INFORME: IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE LA
CONCENTRACIÓN DE UNA DISOLUCIÓN DE CUSO4.5H2O, POR
ESPECTROFOTOMETRÍA DE UV-VIS, MEDIANTE REGRESIÓN
LINEAL SIMPLE (RLS), APLICANDO EL MÉTODO DE ESTÁNDAR
EXTERNO.
Integrantes
Jose Perez Navarro.
Carlos canencia
María codina
Yeisson Cera
Grupo: 3
Asignatura
Análisis Instrumental
Profesor.
Jayson fals
UNIVERSIDAD DEL ATLANTICO
FACULTAD DE QUIMICA Y FARMACIA
2020
Practica 2: Identificación y cuantificación de la concentración de una
disolución de CuSO4.5H2O, por espectrofotometría de UV-Vis,
mediante regresión lineal simple (RLS), aplicando el método de
estándar externo.
Jose Perez, María codina, Carlos Canencia, Yeisson cera
1
, Facultad de Ciencias Básicas, Universidad del atlántico, Km 7 Via Puerto,
Barranquilla, Atlántico.
RESUMEN
En esta practica se determino la concentración de una muestra problema mediante el
método de estándar externo. Utilizando un simulador de software para registrar : la
longitud de onda máximo de la disolución CuSO4 5H2O, la absorbancia y la
concentración de la mencionada disolución. Además se prepararon
disoluciones con diferentes concentraciones, en donde se tuvo en cuenta los
conceptos básicos del capítulo de disoluciones para prepararlas correctamente. Por
medio de este laboratorio se dio a conocer el equipo que se encuentra disponible en la
universidad para realizar este tipo de prácticas, el cual es el espectrofotómetro UV- VIS
UV-1900 de la marca shimadzu, el cual además de ser muy usado en el área de la
investigación, también es uno de los elementos más importantes de la industria
farmacéutica.
PALABRAS CLAVES
Estándar externo, disolución, espectrofotometría Ultra Violeta – Visible, Regresión
lineal simple
2
1. INTRODUCTION
Espectrofotometría Ultravioleta – Visible.
“La espectrofotometría Ultravioleta Visible fue uno de los primeros métodos
físicos analíticos que se aplicó en el análisis cuantitativo y de la determinación de
estructuras. La espectrofotometría de absorción UV-VIS se encarga de medir la
disminución de un haz de luz después de pasar a través de una muestra; esta técnica es
comúnmente usada para la detección de grupos funcionales, detección de impurezas,
análisis cualitativo y cuantitativo de analitos, medicamentos con grupos cromofóros
entre otras aplicaciones.
“La luz visible representa apenas una pequeña porción del espectro electromagnético”1
(radiación electromagnética que emite o absorbe una sustancia), que abarca desde
longitudes de onda muy cortas (rayos gamma y rayos X) hasta longitudes de onda muy
largas (microondas y ondas de radio).
Imagen 1. Espectro electromagnético. En la imagen se puede observar que entre 400
nm y 780 nm de longitud de onda, la espectrofotometría UV – VIS es visible.”2
Cuando un haz de luz blanca pasa a través de una sustancia coloreada a la longitud de
onda máxima que absorbe la mencionada sustancia, una porción de las longitudes de
este rango es absorbida por la sustancia, mientras que el restante conjunto de longitudes
de onda es reflejado, este fenómeno es el que origina el color de los cuerpos, y en el
que se basa la espectrofotometría de absorción UV-VIS.
El instrumento utilizado para realizar esta técnica es el Espectrofotómetro Ultra Violeta
Visible, el cual permite trabajar con una gran cantidad de longitudes de onda. El equipo
disponible en la Universidad del Atlántico es el UV-VIS UV-1900 de la marca
shimadzu, este equipo permite o hace un barrido espectral y proporciona un gráfico de
absorción de la sustancia que se está analizando.
