API 20
OBJETIVOS
API 20 E es un sistema de identificación estandarizado para Enterobacteriaceae y
otras bacterias gramnegativas no exigentes, que utilizan 21 productos bioquímicos
en microtubos en una galería. La lista completa de esos organismos que es posible
identificar con este sistema está en la tabla de identificación al final.
PRINCIPIO
La tira API 20 E consta de 20 microtubos que contienen sustratos deshidratados.
Estas pruebas se inoculan con una suspensión bacteriana que reconstituye los
medios. Durante la incubación, el metabolismo produce cambios de color. que son
espontáneos o revelados por la adición de reactivos.
MATERIAL :
● Galería de pruebas API 20E de la casa comercial Biomérieux
● Microorganismo problema procedente de un cultivo joven
● Ampolla de 5 ml de suero salino fisiológico
● Hilo de siembra de platino
● Pipeta pasteur
● Papel de filtro
● Mechero Bunsen
● Portabjetos
● P-fenil-diamina (oxidasa)
● Reactivos reveladores de Voges Proskauer, Indol y TDA
● Cámara
● Estufa
● Libro de interpretación API
● Parafina estéril
API 20 E CONTIENE:
● ONPG: Prueba de la ONPG.
● ADH, LDC y ODC: Son pruebas de descarboxilación, porque detectan la
presencia de descarboxilasas. La LDC es la Lisina Descarboxilasa, la ODC la
Ornitina descarboxilasa y la ADH es la Arginina Dihidrolasa.
● CIT: Prueba del Citrato.
● SH2: Prueba de la fermentación triple.
● Ureasa: Prueba de la Ureasa.
● TDA: Triptófano desaminasa. Prueba del metabolismo de los compuestos
nitrogenados, que pone de manifiesto si el microorganismo posee la enzima
triptófano desaminasa. El medio lleva triptófano, y si el microorganismo posee
dicha enzima originará amoniaco y un compuesto que, cuando se le añade
Cl3Fe aparece un color marrón de manera inmediata, indicando que es positiva.
Si el medio queda de color amarillo la prueba es negativa. Se le adiciona una
gota de reactivo de TDA para revelar la positividad si la hubiere.
● IND: Prueba del Indol
● VP: Voges-Proskauer.
● GEL: Prueba de la Gelatinasa.
● GLU, MAN, INO, SOR, RHA, SAC, MEL, AMY y ARA: Fermentación/Oxidación
de Hidratos de Carbono (Glucosa, Manosa, Inositol, Sorbitol, Ramnosa,
Sacarosa, Melibiosa, Amigdalina y Arabinosa).
● OX (Prueba de la Oxidasa), NO2 y N2 (Prueba de reducción de Nitratos), MOB
(Examen de movilidad en un porta), MaC (Sembrar en McConkey para
metabolismo de lactosa), OF-O y OF-F (Oxidación-Fermentación de
Hugh-Leifson): Estas pruebas forman parte del API pero no de la batería de 20
pruebas de los microtubos. Se realizan externamente.
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PROCEDIMIENTO
1. Preparar la cámara llenando los alveolos de agua destilada.
Preparación de la inóculo / suspensión
1. Tomar una colonia, con el asa de siembra una vez esterilizada en el
mechero, bien aislada de cada microorganismo y resuspenderla
homogéneamente en 5 mL de solución salina (1% de NaCl) o 5 mL de agua
estéril..Esta suspensión debe usarse inmediatamente después preparación.
Siembra de la galería API:
1. Realizar la prueba de la oxidasa al microorganismo problema.
2. Llenar con la suspensión de bacterias los tubos, no la cúpula, de todos los
pocillos.
3. Llenar la cúpula de los pocillos CIT , VP, GEL con la suspensión de bacterias.
4. Llenar con parafina las cúpulas de los pocillos ADH, LDC, ODC, URE, H2S
para obtener anaerobiosis.
5. Poner la galería en su propia cámara húmeda
de incubación.
6. Poner la tira en su propia cámara húmeda de
incubación. Previamente poner agua en los alvéolos
de la cámara para proporcionar una atmósfera
húmeda durante la incubación.
7. Incubar a 37ºC durante 18-24 horas.
8. La lectura de los resultados se lleva a cabo por comparación de los colores
de cada pocillo con los de las tablas de lectura. Se anotará según
corresponda resultado negativo o positivo.
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9. Si la glucosa y/o tres o más pruebas son positivas hay que efectuar el
revelado de los test que requieren reactivos, que son VP, TDA e IND.
10. Si la glucosa da negativo y/o el número de test positivos es menor o igual a 2,
se investiga el metabolismo óxido-fermentativo en un tubo de Hugh-Leifson
(dos últimas pruebas: OF-O y OF-F).
11. Se siembra en McConkey (McC) para ver el metabolismo de la lactosa.
12. Se comprueba la movilidad (MOB).
13. Reincubar la galería durante 24-48 horas.
14. Si la glucosa y/o tres pruebas dan positivo, hay que efectuar el revelado de
los test que requieren reactivos (VP, TDA e IND). En cambio, si el resultado
sigue siendo el mismo (glucosa negativo y nº test positivos igual o inferior a 2)
no se puede identificar el microorganismo como una enterobacteria.
15. Se procede a la identificación a partir de un perfil numérico.
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