EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN, EL pH Y LA TEMPERATURA SOBRE LA

VELOCIDAD DE UNA REACCIÓN ENZIMÁTICA.

Santiago Ahumada Tobar y Maira Alejandra Gil Blandón
santyahumada@[Link], mayigil@[Link]
Universidad ICESI, Facultad de Ciencias Naturales, Programa de Química
Farmacéutica, Laboratorio de Bioquímica, Santiago de Cali, Colombia.
Marzo 23 de 2019-I

OBJETIVOS DE APRENDIZAJE:
 Reconocer y diferenciar los factores que afectan la velocidad de las reacciones
catalizadas por enzimas.
 Ilustrar el mecanismo por el cual ciertos factores afectan la velocidad de las
reacciones enzimáticas.
 Utilizar aquellos factores que afectan la velocidad de las reacciones enzimáticas
para comprender cómo se regula el trabajo de las enzimas en los organismos
biológicos.
 Discutir los efectos de las variaciones bruscas de factores como temperatura y pH
en el funcionamiento adecuado de los organismos.

RESULTADOS
Tabla 1. Efecto de la [E] sobre la actividad enzimática
Tubo 1. Tubo 2. Tubo 3. Tubo 4.
Tiempo Tubo 1 Tiempo Tubo 2 Tiempo Tubo 3 Tiempo Tubo 4
(Min) (0,1 mL) (Min) (0,2mL) (Min) (0,3mL) (Min) (0,4mL)
45 5 45 5 45 5 45 2
50 5 50 4 50 4 50 2
55 5 55 4 55 3 55 1
60 5 60 3 60 3 60 1
 Figura 1. Primeras 4 columnas corresponden a la [E] y las columnas 6 y 8
corresponden al pH 7.0 y 4.0 respectivamente

Efecto de la [E] sobre la velocidad de reacción

Tubo 1 (0,1 mL) Tubo 2 (0,2mL) Tubo 3 (0,3mL) Tubo 4 (0,4mL)
6

55 5 5 5

4 4 4
Concentración

3 3 3

22 2

1 1 1

0
45 50 55 60
Tiempo (min)

Tabla 2. Efecto del pH sobre la actividad enzimática

Tubo 1. Tubo 2.
Tiempo (Min) Tubo 1 pH=7.0 Tiempo (Min) Tubo 2 pH=4.0
45 5 45 5
50 4 50 5
55 4 55 5
60 4 60 5
 Efecto del pH sobre la velocidad de una reacción
enzimática
Tubo 1 pH=7.0 Tubo 2 pH=4.0
6

5
Concentraciones [S]

0
45 50 55 60
Tiempo (Min)

Tabla 3. Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática

Tiempo (Min) Tubo 1. T= 50°C Tubo 2. T. ambiente Tubo 3. T=4°C
0 5 5 5
3 5 4 4
6 5 3 3
9 5 2 3
12 5 2 5
15 5 1 2
18 5 1 2
21 5 1 2
 Efecto de la temperatura sobre la velocidad de
reacción
6

5
Concentraciones

0
0 3 6 9 12 15 18 21
Tiempo (Min)

Tubo 1. T= 50°C Tubo 2. T. ambiente Tubo 3. T=4°C

Figura 2. Primeras 4 columnas corresponden a la [S] y las columnas 6,7 y 8

corresponden a las temperaturas (50°C, ambiente y 4°C respectivamente).
 Tabla 4. Efecto de la [S] sobre la actividad
enzimática
Volumen sustrato (mL) Velocidad reacción
1 1,0
1,5 0,3
2 0,3
3 0,3

Efecto de la [S] sobre la velocidad de reacción

1.2
Velocidad de la reacciión (1/vel)

1.0

0.8

0.6

0.4

0.2

0.0
0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
Volumen de sustrato (1/s)