Entre los componentes de un espectrofotómetro se puede citar a la fuente de luz, que es
la encargada de iluminar la muestra; Monocromador: que aísla las radiaciones
de longitud de onda deseada que inciden o se reflejan desde el conjunto y se usa
para obtener luz monocromática; Compartimento de Muestra: o lugar de la interacción
con la materia la cual debe producirse donde no haya absorción ni dispersión de
las longitudes de onda y es en esta parte del proceso donde se aplica la ley de Lambert-
Beer en su máxima expresión, Detector: que es el encargado de captar la radiación y, a
su vez, dejarla en evidencia para su estudio posterior. Y las Celdas: que son los
recipientes donde se depositan las muestras líquidas a analizar. Cabe resaltar que el
material del cual están hechas las celdas varía de acuerdo con la región que se
esté trabajando pueden ser de vidrio o plástico si se trabaja en la región visible, de
cuarzo si se trabaja en la ultravioleta
“Hay casos en que la sustancia a analizar no absorbe por si sola en el rango de
la longitud de onda del UV – VIS por lo que es necesario de que esta sustancia
se encuentre en un complejo. Por ejemplo en ion fosfato no absorbe en el UV – VIS,
pero al formar un complejo con el molibdato y el vanadato (fosfomolibdovanadato) que
tiene una gran intensidad de absorción a 430 nm, y se emplea para el análisis de fosforo
en el agua.
Tabla 1. Algunas sustancias que deben formar complejos.
Sustancia Como absorbe en el UV Donde se encuentra.
P,B Mediante la formación de Aguas, suelos, fertilizantes.
complejos.
Fe, Co, Mo Complejos con: SCN- Aguas.
Ti, Va, Cr Complejo con: H2O2. Suelos.
Bi, Pd, Te Complejos con: I-. Contaminantes.
Cu, Pb, Ni, Fe Mediante la formación de Contaminantes.
complejos.
Nitritos, Nitratos Directamente o con Suelos.
complejos.
La anterior tabla muestra algunos de las sustancias que necesitan formar complejo y las
sustancias con las que formaría el complejo en el UV – VIS.”3
Método de estándar externo.
Para el método de estándar externo se hace uso de una curva de calibrado, la cual como
ya se sabe representa la respuesta de un método analítico sobre muestras patrón
o estándar con concentraciones conocidas de un determinado analito. Además en
este método se prepara una disolución conocida como blanco, que contienen únicamente
la matriz, es decir todos los reactivos y disolventes de la muestra salvo el analito
de interés. En el intervalo de respuesta lineal del método analítico (dentro del cual la
señal es proporcional a la concentración de analito), se obtiene una recta de calibrado a
partir del procedimiento siguiente:
1) Se prepara una solución patrón con su concentración conocida, de esta se
toman diferentes volumen que van desde 1 ml hasta x volumen y los cuales son
colocados en diferentes matraces de aforo también de un volumen determinado. De
esto se obtiene una serie de la misma solución patrón pero con diferentes
concentraciones.
1) Se representa la señal detectada corregida de la señal del blanco frente a la
concentración de cada disolución patrón.
2) Se realiza una regresión lineal de los puntos resultantes por el método de mínimos
cuadrado. Se recomienda el uso de Excel para obtener la recta de ajuste. La recta de
calibrado y = a x + b (x: concentración, y: absorbancia) permite obtener
la concentración de cualquier muestra problema a partir de la señal obtenida
experimentalmente.
Este informe se hizo con la finalidad de mostrar y dar a conocer los los resultados y las
conclusiones que se obtuvieron de la práctica de laboratorio que se realizó la semana
pasada y los cuales se describirán a lo largo del presente informe.
2. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Preparación de la disolución madre de CuSO4.5H2O.
• Se preparó 50 mL de una disolución madre de CuSO4.5H2O con
una concentración de 100 mM, partiendo del soluto sólido de
CuSO4.5H2O, teniendo en cuenta la pureza del solido que se encontraba en el
recipiente y la cual era del 98%.
• A partir de la disolución madre de CuSO4.5H2O que se preparó en el
paso anterior, se prepararon 5 disoluciones estándar con diferentes alícuotas de
esta disolución, de la siguiente forma:
- De la solución madre se tomaron 5 alícuotas de 1 mL a 5 mL y las cuales fueron
colocadas en diferentes matraces de aforo de 25 mL, y cada matraz fue rotulado
con números de 1 a 5.
