UNIVERSIDAD CIENTIFICA DEL SUR
FACULTAD de: Medicina Humana
LABORATORIO DE
BIOQUIMICA
CURSO: BIOQUIMICA
INFORME DE PRACTICA
PRACTICA N: 4
TITULO: Digestión enzimática del almidón
ESTUDIANTE:
Fernanda Azcarate
Mirella Huaman Loo
Rodrigo Barrantes
Franco Espino
HORARIO de PRACTICAS
DIA: Martes
HORA: 3:00 – 5:00 pm
2017 - I
Introducción
Un catalizador es una sustancia que aumenta la velocidad de una reacción
química, sin sufrir ningún cambio al final de la misma. Casi todas las
reacciones químicas que ocurren en los seres vivos son catalizadas por
proteínas especializadas llamadas enzimas.
La sustancia sobre la que actúa una enzima se llama sustrato. La enzima se
une al sustrato formando un complejo enzima-sustrato que al final se
disocia en enzima y producto. La enzima libre queda así en capacidad de
unirse a otras moléculas del sustrato y generar más producto, hasta que se
agote la disponibilidad del sustrato o se presenten efectos reguladores que
inhiban la actividad catalítica de la enzima.
Las enzimas son proteínas de peso molecular elevado (más de 10 K
daltons). Su estructura tridimensional está determinada por la secuencia de
aminoácidos que caracteriza a cada una. En su estructura contienen un
pequeño espacio llamado sitio activo, catalítico o sitio isostérico, al que se
une una región específica del sustrato, por medio de un acoplamiento muy
específico semejante al de una llave con su cerradura. Esto explica una de
las características de las enzimas: una alta especificidad por su sustrato. Por
ejemplo, la enzima SACARASA actúa sólo sobre SACAROSA y no lo
puede hacer sobre otros disacáridos parecidos.
La actividad enzimática puede verse afectada por cualquier factor físico o
químico que altere su estructura tridimensional. Generalmente, las
condiciones óptimas se encuentran entre límites estrechos de temperatura,
pH, concentración salina, etc. A medida que las condiciones se alejan del
punto óptimo, la actividad de la enzima empieza a decrecer y en
condiciones extremas, puede perder su estructura tridimensional y se dice
que la enzima es desnaturalizada.
Materiales y Reactivos
MATERIALES EN LA MESA DEL ALUMNO
01 Gradilla
03 Tubos de ensayo
01 Piseta con agua destilada
01 Beaker de 50mL
01 Pipeta de 10mL
01 Pipeta de 5mL
02 Propipetas
REACTIVOS EN LA MESA DE LOS ESTUDIANTES
3mL Tampón fosfato 0.1M pH 6.5
6mL Almidón 1%
7.5mL Ácido clorhídrico 0.5N (HCl)
01 Gotero de solución de Lugol
MATERIALES EN LA MESA CENTRAL (DEL PROFESOR)
01 Baño María con temperatura a 37°C
Metodología
Resultados
1 2 3
Buffer fosfato sodio 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL
0,1 M
Solución HCl 0,5N --------------- ------------------- 1,5 mL
--
Solución Almidón 1% 2,0 mL 2,0 mL 2,0 mL
Agua destilada 2,0 mL 2,0 mL 2,0 mL
Amilasa Salival NO SI SI
Tiempo de Reacción
Lugol SI SI SI
Color final Azul intenso Amarillo Azul Intenso
pH de reacción: 6,5
Temperatura de incubación: 37°C
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
El tubo 1 presentó el color azul intenso después de haberlo sometido a
incubación y habiéndole echado lugol. Esto se debe a que no hubo ninguna
reacción enzimática en este tubo ya que el lugol se tiñe de azul intenso al
entrar en contacto con el almidón que en este caso vendría a ser nuestro
sustrato. Debido a que no se le añadió enzima a este tubo 1 (blanco), nunca
se formó el complejo enzima – sustrato y por lo tanto no hubo una
transformación de sustrato a producto. Sin enzima no hay catálisis. Los
demás factores que afectan la actividad enzimática no afectaron
negativamente a este tubo porque el pH y la temperatura son constantes y la
concentración del sustrato no varía frente a los demás tubos.
