had significant
SC 9.8 57.7 7.2 42.4 percentages of Rha (>7%) (Figure 8).
SC3-5-1 7.4 39.2 11.4 60.8 Table 4 presents a summary of the soluble fractions (pectic
SC7-2 5.4 39.2 8.4 60.9 and hemicellulose) and showed the differences between parental
a
Relative percentage of the total fractions quantified from cell wall lines. The pectic fraction was defined as the sum of ISF and CSF,
material (ISF, CSF, K1SF, K4SF, and R-CEL). b Relative percentage of and the hemicellulosic fraction as K1SF plus K4SF. The percen-
the noncellulosic fractions quantified from cell wall material. tages of pectic and hemicellulosic fractions were around 44% and
55%, respectively, for PS; while the same fractions for SC were
Table 5. Relative Percentage of Polysaccharides (%) in Imida- around 56% and 44%, respectively. Therefore, PS showed a
zole-Soluble Fraction (ISF), Carbonate-Soluble Fraction (CSF), higher hemicellulosic fraction and a lower pectic fraction than
1 M Potassium-Soluble Fraction (K1SF) and 4 M Potassium- SC. The ISF showed a higher content of low molecular weight
Soluble Fraction (K4SF) of the Noncellulosic Polysaccharides polysaccharides in SC than PS (Figure 2).
Extracted from Cell Wall Material in the Parental Lines and Fruit Quality Traits of the Climacteric NIL SC3-5-1 versus PS.
NILs of Melon Obtained in Two Consecutive Seasons (2008 Cell Wall Material and Fractions. SC3-5-1 showed lower flesh
and 2009) firmness than PS in 2008 but not in 2009. The juice of SC3-5-1
had a higher soluble solid content and similar flesh juiciness and
pectic hemicellulosic pellet content of the juice than PS. The hardness of SC3-5-1 was
polysaccharides polysaccharides
50
65% lower than that of PS (Table 1). At harvest, the
respiration rate and ethylene production were significantly high-
parental line or NIL ISF (%) CSF (%) K1SF (%) K4SF (%) er in the climacteric NIL SC3-5-1 than in PS (data not shown).
In SC3-5-1, R-CEL (77%), was the main component of the
Season 2008 cell wall structure, in agreement with its inbred parentals. Overall,
PS 32.3 11.7 22.4 33.6 SC3-5-1 had 9
16% lower uronic acids content than PS
SC 41.0 13.2 23.7 22.1 (Table 2).
SC3-5-1 19.0 21.4 26.5 33.1 After cell wall fractionation, study of the ISF showed that the
SC7-2 21.1 19.4 23.9 35.6 pectic sugars (UA, Gal and Ara) were present in SC3-5-1, as they
were in PS. The imidazole-soluble fraction from the climacteric
Season 2009 NIL had a noticeably higher content of nonpectic sugars (especially
PS 24.3 21.1 31.0 23.6 in 2008) than PS. Glucose and fucose were 23
77% and 42
121%
SC 25.0 32.7 24.3 18.0 higher in SC3-5-1 than PS, respectively. In the season 2008, Man
SC3-5-1 27.9 11.3 41.3 19.5 and Xyl values were higher (111% and 75% respectively) in SC3-
SC7-2 30.5 8.6 30.6 30.3 5-1 than PS (Figure 1). By HPSEC (Figure 2), it was seen that
the climacteric NIL showed more peaks in the ISF of high and
low molecular weight than PS. The main peak of SC3-5-1 at
hemicellulosic fractions (especially in K4SF) than in the pectic 70 kDa was wider than the same peak in PS and showed a
fractions (44
55% in ISF and 55
81% in CSF) (Figures 1, 3, 4 broadening of the eluted peak to a higher molecular weight. High
and 6). MW polysaccharides (250 kDa) were detected in SC3-5-1 and
In K1SF, uronic acids were still the main component but to a were more abundant than in PS. Homogalacturonans were the
lesser extent in SC (in 2008). Xylose was the most abundant main component in carbonate-soluble fraction of SC3-5-1, as in
neutral sugar in both parentals. PS showed lower Gal (14
34%) PS (Figure 3).
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Journal of Agricultural and Food Chemistry ARTICLE

Figure 1. Composition of neutral sugars (NS) and uronic acids (UA) in the pectic imidazole-soluble fraction (ISF) of the fruit flesh of different melon
lines harvested in two consecutive seasons, 2008 and 2009. NS and UA are expressed in percentage of total sugar (TS) recovered from this fraction. Error
bars with standard deviation (σ) are included in columns.

Figure 2. Molecular-mass distribution of the neutral fraction from the pectic imidazole-soluble fraction (ISF) of the fruit flesh of different melon lines.
T250, T110, T70, T40, T6 and glucose were the molecular size standards, and V0 was the void volume.

In the K1SF hemicellulosic fraction, uronic acids and xylose NIL showed around 39% lower values in Ara than in PS
were the main sugars in PS and in SC3-5-1, but this climacteric (Figure 4). In HPSEC (Figure 5), SC3-5-1 did not show the

7777 [Link]/10.1021/jf201155a |J. Agric. Food Chem. 2011, 59, 7773–7784

Journal of Agricultural and Food Chemistry ARTICLE

Figure 3. Composition of neutral sugars (NS) and uronic acids (UA) in the pectic carbonate-soluble fraction (CSF) of the fruit flesh of different melon
lines harvested in two consecutive seasons, 2008 and 2009. NS and UA are expressed in percentage of total sugar (TS) recovered from this fraction. Error
bars with standard deviation (σ) are included in columns.

Figure 4. Composition of neutral sugars (NS) and uronic acids (UA) in the hemicellulosic 1 M potassium-soluble fraction (K1SF) of the fruit flesh of
different melon lines harvested in two consecutive seasons, 2008 and 2009. NS and UA are expressed in percentage of total sugar (TS) recovered from
this fraction. Error bars with standard deviation (σ) are included in columns.

peak at 70 kDa present in PS, although other polysaccharides Fruit Quality Traits of the Nonclimacteric NIL SC7-2 versus
seemed to be similar. In the K4SF, the high values of glucose, PS. Cell Wall Material and Fractions. The trends in respiration
xylose, galactose and fucose suggested the presence of xyloglu- rate and ethylene production were similar in the nonclimacteric
cans in SC3-5-1, as in PS (Figure 6). SC3-5-1 had less Glc NIL SC7-2 and PS (data not shown). SC7-2 had 60% higher flesh
(7
46%), Rha (63
77%) and Fuc (38%) and more UA (23
50%) firmness, 15
30% lower hardness and lower flesh juiciness
than PS (higher values in 2009). After HPSEC analysis (Figure 7), (particularly in 2009) but a similar soluble solid content to PS
SC3-5-1 showed a principal polysaccharide peak close to 40 kDa, (average value 10.7 °Brix) (Table 1).
which shifted toward 70 kDa in PS. Overall, SC7-2 had more neutral sugars, uronic acids and
In the R-cellulose residue of SC3-5-1, CEL was the major cellulose than PS (Table 2). Neutral sugars Gal, Rha, Man, Xyl
component and Gal, Glc and UA were abundant, as in PS. SC3-5- and Fuc were higher in SC7-2 than PS (Table 3), differences that
1 had more Ara and less Man (especially in 2009), Fuc and Xyl were more pronounced in 2009.
than PS (Figure 8). In the ISF, the flesh of SC7-2 had higher levels of hemi-
The pectic and hemicellulosic fractions of SC3-5-1 were 11% cellulosic sugars Glc and Man than PS (Figure 1). In SC7-2,
lower and 9% higher respectively, compared with PS. The main the main peak (present at 70 kDa in PS) shifted to a
difference was in the hemicellulosic fractions of SC3-5-1 contain- molecular weight below 40 kDa, and polysaccharides of
ing around 27% more K1SF than PS (Table 5). low MW were more abundant than in PS (Figure 2). In the
The climacteric NIL SC3-5-1 showed the highest values in galac- CSF, homogalacturonans were present in both, SC7-2 and
tose in the CSF, K4SF, and especially in R-CEL (Figures 3, 6 and 8). PS (Figure 3).
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In the K1SF, uronic acids and xylose were the main compo- peak could be formed by the overlapping of two others, one of
nents in SC7-2, as in PS, and xylans were the main hemicellulosic molecular weight between 40 and 6 kDa and another of around
polysaccharides. SC7-2 had less Ara and Fuc but slightly higher 6 kDa. However, in SC7-2 this second peak below 6 kDa was
Man levels than PS (Figure 4). In HPSEC analysis, SC7-2 did not reduced to a small shoulder, so that the main peak was visible
show the peak at 70 kDa present in PS (Figure 5). In PS, the main between 40 and 6 kDa. In the K4SF, uronic acids, glucose, xylose
and galactose were the main components, so that xyloglucans were
probably the most abundant polysaccharides, as in PS (Figure 6).
The NIL SC7-2 had a main peak close to 110 kDa with a shift
toward lower molecular weight (110 to 70 kDa) in PS, as in-
dicated by HPSEC analysis (Figure 7).
Cellulose was the major constituent in R-CEL of SC7-2, and
noncellulosic sugars Gal, Glc and UA were the main components,
as in PS. SC7-2 showed more Gal (24
58%), and less Man
(around 25%) and UA (18%) than PS (Figure 8).
Compared with PS the cell wall structure of SC7-2 had a
slightly higher R-CEL content (>7%, data not shown) and less
pectin and more hemicellulose (Table 4). The greatest differ-
ences were the higher values in the K4SF (Table 5), unlike in
SC3-5-1, where K1SF was the main hemicellulosic fraction.
Differences between Seasons. The fruit from season 2008 grew
outside their optimum summer conditions and attained a lower
maturity index at harvest, with lower levels of soluble solids and free
sugars. Uronic acids, cellulose and flesh firmness were higher in 2008
than in 2009 (Tables 1 and 2). As shown, both NILs showed a higher
content of nonpectic sugars and lower content of UA in ISF of 2008
than 2009 (Figure 1) and in CSF of 2009 than 2008 (Figure 3).
The glucose/galactose ratio was less than 1 in 2008 and more
than 1 in 2009 (Table 3). In 2009, the higher values of Gal and
Rha in SC3-5-1 (Figure 3) would have contributed to the higher
content of rhamnogalacturonans than observed in PS.
SC fruits harvested in 2009 only attained 5.3 °Brix and 3.8 g/
100 g of free sugars (55.4 and 41.4% lower than PS, respectively).
The pectic components (UA, Gal and Rha) and hemicellulosic
components (Glc, Xyl and Man) were higher and lower in 2008
than in 2009, respectively (Table 3).

Figure 5. Molecular-mass distribution of neutral fraction from the ’ DISCUSSION

hemicellulosic 1 M potassium-soluble fraction (K1SF) of the fruit flesh
of different melon lines. T250, T110, T70, T40, T6 and glucose were the The locations and structures of cell wall polysaccharides are
molecular size standards, and V0 was the void volume. related to several texture parameters such as flesh firmness and

Figure 6. Composition of neutral sugars (NS) and uronic acids (UA) in the hemicellulosic 4 M potassium-soluble fraction (K4SF) of the fruit flesh of
different melon lines harvested in two consecutive seasons, 2008 and 2009. NS and UA are expressed in percentage of total sugar (TS) recovered from
this fraction. Error bars with standard deviation (σ) are included in columns.

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whole fruit hardness (Table 1). In general, the main changes that polysaccharide group was fully responsible for the value of fruit
occur during fruit ripening, including softening, have been asso- texture in any of the melons lines analyzed, but the relative
ciated with modifications in the cell wall pectic structure. How- amounts of each group were important for texture.
ever, investigations have revealed that the hemicellulosic matrix Parental Lines (PS and SC). This is the first study that dem-
of the cell wall is at least as important as the pectin matrix in onstrates that parental melons PS and SC showed marked dif-
determining the structural integrity of the wall.32,33 From the ferences in the intrinsic characteristics and composition of the
results of the present work, it can be proposed that no individual cell wall structure irrespective of the other quality traits studied
(Tables 1 and 2) and according to previous studies conducted for
QTL mapping of quality traits.18,22 In general, PS had higher cell
wall material yield, total uronic acids, neutral sugars and cellulose
content and higher molecular weight, in the hemicellulose
fractions than SC. These values, together with the different
percentages of pectic and hemicellulosic components, contrib-
uted to the differences with PS, but did not explain why SC had
similar flesh firmness to PS. The variability in firmness, texture
and juiceness characteristic of ripe fruit of different types is in
relation with differences in cell wall composition and marked
diversity exists in cell wall changes between species and even
different cultivars of the same species.34 However, this informa-
tion particularized on melons is lacking.
Pectic fractions of parental lines (and NILs) showed a typical
melon composition found in several cultivars,5,7 with high content in
UA, Gal and Ara. In parentals (and NILs), values of the typically
hemicellulosic sugars (Xyl, Glc, Fuc and Man) pointed to
depolymerization of these polysaccharides, whose fragments
were collected in this fraction such as in other previous studies
on “Prince” and “Wasada-Uri” melons.8 The presence of hemi-
cellulosic sugars in SC could be related to the presence of poly-
saccharides of low molecular weight (<6 kDa) indicating the
onset of increased hydrolytic activity in this parental because
depolymerization of hemicelluloses has been observed through-
out ripening in “Charentais” melons.5
In the carbonate-soluble fraction, homogalacturonans were
the most abundant polysaccharide constituents in parental and
NILs, accompanied by lower levels of rhamnogalacturonans and
arabinogalactans in parentals. The solubilization problem of this
Figure 7. Molecular-mass distribution of neutral fraction from the fraction was present in the parentals and NILs analyzed. In CSF
hemicellulosic 4 M potassium-soluble fraction (K4SF) of the fruit flesh in green bean pods, solubilization problems have been reported
of different melon lines. T250, T110, T70, T40, T6 and glucose were the previously2 and suggest a low degree of esterification of the pectin
molecular size standards, and V0 was the void volume. extracted.

Figure 8. Composition of neutral sugars (NS) and uronic acids (UA) in R-cellulose residue (R-CEL) of the fruit flesh of different melon lines harvested
in two consecutive seasons, 2008 and 2009. NS and UA are expressed in percentage on total noncellulosic sugar (TS) recovered from this fraction. Error
bars with standard deviation (σ) are included in columns.

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In hemicellulosic fractions, lower values of uronic acids than in ripening index. Also, the NS content from side chains of pectins
pectic fractions were in agreement with results already reported was higher in SC3-5-1 than in PS. The presence of NS from
in melon.5 However, in K1SF, xylose values suggested that xylans pectins is a common indication of ripening in all fruit species
are the main polysaccharides, although the high content of uronic including melons.7,9,39
acids also quantified in this fraction indicated that significant The climacteric behavior of SC3-5-1 was in agreement with
amounts of pectins were still bound to the wall (in parental and previous results in other climacteric NILs versus PS.18,23 The
NILs). The xylans are hemicellulosic components present in small climacteric behavior of SC3-5-1 could be responsible for the
quantities in the primary and secondary cell walls of dicotyledonous differences in the high molecular weight polysaccharides extracted
plants such as melon.10 and could be related to the higher content of hemicellulosic
Differences in texture between parentals could be explained in polysaccharides present in ISF. The greater loss of high MW
part by the intermediate molecular weight polysaccharides of polymers in SC3-5-1 than in PS could affect the structure of the
K1SF present in PS, which could contribute to the increased wall and consequently textural values during the subsequent
firmness of this parental. postharvest phase, but particularly juiciness.
Xyloglucans could be the main component of K4SF of both In K4SF, the lower molecular weight of the main peak in SC3-
parentals (and NILs) as indicated the values of Glc, Xyl and Fuc 5-1 could be correlated with the QTLs contained in the introgres-
(Figure 6). These results are consistent with observations made sion of SC present in this NIL and other similar NILs.18,21,23
for the monosaccharide composition of the hemicellulosic frac- Climacteric NIL SC3-5-1 had the highest values in galactose.
tion of other cultivars such as Galia melons with their high levels The increase in Gal indicates an increased content of pectic
of glucose, xylose and galactose.35 galactan side chains.40 Studies in muskmelon (Cucumis melo L.)
R-Cellulose residue was the main component in parentals and other fruits point to a decrease in the level of the Gal as a
(and NILs), which agrees with the results reported for Galia result of ripening.36,39 Indeed, galactose does not decrease in
melon.35 Cellulose and xyloglucans presents in R-CEL contrib- ripening-impaired tomato such as Cnr tomato mutants unable to
uted to texture values through their interactions.36 Rhamnose soften41 or transgenic tomatoes with suppressed β-galactosi-
values indicate that rhamnogalacturonans of low degree of branch- dase/exogalactanase activity.
ing were bound to cellulose microfibers, probably due to rhamno- The existence of melon varieties with climacteric and non-
galacturonan/galactan-type structure associations, as reported in climacteric behavior make this species a suitable system for studying
papaya fruit.37 the genetic control of climacteric ripening. In a recent study with
Cellulose and hemicellulose exhibit a distinctive network of near-isogenic lines of melon five quantitative trait loci were
microfibrils via hydrogen bonds, which enhance cell wall rigidity associated with flesh firmness.18 The QTL eth3.5 involved in
and resistance to tearing. Pectin and hemicellulose confer plasticity ethylene production and climacteric response was located in an
and the ability to stretch. In the middle lamella, pectin plays a introgression of approximately 50 cM in SC3-5b.21 In this
primary role in intercellular adhesion.32 Therefore, the differ- introgression, the CmACS5 and CmEIL4 genes belonging to
ences observed in the percentages of pectins and hemicellu- ACC synthase (ACS) multigenic family involved in ethylene
loses found in parental cell walls could have an important biosynthesis and signaling have been mapped.18 In the climac-
effect on fruit texture. There is extensive evidence to support teric NIL SC3-5b, a QTL (ff3.5) associated with lower firmness
the contribution of the matrix of noncellulosic polymers in values than the control PS was identified, suggesting that these
cell wall disassembly during normal fruit ripening; however, values might be due to eth3.5, a climacteric QTL located in the
cellulose microfibrils, in most cases, are not significant con- same introgression as ff3.5. In our investigation, lower values of
tributors to disassembly.17 the cell wall components than PS, especially uronic acids, were
NILs (SC3-5-1 and SC7-2). The genetic nature of the climac- associated with QTL eth3.5. An expansin CmEXP2 has been
teric NIL SC3-5-1, that can somehow separate some ripening mapped in this interval.18 Expansin enzymes are influenced
events such as climacteric ripening (ethylene-dependent) and directly by ethylene and cooperate with endopolygalacturonases
part of the softening process (a partly ethylene-independent and to disassemble the polymer networks of cell wall including the
partly ethylene-dependent process4,13), could explain differences cleavage of the R-1,4-linkages between the galacturonic acid residues
in the cell wall composition (especially UA) and the reason for of homogalacturonans,17 thereby contributing to fruit softening,
SC3-5-1 showing similar flesh firmness values despite different especially in the early stage of fruit softening.42 Although the
ripening index values at harvest compared to PS. The action of function of expansin enzymes may not cause the hydrolysis of
ethylene would determine in part the lower values of uronic acids in pectin, it may enhance polymer degradation by affecting PG
SC3-5-1 than in PS, probably due to the extensive depolymerization activity.43 In tomato fruit, underexpression of an expansin gene
of pectic components as a result of enhanced endopolygalactur- resulted in a moderate increment in firmness due to a lower
onase activity. In fact, ethylene-treated watermelon fruit with a degree of pectin depolymerization.44
reduced total UA content showed increased PG activity.38 Flesh juiciness and firmness values of nonclimacteric NIL
On the other hand, the expression of polygalacturonase genes, SC7-2 were lower and higher than those of PS, respectively. Flesh
which act in cell wall degradation and the loss of cell membrane juiciness is considered a main feature in fruit texture, but melon
semipermeability during ripening, has components that are both fruit with firmer flesh is usually less juicy and few QTLs associated
dependent and independent of ethylene action.16 Juice pellet with juiciness have been mapped so far in melon.22 In fact, SC7-2
content, juice, density and flesh juiciness values in the climacteric showed lower juice leakage than PS during storage in fresh-cut
line SC3-5-1 could also help explain this fact, since, according to format.19
several authors,9,12 tissue firmness is associated with several Enhanced CEL and NS contents (as in SC7-2 versus PS
attributes, including those mentioned. melons) and a reduced UA content in raw and cooked squash
The higher content in nonpectic sugars in imidazole-soluble (Cucumis maxima) fruit have been associated with higher
fraction of SC3-5-1 than PS was possibly a result of different firmness.36 The opposite trend in the UA content found by the
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authors36 compared with that observed in SC7-2 suggests that β-galactosidase level would also limit pectin methylesterase activity
reduced UA is a cultivar-dependent effect associated with flesh although this mechanism is not clear.45
firmness or that it is not so essential for flesh firmness. In fact, As regards the structural integrity of the cell wall, is important
higher values of UA may be due to the better maintenance of cell to highlight the role of the matrix of hemicellulose.32,33 The
wall integrity in the covalently bound pectin polymers of SC7-2. highest values of hemicellulose in SC7-2 (Tables 4 and 5) can be
A higher content in galactose has been related with higher flesh related to slower ripening process. A large number of studies have
firmness in several fruits,41 and a reduction in Gal levels has also demonstrated that the depolymerization of hemicelluloses in
been proposed as an index of progression of flesh softening in ripening fruits, including melon, is closely correlated with fruit
peach.45 softening.17 In melon, modifications of hemicelluloses occurred
In SC7-2, the higher ISF content of nonpectic sugars (as in the through all ripening stages, but only few changes in the molecular
climacteric NIL SC3-5-1) than in PS indicates that, irrespective weight of these compounds during ripening have been described.5
of the differences between NILs in firmness or climacteric The role of cellulosic fraction is important because cellulose micro-
behavior, pectins that were more branched and less joined to fibers interact with xyloglucans through cross-bridges, which
the wall structure were more solubilized in NILs than in PS. Also, contributes to maintaining and strengthening the network struc-
hemicellulosic components were more abundant especially in ture observed microscopically.36
less mature and firmer fruits harvested in 2008, and this can be an The presence of more hemicellulosic and cellulosic fractions
indication of the involvement of hemicellulose disassembly in and reduced flesh juiciness can compromise the edibility of
fruit softening. melon fruit containing the QTL of SC7-2. The importance of
Mannose is a nonpectic sugar especially important for cross- the abundance of cellulosic polysaccharides and/or of the
linkages between xyloglucan polymers in hemicelluloses and covalently bound pectin polymers in cell wall integrity together
cellulose microfibers, and the higher Man content in the pectic with the galactose and mannose content of different fractions
fractions (ISF and CSF) can been associated with firmer SC7-2 agrees with previous results of experiment in long shelf life melons
melons, as previously reported by Nishizawa and Ito.8 stored at 20 °C.8 The enhanced cellulose fractions in SC7-2 may
Hemicellulose was higher in NILs than PS. In SC7-2, K4SF extend shelf life of this NIL but could compromise the fruit's
was the main hemicellulosic fraction and K1SF in SC3-5-1. This nutritional value.
fact could be consistent with the texture values of both NILs In summary, the biochemical effect of the QTLs of the
(Table 1). According to several authors,5,40,46 K1SF is character- climacteric NIL SC3-5-1 was associated with extensive pectin
ized by solubilizing glycans barely involved in the wall structure, degradation and, consequently, polyuronide degradation, with
and contained only small amounts of xyloglucans, whereas in no always significant effect on flesh firmness at harvest. In the
K4SF glycans tightly bound to the wall structure are released by nonclimacteric NIL SC7-2, the effect of the QTL which resulted
breaking hydrogen bonds and swelling without dissolution of the in higher values of flesh firmness was associated with higher levels
cellulose microfibrils. This indicates greater involvement of K4SF of cell wall components (especially galactose) and R-cellulose
polysaccharides in the maintenance of the wall structure, and, residue.
therefore, a higher percentage of this fraction could be related to Differences between Seasons. The less advanced solubiliza-
a harder fruit texture. tion and depolymerization processes of the cell wall components
The highest values of hemicellulose and R-CEL in SC7-2 in 2009 than in 2008 explained the differences in UA, CEL and
could be related to the 1.6-fold higher flesh firmness observed in flesh firmness values between seasons. Menezes et al.35 reported
this nonclimacteric NIL than in PS. The fruit flesh firmness QTL, higher values of UA in less mature fruits of Galia melon. The
fh7.2, was located in an introgression of approximately 27 cM higher soluble solids and NS content measured in 2009 was
from SC in linkage group VII, and resulted in a fruit hardness associated with fruit attaining a higher ripening index in 2009
value 1.8-fold higher than the value found for PS.18,22 Previous than in 2008 for environmental and crop management reasons.
analyses of the change in hardness of fresh fruit20 and in the flesh In 2009, SC fruits were harvested less mature because the plants
firmness of fresh-cut cubes of SC7-2 and PS during storage19 suffered from Fusarium sp. in their roots. These differences
indicated that the value at harvest is critical and that SC7-2 is also provoked a different level of solubilization and depolymerization
firmer than PS. The QTL of SC7-2 is located in linkage group of pectic and hemicellulosic components that reflected fruit
VII.21 The effect of this QTL on cell wall composition according ripening.9,39,40
to our results was a higher level of hemicellulosic and lower level Sucrose accumulation accompanies fruit development and
of pectic components, and higher uronic acid, neutral sugar ripening in sweet melons47 and was clearly dependent on environ-
(especially galactose), mannose (only in pectic fractions), cellu- mental conditions because fruit from season 2009 accumulated
lose and R-cellulose residue contents. A pectin methylesterase more sucrose in the flesh than those from 2008 (data not shown).
CmPME2 has been mapped in linkage group VII.18 PME de- This research will serve as the basis for studies on the dynamic
esterification of polyuronides removes the methyl groups from of changes in texture attributes (particularly softening) and cell
the C6 position of galacturonic acid residues of high molecular wall degradation caused by physical and enzymatic processes
weight pectin during fruit ripening.37,46 A higher yield of during melon ripening, as affected by QTLs.
galactose and uronic acids may be due to increased content of
pectic galactan side chains, and, consequently, the greater inter- ’ ASSOCIATED CONTENT
action with cellulose microfibers40 was probably associated with
decreased PME (EC [Link]). P
erez-Almeida and Carpita33 bS Supporting Information. Supplementary Figure 1, prepa-
proposed that the galactose side chains on the wall would decrease ration of cell wall material (CWM) from the fresh melon flesh.
the wall's porosity, blocking the access of hydrolases such as Supplementary Figure 2, preparation of polysaccharide fractions
PME to the wall components and preventing the depolymeriza- from the fresh melon flesh. This material is available free of
tion of structural polysaccharides. In this context, a reduced charge via the Internet at [Link]
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’ AUTHOR INFORMATION Reevaluation of the key factors that influence tomato fruit softening and
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Corresponding Author (7) Simandjuntak, V.; Barrett, D. M.; Wrolstad, R. E. Cultivar and
*Phone: þ34 968 32 54 36. Fax: þ34 968 32 54 33. E-mail: [Link]@ maturity effects on muskmelon (Cucumis melo) colour, texture and cell
[Link]. wall polysaccharide composition. J. Sci. Food Agric. 1996, 71, 282–290.
(8) Nishizawa, T.; Ito, A. Analysis of cell wall polysaccharides during
Funding Sources storage of a local melon accession “Wasada-uri” compared to the melon
This work was funded by Fundaci
on S
eneca de la Regi
on de cultivar “Prince”. J. Hortic. Sci. Biotechnol. 2007, 82, 227–234.
Murcia (Grants 05676/PI/07 and 11784/PI/09). N.D.-S. is (9) Prasanna, V.; Prabha, T. N.; Tharanathan, R. N. Fruit ripening
grateful for the fellowship-contract FPU (AP2006-01565) and phenomena-an overview. Crit. Rev. Food Sci. Nutr. 2007, 47, 1–1.
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We thank the CIFEA-Torre Pacheco team (Pl
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SUPPORTING INFORMATION