- Se calculó la concentración de cada una de las disoluciones mediante la
siguiente formula:
𝐶𝑖 𝑥 𝑉𝑖 = 𝐶𝑓 𝑥 𝑉𝑓
• Se determinó la absorbancia de la disolución madre de CuSO4.5H2O, en
el rango del visible [1000-400] nm, donde se identificó la λmax, para ello
se realizó una muestra blanco, donde se colocaron en una cubeta de 1 cm de paso
óptico agua destilada hasta 3⁄4 partes de capacidad de la celda y se la ubico en el
equipo donde se debe colocar la muestra blanco, se seleccionó en el equipo Auto
zero, y posteriormente la línea base en el rango de [1000 - 400] nm, para asi
restar cualquier absorción del blanco a las disoluciones de CuSO4.5H2O.
Finalmente se tomó una celda de 1 cm de paso óptico y se la lleno 3⁄4 de su
capacidad con la disolución madre de CuSO4.5H2O y se midió su espectro de
absorción en el rango anteriormente establecido. El espectro de absorción
al igual que las medidas fotométricas se realizó en el espectrofotómetro
Shimadzu UV-1900 de doble haz disponible en la Universidad del Atlantico.
• Se midió la absorbancia de las disoluciones estándar o patrón a la λmax. Y se
construyó la curva de calibrado graficando Absorbancia vs la concentración de
las disoluciones estándar, donde se determinó la regresión lineal, ecuación de la
recta y coeficiente de regresión lineal.
• Se midió la absorbancia de la muestra problema por triplicado y mediante
regresión lineal simple se determinó la concentración de la MP.
3. RESULTADOS Y DISCUCION
1. Preparación de la disolución madre de CuSO4.5H2O.
Preparar 50 mL disolución madre de CuSO4.5H2O 100 mM, a partir del soluto sólido
de CuSO4.5H2O, teniendo en cuenta la pureza del 98 % soluto.
Datos
Volumen: 50 mL = 0,05L
Concentración: 100 mM = 0,1 M
Pureza 98%
Factores de conversión
100mM x 1M = 0.1 M 50mL x 1L = 0.05L
1000mL 1000 mL
Para calcular los gramos de sulfato de cobre pentahidratado CUSO4.5H2O, se
puede realizar con la siguiente formula.
W g = mol x volumen (L) X MM DEL CU CUSO4.5H2O
L
Wg= 0.1 mol x 0.05 L x 249.68 g
L mol
Wg= 1.2484gr
Luego utilizando la ecuación de pureza, se calcula los gramos impuros que se
debe pesar en la balanza analítica así:
P= W pura x 100%
W Impuro
W impuro = Wpuro x100%
P
W impuro = 1.2484 x100%
98%
W impuro=1.2739 g sulfato de cobre (que se deben pesar en la balanza analítica, para
preparar la disolución
2. Concentraciones de las disoluciones estándar preparadas a partir de
la disolución madre de CuSO4.5H2O 100 mM
Tabla 2. Datos para la preparación de soluciones estándar.
Disolución Madre Concentración 100 mM Volumen 50 mL
Concentraciones Estándar
Nº Alícuota volumen
1 1 mL 25 mL
2 2 mL 25 mL
3 3 mL 25 mL
4 4 mL 25 mL
5 5 mL 25 mL
• Cálculo de la concentración de las disoluciones estándar (a las que se les agregó
un volumen de 1, 2, 3 4 y 5 ml de solución patrón y luego se las aforó hasta los 25
ml). Para esto se utilizó la ecuación de disolución así:
Para la disolución estándar 1
𝐶1𝑉1 = 𝐶2 𝑉2 donde:
C1= Concentración solución patrón C2 =Concentración de solución estándar 1
V1=Volumen de solución patrón V2= Volumen de solución estándar
𝐶2 ∗ 𝑉2 100 𝑚 ∗ 1 𝑚l
𝐶1 = = =
𝑉1 25 𝑚l 4𝒎𝑴 𝐂𝐮𝐒𝐎4. 5𝐇𝟐𝐎
Para la Solución # 2.
