"Benemérita Universidad Autónoma

de Puebla"
Licenciatura en biotecnología
Microbiología Ambiental
Trabajo: Medios de cultivo
Maestra: Yuridia Santoyo Paez
Angeles Torres Valdetano
Generación 2017.5
15 de septiembre de 2020 Puebla, Pue.
 Medio LB (Luria Bertani)
Triptona de caseína Es un digerido de la proteína caseína de la leche
esta proporciona nitrógeno, vitaminas, minerales y
Componentes aminoácidos esenciales para el crecimiento además estos son
solubles en agua y no coagulables por efecto del calor
Agar Agente solidificante en medios de cultivo
es un poligalactósido que se obtiene a partir de algas rojas
marinas.
Extracto de levadura Se obtiene a partir de células de levadura autolisadas y es rico
en vitaminas del grupo B, aminoácidos y otros factores de
crecimiento.
NaCl Proporcionan los iones de sodio para el transporte y el
equilibrio osmótico
Agua destilada Facilita la conductividad, el ajuste de pH, no contiene
contaminantes o alguna sustancia patógena que pueda alterar
el crecimiento de las bacterias.
Características Temperatura Almacenamiento
Temp. Min.:2 º C
Temp. Max.:25 ° C
pH Se ajusta el pH de LB a 7,0 ± 0,2
Estado Puede ser sólido o líquido, dependiendo del uso o no del agar
Formula Fórmula en g/L
 Agar bacteriológico …………15
 Cloruro sódico……………… 10
 Triptona……………………… 10
 Extracto de levadura………. 5
 Agua…………………. (aforar a 1L)
Control de calidad  Solubilidad: Sin restos
 Apariencia: Polvo fino
 Color del medio deshidratado: Sin restos Polvo fino Beige
 Color del medio preparado: Ámbar, ligeramente
opalescente
 Final pH 7,0±0,2 (25ºC)
Función Medio de enriquecimiento, su uso es recomendado para procedimientos cualitativos para
el cultivo y mantenimiento de Escherichia Coli, con fines de clonación, propagación de
plásmidos y expresión de proteínas en procedimientos microbiológicos moleculares Estas
cepas se derivan generalmente de E. coli K12 y no crecerá en medios nutricionalmente
deficientes porque no pueden producir vitamina B
Microorganismo Crecen Especialmente para Escherichia coli , pero pueden crecer
s casi todo tipo de bacterias, ya sean Gram positivas o
negativas
No crecen Levaduras y algunos hongos
DATOS Existen diferentes tipos de medio LB, el típico no lleva agar, y el que si lleva se le conoce
INTERANSTES como Agar LB. El Agar Luria (Agar LB de Miller) tiene un nivel de cloruro de sodio distinto
al de otros medios como el Agar LB (Lennox) o el Agar Luria (Modificación de Miller). Esto
permite seleccionar la concentración de sal óptima del medio para una cepa específicos
Tabla 1: Información y características del medio LB, (elaboración propia)
 Medio AGAR SANGRE
Extracto de carne El extracto de carne proporciona al medio fuente de carbohidratos, de
nitrógeno y vitaminas.
Componentes Agar Agente solidificante en medios de cultivo
es un poligalactósido que se obtiene a partir de algas rojas marinas.
Peptona de carne Las peptonas de carne son proteínas de origen animal que se han
hidrolizado o degradado en aminoácidos y péptidos para proporcionar
nitrógeno a los microorganismos. Son muy ricas en péptidos y
aminoácidos y, en ausencia de hidratos de carbono en el medio de
cultivo complejo, cumplen la función de fuente de carbono y energía
NaCl Proporciona los iones de sodio para el transporte y el equilibrio
osmótico
Sangre proporciona factores de crecimiento extra para microorganismo
fastidiosos y es la base para determinar las reacciones
hemolíticas. Los patrones hemolíticos pueden variar con el tipo de
sangre o la base de medio utilizado.
Agua destilada Facilita la conductividad, el ajuste de pH, no contiene contaminantes o
alguna sustancia patógena que pueda alterar el crecimiento de las
bacterias.
Características Temperatura Almacenamiento
Temp. Min.:2 º C
Temp. Max.:25 ° C
pH Se ajusta el pH de 7,3±0,2
Estado Sólido
Formula Fórmula en g/L
 Agar bacteriológico…………… 15
 Peptona de carne……………… 10
 Cloruro sódico…………………… 5
 Extracto de carne……………… 10
 Agua………………………aforar a 1L
Control de  Solubilidad: Sin restos
calidad  Apariencia: Polvo fino
 Color del medio deshidratado: Tostado
 Color del medio preparado: Rojo cereza opalescente
 Final pH 7,3±0,2 (25ºC)
Función Es diferencial para detectar actividad hemolítica (lisis y digestión de eritrocitos) según si las
bacterias pueden hacer β-hemolisis (lisis completa y se ve un halo incoloro alrededor de la
colonia) o α-hemolisis (hemolisis parcial y aparece un halo verdoso alrededor de la colonia).
Microorganismos Crecen Entre los microorganismos capaces de crecer en el medio agar sangre
se tienen: bacterias aerobias estrictas, facultativas, microaerófilos,
anaerobias, Gram positivas o Gram negativas, bacterias de crecimiento
rápido o crecimiento lento
No crecen No permite el crecimiento de Neisseria y Haemophilus.
DATOS La sangre que se añade a los medios de cultivo suele ser de carnero, aunque
INTERANSTES también puede utilizarse de caballo o de conejo. Todas permiten buenas reacciones
hemolíticas. También puede usarse sangre humana del banco de sangre, negativa para
ciertos virus como VIH o hepatitis B. Esta última es menos recomendada por la presencia de
 anticoagulantes, anticuerpos y otros factores que pueden afectar al crecimiento microbiano
y a la actividad hemolítica.
Tabla 2: Información y características del medio Agar Sangre,(elaboración propia)