Melon flesh
400 g

96% v/v ethanol

(x4 per unit of sample EXTRACTION

GRINDING

HOMOGENATION

FILTRATION Soluble Fraction

Residue

80% v/v ethanol

(x4 per unit of sample)
EXTRACTION

HOMOGENATION

FILTRATION Soluble Fraction

Residue

Acetone
DRIYING

Cell Wall Material

(CWM)

Supplementary Figure 1. Preparation of cell wall material (CWM) from the fresh

melon flesh.
 CWM
1g
0.5 M Imidazole/HCl
buffer pH 7 (2 x 250 mL) EXTRACTION

(1) 4 h, room temperature STIRRING

(2) 18 h, room temperature
CENTRIFUGATION

FILTRATION
Distilled water
(250 mL)
WASHING Supernatant: ISF

Residue
50 mM Sodium Carbonate EXTRACTION
(2 x 250 mL)
(1) 18 h, 4ºC STIRRING
(2) 4h, room temperature
CENTRIFUGATION

FILTRATION
Distilled water
(250 mL) WASHING Supernatant: CSF
Residue
1 M KOH
(2 x 250 mL) EXTRACTION

(1) 18 h, 4ºC STIRRING

(2) 4h, room temperature
CENTRIFUGATION

FILTRATION

Distilled water WASHING

(250 mL) Supernatant: K1SF

Residue
4 M KOH
EXTRACTION
(2 x 250 mL)
(1) 18 h, 4ºC STIRRING
(2) 4h, room temperature
CENTRIFUGATION

FILTRATION
Distilled water
(250 mL)
WASHING Supernatant: K4SF
-CEL
Supplementary Figure 2. Preparation of polysaccharide fractions from the fresh melon

flesh.
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-
CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

CAPÍTULO V

AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS

OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST
IN NON-CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC
LINES OF MELON

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
175
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-
CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
176
 Food Research International 54 (2013) 1801–1812

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Food Research International

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Aroma volatiles as biomarkers of textural differences at harvest in

non-climacteric near-isogenic lines of melon
Noelia Dos-Santos a,b, María Carmen Bueso c, Juan Pablo Fernández-Trujillo a,b,⁎
a
Department of Agricultural & Food Engineering, Regional Campus of International Excellence “Campus Mare Nostrum” (CMN), Technical University of Cartagena (UPCT), Paseo Alfonso XIII, 48,
ETSIA, E-30203 Cartagena, Murcia, Spain
b
Institute of Plant Biotechnology, CMN, UPCT, Plaza del Hospital s/n, Campus Muralla del Mar, E-30202 Cartagena, Murcia, Spain
c
Department of Applied Mathematics and Statistics, CMN, UPCT, Campus Muralla del Mar, Doctor Fleming s/n, ETSII, E-30202 Cartagena, Murcia, Spain

a r t i c l e i n f o a b s t r a c t

Article history: The texture and aroma volatiles of two non-climacteric near-isogenic lines (NILs) of melon (Cucumis melo L.),
Received 28 June 2013 SC10-2 and SC7-1, containing introgressions of the Korean cultivar ‘Shongwan Charmi’ accession PI 161375(SC) in
Accepted 18 September 2013 the Spanish cultivar ‘Piel de Sapo’ (PS) were studied. Data were examined using different supervised and
Available online 27 September 2013
unsupervised univariate and multivariate statistical techniques in order to determine the aroma volatiles most
closely associated with differences in melon texture. SC10-2 showed 65% higher flesh firmness, a higher level of
Keywords:
pellet juice content and lower flesh juiciness than PS and was harvested at least 7 days later. In SC7-1, only the
Aroma volatiles
Cucumis melo L. textural trait, whole fruit hardness, was lower (by 34%) than in PS. About eleven quantitative trait loci for
Introgression lines aroma volatiles were mapped in linkage group VII and other nineteen in group X. The aroma compounds discrim-
Multivariate statistical techniques inated SC10-2 from PS better than SC7-1, as revealed by Partial least squares-discriminant analysis and, to a lesser
Quantitative trait loci extent, by Random forest analysis. Around seven aroma volatile compounds, mostly ketones, aldehydes and alco-
Texture hols, consistently lent support to the discrimination irrespective of the methodology used. Higher levels of several
Flesh firmness aldehydes (e.g. 2,4-dimethylbenzaldehyde, 2-methylpropanal and 2-methylbutanal), not present in PS, discrimi-
nated SC10-2 from PS. Also, SC10-2 lacked some ketones (e.g. 1-phenylethanone), alcohols (e.g. 1-phenylethanol)
and one acid (e.g. 2-phenylpropanoic acid) compared with higher content in PS. The former aldehydes and other
compounds, such as 3-methylsulfanylpropanal, were the volatiles with the closest association with flesh firmness
and harvest, and form part of the phenylalanine, leucine, valine, isoleucine or methionine metabolism and the
benzenoid biosynthetic pathway. A negative correlation with the former discriminative compounds of SC7-1
and PS and whole fruit hardness was established. SC7-1 stood out mainly for its higher content of one sulfur-
derived compound (S-methyl ethanethioate), one acetate ester (benzyl acetate) and two alcohols (octan-1-ol
and (2R, 3S)-3-ethylheptan-2-ol) compared with PS, and one ketone (pentane-2,3-dione), which was absent in
PS, but none of these were associated with flesh textural traits.
© 2013 Elsevier Ltd. All rights reserved.

1. Introduction among other quality traits, making the fruit more palatable to consumers
(Ezura & Owino, 2008; Saftner & Lester, 2009; Vallone, Sivertsen, Anthon,
Melon fruit ripening is a genetically programmed event characterized Barrett, Mitcham, Ebeler, et al., 2013; Villanueva, Tenorio, Esteban, &
by a series of physiological and biochemical changes that affect taste traits Mendoza, 2004).
(sugars, organic acids, amino acids), fruit texture and aroma production, Melon aroma is determined by unique combinations of aroma-
active compounds, the proportions of key volatiles as well as the
Abbreviations: ANOVA, Analysis of variance; FDR, False discovery rate test; FF, flesh presence or absence of several unique components (Pang, Guo, Qin,
firmness; FJ, flesh juiciness; GC-MS, gas-chromatography mass-spectrometry; JD, juice Yao, Hu and Wu, 2012; Vallone et al., 2013). Aroma is strongly depen-
density; JJ, juiciness; LG, linkage group; LRI Cal, calculated linear retention index; LRI, lin- dent on the cultivar and physiological behavior of the fruit (Obando-
ear retention index; NID, unidentified compound; NILs, near-isogenic lines; NIST, National
Ulloa, Moreno, Garcia-Mas, Nicolai, Lammertyn, Monforte, et al.,
Institute for Standards and Technology; PJ, pellet content of the juice; PLS-DA, Partial least
square-discriminant analysis; PS, Spanish cultivar ‘Piel de Sapo’; RF, Random forest; SC, 2008). Volatiles derived from amino acids as precursors, particularly es-
Korean cultivar ‘Shongwan Charmi’ accession PI161375; SPME, Solid phase micro-extrac- ters, are the major contributors to melon aroma (Gonda, Bar, Portnoy,
tion; QTL, quantitative trait loci; VIM, Variable importance measures; VIP, Variable impor- Lev, Burger, Schaffer, et al., 2010).
tance in the projection; WFH, whole fruit hardness. Texture is one of the most important quality parameters and is partly
⁎ Corresponding author at: Department of Agricultural and Food Engineering, Technical
University of Cartagena (UPCT), Campus Alfonso XIII, Paseo de Alfonso XIII, 48, ETSIA, E-
responsible for consumer preferences of edible fruit (Harker & Johnston,
30203 Cartagena, Murcia, Spain. Tel.: +34 968 32 54 36; fax: +34 968 32 57 32. 2008), while softening – partly associated with cell wall polysaccharide
E-mail address: [Link]@[Link] (J.P. Fernández-Trujillo). changes – is a determining factor in the quality and postharvest life of

0963-9969/$ – see front matter © 2013 Elsevier Ltd. All rights reserved.
[Link]
1802 N. Dos-Santos et al. / Food Research International 54 (2013) 1801–1812

fruit (Dos-Santos, Jiménez-Araujo, Rodríguez-Arcos, & Fernández- were expressed in grams of juice per kg fresh weight, grams of juice per
Trujillo, 2011). Harvesting firm and early mature fruits is a commercial mL juice, grams of juice per kg juice and grams of pellet per kg juice.
practice commonly adopted to maximize post-harvest life, but this prac- Whole fruit hardness (WFH) was determined at the equator as pre-
tice can modify the fruit aroma profile, and is counterproductive to the viously reported measuring the compression force to achieve 2 mm de-
flavor and quality, especially in climacteric fruit (Navarro, 1997; formation (Tijskens et al., 2009). Flesh firmness (FF) was measured with
Vallone et al., 2013). Fruits with very soft flesh or that are over-mature a puncture test using cylinders (L = 20 mm; Ø = 15 mm) obtained
are also rejected by consumers (Abrahão, Miguel, Dias, Spoto, & da with stainless steel apple corers from the equator of the fruit and a
Silva, 2009), particularly for the fresh market, due to loss of volatiles 4.6 mm wide probe (TG83, SAE Ibertest, Madrid, Spain) adapted to a
during storage (Amaro et al., 2013). testing machine (ELIB-5K, SAE Ibertest) (Fernández-Trujillo et al.,
Aroma biosynthesis and textural changes during fruit ripening and se- 2005).
nescence have a certain correlation due to a matrix effect. The aromas
trapped in the network formed by the polysaccharides modify flesh
and juice viscosity (Bezman, Mayer, Takeoka, Buttery, Ben Oliel, 2.4. Juice sampling and volatile compounds analysis
Rabinowitch, et al., 2003; Harker & Johnston, 2008; Savary, Guichard,
Doublier, & Cayot, 2006). Matrix effect also can result in differential sub- The methodology to determine the volatile aroma composition of
strate supply due to differences in membrane peroxidation catalyzed by melon juice by constant flow gas-chromatography mass-spectrometry
lipoxygenases (Harker & Johnston, 2008; Whitaker & Lester, 2006). (GC–MS) was adapted from Obando-Ulloa et al. (2008). The volatile com-
One near-isogenic line (NIL) of melon (SC10-2) contains quantita- pounds were measured from vials stored at −80 °C with a solution con-
tive trait loci (QTL) with a positive effect on flesh firmness (Moreno, taining melon juice and saturated calcium chloride. The previously
Obando, Dos-Santos, Fernández-Trujillo, Monforte and Garcia-Mas, tempered juice was poured into a 10 mL glass vial (Gerstel, Germany)
2008) and also in juiciness retention in refrigerated fresh-cut cubes of and then an internal standard (10 μL of phenyl–ethyl alcohol 0.01% v/v;
SC10-2 (Gomes, Fundo, Obando-Ulloa, Almeida, & Fernández-Trujillo, Merck, Spain) dissolved in 1-mL deionized water (Type I) was added.
2009). Also, the aroma profile and, to a lesser extent textural traits, are We added this amount to each vial before analysis. The volatiles were an-
efficient tools for discriminating climacteric NILs from non-climacteric alyzed by solid phase micro-extraction (SPME) and identified by gas-
ones (Obando-Ulloa, Jowkar, Moreno, Souri, Martínez, Bueso, et al., chromatography mass-spectrometry, according to Obando-Ulloa
2009; Obando-Ulloa et al., 2008). et al. (2008). Briefly, the 1-cm long SPME fiber was a 50/30 μm
The goal of this work was to map QTLs and select the most discrim- divinylbenzene/carboxen on polydimethylsiloxane coating (57329-
inant flesh aroma volatiles as potential biomarkers of textural differ- U DVB/Carboxen™/PDMS Stable Flex™ Fiber, Supelco, Bellefonte,
ences (especially flesh firmness) due to introgressions in melon PA, USA). Fiber was automatically preconditioned before extraction
chromosomes VII and X. The usefulness of combining univariate and in the injection port at 250 °C for 1 h and remained for 30 min at
multivariate statistical methods and aroma pathways potentially in- 35 °C absorbing the volatiles of the vial.
volved in textural differences between PS and NILs are also discussed. The analyses were conducted with a MPS2 Gerstel Multipurpose
sampler coupled to the 6890 GC coupled to a mass spectrometer 5975
2. Materials and methods with a hyperbolic quadrupole (Agilent Technol.). The injection port
was operated at 280 °C in a splitless mode and subjected to a pressure
2.1. Plant material of 80 psi. The liner was a 78.5 mm × 6.5 mm × 0.75 mm internal di-
ameter (SPME/direct, Supelco). Volatiles were separated according to
The non-climacteric melon near-isogenic lines were obtained through Obando-Ulloa et al. (2008) on a 30 m × 0.25 mm id × 0.25 μm thick-
repeated backcrossing between non-climacteric parentals, the Spanish ness capillary column (HP-5MS UI, Agilent Technol.). The inlet liner
melon Cucumis melo L., Inodorus group, cultivar T111, of the ‘Piel de used was a 2637505 SPME/direct (Supelco), 78.5 mm × 6.5 mm ×
Sapo’-type (PS) and the exotic Korean accession PI 161375 (SC; Cucumis 0.75 mm. Chromatographic-grade helium was used as the carrier gas
melo L. var. ‘Shongwan Charmi’ sp. Agrestis, Conomon group) (Eduardo, with a flow rate of 1.5 mL/min. The variable temperature program was
Arús, & Monforte, 2005; Moreno et al., 2008). Two non-climacteric NILs an initial oven temperature of 35 °C, followed by a ramp of 2 °C/min
(SC7-1 and SC10-2) with introgressions of SC in a single linkage group up to 75 °C, and then at 50 °C/min to reach a final temperature of
(LG) of the PS genetic background as mapped by Eduardo et al. (2005) 250 °C, which was held for 5 min. Mass spectra were obtained by elec-
were tested. The first numbers (7 or 10) refer to the LG containing the in- tron ionization (EI) at 70 eV, and a spectrum range of 40–450 m/z was
trogression (i.e. in the chromosomes VII and X, respectively) (Dos-Santos used. The detector worked at 230 °C and in full scan with data acquisi-
et al., 2011; Tijskens, Dos-Santos, Jowkar, Obando, Moreno, Schouten, tion and ion mass captured between 30 and 300 amu. The total flow
et al., 2009). Fruit quality traits of both NILs were compared with those 54.4 mL/min.
of the PS parental. The chromatograms and mass spectra were evaluated using the
ChemStation software (G1791CA, Version C.00.00, Agilent Technol.).
2.2. Experimental design The compounds were tentatively identified by comparing their mass
spectra with those included in the National Institute for Standards
Melons were cultivated in Mediterranean conditions in Torre and Technology (NIST05a.L, search version 2.0) data bank and by
Pacheco (Murcia, Spain) according to the growing practices commonly comparing with linear retention indices (LRI) reported in the litera-
used for this crop. The number of replicates was 21 for PS and 3 and 5 ture or NIST database ([Link]
replicates, respectively, for NILs SC10-2 and SC7-1 (Fernández-Trujillo, html) (Obando-Ulloa et al., 2008).
Obando, Martínez, Alarcón, Eduardo, Arús and Monforte, 2005; Volatiles were classified into ten classes of compounds (acetate es-
Obando, Fernández-Trujillo, Martínez, Alarcón, Eduardo, Arús, et al., ters, acids alcohols, aldehydes, alkanes, ketones, non-acetate esters,
2008; Tijskens et al., 2009). sulfur-derived compounds, others and terpenes) and all the areas of
the compounds were added to the corresponding class and percentages
2.3. Textural traits were based on total area of the identified compounds.
For individual aroma volatile compounds, the area of each com-
Flesh juiciness (FJ), juice density (JD), juiciness (JJ) and pellet con- pound was normalized according to the internal standard and the re-
tent of the juice (PJ) were measured according to the methodology de- sults are reported as percent of normalized area of each compound
scribed in Dos-Santos et al. (2011) and Obando et al. (2008). The results divided by total area counts of the identified compounds. In a separate
 N. Dos-Santos et al. / Food Research International 54 (2013) 1801–1812 1803