𝐶1𝑉1 = 𝐶2 𝑉2
C1= Concentración solución patrón C2 =Concentración de solución estándar 1
V1=Volumen de solución patrón V2= Volumen de solución estándar
𝐶2 ∗ 𝑉2 100 𝑚M ∗ 2 𝑚L
𝐶1 = = =
𝑉1 25 𝑚L 𝟖 𝒎𝑴 𝐂𝐮𝐒𝐎4. 5𝐇𝟐𝐎
Se realizó y aplicó la misma ecuación para las soluciones estándar 3. 4. y 5, se obtuvo
concentraciones de 12, 16, y 20 mM, respetivamente
3. Espectro de absorción del CuSO4.5H2O desde 1000 nm hasta los 400 nm
A continuación, se da a conocer el espectro de absorción del CUSO4.5H2O, en donde se
puede apreciar que desde los 550 nm comienza a presentarse una mayor absorbancia,
esto significa que la molécula estaba absorbiendo energía lumínica que se le suministro,
de esta manera absorbió energía para tomar saltos electrónicos, es decir que el electro
paso de un estado basal a un estado excitado, que volverá a su estado basal cuando deje
de suministrarle energía. El valor de máxima absorción o su landa máxima (λ), se da en
los 811 nm, esto significa que a esa longitud de onda todas las moléculas que
se
encontraban en la celda absorbieron energía, como analista se garantiza que es en este
punto donde ocurre la ley de Beer-lamber. (las muestras estándar que se preparó, con la
disolución patrón, se llevaron a esta longitud de onda, por las razones anteriormente
explicadas.
Espectro de absorción del CuSO4.5H2O
Absorbancia (UA)
3.0000
2.5000
2.0000
1.5000
1.0000
0.5000
0.0000
400.0 500.0 600.0 700.0 800.0 900.0 1000.0
Longitud de onda (nm)
4. Determinación de la concentración de la muestra problema de
CuSO4.5H2O, mediante regresión lineal simple, método estándar externo.
Para el cálculo de la concentración de la muestra problema, fue necesario recurrir a
graficar la concentración y la absorbancia de las muestras estándar, relacionados en la
siguiente tabla.
Tabla 3. Absorbancias de las disoluciones estándar.
λ max (811 nm)
[mM] Abs
4 0,045
8 0,102
12 0,154
16 0,212
20 0,272
Teniendo la información del estándar se realizó mediante regresión lineal simple,
método estándar externo, se halló la ecuación de la recta para así poder encontrar las
concentraciones de las muestras problemas.
Tabla 4. Absorbancia de la muestra problema
Muestra Problema
Abs 1 0,201
Abs 2 0,199
Abs 3 0,2
Abs 4 0,198
Abs 5 0,199
Absorbancia Promedio 0.1994
Grafica 1. Representación lineal de la absorbancia vs concentración de muestras
estándar a partir de una solución madre CuSO4.5H2O al 100 mM.
Absorbancia vs Concentración
0.3
y = 0.0141x - 0.0122
Absorbancia
0.25 R² = 0.9994
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 5 10 15 20 25
Concentración (mM)
Para encontrar la concentración de la muestra problema, se tomó la ecuación de la recta
y se despejo x, de la siguiente manera
Y = 0.0144 X -0.0122
Absorbancia= 0.0144 (concentración)-0.0122
Absorba+0.0122 = concentración
0.0144
0.1994+0.0122 = concentración
0.0144
14.6944= concentración de la muestra problema
• Determinación del coeficiente de absortividad molar
Teniendo en cuenta que el coeficiente de absortividad molar de un componente a partir
de regresiones lineales corresponde a la pendiente, y que la ecuación para estos casos es:
Y= mx+b, donde m es el valor de la pendiente.