Medio LGI
Azul de Se utiliza para detectar el pH. A pesar de su nombre, el azul de bromotimol puede adoptar diferentes
bromotimol colores. Puede ser de color amarillo o fucsia (sobre una solución ácida) y verde o azul (en una solución
Componentes básica).
Agar Agente solidificante en medios de cultivo
es un poligalactósido que se obtiene a partir de algas rojas marinas.
Jugo de caña de Aporta sacarosa o sucrosa como fuente de carbono, tambien es rico en calcio, cromo, hierro, cobalto,
azúcar diluido cobre, fósforo magnesio, manganeso, potasio y zinc. Asimismo, contiene vitaminas A, C, B1, B2, B3, B5,
B6 y una gran concentración de fitonutrientes, antioxidantes, proteínas y fibra soluble
Extracto de Se obtiene a partir de células de levadura autolisadas y es rico en vitaminas del grupo B, aminoácidos y
levadura otros factores de crecimiento.
K2HPO4 y Un microorganismo puede alterar el pH del medio de cultivo como resultado de las sustancias
KH2PO4 producidas por el propio microorganismo. Estos cambios pueden llegar a ser tan grandes que inhiban el
crecimiento del microorganismo. Sin embargo, se pueden prevenir controlando el pH mediante
sistemas tampón. Uno de los más utilizados en microbiología es la combinación de KH2PO4 y K2HPO4

CaCl2 Mineral utilizado para proporcional el micronutriente calcio al medio de cultivo

FeCl3 Mineral utilizado para proporcionar el micronutriente hierro al medio de cultivo
Agua destilada Facilita la conductividad, el ajuste de pH, no contiene contaminantes o alguna sustancia patógena que
pueda alterar el crecimiento de las bacterias.
Características Temperatura 30.0°C
pH Se ajusta el pH 6.0.
Estado Para medio semisólido, añadir 0,5 g de agar; para medio sólido, agregue 15 g de agar
Formula  K2HPO4 ..................................... 0.2 g
 KH2PO4 ..................................... 0.6 g
 CaCl2. 2H2O ............................... 0.02 g
 MgSO4. 7H2O ............................... 0.2 g
 Na2MoO4. 2H2O...........................2.0 mg
 FeCl3 ...................................... ……0.01 g
 Azul de bromotimol…………….......... 5.0 ml
 Sacarosa.................................... 5.0 g
 Agar....................................... 1.75 g
 Agua destilada…………………aforar a 1,0 L
Control de calidad  Apariencia: Polvo blanco lechoso
 Color y claridad: Líquido viscoso transparente amarillo
 Condiciones de almacenaje: Sellado, protegido de la luz y almacenado a 2-30 ° C.
Función Utilizado para aislar e identificar bacterias fijadoras de N2 ya que hay muy poca información disponible relacionada con la
estrategia de aislamiento e identificación de diazótrofos, los pioneros fueron del equipo de Johanna Döbereiner, aunque
también hay otros autores contemporáneos y más recientes que han aplicado el medio semisólido para estudiar la presencia
de bacterias fijadoras de N2 en sus sistemas agrícolas y condiciones climáticas.
Microorganismos Crecen Bacterias fijadoras de nitrógeno como Gluconacetobacter diazotrophicus
No crecen Bacterias que no son fijadoras de nitrógeno
DATOS Existe una nueva versión modificada del medio LGI. El medio LGI-P se diferencia del medio LGI original en que contiene 0,02 g
INTERANSTES de Na 2 MoO 4 · 2H 2 O litro -1 , 0,1 mg de biotina litro -1 , 0,2 mg de piridaxol HCl litro -1 y 5 ml de jugo de caña de azúcar
 (prensado de tallo de caña de azúcar fresca) litro -1, y el pH final se ajustó a 5,5 utilizando ácido acético al 1%.
Tabla 1: Información y características del medio LGI,(elaboración propia)

Medio PDA (Papa Agar Dextrosa)