analysis, normalized areas were also used. When data were not detect- around each centroid were drawn at 65% confidence level with the car
ed, empty cells were automatically considered as zero for the analysis. package in R language. The correlation loading plot of the PLS-DA indi-
Variables representing volatile compounds with a presence below cates the correlation between the original variables (aroma volatiles)
25% of the fruits and below 50% of the replicates analyzed in all melon and the PLS-components. The coordinates of an aroma volatile on the
lines were discarded. The volatile compounds such as silane and silox- first and the second latent variables show how well these volatiles are
ane derivatives, or volatile organic compounds associated with contam- correlated with the latent variables. The concentric circles on the figures
ination, plastic composition, and the fiber were discarded and are not represent 25%, 50% and 100% explained variance of the aroma volatiles
reported here. Some compounds of importance obtained in the analysis by the latent variables.
were classified as unidentified (NID) and reported according to their Additionally, we have included in this plot the correlations between
mass spectra. the textural traits and the latent variables. We also have computed the
Pearson correlations between textural traits and volatile compounds
2.5. Statistical analysis and QTL mapping to measure the linear dependence between them.
For PLS-DA, a total of two components and four criteria to measure
All individual volatile compounds for each melon line were subjected the influence of the aroma volatile compounds on the classification
to exploratory data analysis to detect possible outliers by using box– were considered. The first criterion of the PLS-DA selected the most
whisker-plot graphs and also normal probability plots to detect poten- discriminant aroma volatiles variables between the two outer circles
tial deviations from normality. If necessary, the Box–Cox family of trans- (more than 50% of its variability is explained by the first two latent var-
formations was used to estimate normalizing transformations of each iables, i.e., distance from the origin greater than 0.7). These variables are
univariate variable. This transformation was made to obtain residuals important in describing the variability within the dataset (Obando-
from the analysis of variance (ANOVA) as close to normal distribution Ulloa et al., 2008). The second criterion for this multivariate analysis
as possible (Box & Cox, 1964). In order to apply this type of transforma- was Variable importance in the projection (VIP) scores higher than a
tion in cases with zero values in the input data, a constant is added to all given threshold. As a selection criterion, a cut-off value greater than
the observed data. one it is generally used for the variables. The third criterion, Variable im-
A one-way ANOVA with pedigree (PS, SC10-2 or SC7-1) as factor was portance measures (VIM), was computed based on weighted sums of
conducted. We also applied the false discovery rate (FDR) test the absolute regression coefficients, where the weights are a function
(Benjamini & Hochberg, 1995) to correct the raw P values for the multi- of the reduction of the sums of squares across the number of PLS com-
ple test. When pedigree was significant at P ≤ 0.05, QTL mapping was ponents. For both VIP and VIM criteria, the selection of the number of
conducted according to Obando et al. (2008) by establishing significant discriminant volatile compounds was based on the change of the
differences between PS and each NIL according to a Dunnett's test at slope of the VIP or VIM values, respectively. Finally, the fourth criterion
P = 0.05. The QTLs were mapped in the LG region previously flanked consists of selecting the main compounds showing higher absolute
by molecular markers (Eduardo et al., 2005). loading weights of one of the two PLS-DA components (Quintás,
In order to apply different multivariate statistical analysis to the in- Portillo, García-Cañaveras, Castell, Ferrer and Lahoz, 2012).
dividual aroma volatile variables, the zero-values were substituted by RF is a classification method based on a collection of decision trees
the minimum non-zero value observed in the whole dataset and log- using samples from the dataset applicable to a large number of input
transformation (base 2) was performed (Mathieu, Dal Cin, Fei, Li, Bliss, variables. The RF analysis provided two variable importance measures
Taylor, et al., 2009). The data were means-centered and scaled to unit useful for quantifying the relative contribution of each variable to the
variance to avoid the effect of the scale of the measurements on the var- classification (Liaw & Wiener, 2002). The first (RF1) was based on
iables. Principal components analysis (PCA) was used for a descriptive mean decreases in accuracy and the second (RF2) was based on the
analysis in order to determine the structure of the data and to detect po- mean decreases in the Gini index. Multidimensional scaling (MDS)
tential outlier data. The results reported in this paper are based on other plots were used to visualize the RF dissimilarity graphically. As men-
multivariate techniques and classification methods such as Partial least tioned above, the selection criteria to conduct screening compounds
squares-discriminant analysis (PLS-DA) and Random forest (RF). These listed by RF were also a change in the slope of mean decreases in accu-
classification methods are well-established approaches to handle high racy and mean decreases in the Gini index.
dimensional datasets and provide variables important measures for de-
termining the contribution of the aroma volatile compounds in the
classification. 3. Results
All statistical analyses were conducted using the R free software en-
vironment version 2.14.1 (2011-12-22) (R Foundation for Statistical 3.1. Physiological behavior, textural traits and selection of aroma
Computing, Vienna, Austria) and the FactoMineR (Husson, Josse, Le, & volatile compounds
Mazet, 2012), caret (Kuhn, 2013) and randomForest (Liaw & Wiener,
2002) packages for PCA, PLS-DA and RF, respectively. Both NILs and PS showed non-climacteric behavior accompanied by
PLS-DA is a PLS regression method where the response variable is a ethylene production levels below 5 pmol/(kg ∗ s) of ethylene. SC10-2
categorical variable and the number of components to be extracted is showed an average of 225 nmol/(kg ∗ s) of CO2 while levels of PS or
usually set to k-1, where k is the number of levels of the factor. In this SC7-1 were 360 or 410 nmol/(kg ∗ s) of CO2, respectively (data not
case, the different levels of the response variable are the different shown).
melon cultivars or NILs and the vector of explanatory variables are the SC10-2 had higher flesh firmness (11.2 N) than PS (6.8 N) but similar
aroma volatiles (Obando-Ulloa et al., 2008). The set of PLS components whole fruit hardness (58.2 N/mm). SC7-1 had lower whole fruit hardness
are a linear combination of the original explanatory variables (aroma (36.9 N/mm) than PS (56.9 N/mm), but similar flesh firmness (7.1 N). PS
volatiles) whose coefficients are defined maximizing at the same time and both NILs showed similar flesh juiciness (x̄ = 366.9 g/kg) and juice
the description of the variability of the explanatory variables and the pre- density (x̄ = 1015 kg/m3) values. The pellet content of the juice (x̄ =
diction of the response variable (Gabrielsson & Trygg, 2006; Karp, Griffin, 65.5 g/kg) and juiciness (x̄ = 934.5 g/kg) were similar in PS and SC7-1.
& Lilley, 2005). The multidimensional data structure was visualized by SC10-2 showed a higher pellet content of the juice (72.9 g/kg) and
constructing score plots and correlation loading plots. The centroids rep- lower juiciness (927.1 g/kg) than PS (64.1 and 936.0 g/kg). These flesh
resented in the bidimensional space of the two PLS-components in the and juice textural differences detected between PS and SC10-2 served
score plots are the average value of all the observations within each as a basis for mapping four textural QTLs (fh7.1; ff10.2; pc10.2; fj10.2)
NIL and were used for an easier interpretation of the figure. The ellipses and the subsequent association between texture and aroma volatiles.
1804 N. Dos-Santos et al. / Food Research International 54 (2013) 1801–1812

In all, 444 aroma volatile compounds were tentatively identified but and VIM criteria (Suppl. Tables 4 and 5). The first component (PLSDA1
only 173 were considered as typical of melon. Finally, 127 compounds axis; 25.5% total variance explained) discriminated the NILs mainly as
matched the consistence criterion described above. The main results a result of their aldehyde content (especially SC10-2) and PS was mainly
in aroma volatiles using total area or percentages were similar and, con- associated with ketones, terpenes and non-acetate esters (Fig. 1). The
sequently, only percentages of total area counts are reported. second component (PLSDA2 axis; 14.3% total variance explained) dis-
criminated PS based on the acetate esters content (Fig. 1).
3.2. Univariate analysis of classes of compounds and QTL mapping As regards the RF analysis, ketones were also the class of volatile
compound selected as the most discriminant since they made a greater
Aldehydes, ketones and alcohols were the major classes of volatile contribution to the classification than the rest of the compound classes.
compounds in PS and both NILs. Two groups of compounds discriminat- Also, aldehydes, sulfur-derived compounds, and acids were described as
ed PS and NILs. PS had a 50% higher content of ketones than SC10-2, and influential classes (Suppl. Fig. 1).
SC7-1 had 70% higher content of sulfur-derived compounds than PS
(Table 1), corresponding to one QTL for total ketone content (in LG X) 3.5. Multivariate analysis of individual aroma volatiles
and another in LG VII for sulfur-derived compounds.
3.5.1. PLS-DA of individual aroma volatiles
3.3. Univariate analysis of individual aroma volatile compounds and Nineteen volatile compounds with diverse chemical structures dis-
QTL mapping criminated among the NILs and the control PS according to the first crite-
rion explained above based concerning the proportion of variance
Thirty compounds were the more discriminant volatiles between explained in the PLS-DA analysis (Table 4; Fig. 2). The two first compo-
the NILs and PS, nineteen between SC10-2 and PS and eleven be- nents of PLS-DA explained 13.6% (PLSDA1 axis) and 12.8% (PLSDA2
tween SC7-1 and PS. Three compounds present in PS were absent axis) of the total variance and 50% to 100% of the variance of thirteen dis-
from SC10-2, while nine compounds present in SC10-2 and were criminant volatile compounds (Fig. 2). The PLSDA1 axis discriminated the
absent from PS. Four alcohols (i.e. 2-phenylbutan-2-ol) and four al- NILs (left) from PS (right), indicating a general effect of the introgression
dehydes (i.e. 2-methylpropanal) were the most represented com- in the PS aroma content irrespective of the LG considered (VII or X). The
pounds in SC10-2 (Table 2). PS and SC7-1 aroma were closer than PLSDA2 axis discriminated NILs from PS (Fig. 2). Seven compounds dis-
PS and SC10-2. In fact the most of the discriminant compounds in criminated SC7-1 from PS, with pentane-2,3-dione, octan-1-ol and
SC10-2 were absent or had a similar value in PS and SC7-1. Three ke- (2R,3S)-3-ethylheptan-2-ol being the first volatile compounds in the clas-
tones (e.g. pentane-2,3-dione) were the most widely represented sification. Twelve compounds (i.e. 2,4,5-trimethylphenyl)ethanone, 2,4-
compounds in SC7-1 (Table 2). dimethylbenzaldehyde, 1-phenylethyl acetate, 2-methylbenzaldehyde/
From the above results, nineteen QTLs in LG X were mapped, four- 4-methylbenzaldehyde and 1-phenylethanone) discriminated SC10-2
teen with an effect above the PS mean and other five with effect from PS (Table 4; Fig. 2). The similarity between SC7-1 and PS was due
below PS mean. Also, another eleven QTLs were mapped in LG VII, ten to the similar presence or absence of ten compounds that also discrimi-
with effect above PS mean and one with effect below PS mean. nated SC10-2 from PS (Table 4; Suppl. Table 6). Furan-2-carbaldehyde,
Fruity, sweet and green, were the potential aromatic notes of the dihydrofuran-2(3H)-one and ethenyl octadecanoate were among the
main volatiles described (Table 3; Suppl. Tables 1 and 3). more discriminant volatile compounds for SC10-2 (Table 4).
Three compounds (NID1, NID3 and NID2), with retention times (RT)
3.4. Multivariate analysis of classes of volatile compounds of 12.376, 20.879 and 21.458 min and a calculated linear retention
index (LRI Cal) of 975, 1143 and 1180, respectively, were described as
The PLS-DA clearly discriminated SC10-2 from PS because SC7-1 was unidentified (NID) (Suppl. Tables 7–9; Suppl. Figs. 2–4).
closer to PS, although SC7-1 showed a higher content of sulfur-derived Although sixty volatile compounds are reported in the VIP list, only thir-
compounds than PS (Table 1; Fig. 1). Ketones and terpenes were the teen compounds can be regarded as important, particularly the first nine
most discriminative classes of volatile compounds according to the VIP compounds. Mainly, a higher content of five compounds discriminated
SC7-1 from PS: pentane-2,3-dione, octan-1-ol, 2-methylbenzaldehyde/
4-methylbenzaldehyde, 3,5,5-trimethylcyclopent-2-en-1-one and NID3.
Table 1 Four compounds (2-methylpropanal, 2,4-dimethylbenzaldehyde,
Main compound classes identified in the headspace of the fruit of the near-isogenic lines
1-(2,4,5-trimethylphenyl)ethanone and 3-methylsulfanylpropanal)
(NILs) SC10-2 (n = 3) and SC7-1 (n = 5) of melon and the parental line ‘Piel de Sapo’
(PS) (n = 21). Data are expressed as percentage of each compound class with respect to
not present in PS discriminated SC10-2 from PS, mainly (Suppl.
the total normalized areas. Table 2; Suppl. Fig. 5). Six of the first nine compounds were in com-
mon to results obtained by the first PLS-DA criterion (Table 4). Sim-
Pedigree
ilar results were obtained according to the VIM criterion, and only
Compound classa PS SC10-2 SC7-1 one compound (3,5-dimethylcyclohexan-1-ol) was not present in
x̄ SE x̄ SE x̄ SE p-Value the VIM classification (Suppl. Table 10; Suppl. Fig. 6). Finally, the cri-
ALD 33.3 ±2.7 41.4 ±18.5 43.0 ±3.0 NS terion loading weights (Suppl. Table 11) confirmed the main aroma
KET/LAC 19.8 ±1.3 9.9* ±4.8 12.9 ±2.0 ** volatiles identified in the above PLS-DA analysis.
ALC 16.8 ±1.2 14.6 ±4.8 17.3 ±3.2 NS
OTH 6.4 ±0.7 9.3 ±6.1 5.9 ±0.4 NS 3.5.2. RF of individual aroma volatiles
NAE 6.3 ±0.6 4.3 ±2.0 5.0 ±1.3 NS
ACE 5.9 ±1.2 3.3 ±0.2 6.1 ±1.5 NS
Twenty aromas volatiles were the most discriminant compounds
AHA 2.1 ±0.2 2.1 ±0.7 2.0 ±0.4 NS (Table 5; Suppl. Fig. 7), sixteen of them also identified in four PLS-DA
SDC 1.5 ±0.1 1.3 ±0.6 2.5* ±0.6 * classifications. In the MDS plots (Suppl. Fig. 8) discrimination between
TER 1.4 ±0.1 1.0 ±0.2 1.2 ±0.1 NS lines was evident but so was the higher similarity between SC7-1 and
ACD 0.2 ±0.0 0.4 ±0.2 0.2 ±0.1 NS
PS. Nine compounds (in common with PLS-DA classifications) discrim-
NIL means followed by an asterisk were significantly different from the control PS according inated SC7-1 from PS (Table 5).
to one-way ANOVA with pedigree effect followed by a Dunnett test (P = 0.05). SE, stan- Again, nine compounds, especially four of them, the aldehydes 2-
dard error. *, **: significance at P ≤ 0.05 or 0.01, respectively. NS, non-significant.
a
Compound classes: ACD, acids; ACE, acetate esters; AHA, alkanes; ALC, alcohols; ALD,
methylpropanal and 2,4-dimethylbenzaldehyde, the ketone 1-(2,4,5-
aldehydes; KET, ketones; LAC, lactones; NAE, non-acetate esters; OTH, others; SDC, sulfur- trimethylphenyl)ethanone and NID1 discriminated SC10-2 from PS
derived compounds; TER, terpenes. (Table 5). Four of the nine volatile compounds (2-phenylpropan-2-ol,
 N. Dos-Santos et al. / Food Research International 54 (2013) 1801–1812 1805

Table 2
Main volatile compounds identified for QTL mapping in melon linkage class X and VII using near-isogenic lines (NILs) SC10-2 (n = 3) and SC7-1 (n = 5) respectively, and the parental line
‘Piel de Sapo’ (PS) (n = 21). Volatile compounds were selected for significance of all the univariate and multivariate (PLSDA and RF) statistical criteria described. Data are the mean relative
content in percentage with respect to the total of the probable aromatic volatile compounds identified.

Compounds per NILa CASa1 number IUPACa2 name Compound classb IDNc Pedigree p-Valued MQe

PS SC10-2 SC7-1

NIL SC10-2
1 000078-84-2 2-Methylpropanal ALD 7 0.00 0.07* 0.02 *** 45
2 000096-17-3 2-Methylbutanal ALD 16 0.00 0.07* 0.01 *** 54
3 000098-01-1 Furan-2-carbaldehyde ALD 41 0.00 0.03* 0.00 **** 38
4 000096-48-0 Dihydrofuran-2(3H)-one LAC 51 0.00 0.24* 0.00 **** 90
5 003268-49-3 3-Methylsulfanylpropanal SDC 52 0.00 0.04* 0.03 ** 93
6 005441-52-1 3,5-Dimethylcyclohexan-1-ol ALC 64 0.38 0.10* 0.30 **** 93
7 000124-18-5 Decane AHA 66 0.15 0.00* 0.06 ** 95
8 NID1 Unidentified NID 70 0.00 0.32* 0.00 **** –
9 000098-86-2 1-Phenylethanone KET 75 1.17 0.00* 0.41 * 76
10 001565-75-9 2-Phenylbutan-2-ol ALC 80 0.33 2.27* 0.00 ** 72
11 0096316-89-1 Ethenyl octadecanoate NAE 83 0.00 0.17* 0.00 *** 97
12 000585-74-0/000577-16-2 3-Methylacetophenone/2-methylacetophenone KET 95 0.36 0.00* 0.26 ** 57
13 004621-04-10 4-Propan-2-ylcyclohexan-1-ol ALC 96 0.30 1.72* 0.44 **** 46
14 000076-22-2/000464-49-3 1,7,7-Trimethylbicyclo[2.2.1]heptan-2-one/(1R,4R)-1,7, ALC 97 0.98 0.63* 0.73 **** 98
7-Trimethylbicyclo[2.2.1]heptan-2-one
15 019550-05-1 3,4-Dimethylhexan-2-ol ALC 98 0.01 0.20* 0.00 **** 25
16 NID2 Unidentified NID 104 0.03 0.32* 0.00 ** –
17 000093-92-5 1-Phenylethyl acetate ACE 107 0.01 0.20* 0.00 ** 81
18 002040-07-5 1-(2,4,5-Trimethylphenyl)ethanone KET 108 0.00 0.12* 0.00 *** 83
19 015764-16-6 2,4-Dimethylbenzaldehyde ALD 115 0.00 0.69* 0.09 * 93

NIL SC7-1
1 000600-14-6 Pentane-2,3-dione KET 22 0.00 0.00 0.14* **** 85
2 001534-08-3 S-methyl ethanethioate SDC 24 0.05 0.00 0.44* ** 87
3 000108-21-4 Propan-2-yl acetate ACE – 0.05 0.00 0.21* *** 81
4 024156-95-4 3,5,5-Trimethylcyclopent-2-en-1-one KET 38 0.00 0.00 0.05* *** 62
5 019780-39-3 (2R,3S)-3-ethylheptan-2-ol ALC 76 0.03 0.00 0.43* *** 50
6 000111-87-5 Octan-1-ol ALC 79 0.05 0.11 0.59* *** 72
7 000529-20-4/000104-87-0 2-Methylbenzaldehyde/4-methylbenzaldehyde ALD 81 0.00 0.00 0.07* ** 93
8 NID3 Unidentified NID 91 0.06 0.44 0.38* * –
9 000624-16-8 Decan-4-one KET 93 0.10 0.23 0.42* ** 35
10 000140-11-4 Benzyl acetate ACE 100 0.18 0.17 2.13* *** 97
11 074367-31-0 (2-Ethyl-3-hydroxy-hexyl) 2-methylpropanoate NAE 120 2.28 1.04 0.95* * 38

NIL means followed by an asterisk were significantly different from the control PS mean according to one-way ANOVA with a pedigree effect followed by a Dunnett test (P = 0.05). *, **;
***, ****: significance at P ≤ 0.05, 0.01, 0.001 or 0.0001, respectively. Mass spectra unidentified compounds (NID1, NID2, NID3) reported in Supplementary Tables 7–9 and Supplementary
Figs. 2–4.
a
Number of compounds identified for QTL mapping per NIL (SC10-2 or SC7-1) and ordered according to IDN.
a1
CAS, chemical abstracts service.
a2
IUPAC, international union of pure and applied chemistry.
b
Compound Classes: ACE, acetate esters; AHA, alkanes; ALC, alcohols; ALD, aldehydes; KET, ketones; LAC, lactones; NAE, non-acetate esters; NID, not identified; SDC, sulfur-derived
compounds.
c
IDN: Identification number assigned for each volatile compound in the correlation plot of PLS-DA analysis (Fig. 2). IDN with dash (-) means that the compound is into the inner circle of
radius 0.5 and the IDN is not represented in Fig. 2.
d
The raw p values of the ANOVA were corrected for the multiple test using the Benjamini and Hochberg false discovery rate criterion.
e
MQ: Match quality (0–100 units) of spectra compared with those of the National Institute for Standards and Technology (NIST05a.L, search version 2.0) data bank.

4-propan-2-ylcyclohexan-1-ol, 1,7,7-trimethylbicyclo[2.2.1]heptan-2- the NILs from PS. The remaining textural traits (JJ, PJ, JD and FJ) did
one/(1R,4R)-1,7,7-trimethylbicyclo[2.2.1]heptan-2-one and acetic acid) not show clear correlations with differences in volatile compounds be-
were not present in the main compounds of PLS-DA classifications tween both NILs and PS.
(Table 4; Suppl. Tables 2, 10 and 11; Fig. 2; Suppl. Figs. 5 and 6).
4. Discussion
3.6. Association among textural traits and aroma volatile compounds
Flesh firmness was the textural trait more closely associated to nine
Compound classes did not show significant correlations (absolute aroma volatiles as a result of discriminant aroma (Fig. 2) and correlation
value lower than 0.5, data not shown) with textural traits (Fig. 1). Nev- analysis (Table 6). Several aroma metabolic pathways identified were
ertheless, as shown in Fig. 2, textural traits and individual volatile com- putatively associated with higher flesh firmness of SC10-2 (Table 3),
pounds showed certain association in discrimination between PS and such as those having amino acids, fatty acids, gamma-aminobutyrate
NILs. Mainly, FF and to a lesser extent WFH (graphic outer crown) and alfa-methylstyrene/ethylbenzene as precursors. Flesh firmness de-
were the textural traits most influential on discrimination with signifi- pends on environmental factors, growth conditions, and postharvest
cant correlations (Table 6). The strongest positive correlation was ob- handling, but fruit texture is a factor largely dependent on genotype
served among some individual volatile compounds and FF (Table 6), (Aurand et al., 2012; Sams, 1999). Cell wall thickness and strength is
with negative correlation with PLS-DA1 (Fig. 2B). The strongest nega- one of the major contributors to flesh firmness, although several factors
tive correlation was observed among other individual volatile com- are also important and interrelated in physical anatomy of the tissues
pounds and WFH (Table 6), with positive correlation with PLS-DA1 typical of each genotype and specie, such as cell size, turgor, cuticle prop-
(Fig. 2B). The aroma volatile compounds with high correlation (positive erties, or the activity of cell wall degradation enzymes (Chapman,
or negative; Table 6) in both cases were the one which discriminated Bonnet, Grivet, Lynn, Graham, Smith et al., 2012; Toivonen & Brummell,
 1806

Table 3
Chemical and sensory attributes of the main melon volatile compounds used for QTL mapping in linkage Classes X and VII of Table 2 identified in one of the three melon lines used [near-isogenic lines (NILs) SC10-2 and SC7-1 or the parental line ‘Piel
de Sapo’ (PS)].

