Biología General Dr.
César Cevallos
Columbus
UNIVERSIDAD NACIONAL “JORGE BASADRE GROHMANN”
FACULTAD DE CC. SS – E.P DE ENFERMERIA
PRACTICA Nº 03
FUNDAMENTOS Y MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO
INTRODUCCIÓN
La célula es la unidad más pequeña de un ser vivo que muestra todas las propiedades características de la vida,
ya que se distingue del medio que la rodea (gracias a su membrana), tiene un metabolismo propio y puede
replicarse (toda célula procede de otra célula anterior).
El tamaño de las células escapa al poder de resolución del ojo que se define como la distancia mínima entre dos
puntos para que puedan verse como objetos separados. El descubrimiento de las células fue posible a partir de la
invención del microscopio compuesto. El conocimiento de la célula y el papel que juega en la formación de los
tejidos animales y vegetales ha avanzado de manera paralela al perfeccionamiento de las técnicas de
microscopía.
Se han desarrollado diferentes sistemas de iluminación para el microscopio, que permiten observar células o
tejidos vivos, o fijados y teñidos. El microscopio de campo claro es útil para la observación de material teñido, la
tinción incrementa el contraste entre la muestra y el medio que lo rodea. La imagen formada resalta sobre un
fondo blanco brillante. En este sistema, el trayecto que sigue la luz va desde la lámpara hasta el ojo del
observador pasando por un sistema de lentes que la alinea y la concentra.
El microscopio óptico es un instrumento que sirve para aumentar el tamaño de un objeto a través de un sistema de
lentes. Puede conseguirse con este método un aumento de hasta 2000 veces.
OBJETIVO
Identificar las partes del microscopio de campo claro y, aprender a realizar la iluminación de Köhler.
MATERIALES
Microscopio óptico.
papel seda
aceite de inmersión
algodón
Figura 1. Microscopio óptico compuesto.
El microscopio óptico está compuesto por los siguientes componentes o sistemas:
1. Sistema mecánico
2. Sistema de iluminación
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3. Sistema óptico
CONCEPTOS SOBRE EL MICROSCOPIO
AMPLIFICACIÓN: La amplificación de un microscopio es el producto de número de aumentos del
objetivo por los del ocular. Aumentos útiles: x1000, x2000
PODER DE RESOLUCIÓN: Capacidad de una lente para mostrar dos objetos muy cercanos como
distintos, discretos y separados.
Figura 2: El poder de resolución
de los instrumentos nos permite
detectar objetos cada vez más
pequeños (Tomado de De Juan,
1999).
APETURA NUMÉRICA (AN).
Expresión matemática que
describe la forma en que la luz
es concentrada por el condensador y captada por el objetivo.
LÍMITES DE RESOLUCIÓN (d). Distancia más pequeña por la cual dos objetos pueden estar
separados y ser todavía distinguibles como dos objetos separados.
Formas de reducir el límite de resolución:
a) Disminuyendo la longitud de onda
b) Aumentando la Apertura Numérica
El límite de resolución máximo que se consigue en los microscopios de campo luminoso se sitúa en
0.22 – 0.25 µm.
ÁREA DE CAMPO. Diámetro de la parte de la preparación que se está viendo al microscopio.
PROFUNDIDAD DE CAMPO. Espesor de la preparación enfocada en cualquier momento (mayor a
pequeños aumentos).
DISTANCIA FOCAL. Es la relación existente entre la longitud del tubo del microscopio empleado y la
amplificación usada en un momento dado.
DISTANCIA DE TRABAJO. Espacio existente entre el punto más bajo del objetivo y el objeto enfocado.
MÉTODO. Para que los microscopios proporcionen imágenes de buena calidad las lentes deben estar
limpias, por lo que debe evitar tocarlas, ya que las huellas digitales alteran la calidad de la imagen
observada.
Cada vez que observe con el objetivo de 100X, deberá colocar sobre el cubreobjetos de la
preparación, una pequeña gota de aceite de inmersión, la lente del objetivo deberá quedar inmersa
en el aceite para tener un mejor resultado. Al retirarlo, absorba el aceite de la lente usando papel
seda. NO OLVIDE LIMPIAR BIEN las lentes de 40X y 100X.
Evite que su muestra se seque agregando una gota de la solución correspondiente por los bordes
del cubreobjetos.
USO DEL MICROSCOPIO:
1. Tenga el objetivo de menor aumento colocado en posición de observación.
2. Coloque la preparación sobre la platina. Debe estar cubierta por un cubreobjetos y seca por los
bordes.
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3. Inicie la observación con el objetivo de menor aumento. Mirando por fuera se baja el tubo con la
ayuda del tornillo macrométrico, hasta que el objetivo quede a 0,5 cm de la preparación. Luego,
mirando a través del ocular, comience a subir el tubo lentamente hasta que se observe la imagen.
4. Utilice el tornillo micrométrico para lograr la nitidez de la imagen.
5. De este primer aumento pase a los aumentos sucesivos que vaya requiriendo.
6. Para enfocar con objetivos de mayor aumento debe bajarse el objetivo hasta que está muy cerca de
la preparación. Luego mirar por el ocular y subir lentamente la preparación, y ajustar la nitidez con
el tornillo micrométrico para lograr nitidez.
7. Realice la observación con los dos ojos abiertos.
CUIDADO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO
1. Cuando no está en uso el microscopio debe ser guardado en una caja o cubierto con una funda
plástica, y con el objetivo de menor aumento colocado en posición de observación.
2. Para trasladarlo se debe tomar colocando una mano en la base y la otra en el brazo del
microscopio.
3. Colóquelo con suavidad sobre la mesa de trabajo y evite movimientos o golpes bruscos.
4. No toque los lentes con los dedos porque el sudor los daña. Para limpiarlos use papel para lentes.
5. Use cubreobjetos para cubrir la preparación y evitar así el contacto del microscopio con agua u
otros líquidos.
6. Nunca use alcohol para limpiar las partes laqueadas, ya que esta sustancia quita la capa de laca y
favorece la oxidación de las partes metálicas. Evite también el contacto del microscopio con ácidos.
7. Después de usar el objetivo de inmersión elimine el aceite de cedro, primero con papel para lentes
seco y luego con uno ligeramente humedecido en xilol. Los restos de aceite en el microscopio se
quitan con una tela suave humedecida en xilol.
CUESTIONARIO
Defina y explique el fundamento de cada tipo de microscopio. ¿Qué tipos de observaciones se realizan?
1. El microscopio óptico de contraste de fases
2. El microscopio óptico de campo oscuro
3. El microscopio óptico de fluorescencia
4. El microscopio electrónico
Tacna, abril 2019