El tubo 2 presentó un color amarillo característico del lugol cuando no
reacciona. Esto significa que no encontró almidón con el cual reaccionar ya
que este se hidrolizó totalmente reaccionando con sus enzimas y
volviéndose un producto distinto al sustrato original. Hubo una adecuada
reacción enzimática debido a que se presentaron las condiciones necesarias
para que esta pueda trabajar adecuadamente. Ningún factor afectó de
manera negativa a la reacción enzimática. Se presentó una temperatura y
pH adecuados para el trabajo de la enzima (pH 6,5 y temperatura 37°C) y la
concentración del sustrato y de la enzima fueron similares ya que no quedó
sustrato libre sin hidrolizar en este tubo, es decir, todo el sustrato se unió a
la enzima para formar el nuevo producto.
El tubo 3 presentó un color azul intenso luego de la incubación y la
añadidura del lugol. Esto quiere decir que reaccionó con el sustrato
(almidón) que no fue capaz de transformarse en un producto diferente. Esto
se debe a que se alteró el medio de reacción para esta enzima añadiendo
una solución de HCl 0,5 N, lo cual bajo el pH del medio y acidificándolo
(el pH óptimo para esta enzima es alrededor de 6,5). Además, el HCl dejará
que iones Cl- se disocien y afecten a reacción enzimática retrasándola o
suprimiéndola. “La unión y el reconocimiento de moléculas de sustrato con
grupos disociables típicamente también comprenden la formación de
puentes salinos con la enzima. Los grupos cargados más frecuentes son
grupos carboxilato (negativos) y aminas protonadas (positivos). La
ganancia o pérdida de grupos cargados cruciales afecta de manera adversa
al sustrato y, así, retrasará o suprimirá la catálisis.” (1)
Cuestionario:
1. Realiza un cuadro comparativo entre la amilasa salival y pancreática
respecto a:
a. Necesidad de cofactor
b. Km de la enzima
c. Diferencias estructurales
Diferencias Semejanzas
Necesidad de Hidroliza el Similar a la de Son principales enzimas
cofactor almidón a la saliva pero durante el proceso de
maltosa mucho más desintegrar almidón de los
Se produce potente alimentos
en las (hidrolisis del Son enzimas para hidrolizar
glándulas almidón mucho el almidón de los alimentos.
salivales mas potente).
pH ideal es Se produce en
de 6.9 el páncreas
pH ideal es de 7
Km de la 6 - 6.8 es su 7.5-8 es su km No presentan el mismo KM
enzima km
Diferencias Ver imagen #1 Ver imagen #2 No presentan la misma estructura
estructurales
1 2
2. Explique el mecanismo de acción de la amilasa pancreática a nivel
intestinal.
Cuando comes alimentos que contienen grasas, las grasas pasan a
través del estómago sin digerir en el intestino delgado. En el
intestino delgado, las lipasas pancreáticas -lipasas producidas y
secretadas por el páncreas- degradan las grasas en partículas más
pequeñas que pueden pasar a través de la pared del intestino y en los
conductos linfáticos, de los que finalmente pasan al torrente
sanguíneo.
3. Describa la preparación del masato: desde origen nativos.
El masato originalmente era preparado por las tribus nativas de la
selva, quienes luego de sancochar las yucas las colocaban en un
batán para machucarlas con un mazo de madera. Posteriormente
mezclaban una parte con el agua de la cocción, el resto de las yucas
machucadas eran masticadas por las mujeres de la tribu, con el
objeto de que su saliva produjera las enzimas para la transformación
de los almidones de la yuca y la posterior fermentación. Este
producto luego era mezclado con la yuca con agua y colocado en
depósitos cubiertos con hojas de bijao o plátano para terminar de
fermentarse por alrededor de una semana.
Conclusiones
1. La enzima o apoenzima mas el cofactor, que puede ser un ion o
una molécula (coenzima), genera la holoenzima.
2. El tiempo de reacción del lugol frente a las muestras era
instantáneo, aunque en algunos casos, la tonalidad fuerte varia
debido a que se estableció un tiempo de espera entre todas las
muestras, cada 30s.
3. Se puede confirmar en la muestra cuando aparece el azul intenso
que ha reaccionado el lugol con el almidón, y para la muestra que
no se observó el azul, nos quiere decir que el almidón ha sido
desintegrado por el HCl.
Recomendaciones
Bibliografía
(1) Murray R K et al. Enzimas: cinética. En: HARPER BIOQUÍMICA
ILUSTRADA. 29° ed. México DF: McGraw-Hill; 2012. p. 75.
2. Murray R. et al. Bioquímica de Harper 16ª y 17ª Ed. 2007 El Manual
Moderno. México, D. F.
3. Mathews J. Linch. Métodos de Laboratorio 2ª. Ed. Interamericana.
México, D. F