Compounds per NILa IUPACa1 name Compound IDNc RTd LRI LRI Ref. Ref .1 Volatile precursors Ref. 2 Aromatic notes Ref .3
classb (min) Cale

NIL SC10-2
1 2-Methylpropanal ALD 7 1.573 ND 552 1 AA Leu/Val 3 Green, pungent, burnt, malty, toasted, fruity 27
2 2-Methylbutanal ALD 16 2.239 653 682 1 AA Iso 4,5,6,7,8 Green, almond, strong burnt, malty, cocoa 27
3 Furan-2-carbaldehyde ALD 41 5.788 837 838 1 Furan 9 Woody, almond, sweet, fruity, flowery 28
4 Dihydrofuran-2(3H)-one LAC 51 9.112 916 922 1 GABA 10 Cream, oil, fat, caramel 27, 29
5 3-Methylsulfanylpropanal SDC 52 8.496 905 911 1 AA Met Cooked potato 30
6 3,5-Dimethylcyclohexan-1-ol ALC 64 13.535 996 NR CH-ol Not found
7 Decane AHA 66 13.920 1003 1000 1 FAs Saturated fatty 11 Fusel-like, fruity, sweet 28
acyl chains
8 Unidentified NID 70 12.376 975 – – – –
9 1-Phenylethanone KET 75 18.304 1070 1070 1 AMS 12 Sweet, pungent, hawthorn, mimosa, 27
almond, acacia, chemical.
10 2-Phenylbutan-2-ol ALC 80 19.316 1086 NR AA Phe 13 Not found
11 Ethenyl octadecanoate NAE 83 20.635 1127 NR FAs Not found
12 3′-Methylacetophenone/2′-methylacetophenone KET 95 21.020 1152 1176 1 ACP 14 Not found
13 4-Propan-2-ylcyclohexan-1-ol ALC 96 20.998 1150 1130 1 TER Leather, red rose, green, dusty, weedy, metallic 31
14 1,7,7-Trimethylbicyclo[2.2.1]heptan-2-one/ ALC 97 21.091 1156 1151 1 α-Pinene 14 Camphor, minty, phenolic, herbal, wood; strong 27, 32,33
(1R,4R)-1,7,7-Trimethylbicyclo[2.2.1]heptan- penetrating pungent aromatic odor; camphor.
2-one
15 3,4-Dimethylhexan-2-ol ALC 98 21.262 1167 NR FAs Not found
16 Unidentified NID 104 21.458 1180 – – – –
17 1-Phenylethyl acetate ACE 107 21.731 1197 1186 1 AA Try 15 Not found
18 1-(2,4,5-Trimethylphenyl)ethanone KET 108 21.598 1189 NR ACP/EB 14 Not found
19 2,4-Dimethylbenzaldehyde ALD 115 21.892 1220 1175 1 AA Phe 16,17 Naphthyl, cherry, almond, spice, vanilla 31

NIL SC7-1
1 Pentane-2,3-dione KET 22 2.639 698 670 2 AA Thr/Met 18,19 Caramel, sweet, fruity, buttery, fresh 27
2 S-methyl ethanethioate SDC 24 2.688 701 NR 1 AA Met 20,21,22 Sulfurous, eggy, cheese, dairy, vegetable, cabbage 31
3 1-Methylethyl acetate ACE – 2.271 609 662 1 IPA 23 Fruity, ethereal, sweet, banana with a 27
slight compound nuance
4 3,5,5-Trimethylcyclopent-2-en-1-one KET 38 5.355 826 832 1 CAR 24 Top note of Osmanthus fragrans (sweet osmanthus) 34
5 (2R,3S)-3-Ethylheptan-2-ol ALC 76 18.870 1078 NR FAs Not found
N. Dos-Santos et al. / Food Research International 54 (2013) 1801–1812

6 Octan-1-ol ALC 79 18.578 1075 1087 1 FAs 25 Fatty, green, herbal 35

7 2-Methylbenzaldehyde/4-methylbenzaldehyde ALD 81 18.688 1076 1067/1081 1 AA Phe 16,17 Warm, mild, floral, sweet, spicy 28
8 Unidentified NID 91 20.879 1143 – – – –
9 Decan-4-one KET 93 20.979 1149 NR FAs Saturated fatty 11 Not found
acyl chains
10 Benzyl acetate ACE 100 21.419 1177 1165 1 AA Phe 4 Floral, burnt, boiled zucchini 27
11 (2-Ethyl-3-hydroxy-hexyl) 2-methylpropanoate NAE 120 13.771 1376 1375 1 FAs 26 Not found

Abbreviations and acronyms: LRI, linear retention time; LRI Ref., linear retention time referenced (LRI Ref.), Ref(), literature references for LRI (Ref.1), volatile precursors (Ref.2) or aromatic notes (Ref.3); AA, amino acid; ACP, acetophenone; AMS, alfa-
methylstyrene; CAR, carotenoides; CH-ol, ciclohexanol; EB, ethylbenzene; FAs, fatty acids; GABA, gamma-aminobutyrate; IPA; isopropanol; Iso, L-isoleucine; Leu, L-leucine; Met, L-methionine; NR, not reported in literature search; Phe, L-
phenylalanine; TER, terpenes; Thr, L-threonine; Try, L-tryptophan; Val, L-valine.
a
Number of volatile compounds identified for QTL mapping per NIL (SC10-2 or SC7-1) and ordered according to IDN.
a1
IUPAC, international union of pure and applied chemistry.
b
Compound Classes: ACE, acetate esters; AHA, alkanes; ALC, alcohols; ALD, aldehydes; KET, ketones; LAC, lactones; NAE, non-acetate esters; NID, not identified; SDC, sulfur-derived compounds.
c
IDN: Identification number assigned for each volatile compound in the correlation plot of PLS-DA analysis (Fig. 2). IDN with dash (-) means that the compound is into the inner circle of radious 0.5 and the IDN is not represented in Fig. 2.
d
RT: Mean retention time in minutes for each volatile compound.
e
LRI Cal: Linear retention indices calculated from the RT of a series of straight-chain alkanes (C6–C20).
 N. Dos-Santos et al. / Food Research International 54 (2013) 1801–1812 1807

Fig. 1. Discrimination among melon near-isogenic lines (NILs) SC10-2 (♦) and SC7-1 (○) and the parental control ‘Piel de Sapo’ (PS, ●) by compound classes of fruit aroma volatiles
according to Partial least squares discriminant analysis (PLS-DA). A. Datasets and the corresponding centroids (x) for the different lines and 65% confidence ellipses. B. Correlations be-
tween compound classes and the first two components. The abbreviations in the graph on the right correspond to the compound classes and textural traits included in the analysis.
ACE, acetate esters; ACD, acids; ALC, alcohols; ALD, aldehydes; AHA, alkanes; FF, flesh firmness; FJ, flesh juiciness; JD, juice density; JJ juiciness; KET, ketones; NAE, non-acetate esters;
OTH, others; PJ, pellet content of the juice; SDC, sulfur-derived compounds; TER, terpenes; WFH, whole fruit hardness.

2008). Differences in cell wall composition of melon NILs with higher (Table 6), the correlation among texture and aroma traits has been gen-
flesh firmness other than NIL SC10-2 have been previously described erally low and not modeled (Causse et al., 2002).
(Dos-Santos et al., 2011). In tomato, QTLs affecting flesh textural traits The similar flesh firmness of NIL SC7-1 and PS was matched by sim-
and volatiles have been identified (Aurand et al., 2012; Causse, 2008; ilarities in aroma between them, although only a possible indirect link
Causse, Saliba-Colombani, Lecomte, Duffe, Rousselle and Buret, 2002; between whole fruit hardness and differential flesh aroma (Tables 3
Chapman et al. 2012; Mathieu et al., 2009). However, in contrast with and 6) could be established. Aroma QTLs were found in SC7-1 that
the correlation found here for flesh firmness and whole fruit hardness showed no difference in flesh and juice textural properties from PS,

Table 4
Main volatile compounds identified in the headspace of the fruit of near-isogenic lines (NILs) SC10-2 (n = 3) and SC7-1 (n = 5) of melon and the parental line ‘Piel de Sapo’ (PS) (n = 21).
The compounds were selected with 50% or more of the variance explained by the two components according to the Partial least squares discriminant analysis (PLS-DA). Data are the mean
relative content in percentage with respect to the total of the probable aromatic volatile compounds identified.

Ordera CASa1 number IUPACa2 nameb Compound classc IDNd r-distancee Pedigree p-Valuef

PS SC10-2 SC7-1

1 002040-07-5 1-(2,4,5-Trimethylphenyl)ethanone KET 108 0.915 0.00 0.69* 0.09 ***

2 000600-14-6 Pentane-2,3-dione KET 22 0.896 0.00 0.00 0.14* ****
3 015764-16-6 2,4-Dimethylbenzaldehyde ALD 115 0.879 0.00 0.69* 0.09 *
4 NID1 Unidentified NID 70 0.868 0.00 0.32* 0.00 ****
5 0096316-89-1 Ethenyl octadecanoate NAE 83 0.864 0.00 0.17* 0.00 ****
6 000096-48-0 Dihydrofuran-2(3H)-one LAC 51 0.863 0.00 0.24* 0.00 ****
7 000093-92-5 1-Phenylethyl acetate ACE 107 0.841 0.01 0.20* 0.00 **
8 000098-01-1 Furan-2-carbaldehyde ALD 41 0.828 0.00 0.03* 0.00 ****
9 005441-52-1 3,5-Dimethylcyclohexan-1-ol ALC 64 0.823 0.38 0.10* 0.30 ****
10 000111-87-5 Octan-1-ol ALC 79 0.811 0.05 0.11 0.59* ***
11 NID2 Unidentified NID 104 0.799 0.03 0.32* 0.00 **
12 019780-39-3 (2R,3S)-3-ethylheptan-2-ol ALC 76 0.786 0.03 0.00 0.43* ***
13 000098-86-2 1-Phenylethanone KET 75 0.735 1.17 0.00* 0.41 *
14 003214-41-3 Octane-2,5-dione KET – 0.728 0.03 0.12 0.14 NS
15 000529-20-4/000104-87-0 2-Methylbenzaldehyde/4-methylbenzaldehyde ALD 81 0.727 0.00 0.00 0.07* **
16 000585-74-0/000577-16-2 3′-Methylacetophenone/2′-methylacetophenone KET 95 0.724 0.36 0.00* 0.26 **
17 000124-18-5 Decane AHA 66 0.724 0.15 0.00* 0.06 **
18 024156-95-4 3,5,5-Trimethylcyclopent-2-en-1-one KET 38 0.721 0.00 0.00 0.05* ***
19 001534-08-3 S-Methyl ethanethioate SDC 24 0.720 0.05 0.00 0.44* **

NIL means followed by an asterisk were significantly different of the control PS according to one-way ANOVA with pedigree effect followed by a Dunnett test (P = 0.05). *,**; ***, ****:
significance at P ≤ 0.05, 0.01, 0.001 or 0.0001, respectively. NS, non-significant. Mass spectra unidentified compounds (NID1, NID2) reported in Supplementary Tables 7–9 and Supple-
mentary Figs. 2–4.
a
Order of the volatile compounds according to the percentage of variance explained criterion (50%–100% variance explained or 0.7–1 distance from the origin in correlation plot).
a1
CAS, chemical abstracts service.
a2
IUPAC, international union of pure and applied chemistry.
b
Properties of these compounds reported in Table 3 except octane-2,5 dione (IDN = 61; LRI Cal. = 988; LRI Ref. = 986; RT = 13.069 min).
c
Compound classes: ACE, acetate esters; AHA, alkanes; ALC, alcohols; ALD, aldehydes; KET, ketones; LAC, lactones; NID, not identified; SDC, sulfur-derived compounds.
d
IDN: Identification number assigned for each volatile compound in the correlation plot of PLS-DA analysis (Fig. 2). IDN with dash (-) means that the compound is into the inner circle of
radius 0.5 and the IDN is not represented in the Fig. 2.
e
Distance to the origin in correlation plot.
f
The raw p values of the ANOVA were corrected for the multiple test using the Benjamini and Hochberg false discovery rate criterion. Original data were transformed for statistical anal-
ysis by substituting the zero-values by the minimum non-zero value observed and applying the log-transformation (base 2).
1808 N. Dos-Santos et al. / Food Research International 54 (2013) 1801–1812

Fig. 2. Discrimination among the melon near-isogenic lines (NILs) SC10-2 (♦) and SC7-1 (○) and the parental control ‘Piel de Sapo’ (PS, ●) by individual fruit aroma compounds according
to Partial least squares discriminant analysis (PLS-DA). A. Datasets and the corresponding centroids (x) for the different lines and 65% confidence ellipses. B. Correlations between the in-
dividual volatile compounds, the textural traits and the first two components. The numbers in the graph on the right correspond to the compounds with 25% or more of the variance
explained by the two components according to the PLS-DA and numbered according to Table 4. The abbreviations in the graph correspond to the textural traits included in the analysis.
FF, flesh firmness; FJ, flesh juiciness; JD, juice density; JJ juiciness; PJ, pellet content of the juice; WFH, whole fruit hardness.

while SC10-2 showed firmer texture and other textural properties with information indicating differential textural properties and the corre-
a strongest correlation among flesh firmness and volatile compounds sponding QTLs has been previously reported in SC10-2 (Moreno et al.,
(Table 6), which may have had a matrix effect on aroma volatile mea- 2008; Obando et al., 2008).
surements. Differences in the juice matrix can modify the concentration About thirty QTLs were associated with aroma volatiles in non-
of the aroma compounds in the headspace (Bezman et al., 2003). Some climacteric melon NILs. Obando-Ulloa, Ruiz, Monforte, and Fernández-

Table 5
Main volatile compounds identified in the headspace of the fruit of near-isogenic lines (NILs) SC10-2 (n = 3) and SC7-1 (n = 5) of melon and the parental line ‘Piel de Sapo’ (PS) (n = 21).
The compounds were screened according to the Random forest (RF) analysis. The criterion RF1 was based on the mean decreases in accuracy and the criterion RF2 was based on mean
decreases in the Gini index. Data are the mean relative content in percentage with respect to the total of the probable aromatic volatile compounds identified.

Ordera CASa1 number IUPACa2 nameb Compound classc IDNd Pedigree Order RF1 Order RF2 p-Valuee

PS SC10-2 SC7-1

1 000600-14-6 Pentane-2,3-dione KET 22 0.00 0.00 0.14* 1 3 ****

2 000140-11-4 Benzyl acetate ACE 100 0.18 0.17 2.13* 2 2 ***
3 NID3 Unidentified NID 91 0.06 0.44 0.38* 3 1 *
4 000624-16-8 Decan-4-one KET 93 0.10 0.23 0.42* 4 5 **
5 019780-39-3 (2R,3S)-3-ethylheptan-2-ol ALC 76 0.03 0.00 0.43* 5 6 ***
6 000078-84-2 2-Methylpropanal ALD 7 0.00 0.07* 0.02 6 11 ***
7 000111-87-5 Octan-1-ol ALC 79 0.05 0.11 0.59* 7 4 ***
8 NID1 Unidentified NID 70 0.00 0.32* 0.00 8 7 **
9 001534-08-3 S-methyl ethanethioate SDC 24 0.05 0.00 0.44* 9 9 **
10 015764-16-6 2,4-Dimethylbenzaldehyde ALD 115 0.00 0.69* 0.09 10 10 *
11 002040-07-5 1-(2,4,5-Trimethylphenyl)ethanone KET 108 0.00 0.12* 0.00 11 8 ***
12 000096-48-0 Dihydrofuran-2(3H)-one LAC 51 0.00 0.24* 0.00 12 24 ****
13 004621-04-10 4-Propan-2-ylcyclohexan-1-ol ALC 96 0.30 1.72* 0.44 13 14 ****
14 000617-94-7 2-Phenylpropan-2-ol ALC 78 2.53 0.24* 2.00 14 12 *
15 003268-49-3 3-Methylsulfanylpropanal SDC 52 0.00 0.04* 0.03 15 19 **
16 000529-20-4/000104-87-0 2-Methylbenzaldehyde/4-methylbenzaldehyde ALD 81 0.00 0.00 0.07* 16 15 **
17 024156-95-4 3,5,5-Trimethylcyclopent-2-en-1-one KET 38 0.00 0.00 0.05* 17 28 ***
18 000076-22-2/000464-49-3 1,7,7-Trimethylbicyclo[2.2.1]heptan-2-one/(1R,4R)- ALC 97 0.98 0.63* 0.73 NR 13 ****
1,7,7-Trimethylbicyclo[2.2.1]heptan-2-one
19 005441-52-1 3,5-Dimethylcyclohexan-1-ol ALC 64 0.38 0.10* 0.30 36 16 ****
20 000064-19-7 Acetic acid ACD – 0.11 0.30* 0.11 NR 17 NS

NIL means followed by an asterisk were significantly different of the control PS according to one-way ANOVA with pedigree effect followed by a Dunnett test (P = 0.05). *, **; ***, ****:
significance at P ≤ 0.05, 0.01, 0.001 or 0.0001, respectively. NS, non-significant.
Mass spectra of unidentified compounds (NID1, NID3) reported in Supplementary Tables 7 and 9 and Supplementary Figs. 2 and 4.
a
Order of the main volatile compounds according to criteria RF1 (compounds 1–17) and RF2 (compounds 18–20).
a1
CAS, chemical abstracts service.
a2
IUPAC, international union of pure and applied chemistry.
b
Properties of these compounds reported in Table 3 except acetic acid (IDN = 11; LRI Cal. = 609, LRI Ref. = 600; RT = 1.831 min; MQ = 53).
c
Compound classes: ACD, acids; ACE, acetate esters; ALC, alcohols; ALD, aldehydes; KET, ketones; LAC, lactones; NID, not identified; SDC, sulfur-derived compounds.
d
IDN: Identification number assigned for each volatile compound in the correlation plot of PLS-DA analysis (Fig. 2). IDN with dash (-) means that the compound is into the inner circle of
radius 0.5 and the IDN is not represented in the Fig. 2.
e
The raw p values of the ANOVA were corrected for the multiple test using the Benjamini and Hochberg false discovery rate criterion. Original data were transformed for statistical
analysis by substituting the zero-values by the minimum non-zero value observed and applying the log-transformation (base 2).
 N. Dos-Santos et al. / Food Research International 54 (2013) 1801–1812 1809

Table 6
Pearson's correlation coefficients between textural traits and volatile compounds in near-isogenic lines (NILs) SC10-2 (n = 3) and SC7-1 (n = 5) of melon and the parental line ‘Piel de
Sapo’ (PS) (n = 21). Only correlations in absolute value higher than 0.5 are shown.

Volatile compounds IDNb Textural traits

CASa1 number IUPACa2 name FFc WFHd PJe FJf JDg JJh

000067-64-1 Acetone – 0.64

000079-20-9 Methyl acetate – −0.50
000078-93-3 Butan-2-one – −0.50
017528-72-2 Pent-1-en-3-one – −0.55
000600-14-6 Pentane-2,3-dione 22 −0.85 0.51
001534-08-3 S-methyl ethanethioate 24 −0.64
000105-37-3 Ethyl propanoate 27 0.51
000066-25-1 Hexanal – −0.52
024156-95-4 3,5,5-Trimethylcyclopent-2-en-1-one 38 −0.57 0.52
000098-01-1 Furan-2-carbaldehyde 41 0.56
000111-27-3 Hexan-1-ol – −0.60
000096-48-0 Dihydrofuran-2(3H)-one 51 0.62
000591-23-1 3-Methylcyclohexan-1-ol – −0.57
005441-52-1 3,5-Dimethylcyclohexan-1-ol 64 −0.56
000124-18-5 Decane 66 −0.65
070424-13-4 2-[(Z)-pent-2-enyl]furan – 0.59
NID1 NID1 70 0.71
000104-76-7 2-Acetyloxypropyl acetate 71 0.51
019780-39-3 (2R,3S)-3-ethylheptan-2-ol 76 −0.67
000111-87-5 Octan-1-ol 79 −0.59
001565-75-9 2-Phenylbutan-2-ol 80 0.51
000529-20-4/000104-87-0 2-Methylbenzaldehyde/4-methylbenzaldehyde 81 −0.63
0096316-89-1 Ethenyl octadecanoate 83 0.63
NID3 NID3 91 −0.52
000585-74-0/000577-16-2 3′-Methylacetophenone/2′-methylacetophenone 95 −0.62
000140-11-4 Benzyl acetate 100 −0.61
NID2 NID2 104 0.58
000093-92-5 1-Phenylethyl acetate 107 0.60
002040-07-5 1-(2,4,5-Trimethylphenyl)ethanone 108 0.77
015764-16-6 2,4-Dimethylbenzaldehyde 115 0.65
000103-45-7 2-Phenylethyl acetate 116 −0.52

Volatile compounds in bold showed significant differences according to one-way ANOVA with pedigree effect followed by a Dunnett test (P = 0.05). Data in Tables 2, 4 and 5.
a1
CAS, compound abstracts service.
a2
IUPAC, international union of pure and applied chemistry.
b
IDN: Identification number assigned for each volatile compound in the correlation plot of PLS-DA analysis (Fig. 2). IDN with dash (-) means that the compound is into the inner circle of
radious 0.5 and the IDN is not represented in the Fig. 2.
c
FF, flesh firmness
d
WFH, whole fruit hardness.
e
PJ, pellet content of the juice.
f
FJ, flesh juiciness.
g
JD, juice density.
h
JJ, juiciness.