Infusión de papa Es utilizada como fuente de almidones que son la base para
el crecimiento de hongos y levaduras
Componentes Agar Agente solidificante en medios de cultivo es un
poligalactósido que se obtiene a partir de algas rojas marinas
Glucosa o Proporciona la fuente de energía perfecta para que el
dextrosa crecimiento
Inhibidores Antibióticos Los antibióticos eliminan o inhiben el
crecimiento de las bacterias sensibles.
Ácidos Se considera que la mayoría de las
bacterias crecen a un pH más bien
neutro, entre 6 y 8, por tanto, con un
pH bajo disminuye el crecimiento de
bacterias
Agua destilada Facilita la conductividad, el ajuste de pH, no contiene
contaminantes o alguna sustancia patógena que pueda
alterar el crecimiento de las bacterias.
Características Temperatura Almacenamiento
Temp. Min.:2 º C
Temp. Max.:25 ° C
pH Se ajusta el pH 5.6 ± 0.2
Estado Sólido
Formula Formula en g/L
 Infusión de papa………… 4
 Dextrosa…………………20
 Agar…………………………15
 Agua…………………aforar a 1L
Control de  Solubilidad: Sin restos
calidad  Apariencia: Polvo fino
 Color del medio deshidratado: beige
 Color del medio preparado: Ámbar
 Final pH 5.6 ± 0.2 (25ºC)
Función Para cultivo y recuento de hongos y levaduras en productos lácteos, bebidas
embotelladas y alimentos. Como medio preparado para la cuenta de hongos y
levaduras en líquidos.
El agar de patata dextrosa puede ser suplementado con antibióticos o ácidos para
inhibir el crecimiento bacteriano. Este medio es recomendado para realizar el
recuento colonial. También puede ser utilizado para promover el crecimiento de
hongos y levaduras de importancia clínica. La base del medio es altamente
nutritiva y permite la esporulación y la producción de pigmentos en algunos
dermatofitos
Microorganismos Crecen HONGOS Y LEVADURAS
No crecen BACTERIAS
DATOS Actualmente se esta estudiando a los hongos y microorganismos micorrícicos
INTERANSTES (mediante los medios más utilizados PDA, BAF y MNM), ya que al ser
 introducidos como inóculos al suelo estas pueden aumentar los nutrientes y el
crecimiento vegetal y asi evitar la erosión.
Tabla 1: Información y características del medio PDA,(elaboración propia)

AGAR MULLER-HILTON
Peptona acida Es un hidrolizado ácido de la caseína. El agente en una hidrólisis ácida
de caseína completa o total es comúnmente ácido clorhídrico. Resulta comúnmente en
Componentes una hidrólisis total de proteína a aminoácidos. El proceso destruye
glutamina, asparaginas, triptófano, cisteína, serina, treonina, lisina, ácido
aspártico, aminoácidos de prolina racémicos y destruye completamente las
vitaminas.
Agar Agente solidificante en medios de cultivo es un poligalactósido que se
obtiene a partir de algas rojas marinas
Almidón Actúa como coloide de protección contra las sustancias tóxicas que puedan
estar presentes en el medio. La hidrólisis del almidón durante el
procesamiento en autoclave proporciona una pequeña cantidad de dextrosa,
que constituye una fuente de energía.
Infusión de La infusión de carne y la peptona de caseína ácida proporcionan nitrógeno,
carne vitaminas, minerales.
Agua Facilita la conductividad, el ajuste de pH, no contiene contaminantes o
destilada alguna sustancia patógena que pueda alterar el crecimiento de las bacterias.
Características Temperatura 10-35°C
pH pH final a 25ºC, 7,3 ±0,1
Estado Sólido
Formula Formula en g/L
 Peptona ácida de caseína ................................ 17,5
 Sólidos de infusión de carne............................ 3,0
 Almidón........................................................... 1,5
 Agar...............................................................15,0
 Agua …………………………………………aforar a 1 L
Control de  Solubilidad: Sin restos
calidad  Apariencia: Polvo fino
 Color del medio deshidratado: Beige
 Color del medio preparado: Ámbar claro
 Final pH 7,3 ±0,1 (25ºC)
Función Medio de cultivo nutritivo no selectivo que promueve el desarrollo [Link] su
composición es utilizado en la realización del antibiograma en medio sólido, debido a que
presenta buena reproducibilidad en las pruebas de sensibilidad. Si se le agrega sangre permite
realizar prueba de sensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos.
Microorganismos Crecen Utilizado para la prueba de sensibilidad de bacterias aerobias de rápido
crecimiento o anaerobias facultativas, como estafilococos, enterococos,
miembros de la especie Enterobacteriaceae y bacilos Gran negativos
aerobios como Pseudomonas spp. También es usado para aislar y mantener
especies de Neisseria y Moraxella
No crecen Bacterias anaerobias estrictas y bacilos Gram positivos anaerobios
DATOS Se ha realizado la optimización del agar Mueller Hinton ya que un problema actual son que
INTERANSTES requisitos de un microorganismo varían debido a sus diferentes respuestas ante los
antimicrobianos, su variación genética y las diferencias en los requerimientos nutricionales.
Tabla 5: Información y características del medio Müller-Hilton,(elaboración propia)

Bibliografía

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Candalab (2019) Base Agar Sangre consulado el 12 de septiembre de 20202 en
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