la ecuación encontrada a partir de las soluciones estándares preparadas en la presente
practica es la siguiente
y = 0,0141x-0,0122
Absorbancia=0.014(concentración)-0.0122
0.0141 corresponde al valor del coeficiente de absortividad molar
También se lo puede calcular, con la fórmula de Beer-lambeer, tomando cualquiera de
las parejas absorbancia y concentración de las disoluciones estándar así
Absorbancia= Ex b x C
Absorbancia = E (coeficiente de absortividad molar)
bxC
0.045 = 0.01
1cm x 4mM cm x mM
El coeficiente de absortividad molar es un valor constante, que corresponde al valor de
la recta en la ecuación lineal
• Importancia de la regresión lineal simple, cuando se usa
La regresión lineal simple es una técnica que permite cuantificar la relación que puede
ser observada cuando se grafica un diagrama de puntos dispersos correspondientes a dos
variables, cuya tendencia general es rectilínea; relación que cabe compendiar mediante
una ecuación “del mejor ajuste” de la forma:
y = a + bx
En esta ecuación, “y” representa los valores de la coordenada a lo largo del eje vertical
en el gráfico (ordenada); en tanto que “x” indica la magnitud de la coordenada sobre el
eje horizontal (absisa). El valor de “a” (que puede ser negativo, positivo o igual a cero)
es llamado el intercepto; en tanto que el valor de “b” (el cual puede ser
negativo o positivo) se denomina la pendiente o coeficiente de regresión.
• Qué información entrega el r2, la pendiente y el intercepto en una
regresión lineal simple.
El coeficiente de determinación, también llamado R cuadrado, refleja la bondad
del ajuste de un modelo a la variable que pretender explicar. el resultado del coeficiente
de determinación oscila entre 0 y 1. Cuanto más cerca de 1 se sitúe su valor, mayor será
el ajuste del modelo a la variable que estamos intentando explicar. de forma
inversa, cuanto más cerca de cero, menos ajustado estará el modelo y, por tanto, menos
fiable será. La pendiente de la recta, mide el cambio en y por cada unidad de cambio
en x. El intercepto o ordenada al origen, es el punto donde la recta intercepta el eje y,
es decir el valor de y cuando x = 0.
4. CONCLUSIONES
• Se prepararon la solución madre y las soluciones estándares requeridas para
este laboratorio de forma correcta, siguiendo las indicaciones que propone el método
de estándar externo.
• Mediante el espectrofotómetro disponible en la Universidad, se determinó el
espectro de absorción de la solución de CuSO4 5H2O y su longitud de onda
máximo, teniendo en cuenta los conceptos estudiados en la teoría y las diferentes
fuentes bibliográficas se determinó que la longitud de onda de la solución
está dentro de la UV – VIS del espectro electromagnético.
• Mediante la metodología del estándar externo se determinó la concentración de la
muestra problema, donde se aplicó de forma experimental la curva de calibrado de la
absorbancias vs la concentración de las soluciones patrón, y por medio del
concepto de la regresión lineal simple que se ha estudiado en la teoría se encontró la
concentración de la muestra problema.
• En esta práctica se dio a conocer el uso y funcionamiento del
espectrofotómetro Shimadzu UV-1900 de doble haz, el cual en su descripción es uno
de los elementos más apropiados en la industria y en el área de la investigación para
la determinación de un componente en un determinado analito.
• Durante el desarrollo de este laboratorio se reforzaron los conceptos de la temática
de disoluciones, los cuales son importantes al momento de preparar las disoluciones
y asi obtener los resultados esperados y un bajo porcentaje de error relativo.
AGRADECIMIENTO
Agradecimiento a la Facultad de Ciencias básicas de la Universidad del Atlántico por el
préstamo del laboratorio de análisis instrumental y de los elementos y equipos que ahí se
encuentran.
BIBLIOGRAFIA
1. APLICACIONES Y GENERALIDADES DE LOS DE
UN ESPECTOFOTOMETRO DE UV-VIS. SHIMADZU / Isabel Cristina
Castellanos Cuéllar, Javier Ricardo Velandia Cabra, Miguel Ángel González
Curbelo, Diana Angélica Varela Martínez, Eduardo Ramírez Valencia. UV-
1800 /Editorial Ediciones EAN, 2018. / pág.: 8-10
2. INSTRUMENTOS DE OBSERVACION “Espectro de absorción” en línea 25
de
junio de 2020. Disponible en
[Link]
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3. ESCUELA TECNICA SUPERIOR DE INGENIEROS INDUSTRIALES “longitud
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[Link]
4. QUESTIONSPRO “Regresion Lineal Simple”, en línea 25 de Junio de 2020.
Disponible en línea: [Link]
regresion/#:~:text=La%20regresi%C3%B3n%20lineal%20simple%20es,o%20estimaciones%20sobr
e%20los%20datos.