Trujillo (2010) mapped four QTLs associated with the aroma profile of degradation (Leffingwell, 1999), respectively (Table 3). At least two
non-climacteric NILs in linkage groups not studied here. With the ex- QTLs related to the aldehyde content (amino acids being the principal
ception of a few non-climacteric fruit such as strawberry (Zorrilla- precursors) and greater flesh firmness were mapped in LG X (Table 3),
Fontanesi et al., 2012), the QTLs of volatile compounds have been one related to the benzenoid biosynthetic pathway (Ribnicky, Shulaev,
mapped mostly in climacteric fruit at harvest or during ripening & Raskin, 1998; Van Moerkercke, Schauvinhold, Pichersky, Haring, &
(Causse et al., 2002; Eduardo, Chietera, Pirona, Pacheco, Troggio, Schuurink, 2009) and the other related to aldehyde production via
Banchi, et al., 2013; Mathieu et al., 2009; Zini, Biasioli, Gasperi, Mott, their corresponding α-keto acid (Gonda et al., 2010; Pang et al., 2012;
Aprea, Mark, et al., 2005). Qi, Guan, Li, & Jing, 2012; Smit, Engels, & Smit, 2009).
The high number of QTLs mapped here could explain in part the low The introgression of SC10-2 covered the entire LG X and for SC7-1
percentage of variance explained by PLS-DA, which was an indicator of was smaller (Eduardo et al., 2005). Due to the length of these introgres-
the low correlation between the volatiles found in the experiment. Also, sions in the PS genetic background, particularly in LG X, some of the
this low variance explained could be an indicator of the many potential QTLs of the aroma volatiles could be independent of textural traits. Be-
pathways involved in melon aroma volatiles (Table 3), even in non- cause of that NILs with smaller introgressions should be tested in the
climacteric fruit, confirming that although Inodorus non-climacteric future.
melons are usually non-aromatic, flesh aroma volatiles are relatively As regards the methods used to analyze aroma volatiles, all criteria
complex, particularly in C9 compounds (Gonda et al., 2010, 2013; (six) from the multivariate analysis (PLS-DA and RF) showed greater dis-
Kourkoutas, Elmore, & Mottram, 2006; Verzera, Dima, Tripodi, Ziino, crimination between the firmer NIL SC10-2 and PS than between NIL
Lanza and Mazzaglia, 2011). At least, one QTL in LG VII is associated to SC7-1 and PS (Fig. 2; Suppl. Fig. 8), both as regards individual aroma vol-
the methionine metabolic pathway (Arfi, Landaud, & Bonnarme, 2006; atiles and compound classes (Fig. 1). In summary, seven compounds
Gonda et al., 2013; Ott, Germond, & Chaintreau, 2000; Singh et al., acted as discriminant aroma volatiles for all the multivariate analyses
2003; Varlet & Fernández, 2010) and another two QTLs could also be performed, while another seven were slightly less consistent and were
mapped in LG VII, which were related to the shikimic pathway confirmed by four at least of the six multivariate criteria. Only five com-
(Gonda et al., 2010; Mahmuda & Ueda, 2008) and carotenoid pounds were confirmed by one criterion (Suppl. Table 12). However,
1810 N. Dos-Santos et al. / Food Research International 54 (2013) 1801–1812

PLS-DA showed better discrimination between the NILs (especially The difference in the aldehyde content between PS and SC10-2 could
SC10-2) and PS as regards individual aroma volatiles than the RF analysis be due to the reduced conversion of aldehydes into alcohols and the
according to confusion matrices (Suppl. Table 13), and the same was true subsequent conversion into esters (Mahmuda & Ueda, 2008), partly be-
when compound classes were analyzed (data not shown). PLS-DA has cause of the greater flesh firmness of the NIL and the corresponding
previously been applied to aroma volatile studies but usually using a lower availability of substrates. As regards the cell wall structure, high
smaller number of input variables (Obando-Ulloa et al., 2008). RF gave levels of uronic acids and neutral sugars (especially galactose, cellulose
better discrimination than PLS-DA for other melon quality traits, includ- and α-cellulose residue) have been related with higher flesh firmness in
ing sensory traits at harvest (Fernández-Trujillo et al., 2009; Obando- another non-climacteric NIL with an introgression in LG VII (Dos-Santos
Ulloa, Jowkar, Moreno, Souri, Martínez, Bueso, et al., 2009). et al., 2011). This differential composition contributes to maintaining
The first two PLS-DA components explained a lower percentage of and strengthening the network structure, reducing cell disruption and,
the variance considering individual volatile compounds than when con- therefore, the formation of new volatiles (Baldwin, Scott, Shewmaker,
sidering compound classes (Figs. 1 and 2). The low percentage of vari- & Schuch, 2000).
ance explained by PLS-DA using individual volatile compounds (Fig. 2) The formation of 2,4-dimethylbenzaldehyde could follow the benze-
was confirmed by launching the multivariate analysis using only twenty noid biosynthetic pathway via phenylalanine (Table 3). Benzaldehyde
variables (data not shown). has been described as an intermediate in the formation of benzoic acid
The variables measured had low correlation and greater indepen- via trans-cinnamic acid following a non-oxidative pathway. Trans-
dence, which suggests that several processes of aroma biosynthesis cinnamic acid is derived from phenylalanine as the product of phenylal-
are functioning independently. Obando-Ulloa et al. (2008) also used anine ammonia-lyase (Ribnicky et al., 1998; Van Moerkercke et al.,
PLS-DA and obtained better percentage of the variance explained in 2009).
the discrimination of climacteric NILs with introgressions in LG III The L-amino acids, mainly phenylalanine and methionine, were the
from PS. Also, PLS-DA is less effective at separating PS and one non- most important metabolism precursors of the volatile compounds of
climacteric PS-type hybrid than at separating climacteric lines and PS the main discriminant compounds in NIL SC10-2 (Table 3). Fatty acids
(Obando-Ulloa et al., 2008). involved in alcohol metabolism or carotenoid degradation (Leffingwell,
Aldehydes and, to a lesser extent, alcohols and ketones were the 1999) were the other potential precursors described here such as for ex-
compound class that best characterized the aroma profile of the non- ample the ketone 3,5,5-trimethylcyclopent-2-en-1-one (Table 3).
climacteric parental PS (Table 1), in agreement with previous results As regards the metabolic pathways involved in the higher sulfur-
(Obando-Ulloa et al., 2008, 2010). The main differences between both derived compound content of SC7-1 compared with PS (Table 1), S-
NILs and PS seem to be associated with the ketones and sulfur-derived methyl ethanethioate is related to the L-methionine (Met) metabolism
compounds and the higher aldehyde content (Table 1; Fig. 1), particu- (Table 3; Suppl. Tables 1 and 10). L-methionine has been postulated to
larly compounds derived from the L-amino acids phenylalanine, isoleu- serve as a precursor of sulfur-containing aroma volatiles (Gonda et al.,
cine, valine and leucine pathways (Table 3; Suppl. Tables 1 and 3). 2013), which are important contributors to the distinctive aroma of
Differences in volatiles among NILs and PS were probably mainly associ- melon. The former pathway could involve the enzymatic degradation
ated with differences in enzymatic activities in the amino acid pathways of the amino acid cysteine from methionine, giving methanethiol, and
rather than limited by the availability of amino acids as substrate, be- the subsequent production of sulfur-derived compounds, such as S-
cause only a higher concentration of valine (51%) but not of other poten- methyl ethanethioate (Varlet & Fernández, 2010), or other volatile com-
tial amino acid precursors was found in SC10-2 (data not shown). pounds, such as pentane-2,3-dione (Table 3), which is obtained in
In previous investigations (Obando-Ulloa et al., 2010), noticeable dif- certain microorganisms via the catabolism of methionine as a result of
ferences were found between the aroma profile of NIL SC10-2 and con- 4-methylthio-2-oxobutyric acid degradation (Arfi et al., 2006; Ott
trol PS, but no QTLs were mapped in that work. The NIL SC10-2 was et al., 2000). Methanethiol has previously been reported as an aroma
characterized by a lower ketone content than PS (Table 1) that could volatile in fruits of melon NILs (Obando-Ulloa et al., 2010).
be associated with differences in the metabolism of acetophenone or Other important compounds for SC7-1 are 1-octanol and benzyl ace-
the ethylbenzene (Table 3). The ketone 1-phenylethanone, detected in tate. The alcohol obtained from the alkane n-octane is a precursor of the
PS and absent in NIL SC10-2 (Tables 2 and 3), has been described in bac- aldehyde 1-octanal, via alcohol dehydrogenase (Wills, Stephen, & Bryan,
teria as a product of two sequential dehydrogenation reactions of ethyl- 2012). The ester benzyl acetate is predominant in certain melon types
benzene to (S) 1-phenylethanol until 1-phenylethanone (Kniemeyer & (Song & Forney, 2007) and is usually produced via the shikimic pathway
Heider, 2001). by the reduction of benzaldehyde to benzyl alcohol by the enzyme benzyl
As regards other metabolic pathways associated with the differ- alcoholacetyl transferase (Gonda et al., 2010; Mahmuda & Ueda, 2008).
ences between PS and SC10-2 QTLs and volatiles, these were related Although some degree of cultivar-dependence exists in the production
in part to the free L-amino acid metabolism, in which phenylalanine, of benzyl acetate according to results using melon disks (Mahmuda &
valine, isoleucine and leucine (Table 3) are considered aroma pre- Ueda, 2008), the higher benzyl acetate content of NIL SC7-1 could be
cursors (Gonda et al., 2010; Qi et al., 2012; Smit et al., 2009). The related with the greater conversion of benzaldehyde into benzyl acetate
higher aldehyde content, mainly 2,4-dimethylbenzaldehyde, furan-2- from amino acids via transamination, as indicated by the results obtained
carbaldehyde, 2-methylpropanal and/or 2-methylbutanal, all of which in melon cubes (Gonda et al., 2010). Finally, the pathway of the aldehyde
were absent from PS (Tables 2, 4 and 5), characterized the firmer NIL 2-methylbenzaldehyde/4-methylbenzaldehyde has been described
SC10-2. The aldehydes, 2-methylbutanal and 2-methylpropanal, are po- above.
tent flavor compounds obtained via the corresponding α-keto acid and Although further research is required, the association between com-
are regarded as key-flavor compounds in many foods (Smit et al., 2009), pounds and metabolic pathways is the key in future investigation to
particularly in melon fruit (Gonda et al., 2010). The volatile compound, identify candidate genes in LG VII or X or new QTLs associated with
2-methylpropanal, an intermediate in the catabolism of leucine and va- melon texture and aromas of interest to consumers.
line, is converted into 2-methyl propanoic acid or 2-methyl propanol
(Gonda et al., 2010; Smit et al., 2009). 2-methylbutanal, which is obtain- 5. Conclusions
ed from L-isoleucine conversion, is converted to its corresponding
branched-chain alcohol 2-methylbutanol, and then, to its correspond- The introgressions in LG VII and X did not affect the melon climac-
ing ester butanol-2-methyl acetate, a typical acetic ester present in cli- teric behavior but higher flesh firmness, lower whole fruit hardness
macteric melon fruits (Gonda et al., 2010; Pang et al., 2012; Qi et al., and different juice textural properties were observed in LG X. The
2012). higher flesh firmness of the NIL SC10-2 was mainly associated with
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ters due to the juice having a potential matrix effect resulting, in High-resolution mapping of a fruit firmness-related quantitative trait locus in tomato
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 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

Appendix A. Supplementary Data.

Supplementary Tables.

Suppl. Table 1. Chemical and sensory attributes of the main volatile compounds of Table 4 identified in the near-isogenic lines (NILs)
SC10-2 and SC7-1, and the parental line ‘Piel de Sapo’ (PS) according to the criterion of percentage of variance explained in PLS-DA.

Compound RTd LRI

a a1 c
Order IUPAC name Classb IDN (min) Cale LRI Ref. Ref.1 Volatile Precursors Ref.2 Aromatic Notes Ref.3
1 1-(2,4,5- KET 108 21.598 1189 NR ACP/EB 14 Not found
Trimethylphenyl)ethanone
2 Pentane-2,3-dione KET 22 2.639 698 670 2 AA Thr/Met 18,19 Caramel, sweet, fruity, 27,
buttery, fresh; Cream, 31
butter
3 2,4-Dimethylbenzaldehyde ALD 115 21.892 1220 1175 1 AA Phe 16,17 Naphthyl, cherry, 32
almond, spice, vanilla
4 Unidentified NID 70 12.376 975 - - - -
5 Ethenyl octadecanoate NAE 83 20.635 1127 NR FAs Not found
6 Dihydrofuran-2(3H)-one LAC 51 9.112 916 922 1 GABA 10 Cream, oil, fat, caramel 27,
29
7 1-Phenylethyl acetate ACE 107 21.731 1197 1186 1 AA Try 15 Not found
8 Furan-2-carbaldehyde ALD 41 5.788 837 838 1 Furan 9 Woody, almond, sweet, 28
fruity, flowery
9 3,5-Dimethylcyclohexan-1- ALC 64 13.535 996 NR CH-ol Not found
ol
10 Octan-1-ol ALC 79 18.578 1075 1087 1 FAs 25 Fatty, green, herbal 35
11 Unidentified NID 104 21.458 1180 - - - -
12 (2R,3S)-3-Ethylheptan-2-ol ALC 76 18.870 1078 NR FAs Not found
13 1-Phenylethanone KET 75 18.304 1070 1070 1 AMS 12 sweet, pungent, 27,
hawthorn, mimosa, 31
almond, acacia,
Compound; Must,
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AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

flower, almond
14 Octane-2,5-dione KET - 13.069 988 986 1 - -
15 2-Methylbenzaldehyde / 4- ALD 81 18.688 1076 1067/1081 1 AA Phe 16,17 Warm, mild, floral, 28
methylbenzaldehyde sweet, spicy
16 3´-Methylacetophenone/ 2´- KET 95 21.020 1152 1176 1 ACP 14 Not found
Methylacetophenone
17 Decane AHA 66 13.920 1003 1000 1 FAs Saturated 11 Fusel-like, fruity, sweet 28
fatty acyl
chains
18 3,5,5-Trimethylcyclopent-2- KET 38 5.355 826 832 1 CAR 24 Top note of Osmanthus 34
en-1-one fragrans (sweet
osmanthus)
19 S-Methyl ethanethioate SDC 24 2.688 701 ND 1 AA Met 20,21,22 Sulfurous, eggy, cheese, 32
dairy,vegetable, cabbage
a
Order of the main volatile compounds according to the criterion of the percentage of variance explained in PLS-DA (50%-100%).
a1
IUPAC, international union of pure and applied chemistry.
b
Compound classes: ACE, acetate esters; AHA, alkanes; ALC, alcohols; KET, ketones; LAC, lactones; NAE, non-acetate esters; NID, unidentified; SDC, sulfur-
derived compounds.
c
IDN: Identification number assigned for each volatile compound in the correlation plot of the PLS-DA analysis (Fig.2). IDN with dash (-) means that the compound
is into the inner circle of radious 0.5 and the IDN is not represented in Fig. 2.
d
RT: Mean retention time in minutes for each volatile compound.
e
LRI Cal: Linear retention indices calculated from the RT of a series of straight-chain alkanes (C6-C20).
Abbreviations and acronyms: LRI, linear retention time; LRI Ref., linear retention time referenced (LRI Ref.), Ref(), literature references for LRI (Ref.1), volatile
precursors (Ref.2) or aromatic notes (Ref.3); AA, amino acid; ACP, acetophenone; AMS, alfa-methylstyrene; CAR, carotenoides; CH-ol, ciclohexanol; EB,
ethylbenzene; FAs, fatty acids; GABA, gamma-aminobutyrate; Met, L-methionine; NR, not reported in literature search; Phe, L-phenylalanine; Thr, L-threonine; Try,
L-tryptophan; Val, L-valine.
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AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

Suppl. Table 2. Main volatile compounds identified in the headspace of the fruit of near-isogenic lines (NILs) SC10-2 (n=3) and SC7-1
(n=5) of melon and the parental line ‘Piel de Sapo’ (PS) (n=21).The compounds are arranged according to the Variable importance in the
projection (VIP) in the Partial least squares-discriminant analysis (PLS-DA). Data are the mean relative content in percentage with respect
to the total of the probable aromatic volatile compounds identified.
Compound Pedigree
a a1 a2 b c
Order CAS number IUPAC name Class IDN PS SC10-2 SC7-1 VIP
1 000600-14-6 Pentane-2,3-dione KET 22 0.00 0.00 0.14 * 2.34
2 000078-84-2 2-Methylpropanal ALD 7 0.00 0.07 * 0.02 1.98
3 015764-16-6 2,4-Dimethylbenzaldehyde ALD 115 0.00 0.69 * 0.09 1.90
4 000111-87-5 Octan-1-ol ALC 79 0.05 0.11 0.59 * 1.86
5 000529-20-4 / 000104-87-0 2-Methylbenzaldehyde / 4- ALD 81 0.00 0.00 0.07 * 1.76
Methylbenzaldehyde
6 002040-07-5 1-(2,4,5-Trimethylphenyl)ethanone KET 108 0.00 0.12 * 0.00 1.75
7 024156-95-4 3,5,5-Trimethylcyclopent-2-en-1-one KET 38 0.00 0.00 0.05 * 1.72
8 003268-49-3 3-Methylsulfanylpropanal SDC 52 0.00 0.04 * 0.03 1.70
9 NID3 Unidentified NID 91 0.06 0.44 0.38 * 1.70
10 019780-39-3 (2R,3S)-3-ethylheptan-2-ol ALC 76 0.03 0.00 0.43 * 1.59
11 000096-17-3 2-Methylbutanal ALD 16 0.00 0.07 * 0.01 1.58
12 074367-31-0 (2-Ethyl-3-hydroxy-hexyl) 2- NAE 120 2.28 1.04 0.95 * 1.53
methylpropanoate
13 005441-52-1 3,5-Dimethylcyclohexan-1-ol ALC 64 0.38 0.10 * 0.30 1.51
NIL means followed by an asterisk were significantly different of the control PS according to one-way ANOVA with pedigree effect followed by a Dunnett test (P =
0.05). Mass spectra unidentified compound (NID3) reported in Suppl. Table 9 and Suppl. Fig. 4.
a
Order of the main volatile compounds according to criterion VIP.
a1
CAS, chemical abstracts service.
a2
IUPAC, international union of pure and applied chemistry.
b
Compound classes: ALC, alcohols; ALD, aldehydes; KET, ketones; NAE, non-acetate esters; NID, unidentified; SDC, sulfur-derived compounds.
c
IDN: Identification number assigned for each volatile compound in the correlation plot of PLS-DA analysis (Fig.2).
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AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

Suppl. Table 3. Chemical and sensory attributes of the main volatile compounds of Suppl. Table 1 identified in the near-isogenic lines
(NILs) SC10-2 and SC7-1, and the parental line ‘Piel de Sapo’ (PS) according to the Variable importance in the projection (VIP) in the
Partial least squares-discriminant analysis (PLS-DA).
Compound RTd LRI Volatile
a a1 b c
Order IUPAC name Class IDN (min) Cale LRI Ref. Ref.1 Precursors Ref.2 Aromatic Notes Ref.3
1 Pentane-2,3-dione KET 22 2.639 698 670 2 AA Thr/Met 18,19 Caramel, sweet, fruity, 27,
buttery, fresh; Cream, 31
butter
2 2-Methylpropanal ALD 7 1.573 ND 552 1 AA Leu/Val 3 Green, pungent, burnt, 27
malty, toasted, fruity
3 2,4-Dimethylbenzaldehyde ALD 115 21.892 1220 1175 1 AA Phe 16,17 Naphthyl, cherry, almond, 32
spice, vanilla
4 Octan-1-ol ALC 79 18.578 1075 1087 1 Fas 25 Fatty, green, herbal 35
5 2-Methylbenzaldehyde / 4- ALD 81 18.688 1076 1067/1081 1 AA Phe 16,17 Warm, mild, floral, sweet, 28
Methylbenzaldehyde spicy
6 1-(2,4,5- KET 108 21.598 1189 NR ACP/EB 14 Not found
Trimethylphenyl)ethanone
7 3,5,5-trimethylcyclopent-2-en-1- KET 38 5.355 826 832 1 CAR 24 Top note of Osmanthus 34
one fragrans (sweet
osmanthus)
8 3-Methylsulfanylpropanal SDC 52 8.496 905 911 1 AA Met Cooked potato 30
9 Unidentified NID 91 20.879 1143 - - - - -
10 (2R,3S)-3-ethylheptan-2-ol ALC 76 18.870 1078 NR Fas Not found
11 2-Methylbutanal ALD 16 2.239 653 682 1 AA Iso 4,5,6,7,8 Green, almond, strong 27
burnt, malty, cocoa
12 (2-Ethyl-3-hydroxy-hexyl) 2- NAE 120 13.771 1376 1375 1 Fas 25 Not found
methylpropanoate
13 3,5-Dimethylcyclohexan-1-ol ALC 64 13.535 996 NR CH-Ol Not found
a
Order of the main volatile compounds according to criterion VIP.
a1
IUPAC, international union of pure and applied chemistry.
b
Compound classes: ALD, aldehydes; ALC, alcohols; KET, ketones; NAE, non-acetate esters; NID, unidentified; SDC, sulfur-derived compounds.
c
IDN: Identification number assigned for each volatile compound in the correlation plot of PLS-DA analysis (Fig.2).
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

d
RT: Mean retention time in minutes for each volatile compound.
e
LRI Cal: Linear retention indices calculated from the RT of a series of straight-chain alkanes (C6-C20).
Mass spectra unidentified compound (NID3) reported in Suppl. Table 9 and Suppl. Fig. 4.
Abbreviations and acronyms: LRI, linear retention time; LRI Ref., linear retention time referenced (LRI Ref.), Ref(), literature references for LRI (Ref.1), volatile
precursors (Ref.2) or aromatic notes (Ref.3); AA, amino acid; ACP, acetophenone; CAR, carotenoides; CH-Ol, ciclohexanol; EB, ethylbenzene; FAs, fatty acids; Iso,
L-isoleucine; Leu, L-leucine; Met, L-methionine; NR, not reported in literature search; Phe, L-phenylalanine; Thr, L-threonine; Val, L-valine.
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-
CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

Suppl. Table 4. Compound classes identified in the headspace of the fruit of near-
isogenic lines (NILs) SC10-2 and SC7-1 of melon and the parental line ‘Piel de Sapo’
(PS). The compounds are arranged according to the Variable importance for projection
(VIP) in the Partial least squares-discriminant analysis (PLS-DA).
Compound
a
Order Classb VIP
1 KET 1.91
2 TER 1.36
3 SDC 1.27
4 ALD 1.12
5 NAE 0.91
6 OTH 0.79
7 AHA 0.47
8 ACE 0.37
9 ACD 0.35
10 ALC 0.14
a
Order of the main volatile compounds according to criterion VIP.
b
Compound classes: ACE, acetate esters; ACD, acids; ALD, aldehydes; ALC, alcohols; ALK, alkanes:
KET, ketones; NAE, non-acetate esters; OTH, others; SDC, sulfur-derived compounds; TER, terpenes.

Suppl. Table 5. Compound classes identified in the headspace of the fruit of near-
isogenic lines (NILs SC10-2 and SC7-1) of melon and the parental line ‘Piel de Sapo’
(PS). The compounds are arranged according to the Variable importance measures
(VIM) in the Partial least squares-discriminant analysis (PLS-DA).