ANÁLISIS DE RESULTADOS degradación del almidón, que es un

polisacárido de reserva vegetal.
Para comenzar es de gran importancia
resaltar los siguientes 3 conceptos: en Con base en lo anterior se puede decir
primera medida la cinética enzimática que el principal objetivo de la práctica
tiene por objeto el estudio de la velocidad realizada fue evaluar la acción de la a-
de las reacciones catalizadas por enzimas, amilasa deshidrolizando el almidón, es
así como los factores que en ella influyen decir, se utilizó almidón como sustrato
y los mecanismos por los cuales para la enzima.
transcurren. En segunda medida la
Inicialmente, para el primer experimento
velocidad de las reacciones enzimáticas
se preparó una solución llamada extracto
se puede medir por agentes claves tales
enzimático, la cual consistía en 20mL de
como la cantidad de sustrato que
solución mezclados respectivamente en
desaparece en cierto tiempo, y la cantidad
2mL de saliva (que contiene la enzima
de producto que se genera en ese mismo
amilasa salival) y 18mL de agua
tiempo. Y en tercera medida la a-amilasa
destilada. Antes de comenzar el
es una enzima proteica que se encuentra
procedimiento se realiza una prueba de
en la saliva humana y cataliza la
lugol, en esta se determina que
concentración de lugol es capaz de
reaccionar por completo con el almidón, Al analizar la tabla 2 se puede deducir
es clave mencionar que esta prueba no fue que el almidón no se hidrolizó
realizada en el laboratorio, ya que para completamente, pues en medio alcalino
optimización del tiempo la docente asignó (pH básico) solo alcanzó el #4 en la
el dato. escala de tonalidades al paso de 50 min,
en medio ácido no se dio la reacción, es
El almidón cambia de color en contacto
decir, no hidrolizó.
con yodo porque el lugol adsorbe el yodo
produciendo una coloración azul intensa, Las enzimas poseen grupos químicos
coloración que desaparece al calentar, ionizables de las cadenas laterales de sus
porque se rompe la estructura que se ha aminoácidos, los cuales pueden tener
producido, pero vuelve a aparecer al cargas de acuerdo con el pH en que se
enfriar (Pinto, G. Sánchez, M. Sánchez, encuentren. Debido a que las
M. 2012). El almidón es un polisacárido conformaciones de las proteínas
vegetal y está formado por amilosa y dependen en parte de las cargas eléctricas
amilopectina, ambos polisacáridos de que posean, debe haber un pH en el cual
glucosa; los polisacáridos como el la conformación sea la más adecuada para
almidón y el glucógeno son muy la actividad catalítica. A esto se le conoce
ramificados y de gran superficie para como pH óptimo (Universidad del País
tener más de un punto de degradación. La Vasco, sf)
alfa amilasa cataliza la hidrólisis de la
Es importante resaltar que la amilasa
cadena lineal (amilosa) y la ramificada
tiene actividad enzimática a un pH de 7,
(amilopectina) del almidón, rompiendo
además su pH óptimo es de 6.9, estos
enlaces 1,4 interiores (endoamilasa) para
datos permiten deducir cómo será el
formar una mezcla de dextrinas; por ello
comportamiento de la enzima a diferentes
se la conoce como enzima
pH, en acido la enzima no hidrolizará
dextrinogénica.
alguna clase de almidón, sin embargo, en
En el procedimiento del efecto del tiempo pH alcalino la enzima si hidroliza, pero
y el pH sobre la velocidad de una no en una efectividad del 100%.
reacción enzimática, se hizo uso de una
En la siguiente parte del experimento se
solución constituida por 2.0mL de
comprobó el efecto que tiene la
almidón al 0.5% y 2.8mL de solución
temperatura sobre la actividad enzimática.
buffer pH 7.0 (tubo 1) y pH 4.0 (tubo 2).
Para ello se utilizaron 3 tubos de ensayo
Éstas fueron agregadas a baño María a
que contenían almidón y el extracto
37ºC aumentando poco a poco la
enzimático. Luego, se colocó uno de estos
temperatura hasta llegar a 50ºC. Se
tubos a calentar hasta los 50°C, el
procedió luego a agregar 0.5mL de
segundo se dejó a temperatura ambiente
extracto enzimático a cada tubo iniciando
(27°C) y el tercero se enfrió a 4°C.
así la reacción. Se realizó el mismo
procedimiento en placa Elisa del método De acuerdo con la información anterior, y
1, con los mismos intervalos de tiempo, a los resultados recopilados en la tabla 3,
para así observar los cambios de se infiere que en el primer tubo no se
coloración. observó cambió alguno debido a que, a
altas temperaturas, el calor suministrado intervalos de 3 minutos observando los
rompe las interacciones débiles de la cambios de coloración.