Compound
Ordera Classb VIM
1 KET 0.100
2 TER 0.071
3 SDC 0.051
4 ALD 0.048
5 OTH 0.047
6 NAE 0.037
7 ACE 0.025
8 AHA 0.025
9 ACD 0.014
10 ALC 0.007
a
Order of the main volatile compounds according to criterion VIM.
b
Compound classes: ACE, acetate esters; ACD, acids; ALD, aldehydes; ALC, alcohols; ALK, alkanes:
KET, ketones; NAE, non-acetate esters; OTH, others; SDC, sulfur-derived compounds; TER, terpenes.
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

Suppl. Table 6. Presence or absence of volatile compounds identified in the headspace of the fruit of near-isogenic lines (NILs) SC10-2
and SC7-1 of melon and their presence or absence in the parental line ‘Piel de Sapo’ (PS). Data are the mean relative content in percentage
with respect to the total of the probable aromatic volatile compounds identified.
Compound Pedigree
Compoundsa CASa1number IUPACa2name Classb IDNc PS SC10-2 SC7-1
Not reported in PS/Reported in NIL SC10-2
1 015764-16-6 2,4-Dimethylbenzaldehyde ALD 115 0.00 0.69 * 0.09
2 000078-84-2 2-Methylpropanal ALD 7 0.00 0.07 * 0.02
3 003268-49-3 3-Methylsulfanylpropanal SDC 52 0.00 0.04 * 0.03
4 000096-17-3 2-Methylbutanal ALD 16 0.00 0.07 * 0.01
5 002040-07-5 1-(2,4,5-Trimethylphenyl)ethanone KET 108 0.00 0.12 * 0.00
6 NID1 Unidentified NID 70 0.00 0.32 * 0.00
7 000096-48-0 Dihydrofuran-2(3H)-one LAC 51 0.00 0.24 * 0.00
8 0096316-89-1 Ethenyl octadecanoate NAE 83 0.00 0.17 * 0.00
9 000098-01-1 Furan-2-carbaldehyde ALD 41 0.00 0.03 * 0.00
Not reported in PS/Reported in NIL SC7-1
1 000600-14-6 Pentane-2,3-dione KET 22 0.00 0.00 0.14 *
2 000529-20-4 / 000104-87-0 2-Methylbenzaldehyde / 4-Methylbenzaldehyde ALD 81 0.00 0.00 0.07 *
3 024156-95-4 3,5,5-Trimethylcyclopent-2-en-1-one KET 38 0.00 0.00 0.05 *
Reported in PS/Not reported in NIL SC10-2
1 000108-21-4 1-Methylethyl acetate ACE - 0.05 0.00 0.21 *
2 000123-92-2 3-Methylbutyl acetate ACE - 0.02 0.00 0.05
3 019780-39-3 (2R,3S)-3-ethylheptan-2-ol ALC 76 0.03 0.00 0.43 *
4 000124-18-5 Decane AHA 66 0.15 0.00 0.06
5 001445-91-6 1-Phenylethanol ALC - 0.70 0.00 * 0.34
6 028473-21-4 Nonan-1-ol ALC - 0.07 0.00 0.10
7 000629-50-5 Tridecane AHA - 0.06 0.00 0.01
8 000557-48-2 (2E,6E)-nona-2,6-dienal ALD - 0.09 0.00 0.01
9 NR (E)-4,4-dimethylpent-2-enal ALD - 0.03 0.00 0.03
10 018829-56-6 (E)-non-2-enal ALD - 0.14 0.00 0.08
11 000098-86-2 1-Phenylethanone KET - 1.17 0.00 * 0.41
12 029590-42-9 6-Methylheptyl prop-2-enoate KET - 0.04 0.00 0.13
13 000565-69-5 2-Methylpentan-3-one KET - 0.07 0.00 0.05
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AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

14 025044-01-3 2-Methylpent-1-en-3-one KET - 0.03 0.00 0.04

15 057283-79-1 (E)-5-Ethyl-6-methyl-hept-3-en-2-one KET - 0.19 0.00 0.21
16 000105-37-3 Ethyl propanoate NAE - 0.11 0.00 0.03
17 000093-58-3 Methyl benzoate NAE - 0.04 0.00 0.04
18 000492-37-5 2-Phenylpropanoic acid ACD - 0.43 0.00 * 0.41
19 001534-08-3 S-methyl ethanethioate SDC 24 0.05 0.00 0.44 *
Reported in PS/Not reported in NIL SC7-1
1 000093-92-5 1-phenylethyl acetate ACE 107 0.01 0.20 * 0.00
2 NID2 Unidentified NID 104 0.03 0.32 * 0.00
3 019550-05-1 3,4-Dimethylhexan-2-ol ALC 98 0.01 0.20 * 0.00
4 001565-75-9 2-Phenylbutan-2-ol ALC 80 0.33 2.27 * 0.00
5 NID4 Unidentified NID - 0.01 0.06 * 0.00
Reported in PS/Not reported in both nils (SC10-2, SC7-1)
1 NID5 Unidentified NID - 0.28 0.00 0.00
2 000554-12-1 Methyl propanoate NAE - 0.06 0.00 0.00
NIL means followed by an asterisk were significantly different of the control PS according to one-way ANOVA with pedigree effect followed by a Dunnett test (P =
0.05). The raw p values of the ANOVA were corrected for the multiple test using the Benjamini and Hochberg false discovery rate criterion.
a
Compounds: Number of volatile compounds for each classification.
a1
CAS, chemical abstracts service.
a2
IUPAC, international union of pure and applied chemistry.
b
Compound classes: ACD, acids; ACE, acetate esters; AHA, alkanes; ALC, alcohols; ALD, aldehydes; KET, ketones; NAE, non-acetate esters; NID, unidentified;
NR, not reported in literature search; SDC, sulfur-derived compounds.
c
IDN: Identification number assigned for each volatile compound in the correlation plot of PLS-DA analysis (Fig.2). IDN with dash (-) means that the compound is
into the inner circle of radious 0.5 and the IDN is not represented in the Fig. 2.
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-
CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

Suppl. Table 7. Relative abundance in of main ions in probable mass spectra of the
unidentified compound NID1 (RT=12.376 min; LRI Cal=975; IDN.70). Relative
abundance was calculated in percentage (%) of each peak in relation to abundance of
base peak (m/z=71). Base peak is the most abundant peak (999). The mass range is 1 to
999. Mass spectra taken of the NIL SC10-2, replica 1, fruit A.

Relative Relative
m/z Abundance Intensityb
a
Abundance (%)
25 25 1 0.02
26 249 12 0.23
27 1574 77 1.46
29 1382 67 1.28
30 3 0 0.00
31 521 25 0.48
32 745 36 0.69
33 23 1 0.02
35 52 3 0.05
36 2 0 0.00
37 31 2 0.03
38 94 5 0.09
39 3036 148 2.81
41 5381 263 4.99
42 2150 105 1.99
43 2997 146 2.78
44 2101 103 1.95
45 322 16 0.30
46 61 3 0.06
47 3 0 0.00
48 42 2 0.04
49 95 5 0.09
50 217 11 0.20
51 384 19 0.36
52 79 4 0.07
53 743 36 0.69
54 543 26 0.50
55 4308 210 3.99
56 1708 83 1.58
57 3591 175 3.33
61 41 2 0.04
62 29 1 0.03
63 134 7 0.12
64 177 9 0.16
65 848 41 0.79
66 175 9 0.16
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-
CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

67 3119 152 2.89

68 1997 97 1.85
69 8433 412 7.82
70 690 34 0.64
71* 20491 999 18.99
72 763 37 0.71
73 88 4 0.08
74 41 2 0.04
75 72 4 0.07
76 34 2 0.03
77 186 9 0.17
79 120 6 0.11
80 259 13 0.24
81 3535 173 3.28
82 2377 116 2.20
83 3705 181 3.43
84 1611 79 1.49
85 749 37 0.69
86 399 19 0.37
87 84 4 0.08
89 22 1 0.02
91 72 4 0.07
93 470 23 0.44
95 15270 745 14.15
96 1346 66 1.25
97 536 26 0.50
98 21 1 0.02
99 670 33 0.62
100 36 2 0.03
103 141 7 0.13
105 127 6 0.12
106 61 3 0.06
107 123 6 0.11
108 96 5 0.09
109 1029 50 0.95
110 4443 217 4.12
111 803 39 0.74
Number followed by an asterisk and highlighted in bold correspond to most abundant peak (base peak).
The mass range is 1 to 999.
a
m/z, mass-to-charge ratio.
b
Relative Intensity: Abundances were calculated in relation of the base peak to normalize all mass
intensities.
c
Relative Abundance (%): Relative abundance in percentage (%) of each peak in relation of the base
peak.
IDN: Identification number assigned for each volatile compound in the correlation plot of PLS-DA
analysis (Fig.2); RT: Mean retention time in minutes for each volatile compound; LRI Cal: Linear
retention indices calculated from the RT of a series of straight-chain alkanes (C6-C20).
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-
CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

Suppl. Table 8. Relative abundance of main ions in probable mass spectra of the
unidentified compound NID2 (RT=21.458 min; LRI Cal=1180; IDN.104). Relative
abundance was calculated in percentage (%) of each peak in relation to abundance of
the base peak (m/z=43). Base peak is the most abundant peak (999). The mass range is
1 to 999. Mass spectra taken of the NIL SC10-2, replica 1, fruit B.

Relative Relative
a
m/z Abundance Intensity Abundancec (%)
b

25 36 1 0.01
26 327 7 0.06
27 9717 198 1.92
28 2328 48 0.46
29 12770 261 2.53
30 370 8 0.07
32 1070 22 0.21
33 18 0 0.00
35 10 0 0.00
36 25 1 0.00
36 15 0 0.00
38 286 6 0.06
39 10773 220 2.13
40 2126 43 0.42
41 38304 782 7.58
42 4726 97 0.94
43 48964 999 9.70
44 2133 44 0.42
45 1384 28 0.27
46 2 0 0.00
49 119 2 0.02
50 321 7 0.06
51 902 18 0.18
52 916 19 0.18
53 5682 116 1.13
54 2970 61 0.59
55 28676 586 5.68
56 8040 164 1.59
57 28974 592 5.74
58 47872 978 9.48
59 570 12 0.11
60 152 3 0.03
61 102 2 0.02
62 205 4 0.04
63 367 7 0.07
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-
CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

64 14 0 0.00
65 1577 32 0.31
66 1427 29 0.28
67 15873 324 3.14
68 7959 163 1.58
69 34094 696 6.75
70 5133 105 1.02
71 20136 411 3.99
72 1771 36 0.35
73 576 12 0.11
74 166 3 0.03
75 183 4 0.04
76 169 3 0.03
77 965 20 0.19
78 381 8 0.08
79 3436 70 0.68
80 835 17 0.17
81 23050 471 4.56
82 4405 90 0.87
83 16523 337 3.27
84 8120 166 1.61
85 11379 232 2.25
86 823 17 0.16
87 125 3 0.02
88 100 2 0.02
90 126 3 0.02
91 609 12 0.12
93 570 12 0.11
94 784 16 0.16
95 4696 96 0.93
96 2805 57 0.56
97 4051 83 0.80
98 4694 96 0.93
99 1698 35 0.34
100 73 1 0.01
101 408 8 0.08
102 83 2 0.02
105 983 20 0.19
106 60 1 0.01
107 788 16 0.16
108 319 7 0.06
109 31004 633 6.14
110 4685 96 0.93
111 2033 42 0.40
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-
CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

112 11893 243 2.36

113 5150 105 1.02
114 541 11 0.11
115 234 5 0.05
121 178 4 0.04
122 197 4 0.04
123 5869 120 1.16
Number followed by an asterisk and highlighted in bold correspond to most abundant peak (base peak).
The mass range is 1 to 999.
a
m/z, mass-to-charge ratio.
b
Relative Intensity: Abundances were calculated in relation of the base peak to normalize all mass
intensities.
c
Relative Abundance (%): Relative abundance in percentage (%) of each peak in relation of the base
peak.
IDN: Identification number assigned for each volatile compound in the correlation plot of PLS-DA
analysis (Fig.2); RT: Mean retention time in minutes for each volatile compound; LRI Cal: Linear
retention indices calculated from the RT of a series of straight-chain alkanes (C6-C20).
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-
CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

Suppl. Table 9. Relative abundance of main ions in probable mass spectra of the
unidentified compound NID3 (RT=20.879 min; LRI Cal=1143; IDN.91). Relative
abundance was calculated in percentage (%) of each peak in relation to abundance of
the base peak (m/z=57). Base peak is the most abundant peak (999). The mass range is
1 to 999. Mass spectra taken of the NIL SC7-1, replica 2, fruit B.

Relative Relative
m/z Abundance Intensity Abundancec (%)
a b

30 222 42 0.41
31 128 24 0.24
33 23 4 0.04
34 70 13 0.13
35 23 4 0.04
36 24 5 0.04
39 376 71 0.70
40 291 55 0.54
41 1579 298 2.94
42 219 41 0.41
43 3603 680 6.71
44 663 125 1.24
45 1015 192 1.89
46 33 6 0.06
47 20 4 0.04
48 45 8 0.08
49 32 6 0.06
50 46 9 0.09
52 89 17 0.17
53 537 101 1.00
54 376 71 0.70
55 2080 393 3.88
56 2429 459 4.53
57 5291 999 9.86
58 85 16 0.16
59 219 41 0.41
60 7 1 0.01
61 21 4 0.04
61 213 40 0.40
62 176 33 0.33
63 205 39 0.38
66 458 86 0.85
67 2418 457 4.50
68 1770 334 3.30
69 2480 468 4.62
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-
CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

70 955 180 1.78

71 2699 510 5.03
72 295 56 0.55
73 172 32 0.32
74 168 32 0.31
75 200 38 0.37
77 75 14 0.14
78 444 84 0.83
79 260 49 0.48
80 505 95 0.94
81 1978 373 3.69
82 3487 658 6.50
83 1673 316 3.12
84 991 187 1.85
85 2191 414 4.08
86 151 29 0.28
88 335 63 0.62
89 69 13 0.13
91 238 45 0.44
93 143 27 0.27
94 116 22 0.22
95 1861 351 3.47
96 1941 366 3.62
98 24 5 0.04
99 445 84 0.83
100 160 30 0.30
101 181 34 0.34
102 172 32 0.32
106 19 4 0.04
107 176 33 0.33
108 133 25 0.25
109 4153 784 7.74
Number followed by an asterisk and highlighted in bold correspond to most abundant peak (base peak).
The mass range is 1 to 999.
a
m/z, mass-to-charge ratio.
b
Relative Intensity: Abundances were calculated in relation of the base peak to normalize all mass
intensities.
c
Relative Abundance (%): Relative abundance in percentage (%) of each peak in relation of the base
peak.
IDN: Identification number assigned for each volatile compound in the correlation plot of PLS-DA
analysis (Fig.2); RT: Mean retention time in minutes for each volatile compound; LRI Cal: Linear
retention indices calculated from the RT of a series of straight-chain alkanes (C6-C20).
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

Suppl. Table 10. Main volatile compounds identified in the headspace of the fruit of near-isogenic lines (NILs) SC10-2 and SC7-1 of
melon and the parental line ‘Piel de Sapo’ (PS). The compounds are arranged according to the Variable importance measures (VIM) in the
Partial least squares-discriminant analysis (PLS-DA). Data are the mean relative content in percentage with respect to the total of the
probable aromatic volatile compounds identified.
Compound Pedigree
a a1 a2 b c
Order CAS number IUPAC name Class IDN PS SC10-2 SC7-1 VIM
1 000600-14-6 Pentane-2,3-dione KET 22 0.00 0.00 0.14 * 0.0189
2 000078-84-2 2-Methylpropanal ALD 7 0.00 0.07 * 0.02 0.0158
3 000111-87-5 Octan-1-ol ALC 79 0.05 0.11 0.59 * 0.0153
4 015764-16-6 2,4-Dimethylbenzaldehyde ALD 115 0.00 0.69 * 0.09 0.0148
5 000529-20-4 / 000104-87-0 2-Methylbenzaldehyde / 4- ALD 81 0.00 0.00 0.07 * 0.0142
Methylbenzaldehyde
6 NID3 Unidentified NID 91 0.06 0.44 0.38 * 0.0141
7 024156-95-4 3,5,5-Trimethylcyclopent-2-en-1-one KET 38 0.00 0.00 0.05 * 0.0139
8 002040-07-5 1-(2,4,5-Trimethylphenyl)ethanone KET 108 0.00 0.12 * 0.00 0.0133
9 003268-49-3 3-Methylsulfanylpropanal SDC 52 0.00 0.04 * 0.03 0.0131
10 019780-39-3 (2R,3S)-3-ethylheptan-2-ol ALC 76 0.03 0.00 0.43 * 0.0126
11 074367-31-0 (2-Ethyl-3-hydroxy-hexyl) 2- NAE 120 2.28 1.04 0.95 * 0.0124
methylpropanoate
12 000096-17-3 2-Methylbutanal ALD 16 0.00 0.07 * 0.01 0.0123
NIL means followed by an asterisk were significantly different of the control PS according to one-way ANOVA with pedigree effect followed by a Dunnett test (P =
0.05). The raw p values of the ANOVA were corrected for the multiple test using the Benjamini and Hochberg false discovery rate criterion. Mass spectra unidentified
compound (NID3) reported in Suppl. Table 9 and Suppl. Fig. 4.
a
Order of the main volatile compounds according to criterion VIM.
a1
CAS, chemical abstracts service.
a2
IUPAC, international union of pure and applied chemistry.
b
Compound classes: ALC, alcohols; ALD, aldehydes; KET, ketones; NAE, non-acetate esters; NID, unidentified; SDC, sulfur-derived compounds.
c
IDN: Identification number assigned for each volatile compound in the correlation plot of PLS-DA analysis (Fig.2).
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-
CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

Suppl. Table 11. Main volatile compounds identified in the headspace of the fruit
of near-isogenic lines (NILs) SC7-1 and SC10-2 of melon and the parental line ‘Piel de
Sapo’ (PS) with absolute loading weights higher than 0.1 in at least one of the two PLS-
DA components.

Ordera CASb number PLS-DA1 PLS-DA2

1 000600-14-6* -0.200 0.239
2 000078-84-2* -0.195 0.003
3 015764-16-6* -0.177 -0.122
4 000111-87-5* -0.168 0.152
5 003268-49-3* -0.167 -0.031
6 NID3* -0.164 0.075
9 000529-20-4 / 000104-87-0* -0.150 0.179
8 000096-17-3* -0.150 -0.086
7 074367-31-0* 0.150 -0.031
11 002040-07-5* -0.148 -0.185
10 024156-95-4* -0.148 0.171
12 004621-04-10 -0.146 -0.004
13 000098-86-2* 0.141 0.068
14 000076-22-2 / 000464-49-3 0.139 0.002
15 000471-01-2 0.135 -0.038
16 005441-52-1* 0.133 0.138
17 019780-39-3* -0.129 0.187
18 000124-18-5* 0.126 0.100
19 000140-11-4 -0.124 0.147
20 000767-54-4 -0.123 0.035
21 000096-48-0* -0.121 -0.152
24 0096316-89-1* -0.120 -0.152
23 000098-01-1 -0.120 -0.149
22 000629-50-5 0.120 -0.002
26 070424-13-4 -0.119 0.060
25 000557-48-2 0.119 -0.015
28 001534-08-3* -0.118 0.172
27 079637-11-9 / 000629-20-9 0.118 -0.061
30 NID1* -0.117 -0.183
29 000475-20-7 0.117 0.078
31 000629-59-4 -0.116 0.017
32 000624-16-8 -0.115 0.127
33 000591-23-1 0.114 0.080
35 061193-21-3 -0.113 0.060
34 068411-77-8 0.113 0.021
38 000585-74-0 / 000577-16-2* 0.112 0.134
37 000123-86-4 -0.112 0.083
36 NR1 -0.112 -0.016
39 003214-41-3* -0.111 0.103
40 000123-73-9 0.105 0.015
41 000093-92-5* -0.089 -0.150
42 019550-05-1 -0.079 -0.131
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-
CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

43 000617-94-7 0.077 0.110

44 NID2* -0.074 -0.169
45 009057-02-7 -0.063 -0.106
46 000122-03-2 -0.060 -0.115
47 001565-75-9 -0.056 -0.144
48 000492-37-5 0.052 0.144
49 000110-93-0 0.045 0.117
50 000078-93-3 0.042 0.136
51 000108-21-4 -0.036 0.134
52 074683-66-2 -0.026 0.100
53 000123-92-2 0.025 0.114
54 000079-20-9 0.017 0.106
55 029590-42-9 -0.009 0.110
56 NR2 0.000 0.119
a
Order of the main volatile compounds according to criterion loading weights higher than 0.1in PLS-
DA1. CAS numbers highlighted in bold correspond to volatile compounds with absolute loading weights
higher than 0.1 in two PLS-DA components. CAS numbers followed by an asterisk correspond to main
volatile compounds identified in the previous PLS-DA analysis (50%-100% variance explained or 0.7-1
distance to the origin in correlation plot, VIP and VIM; Table 4 and Suppl. Tables 1 and 10).
b
CAS, chemical abstracts service.
Abbreviations: NID, unidentified, NR, not reported CAS number in literature search.
Mass spectra unidentified compound (NID1, NID2, NID3) reported in Suppl. Tables 7-9 and Suppl.
Figs.2-4.
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

Suppl. Table 12. Main discriminant volatile compounds identified in the headspace of the fruit of near-isogenic lines (NILs) SC10-2 (n=3)
and SC7-1 (n=5) of melon and the parental line ‘Piel de Sapo’ (PS) (n=21) for all (six) multivariate classifications performed (e and f) and
volatile compounds confirmed by one criterion (g). Data are the mean relative content in percentage with respect to the total of the probable
aromatic volatile compounds identified.
Compounds Compound Pedigree
per NILa CASa1 number IUPACa2 name Classb IDNc PS SC10-2 SC7-1 p-valued
NIL SC10-2
1e 002040-07-5 1-(2,4,5-Trimethylphenyl)ethanone KET 108 0.00 0.12 * 0.00 ***
2e 015764-16-6 2,4-Dimethylbenzaldehyde ALD 115 0.00 0.69 * 0.09 *
3f 000078-84-2 2-Methylpropanal ALD 7 0.00 0.07 * 0.02 ***
4f 000096-48-0 Dihydrofuran-2(3H)-one LAC 51 0.00 0.24 * 0.00 ****
5f 003268-49-3 3-Methylsulfanylpropanal SDC 52 0.00 0.04 * 0.03 **
6f 005441-52-1 3,5-Dimethylcyclohexan-1-ol ALC 64 0.38 0.10 * 0.30 ****
7f NID1 Unidentified NID 70 0.00 0.32 * 0.00 ****
1g 000098-86-2 1-Phenylethanone KET 75 1.17 0.00 * 0.41 *
2g 000076-22-2 / 000464-49-3 1,7,7-Trimethylbicyclo[2.2.1]heptan-2-one / (1R,4R)-1,7,7- ALC 97 0.98 0.63 * 0.73 ****
Trimethylbicyclo[2.2.1]heptan-2-one
3g NID2 Unidentified NID 104 0.03 0.32 * 0.00 **
4g 000093-92-5 1-Phenylethyl acetate ACE 107 0.01 0.20 * 0.00 **
5g 000064-19-7 Acetic acid ACD - 0.11 0.30 * 0.11 NS
Nil sc7-1
1e 000600-14-6 Pentane-2,3-dione KET 22 0.00 0.00 0.14 * ****
2e 024156-95-4 3,5,5-Trimethylcyclopent-2-en-1-one KET 38 0.00 0.00 0.05 * ***
3e 019780-39-3 (2R,3S)-3-ethylheptan-2-ol ALC 76 0.03 0.00 0.43 * ***
4e 000111-87-5 Octan-1-ol ALC 79 0.05 0.11 0.59 * ***
5e 000529-20-4 / 000104-87-0 2-methylbenzaldehyde / 4-methylbenzaldehyde ALD 81 0.00 0.00 0.07 * **
6f 001534-08-3 S-methyl ethanethioate SDC 24 0.05 0.00 0.44 * **
1g NID3 Unidentified NID 91 0.06 0.44 0.38 * *

NIL means followed by an asterisk were significantly different from the control PS according to one-way ANOVA with pedigree effect followed by a Dunnett test (P = 0.05).
The raw p values of the ANOVA were corrected for the multiple test using the Benjamini and Hochberg false discovery rate criterion. Mass spectra unidentified compounds
(NID1, NID2, NID3) reported in Suppl. Tables 7-9 and Suppl. Figs.2-4.
a
Compounds per NIL: Main discriminant volatile compounds for all performed multivariate analysis (e and f) and volatile compounds confirmed by a unique criterion (g).
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

a1
CAS, chemical abstracts service.
a2
IUPAC, international union of pure and applied chemistry.
b
Compound classes: ACD, acids; ACE, acetate esters; ALC, alcohols; ALD, aldehydes; KET, ketones; NID, unidentified; SDC, sulfur-derived compounds.
c
IDN: Identification number assigned for each volatile compound in the correlation plot of PLS-DA analysis (Fig.2). IDN with dash (-) means that the compound is into the
inner circle of radious 0.5 and the IDN is not represented in the Fig. 2.
d
The raw p values of the ANOVA were corrected for the multiple test using the Benjamini and Hochberg false discovery rate criterion. Original data were transformed for
statistical analysis by substituting the zero-values by the minimum value observed and applying the log-transformation (base 2).
e
Discriminant volatile compounds for all performed multivariate analysis classification criteria (six).
f
Discriminant volatile compounds confirmed by at least four of the six classification criteria.
g
Discriminant volatile compounds confirmed by a unique classification criterion.
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-
CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

Suppl. Table 13. Confusion matrices of individual volatile compounds for Partial
least squares-discriminant analysis (PLS-DA) and Random forest (RF) analysis. Data
are the number of replicates analyzed in the near-isogenic lines (NILs) SC10-2 (n=3)
and SC7-1 (n=5) of melon and the parental line ‘Piel de Sapo’ (PS) (n=21).
PLS-DA
Line PS SC10-2 SC7-1
PS 21 0 0
SC10-2 0 3 0
SC7-1 0 0 5
RF
Line PS SC10-2 SC7-1
PS 21 0 0
SC10-2 3 0 0
SC7-1 3 0 2
Numbers highlighted in bold correspond to a non correct classification according to confusion matrix of
RF.
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-
CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

Supplementary Figures.

Suppl. Fig. 1. Classification of the ten compound classes according to Random

forest (RF) analysis. A. The compound classes listed in axe RF1 based on the mean
decreases in accuracy. B. The compound classes listed in axe RF2 based on mean
decreases Gini index. Melon fruit compound classes identified in near-isogenic lines
(NILs) SC7-1 (○; n=5) and SC10-2 (
; n=3) of melon and the parental line ‘Piel de
Sapo’ (PS,●; n=21). ACE, acetate esters; ACD, acids; ALD, aldehydes; ALC, alcohols;
ALK, alkanes; KET, ketones; NAE, non-acetate esters; OTH, others; SDC, sulfur-
derived compounds; TER, terpenes.
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

Suppl. Fig. 2. Relative abundance in of main ions in probable mass spectra of the unidentified compound NID1 (RT=12.376 min; LRI
Cal=975; IDN.70). Relative abundance was calculated in percentage (%) of each peak in relation to abundance of base peak (m/z=71). Base peak
is the most abundant peak (999). The mass range is 1 to 999. Mass spectra taken of the NIL SC10-2, replica 1, fruit A. IDN: Identification
number assigned for each volatile compound in the correlation plot of PLS-DA analysis; RT: Mean retention time in minutes for each volatile
compound; LRI Cal: Linear retention indices calculated from the RT of a series of straight-chain alkanes (C6-C20).
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

Suppl. Fig. 3 Relative abundance of main ions in probable mass spectra of the unidentified compound NID2 (RT=21.458 min; LRI
Cal=1180; IDN.104). Relative abundance was calculated in percentage (%) of each peak in relation to abundance of the base peak (m/z=43).
Base peak is the most abundant peak (999). The mass range is 1 to 999. Mass spectra taken of the NIL SC10-2, replica 1, fruit B. IDN:
Identification number assigned for each volatile compound in the correlation plot of PLS-DA analysis; RT: Mean retention time in minutes for
each volatile compound; LRI Cal: Linear retention indices calculated from the RT of a series of straight-chain alkanes (C6-C20).
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

Suppl. Fig. 4. Relative abundance of main ions in probable mass spectra of the unidentified compound NID3 (RT=20.879 min; LRI
Cal=1143; IDN.91). Relative abundance was calculated in percentage (%) of each peak in relation to abundance of the base peak (m/z=57). Base
peak is the most abundant peak (999). The mass range is 1 to 999. Mass spectra taken of the NIL SC7-1, replica 2, fruit B. IDN: Identification
number assigned for each volatile compound in the correlation plot of PLS-DA analysis; RT: Mean retention time in minutes for each volatile
compound; LRI Cal: Linear retention indices calculated from the RT of a series of straight-chain alkanes (C6-C20).
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-
CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

Suppl. Fig. 5. Main discriminant melon aroma volatile compounds (sixty identified
with their respective CAS numbers) of the total of 127 compounds identified in the
experiment according to the Variable importance in the projection (VIP) in the Partial
least squares-discriminant analysis (PLS-DA). The screen for thirteen volatiles listed
were selected based on a change in the slope and above 72% of the maximum value
(2.34) for the nine compounds more discriminant (in black) and above 64% of the
maximum value for the remaining four compounds (in white). Melon fruit aroma
compounds identified in near-isogenic lines (NILs) SC7-1 (○; n=5) and SC10-2 (
;
n=3) of melon and the parental line ‘Piel de Sapo’ (PS,●; n=21).
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-
CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

Suppl. Fig. 6. Main discriminant melon aroma volatile compounds (sixty identified
with CAS numbers) of the total of 127 identified in the experiment according to the
Variable importance measure (VIM) in the Partial least squares-discriminant analysis
(PLS-DA). The screen for twelve volatiles listed were a change in the slope and above
69% of the maximum value (0.0189) for the nine compounds more discriminant (in
black) and 65% of the maximum value for the remaining three volatiles (in white).
Melon fruit aroma compounds identified in near-isogenic lines (NILs) SC7-1 (○; n=5)
and SC10-2 (
; n=3) of melon and the parental line ‘Piel de Sapo’ (PS,●; n=21).
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

Suppl. Fig. 7. Main discriminant melon volatile compounds (sixty identified with CAS numbers) according to Random forest (RF) analysis
of the total of 127 compounds identified in the experiment. A. The screen for volatiles listed in axe RF1 (17) were selected based on a change in
the slope and above 59% of the maximum value (1.94) on the mean decreases in accuracy for the eight volatiles more discriminant (in black) and
35% above of the maximum value for the remaining nine volatiles (in white). B. The screen for volatiles listed in axe RF2 (17) were selected
based on a change in the slope and above 66% of the maximum value (0.65) on the mean decreases in Gini index for the six volatiles more
discriminant (in black) and 24% above of the maximum value for the remaining nine volatiles (in white). Melon fruit aroma compounds
identified in near-isogenic lines (NILs) SC7-1 (○; n=5) and SC10-2 (
; n=3) of melon and the parental line ‘Piel de Sapo’ (PS,●; n=21).

A A B
 CAPÍTULO V
AROMA VOLATILES AS BIOMARKERS OF TEXTURAL DIFFERENCES AT HARVEST IN NON-
CLIMACTERIC NEAR-ISOGENIC LINES OF MELON

Suppl. Fig. 8. Discrimination of the near-isogenic lines (NILs) SC7-1 (○; n=5) and
SC10-2 (
; n=3) of melon and the parental line ‘Piel de Sapo’ (PS,●; n=21) using
Multidimensional scaling (MDS) plots based on Random forest (RF) analysis applied to
the mean relative content in percentage of the probable fruit aromatic volatile
compounds identified. Datasets and the corresponding centroids for the different lines
and 65% confidence ellipses.
 CAPÍTULO VI
DISCUSIÓN GENERAL

CAPÍTULO VI

DISCUSIÓN GENERAL

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
219
 CAPÍTULO VI
DISCUSIÓN GENERAL

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
220
 CAPÍTULO VI
DISCUSIÓN GENERAL

5. DISCUSIÓN GENERAL

La contribución de esta tesis doctoral se resume en el estudio en profundidad de

QTLs de textura del fruto y climaterio, así como su incidencia en los aromas del mismo
y el mapeo de QTLs de aromas. Ello ha sido posible gracias a la existencia de
marcadores moleculares posicionados en mapas genéticos de melón (Díaz et al. 2011;
Esteras et al. 2013; Moreno et al. 2008; Obando-Ulloa et al. 2008, 2010) y a la
existencia de líneas casi-isogénicas desarrolladas en proyectos anteriores (Eduardo et al.
2005) y a resultados previos exitosos al respecto. De hecho, la combinación de ambas
tecnologías se ha utilizado para mapear QTLs asociados a parámetros de calidad del
melón, como contenido de sólidos solubles totales, ácidos orgánicos, azúcares y
carotenos, producción de compuestos volátiles, maduración del fruto y papel del etileno,
precocidad, peso, forma, tamaño, rendimiento y color del fruto, color de la pulpa,
longitud y anchura del ovario, e inclusive se han identificado QTLs para resistencia a
virus, hongos y enfermedades (Cuevas et al. 2009; Obando-Ulloa et al. 2008, 2009a;
Moreno et al. 2008; Monforte et al. 2004; Park et al. 2009)
En general, utilizando marcadores moleculares y desarrollando nuevas líneas
además de las NILs como las RILs (recombinant inbred lines o RILs) y otras estrategias
de mejora genética (Fernández-Trujillo et al. 2011), más de 160 genes han sido
identificados según la lista de genes de melón de 2011 elaborada por investigadores
expertos en la materia (Dogimont et al. 2011). Por tanto el uso la selección asistida por
marcadores moleculares y la información proporcionada por su mapeo supone una
poderosa herramienta para la mejora del cultivo del melón (Harel-Beja et al. 2010;
Obando-Ulloa et al. 2008; Park et al. 2009). En este trabajo se añadirían a esa lista un
total de más de treinta QTLs relacionados con atributos de calidad como mayor firmeza
de la pulpa, producción de aromas volátiles individuales y por grupos y sus
metabolismos asociados, así como de la interrelación entre ambos parámetros y su
relación con el etileno.
Una de las grandes ventajas del estudio con NILs de melón es que esta especie está
dotada de una alta variabilidad molecular, morfológica, fisiológica y composicional en
hojas, plantas y frutos, haciendo de esta un gran reservorio genético para la mejora de la
calidad de los cultivares de melón (Blanca et al. 2012; Díaz et al. 2011; Nuñez-Palenius
et al. 2008; Raghami et al. 2014). Nuestras NILs han permitido investigar diferentes
genotipos de melón y sus diferencias fenotípicas asociadas, principalmente las

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
221
 CAPÍTULO VI
DISCUSIÓN GENERAL

vinculadas al comportamiento fisiológico, para ello NILs no climatéricas y climatéricas

en diferente grado, con diferencias en textura de pulpa o fruto entero (capítulos 3, 4 y
5), y diferencias de producción aromática (capítulos 3 y 5) fueron evaluadas.
El potencial existente en NILs de melón para el mapeo de QTL lo han demostrado
los resultados previos de Obando-Ulloa et al. (2008, 2009a, 2010) y Moreno et al.
(2008), donde se han mapeado QTLs asociados a azúcares y ácidos orgánicos (siendo de
alto interés los localizados en los LGs III, VIII, IX y X), a la producción de volátiles
aromáticos y su relación con el comportamiento fisiológico tanto climatérico (en el LG
III) como no climatérico (en los LGs IV, VI y XI), así como a la firmeza de la pulpa
(ff10.2 en el LG X) e incluso relacionando los cambios de firmeza con el fenotipo de
maduración climatérica (ff3.5 en el LG III). Basándose en los mismos, esta tesis ha
permitido ampliar el número de QTLs mapeados, especialmente los involucrados en dos
de lo parámetros más importantes a la hora de definir la calidad del fruto del melón,
como son aroma y textura. Para ello se han utilizado NILs con interés por la textura del
fruto, pero además por diferentes razones como por ejemplo la pérdida de parte de las
plantas por problemas fitosanitarios en campañas anteriores (Eduardo et al. 2007),
tuvieron menos oportunidades de caracterización en profundidad como SC7-1, SC7-2 o
SC10-2 (Eduardo et al. 2007; Obando et al. 2008, 2010).

1. Comportamiento fisiológico en frutos de melón.

La coexistencia de variedades de melón climatérica y no climatérica hace de este un

fruto idóneo para el estudio de la maduración climatérica. Estudios de genómica han
revelado que una gran parte de los genes relacionados con la maduración
(aproximadamente un 40%) dependen de etileno, siendo este un potenciador que actúa
como intermediario de una cadena de reguladores relacionados entre sí (Page et al.
2008). Basado en trabajos iniciales de esta tesis doctoral, Fernández-Trujillo et al.
(2008) y Moreno et al. (2008) encontraron un QTL (eth3.5) localizado en el LG III de la
NIL de melón SC3-5 y otras similares que inducía un fenotipo de maduración
climatérica con un incremento tanto de la tasa respiratoria como de los niveles de
etileno. En esa misma introgresión fue localizado un gen candidato (CmACS5) a ser
mapeado y relacionado con la ACC sintasa, enzima clave en la biosíntesis de etileno.
Este QTL ha servido como punto de partida importante de la presente tesis y así
contribuir a aumentar el conocimiento relativo al papel del etileno en muchos los

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
222
 CAPÍTULO VI
DISCUSIÓN GENERAL

procesos madurativos en el fruto del melón. Señalar que paralelamente a las diferencias
debidas a la fisiología del fruto, otros factores como el cultivar-dependiente,
medioambiental y el manejo del cultivo son importantes en la caracterización de los
frutos de melón, como han señalado nuestros resultados con diferentes NILs y en
diversas campañas así como trabajos de otros autores (Bernillon et al. 2013; Biais et al.
2011). Por ejemplo, en Dos-Santos et al. 2011, señalamos que en parte las divergencias
encontradas entre frutos de la misma línea recolectados en campañas consecutivas,
estuvieron motivadas por las diferentes condiciones climáticas y de manejo del cultivo
(incluidos problemas fitosanitarios) que acompañaron a cada año. Esto afectó a la
recolección de los frutos y por tanto a la idoneidad de su estado de madurez, con frutos
algo más inmaduros de lo deseable.

2. Textura, fisiología y composición de la pared celular en frutos de melón.

Definir la calidad de productos hortofrutícolas en términos de atributos internos

como la firmeza es bastante complejo, pero posible, y para ello es importante conocer
los mecanismos que relacionan la textura de un fruto con respecto a su estado de
madurez (Tijskens et al. 2009). Según los resultados de estos autores ciertas NILs de
melón de nuestra colección y con distinta dureza del fruto entero sufren un proceso de
pérdida de dureza similar, con una tasa constante de ablandamiento independientemente
de sus diferencias en la introgresión en el LG III (carácter climatérico o no climatérico).
El ablandamiento es un factor determinante en la calidad y vida poscosecha de la fruta
(Nishiyama et al. 2007; Prasanna, et al. 2007) estando parcialmente asociado con
cambios en los polisacáridos de la pared celular (Dos-Santos et al. 2011). El proceso de
ablandamiento solo depende parcialmente del etileno (Flores et al. 2001a), siendo la
dureza inicial del fruto entero un valor crítico para controlar la variabilidad en el punto
final de senescencia (Tijskens et al. 2009).
Según nuestros resultados la NIL no climatérica SC7-2 tuvo una mayor firmeza de
la pulpa que la NIL climatérica SC3-5-1, que tuvo una firmeza similar a PS. Esta mayor
firmeza fue asignada al QTL fh7.2 localizado en el LG VII y asociado a un mayor
contenido de ciertos componentes de la pared (especialmente galactosa y residuo de α-
celulosa) contribuyendo a la mayor consistencia y menor porosidad de la estructura
celular, y limitando la acción enzimática. Una actividad reducida de una
pectinmetilesterasa (CmPME) ha sido previamente mapeada en el LG VII. Otro QTL

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
223
 CAPÍTULO VI
DISCUSIÓN GENERAL

(eth3.5.), en este caso relacionado con la síntesis de etileno, fue asociado a la mayor
degradación del componente péctico de la pared celular en la NIL SC3-5-1, pudiendo
está implicada una expansina (CmEXP2) localizada en el mismo intervalo dicho QTL.
Por ello, para el desarrollo de variedades de melón con mejores características
texturales, es importante controlar en la medida de lo posible la variabilidad de los
valores de dureza en la recolección, contribuyendo con ello a una mayor estabilidad en
la textura de los frutos. Esto será de especial interés en lugares donde factores como la
localización y el clima potencian dicha variabilidad (Tijskens et al. 2009).
Junto con la textura, están en boga las investigaciones relativas al aroma y la
biosíntesis de los compuestos volátiles característicos de los distintos frutos (Dunemann
et al. 2009; Eduardo et al. 2013; Gonda et al. 2010, 2013; Illa et al. 2013; Mathieu et al.
2009; Sánchez et al. 2012, 2013; Vallone et al. 2013; Zorrilla-Fontanesi et al. 2012). En
los últimos tiempos se han realizado progresos importantes en la determinación de las
vías responsables de las biosíntesis de compuestos volátiles en plantas, siendo el análisis
de QTLs uno de los mecanismos que mayores ventajas ha aportado y que más ha
contribuido a aumentar el conocimiento de los mecanismos moleculares que regulan la
producción de compuestos volátiles en las frutas, y que hoy en día siguen siendo en
gran parte desconocidos (Zorrilla-Fontanesi et al. 2012).

3. Mapeo de QTLs y caracterización del perfil de aromas del melón.

Numerosos QTLs asociados a la producción de ciertos compuestos volátiles

importantes han sido identificados en diferentes especies. La mayoría de estos QTLs
fueron mapeados en frutos climatéricos como el tomate (Causse et al. 2008; Klee 2010;
Mathieu et al. 2009; Tadmor et al. 2002; Tieman et al. 2006), melocotón (Illa et al.
2011; Eduardo et al. 2013; Sánchez et al. 2012) o manzana (Dunemann et al. 2009),
aunque también se han identificado QTLs de interés en frutos no climatéricos como la
uva (Battilana et al. 2009; Doligez et al. 2006) o la fresa (Zorrilla-Fontanesi et al. 2012).
En este trabajo se ha ampliado de forma importante el número de QTLs mapeado en
melón no climatérico, continuando trabajos previos con NILs de melón (Obando-Ulloa
et al. 2008, 2010; Fernández-Trujllo et al. 2012, 2013). Hasta un total de treinta dos
QTLs han sido mapeados, entre ellos QTLs asociados a una mayor producción de
cetonas (en el LG X) y compuestos derivados del azufre (en el LG VII) en general, y
otros asociados a compuestos volátiles individuales en particular; como los aldehídos 2-

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
224
 CAPÍTULO VI
DISCUSIÓN GENERAL

metilpropanal, 3-furan-2-carbaldehído, 2,2-metilbutanal, 3-metilsulfanilpropanal y 2,4-

dimetilbenzaldehído (en el LG X) o compuestos derivados de la metionina como
pentano-2,3-diona o S-metil etanotioato (en el LG VII). Sin embargo, la enorme
cantidad de compuestos volátiles existentes junto con las dificultades asociadas a su
análisis y cuantificación (Vallone et al. 2013; Verzera et al. 2011) hacen que el
conocimiento de la relación entre aromas volátiles y el análisis de QTLs sea limitado.
En Cucumis melo, los cultivares climatéricos y no climatéricos han sido comparados
en numerosos estudios, confirmando junto con lo que mostramos aquí (capítulos 3 y 5),
que el carácter distintivo de ésteres (acetato y no acetato) y de compuestos derivados del
azufre en frutos climatéricos en un manera dependiente de la maduración, está bien
definido (Galaz et al. 2013; Gonda et al. 2010, 2013; Guler et al. 2013; Vallone et al.
2013), mientras que la predominancia de aldehídos y cetonas caracteriza a frutos no
climatéricos (Obando-Ulloa et al. 2008, 2009b, 2010). En el capítulo 3 se muestra por
ejemplo que un QTL vinculado a la introgresión en el LG III de la NIL SC3.5 y que
produjo un climaterio leve en dicha NIL fue asociado a la síntesis de ésteres, y
compuestos derivados del azufre.
En Obando-Ulloa et al. (2009b) NILs de melón climatéricas tuvieron un aumento
más evidente que las NILs no climatéricas en ciertos compuestos aromáticos durante la
senescencia. Sin embargo, la reducción del contenido relativo de ésteres y aldehídos en
comparación con los niveles de estos compuestos en la cosecha en dichas NILs no
climatéricas apoyaron la hipótesis de una producción de aromas volátiles etileno-
independiente en melón
Aldehídos, alcoholes y cetonas fueron los compuestos aromáticos predominantes en
PS, NILs y cultivares de referencia no climatéricos siendo aminoácidos y ácidos grasos
los principales precursores de este tipo de compuestos. Por otro lado, ésteres, tanto
acetato como no acetato obtenidos vía aminoácidos (alanina, valina, leucina, isoleucina,
y fenilalanina, principalmente) como compuestos derivados del azufre obtenidos vía
metionina, caracterizaron a las NILs y cultivares de referencia climatéricas. Los
aminoácidos juegan un papel clave en las síntesis de aromas en melón, estando
diferencias en la producción de ésteres relacionadas con diferencias en aminoácidos en
variedades ácidas de melón (Lignou et al. 2013). La metionina juega un papel clave en
la síntesis de compuestos derivados azufrados en frutos de melón (Varlet y Fernández,
2010; Gonda et al. 2010, 2013).

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
225
 CAPÍTULO VI
DISCUSIÓN GENERAL

Nuestros resultados de los capítulos 3 y 5 confirman la fuerte vinculación entre el

comportamiento fisiológico de los frutos y la síntesis de compuestos volátiles
aromáticos, señalando la dependencia al menos parcial del etileno en la síntesis de
ésteres y compuestos derivados de azufre. A su vez, el grado de climaterio (moderado o
leve) también influyó en la producción de aromas en las líneas de melón estudiadas.
Esto indica que a pesar de la similitud en el comportamiento fisiológico, el efecto del
propio cultivar es un factor a tener en cuenta en la generación de los volátiles
responsables del aroma. Los resultados de Fernández-Trujillo et al. (2012, 2013a) en
frutos de melón intactos de la NIL climatérica SC3-5-1 (con introgresión en el LG III y
VI), ratificaron la etileno-dependencia parcial tanto colectiva como individualmente, de
la síntesis de ésteres (principalmente acetato) y de compuestos derivados del azufre.
Por tanto, la presente tesis confirma la hipótesis de partida de una dependencia al
menos parcial del etileno en la síntesis de estos ésteres y compuestos derivados del
azufre, mientras que aldehídos, cetonas y alcoholes son etileno-independientes.