proteína, lo cual provoca un
Una enzima puede alcanzar una velocidad
desorganizamiento y la consiguiente
máxima de acción si posee la cantidad de
desnaturalización de la enzima
sustrato adecuado sobre la cual puede
(Universidad del País Vasco, sf) y por
actuar a su capacidad máxima. Es decir,
ende la reacción entre esta y el almidón
la cantidad de producto producido será la
no se lleva a cabo.
máxima que puede producir la enzima, si
Por otro lado, el tubo de ensayo que se se tienen las cantidades máximas de
dejó a temperatura ambiente fue el que sustrato las cuales pasan a producto por
obtuvo un cambio más notorio, acción enzimática. Esto tiene una gran
cambiando su coloración de negra a relación con la afinidad que contiene la
amarilla en cuestión de alrededor de 21 enzima por su sustrato. Al observar la
minutos. Esta temperatura es la adecuada tabla 4 se puede inferir que la reacción
para llevar a cabo la reacción entre la más efectiva, es la proporcionada por el
enzima y el almidón, ya que se comprobó, tubo #4, el cual es el que posee un mayor
contrastando los resultados de los otros nivel de concentración enzimático. Con
dos tubos, que los extremos térmicos no base en lo dicho, se puede concluir que la
permiten que haya una adecuada velocidad de reacción se ve afectada por
interacción enzima – almidón, la concentración de enzima que está
provocando que la velocidad de reacción involucrada; mientras mayor sea dicha
sea menor. Un factor que permite este concentración mayor será la velocidad de
hecho es la localización donde se realizó reacción.
la práctica, la ciudad de Cali, la cual tiene
Por último, cabe resaltar la importancia
una temperatura promedio de 30°C. Esta
de la enzima en cuanto a su labor de
temperatura se encuentra en el rango en el
catalizadora y, en el caso específico del
cual la actividad enzimática es máxima,
almidón, el efecto de desintegración que
por lo cual genera una velocidad de
la amilasa tiene sobre este polisacárido.
reacción mayor.
Para ello, es crucial el efecto que tuvo la
En cuanto al estudio del efecto de la [S] alfa-amilasa en el desarrollo de las
sobre la velocidad de la actividad primeras civilizaciones humanas. En
enzimática, se llevó a cabo en 4 tubos de aquellos tiempos, era prácticamente
ensayo con 1.0, 1.5, 2.0 Y 3.0mL de imposible un consumo adecuado de
almidón al 0.5% a baño María alimentos con los cuales nutrir a la
manteniendo constante la temperatura persona de los carbohidratos necesarios
(50ºC). Luego se le agregaron 3.8, 3.3, para un óptimo funcionamiento del
2.8 y 1.8mL de agua destilada, cuerpo humano y de sus funciones
adicionando a cada tubo 0.10mL del motoras. Con lo cual, se corría el riesgo
extracto enzimático, iniciando así la de morir como consecuencia de ello.
reacción.
En este punto la alfa-amilasa entra a jugar
Se realizó el mismo procedimiento en un papel muy importante, ya que era la
placa Elisa del método 1, pero esta vez en enzima clave que permitía degradar el
almidón que se encontraba en los Pinto, G. Sánchez, M. Sánchez, M. 2012.
vegetales y plantas en general que Reactivo de Lugol: Historia de su
consumían los humanos de entonces, descubrimiento y aplicaciones
siendo esta su principal fuente de didácticas. Recuperado de:
carbohidratos. Tras la degradación, el [Link]
n1/[Link]
almidón se convierte en una mezcla de
disacáridos, principalmente la maltosa, la Universidad del País Vasco. Sf. EFECTO
cual luego forma azucares más simples DE LA TEMPERATURA SOBRE
como la glucosa, la cual es la molécula LA ESTRUCTURA DE LAS
fundamental para la producción de PROTEÍNAS. Recuperado de:
energía en el cuerpo humano. [Link]
proteinas/[Link]#4
En conclusión, la alfa-amilasa fue una de
4
las enzimas que posibilitaron el desarrollo
de las civilizaciones humanas al Universidad del País Vasco. Sf. EFECTO
permitirles obtener energía inmediata de DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD
los únicos alimentos que podían consumir ENZIMÁTICA. Recuperado de:
entonces. [Link]
imas/[Link]#ph

CONCLUSIONES

 Si la amilasa no actuara sobre el

almidón, este no se degradaría en
moléculas simples (la glucosa) y
no podría ser absorbido por las
células.
 Se reconocieron los diferentes
factores que afectan las
velocidades de reacción de la
enzima α-amilasa.

 Se evidenció que la actividad

enzimática se ve afectada por la
concentración de la enzima, el pH,
la temperatura y la concentración
del sustrato.

BIBLIOGRAFÍA