4. Textura, compuestos volátiles aromáticos y su interrelación.

En el capítulo 5 se ha incidido en ampliar el conocimiento relativo a la correlación

existente entre textura y aromas volátiles, así como como su grado de dependencia o
independencia del etileno, un trabajo que ha sido abordado con melones con un gen
antisentido para la ACC oxidasa en el fondo genético de melón ‘Védrantais’ (Flores et
al. 2001ab, 2002). También se ha aportado una revisión acerca de los posibles
mecanismos metabólicos involucrados en la síntesis de los compuestos volátiles
discriminantes e implicados en diferencias texturales del melón debido a los QTLs en
los LGs VII y X. La biosíntesis de aromas junto con los cambios texturales durante la
maduración y la senescencia tienen en ciertas frutas cierta correlación debido al efecto
matriz de la pared celular, donde la red formada por los polisacáridos puede modificar
la pulpa y la viscosidad del zumo (Bezman et al. 2003; Harker y Johnston, 2008;
Savary et al. 2006).
En el capítulo 5 la NIL SC10-2 con menor jugosidad de la pulpa también fue la que
presentó las mayores diferencias de aromas respecto al control, confirmando
parcialmente dicha hipótesis. Alguno de estos volátiles se han revelado como
potenciales biomarcadores de las diferencias texturales existente entre el parental PS y
las NILs no climatéricas SC10-2 y SC7-1, permitiendo además mapear QTLs de aromas

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
226
 CAPÍTULO VI
DISCUSIÓN GENERAL

en melones no climatéricos. Veinte QTLs fueron asociados a la mayor firmeza de la

pulpa debida a la introgresión en el LG X. Mientras un QTL fue asociado al menor
contenido en cetonas, diecinueve QTLs fueron asociados a compuestos volátiles
individuales, y principalmente a un mayor contenido en aldehídos derivados de L-
aminoácidos (fenilalalina, leucina, valina e isoleucina principalmente), como el 2-
metilpropanal, 2-metilpropanal, 2,4-dimetilbenzaldehído y/o furan-2-carbaldehído. La
mayor cohesión de la estructura de pared actúa limitando la disponibilidad de los
aldehídos como sustratos para la actividad de ciertas enzimas (como
pectinmetilesterasas) y su correspondiente conversión en otros compuestos aromáticos.
Por otra parte, doce QTLs mapeados en el LG VII y relacionados con un mayor
contenido en compuestos azufrados y el metabolismos de la metionina estuvieron
asociados a parte a la menor dureza del fruto que produjo la introgresión localizada en
el LG VII. Estos resultados servirán de punto de partida para continuar avanzando en la
identificación de genes candidatos asociados con aroma y textura de melón de enorme
interés para consumidores y mercados.

5. Implicaciones prácticas de la tesis y potenciales aplicaciones.

El conocimiento de los aspectos genéticos involucrados en la mejora de la calidad de

frutos, incluido el melón, ha aumentado notablemente en los últimos años. El estudio
con NILs de melón ha demostrado su potencial como herramienta para conocer
marcadores moleculares asociados a atributos de calidad de este fruto e identificar QTLs
asociados al climaterio y la producción de etileno capaces de satisfacer las demandas
del consumidor (Fernández-Trujillo et al. 2008; Moreno et al. 2008; Obando-Ulloa et al.
2008, 2009ab). Sin embargo, aún queda mucho por dilucidar en lo referente al
conocimiento de la interrelación entre compuestos volátiles y/o textura del fruto del
melón, su relación con el etileno y el mapeo de QTLs
Esta tesis ha permitido la identificación de numerosos QTLs de interés para la
mejora de calidad del melón, centrándose principalmente en aquellos QTLs vinculados
a la síntesis de aromas volátiles, y metabolismos implicados, a la firmeza de la pulpa u
otras propiedades texturales e incluso con ambos. Estos QTLs pueden resultar de alto
interés, contribuyendo a aumentar el conocimiento de los mecanismos moleculares que
regulan los procesos madurativos de los frutos y al desarrollo de nuevas variedades de

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
227
 CAPÍTULO VI
DISCUSIÓN GENERAL

melón con características aromáticas diferentes y/o de mayor firmeza de la pulpa. Esto
le da un potencial interés práctico.
De hecho variedades de melón de alto interés económico y de consumo podrán ser
desarrolladas; como variedades con mayor poder nutricional debido a su alto contenido
en micronutrientes como el ácido ascórbico (Dos-Santos et al. 2009); variedades de
mayor acidez, emergentes en el mercado de Reino Unido, debido a un alto contenido en
ácido cítrico (Dos-Santos et al. 2007; Lignou et al. 2013); variedades con mayor firmeza
de la pulpa (Moreno et al. 2008; Dos-Santos et al. 2011) y/o mayor dureza (Tijskens et
al. 2009) encaminadas a satisfacer tanto los gustos de determinados grupos de
consumidores como la necesidad de los mercados, debido a su mayor idoneidad que
variedades de menor consistencia para el manejo poscosecha y el transporte; variedades
más resistentes al daño por frío y/o de larga vida comercial o de utilidad para productos
listos para el consumo (Fernández-Trujillo et al. 2008, 2013b); variedades con notas
aromáticas características y/o diferentes (Dos-Santos et al. 2013ab; Fernández-Trujillo
et al. 2012, 2013a); e inclusive variedades que combinen varias de estas cualidades y
que pueden tener un enorme potencial para diversificar el mercado y llegar a cubrir la
demanda de una amplia gama de la red consumidores.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
228
 CAPÍTULO VII
CONCLUSIONES GENERALES

CAPÍTULO VII

CONCLUSIONES GENERALES

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
229
 CAPÍTULO VII
CONCLUSIONES GENERALES

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
230
 CAPÍTULO VII
CONCLUSIONES GENERALES

CONCLUSIONES GENERALES

Las conclusiones generales que pueden derivarse de la presente tesis doctoral son las
siguientes:

• El distinto comportamiento fisiológico de las líneas de melón estudiadas ha

resultado en diferencias en la producción de compuestos volátiles aromáticos tanto
cuantitativa como cualitativamente.

° Aldehídos, alcoholes y cetonas ([Link]. butanona o 2-metilpropanal) caracterizaron

a las líneas no climatéricas del tipo ‘Piel de Sapo’ (PS y ‘Nicolás’).

° Ésteres (acetato y no acetato) y compuestos derivados del azufre fueron los

compuestos mayoritarios en las líneas climatéricas NIL 6M1 (SC3-5-1) y
‘Védrantais’.

• El mayor o menor grado de climaterio (leve o moderado) implicó diferencias en

la producción de aromas entre las líneas climatéricas. Ésteres acetato ([Link]. 2-
metilbutilacetato) fueron mayoritarios en la NIL con climaterio leve 6M1 mientras
que ésteres no acetato ([Link]. metil 2-metilbutanoato) lo fueron en el cultivar con
climaterio moderado ‘Védrantais’.

• La síntesis de ésteres (acetato y no acetato) y compuestos derivados del azufre

mostró su dependencia al menos parcial del etileno, mientras que aldehídos, alcoholes
y cetonas fueron etileno-independientes.

• Los QTLs del LG III relacionados con el climaterio leve en la NIL 6M1
estuvieron relacionados con la síntesis de ésteres (aparente cosegregación al menos
parcial).

• NILs de melón con distinta textura, firmeza de la pulpa y comportamiento

fisiológico (SC3-5-1 climatérica y SC7-2 no climatérica) y sus parentales no
climatéricos (PS y SC) mostraron diferencias en la composición de la pared celular y
por tanto dependencia al menos parcial del etileno en el desarrollo de la firmeza de la
pulpa de los frutos.

° Los QTLs del climaterio de la NIL climatérica SC3-5-1 estuvieron asociados a

una mayor degradación de pectinas.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
231
 CAPÍTULO VII
CONCLUSIONES GENERALES

° La NIL SC7-2 con el QTL que produjo mayor firmeza de la pulpa (ff7.2) en el
LG VII presentó un mayor contenido de componentes de la pared celular, como la
galactosa y residuo de α-celulosa.

• NILs de melón no climatéricas (SC7-1 y especialmente SC10-2) con diferente

textura respecto a su parental PS mostraron diferencias en el perfil y la producción de
compuestos volátiles aromáticos.

° Se identificaron un total de treinta y dos QTLs localizados en los LGs VII (doce)
y X (veinte) asociados a la producción de ciertos compuestos volátiles fueron
identificados como potenciales biomarcadores de las diferencias texturales de las
NILs con el parental PS.

° La mayor firmeza de la pulpa en la NIL SC10-2 estuvo asociada principalmente

a una mayor producción de aldehídos ([Link]. 2-metilbutanal), obtenidos vía
degradación de L-aminoácidos (fenilalanina, valina, leucina, isoleucina y
metionina principalmente).

° La menor dureza de los frutos enteros en la NIL SC7-1 estuvo asociada a un

mayor contenido en compuestos derivados del azufre y compuestos obtenidos vía
metabolismo de la metionina.

• En resumen el estudio de NILs de melón ha permitido la localización,

identificación y caracterización más detallada del efecto de QTLs en los grupos de
LG III, III+VI, VII y X asociados a parámetros de calidad del melón, especialmente
aquellos relacionados con climaterio, textura y producción de ciertos compuestos
volátiles, así como el uso de parte de estos volátiles como potenciales biomarcadores
de parámetros texturales como la firmeza de la pulpa y la dureza del fruto entero de
melón.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
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Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
260
 SOPORTE FINANCIERO

SOPORTE FINANCIERO PARA LA INVESTIGACIÓN DE LA QUE DERIVA

ESTA TESIS.

El soporte financiero principal se basa en proyectos financiados con fondos

nacionales y regionales cuyo investigador principal es el profesor Juan Pablo Fernández
Trujillo en la Universidad Politécnica de Cartagena. En resumen son los siguientes:

Evaluación de atributos de calidad importantes desde el punto de vista

tecnológico y para el consumidor en líneas isogénicas de melón.
Duración: 1 Diciembre 2003 - 30 Noviembre 2007.
Entidad financiadora: Ministerio de Educación y Ciencia (Ministerio de Ciencia y
Tecnología (MEC, MCYT) AGL2003-09175-C02-02. Proyecto coordinado.

Identificación de QTLs implicados en parámetros de calidad pre y poscosecha

de fruto usando un conjunto de líneas de introgresión de melón.
Duración: 1 Enero 2005 - 31 Diciembre 2006.
Entidad financiadora: Fundación Séneca de la Región de Murcia. Centro de
Coordinación de la Investigación. 00620/PI/04.

Identificación de poligenes implicados en el perfil aromático y características
relacionadas con preferencias de consumo en melón usando una colección de
líneas casi isogénicas.
Duración: 6 Enero 2007 - 5 Enero 2011. Proyecto BioCARM.
Entidad financiadora: Consejería de Educación y Cultura de la CARM. Proyecto
BIO-AGR06/02-0011.

Caracterización detallada de QTLs responsables del carácter climatérico y sus
efectos sobre la calidad global del fruto de melón.
Duración: 1 Enero 2007 - 31 Diciembre 2009
Entidad: Fundación Séneca de la Región de Murcia. Agencia Regional de
Investigación de la C.A. de Murcia. 05676/PI/07.

Análisis del efecto de QTLs que inducen cambios en la textura de la pulpa y la
calidad global del fruto de melón.
Duración: 1 Enero 2010 - 31 Diciembre 2014.
Entidad financiadora: Fundación Séneca de la Región de Murcia. Centro de
Coordinación de la Investigación. 11784/PI/09.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
261
 SOPORTE FINANCIERO

Calidad aromática del melón y su relación con precursores y el

comportamiento fisiológico del fruto.
Duración: 1 Enero 2011 - 31 Diciembre 2013.
Entidad financiadora: Ministerio de Ciencia e Innovación (MICINN). AGL2010-
20858.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
262
 ANEXO

Anexo
Capítulo III. Diferencias aromáticas entre melones
climatéricos de dos tipos y no climatéricos del tipo
‘Piel de Sapo’.

Caracterización de la Calidad del Fruto Asociada al Carácter Climatérico en Líneas Casi-Isogénicas de Melón
263
 Diferencias aromáticas entre melones climatéricos de dos tipos y
melones no climatéricos del tipo “Piel de Sapo”

Noelia Dos-Santos1, María del Carmen Bueso2, Antonio José Monforte3 y Juan Pablo Fernández-Trujillo1,*
Equipo Multidisciplinar de Investigación en Calidad Postcosecha Orientada a
Mejora Genética y Biotecnología
1
Universidad Politécnica de Cartagena (UPCT). Dpto. de Ingeniería de Alimentos y del Equipamiento Agrícola.
ETSIA e Instituto de Biotecnología Vegetal. Paseo Alfonso XIII 48, 30203 Cartagena (Murcia)
*Teléfono: 968 325436. E-mail: [Link]@[Link]
2
UPCT. Dpto. de Matemática Aplicada y Estadística. ETSII. Doctor Fleming s/n, 30202 Cartagena (Murcia)
3
Instituto de Biología Molecular y Celular de Plantas (IBMCP). CSIC/UPV
Ciudad Politécnica de la Innovación - Edificio 8E Ingeniero Fausto Elio s/n, 46022 Valencia

Resumen. En diferentes cultivares de melón aromáticos y climatéricos o no climatéricos se han

detectado diferencias en producción de etileno durante la maduración postcosecha. Los volátiles del
parental “Piel de Sapo” (PS) y de una variedad comercial (“Nicolás”) sirvieron de referencia como
no climatéricos mientras que la línea casi isogénica 6M1 y la variedad “Védrantais” fueron
considerados como los aromáticos y climatéricos. El carácter climatérico se caracterizó por el
contenido en ésteres (acéticos y no acéticos) y compuestos derivados del azufre, con mayor contenido
en ésteres no acéticos (metil 2-metilbutanoato) en “Védrantais”. Los frutos de melones no
climatéricos se diferenciaron por un alto contenido en aldehídos como el 2-metilpropanal (mayor
contenido en “Nicolás”), terpenos, alcoholes y cetonas, como la 2-butanona (mayor contenido en PS).
Los resultados analizados mostraron que existe una influencia genética de la variedad en biosíntesis y
rutas metabólicas de aromas volátiles, especialmente en ésteres no acetato en variedades climatéricas
con muy alta producción de etileno.

1. Introducción climatéricos verificamos que hay variabilidad en

aromas [7]. Igualmente existe interés por verificar si
existen algunos aromas diferentes entre tipos no
El comportamiento fisiológico de los frutos de melón
climatéricos “Piel de Sapo” con fines de mejora
según su carácter climatérico está determinado
genética.
genéticamente, aunque el control genético de la
transición climatérica todavía no está completamente
determinado [1]. La coexistencia de variedades de melón con
maduración climatérica y no climatérica dentro de la
El aroma de la fruta es uno de los parámetros que especie, hacen que sea un sistema adecuado para
estudiar el control genético de la maduración
más influyen en las preferencias del consumidor y es
climatérica [6]. En [7] solamente utilizamos un perfil
el resultado de una compleja mezcla con una amplia
de 29 aromas volátiles comunes para diferenciar entre
gama de compuestos con diferente grado de
volatilidad. Una importante contribución al aroma NILs climatéricas y no climatéricas, “Védrantais” y
característico de la fruta y a la percepción de su “Nicolás”, además de otras líneas. En el presente
calidad general depende de los ésteres y en cierta trabajo evaluamos todos los aromas detectados con
microextracción en fase sólida (SPME) para verificar
medida de los compuestos azufrados [2, 3, 4]. En
mayores diferencias y rutas metabólicas asociadas.
melones climatéricos, el aroma debido a los volátiles
es un factor esencial de calidad vinculado al proceso 2. Material y Métodos
de maduración y está controlado genéticamente [5].
Los frutos procedieron de una colección de líneas
Existe un interés creciente por conocer marcadores
casi-isogénicas ó NILs de melón ampliamente
moleculares asociados a atributos de calidad del
descrita [6, 9]. El material vegetal consistió en dos
melón, como el aroma, e identificar Quantitative
tipos no climatéricos: un parental tipo español “Piel
Trait Loci (QTL) asociados al climaterio y la
de Sapo” (C. melo var. inodorus Naud cv. T111) y un
producción de etileno que están directamente
melón híbrido var. Nicolás (Syngenta Seeds).
relacionados con la vida comercial del fruto [6, 7]. En
Respecto a los tipos climatéricos fueron: C. melo var.
trabajos previos con líneas casi isogénicas (NILs) de
cantalupensis Naud, cv. Védrantais y la línea casi
melón [7, 8] hemos determinado que la presencia de
isogénica 6M1, con dos introgresiones (grupos de
un QTL en el grupo de ligamiento III produce frutos
ligamiento III y VI) del cultivar coreano Shongwan
aromáticos y con pulpa de un aroma retronasal
Charmi PI 161375 (SC) en el fondo genético del tipo
diferenciado del tipo “Piel de Sapo” (PS) no
PS [6]. Los frutos se cultivaron en Torre Pacheco
climatérico. Sin embargo, dentro de los melones
(Murcia) según manejo de cultivo, prácticas de
1
cosecha e índices de recolección previamente principalmente, mientras 8 compuestos, sobre todo
descritos [10, 11]. Se recolectaron frutos de n=7 ésteres no acetato (metil 2-metilbutanoato, butil
réplicas (3 plantas/réplica), salvo n=21 para PS propanoato y 2-metilpropil propanoato),
siguiendo un diseño experimental previamente discriminaron “Vedrantais” (climaterio moderado),
descrito [9]. de 6M1 (datos no mostrados).
Ésteres de cadena lineal, junto con ésteres de cadena
La tasa respiratoria y la producción de etileno se
ramificada derivados de la isoleucina fueron volátiles
determinaron tras la cosecha en al menos cinco frutos
mayoritarios en las líneas climatéricas de acuerdo
individuales de diferentes réplicas según [11]. Los
con [3]. Estos ésteres, junto a otros, son
volátiles de zumo de melón se analizaron por
cuantitativamente los compuestos más importantes y
cromatografía de gases-espectrometría de masas
contribuyen de forma importante al aroma único de
(GC-MS) por SPME según metodología adaptada de
frutas maduras de melón climatérico [14]. El carácter
[7]. Se aplicaron diferentes técnicas estadísticas de
climatérico estuvo fuertemente asociado a la
análisis multivariante (PCA, RF o PLS-DA, entre
producción de ésteres y compuestos derivados
otras), siguiendo la metodología descrita en [7] y
azufrados, lo que revela su dependencia al menos
[12], que permitieron determinar el poder
parcial de la acción del etileno. La catálisis de la
discriminante de los aromas volátiles entre las cuatro
enzima alcohol acetil transferasa (a partir de
líneas en estudio. Para ello, se utilizó el entorno de
alcoholes procedentes de aldehídos) y la producción
programación R v2.11.0.
de derivados azufrados a partir de metionina
3. Resultados y Discusión explicarían en parte este comportamiento [4, 15]. Las
dos líneas no climatéricas tuvieron un
comportamiento similar en contenido en volátiles,
Según los niveles de producción de etileno y de la
con alto contenido en alcoholes (ej. 3,5-
tasa respiratoria, datos no mostrados o publicados en
dimetiylciclohexan-1-ol). El control PS destacó por
[6, 11], las líneas se clasificaron en: No climatérica
su mayor contenido en cetonas (ej. 2-butanona,
(PS y “Nicolás”), climatérica leve (6M1) y
procedente de butano-2,3-diona y acetona; [16]) y el
climatérica moderada (“Vedrantais”).
2-metilpropanal discriminó parcialmente a “Nicolás”
En el análisis discriminante de mínimos cuadrados de PS (datos no mostrados). Este último es el
parciales (PLS-DA) para grupos de compuestos precursor de los 2-metilpropil esteres procedentes de
volátiles, la primera componente (60% de varianza la valina [17].
total explicada) permitió discriminar las líneas
climatéricas (por su contenido en ésteres acéticos y
derivados azufrados) de las no climatéricas (mayor
contenido en cetona, alcanos, alcoholes, terpenos y
otros). La segunda componente extraída en PLS-DA
(7.1% de varianza total) sirvió para discriminar
dentro de las líneas climatéricas y no climatéricas,
con más poder discriminatorio dentro de las
climatéricas, con 6M1 más asociada a derivados
azufrados y “Védrantais” a ésteres no acetato.
“Nicolás” presentó más niveles de aldehídos que PS
Figura 1. Centroides de la NIL 6M1 (), los cultivares “Nicolás”
(más asociado a alcoholes) (Fig. 1). La mayoría de () y “Vedrantais” (*) y el control PS () en función de las dos
compuestos identificados en melón han sido primeras componentes del análisis discriminante de mínimos
alcoholes, aldehídos, cetonas, ésteres, y compuestos cuadrados parciales (PLS-DA) para grupos de compuestos
azufrados, que dependen de la variedad y del volátiles (izq.). Correlaciones entre los grupos de compuestos y las
dos primeras componentes. Abrev.: Alcoholes (ALC), aldehídos
comportamiento fisiológico. Los frutos climatéricos (ALD), cetonas (KET), terpenos (TER), ésteres acéticos (EAC),
de melón de mayor intensidad aromática suelen ésteres no acéticos (ENA), compuestos derivados del azufre
presentar menor vida comercial que los no (CDA), ácidos (ACD), alcanos (AHA) y otros (OTH) (dcha.).
climatéricos. El contenido de compuestos volátiles
responsables del “aroma de melón” es variado y 4. Conclusiones
cultivar-dependiente, incluso teniendo similar
comportamiento fisiológico [2, 5, 7, 13]. Los ésteres Parece existir alguna diferencia genética asociada a
han sido establecidos como típicos compuestos un mayor grado de climaterio y de ésteres no acetato
volátiles en NILs climatéricas de melón mientras que en “Védrantais” respecto a la línea casi isogénica
los aldehídos son característicos de NILs no 6M1. Aldehídos y cetonas estuvieron asociados al
climatéricas [7]. No es descartable una interacción comportamiento no climatérico y discriminaron
entre genotipo x ambiente variable con las campañas. ligeramente entre las líneas PS y “Nicolás”, lo que
soporta también una componente genética que podría
Respecto a aromas individuales, las NILs integrarse a la mejora del aroma de los melones tipo
climatéricas mostraron diferencias entre sí. La NIL “Piel de Sapo”. La introgresión que produjo
6M1 (climaterio leve) destacó por su contenido en 9 climaterio leve en 6M1 está muy asociada a QTL
compuestos, ésteres acetato (2-feniletil acetato, 3- relacionados con la biosíntesis de ésteres.
acetiloypropil acetato y 2-metilbutilacetato)

2
Agradecimientos [8] Fernández-Trujillo, J.P., Bueso, M.C., Hernández,
M.S. (2012). “Quality oriented breeding using
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Proyec. finan.: AGL2010-20858 y AGL2003-09175-
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11784//PI/09 (Fund. Séneca, Región de Murcia). Acta Hort. 934: 975-984.
NDS agradece la beca predoctoral FPU-MEC [9] Obando, J., Fernández-Trujillo, J.P., Martínez,
AP2006-01565. Agradecemos a Semillas Fitó las J.A., Alarcón, A.L., Eduardo, I., Arús, P.,
semillas de PS y al IRTA las de NILs, a JO, JAM, Monforte, A.J. (2008). “Identification of
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