República Bolivariana de Venezuela

Ministerio del Poder Popular Para la Educación Universitaria

Universidad Politécnica Territorial del Alto Apure Pedro Camejo
La Trinidad de Orichuna
Estado_Apure

MICROSCOPIA ELECTRONICA
Y
TIPOS DE MICROSCOPIOS.

Profesora:
 Nancy Viera Integrantes:
 Ballestero Darwin
C.I 27.945.366
 Izaga Rosa
C.I 23.706.027
 Mendoza Richar
C.I 17.845.407
 Nadal Maira
C.I 25.261.347

La Trinidad de Orichuna, Abril 2020

 Microscopía.

La microscopía (o también sin tilde: «microscopia») es el conjunto de técnicas y métodos

destinados a hacer visible los objetos de estudio que por su pequeñez están fuera del rango de
resolución del ojo normal.

Si bien el microscopio es el elemento central de la microscopía, el uso del mismo se requiere

para producir las imágenes adecuadas, de todo un conjunto de métodos y técnicas afines pero
extrínsecas al aparato. Algunas de ellas son, técnicas de preparación y manejo de los objetos de
estudio, técnicas de salida, procesamiento, interpretación y registro de imágenes, etc.

Exceptuando técnicas especiales como las utilizadas en microscopio de fuerza atómica,

microscopio de iones en campo y microscopio de efecto túnel, la microscopía generalmente
implica la difracción, reflexión o refracción de algún tipo de radiación incidente en el sujeto de
estudio.

Microscopía electronica.

La microscopia electrónica es una técnica que utiliza un haz de electrones acelerados para
iluminar y para producir imágenes de especímenes. Usando microscopia electrónica, niveles y la
resolución mucho mayores del aumento se pueden lograr con un microscopio liviano porque la
longitud de onda de electrones es tanto más corta que la de fotones.

Esto permite a científicos estudiar el pequeño detalle de los especímenes y observar la

ultraestructura de células, del microorganismos, de cristales y de metales, por ejemplo. Los
microscopios electrónicos son instrumentos mucho más grandes y más costosos que el
microscopio liviano.

La potencia amplificadora de un microscopio óptico está limitada por la longitud de onda de la

luz visible. El microscopio electrónico utiliza electrones para iluminar un objeto. Dado que los
electrones tienen una longitud de onda mucho menor que la de la luz pueden mostrar estructuras
mucho más pequeñas. La longitud de onda más corta de la luz visible es de alrededor de 4.000
ángstroms (1 ángstrom es 0,0000000001 metros). La longitud de onda de los electrones que se
utilizan en los microscopios electrónicos es de alrededor de 0,5 ángstroms.

Todos los microscopios electrónicos cuentan con varios elementos básicos. Disponen de un
cañón de electrones que emite los electrones que chocan contra el espécimen, creando una
imagen aumentada. Se utilizan lentes magnéticas para crear campos que dirigen y enfocan el haz
de electrones, ya que las lentes convencionales utilizadas en los microscopios ópticos no
funcionan con los electrones. El sistema de vacío es una parte relevante del microscopio
electrónico.

Los electrones pueden ser desviados por las moléculas del aire, de forma que tiene que hacerse
un vacío casi total en el interior de un microscopio de estas características. Por último, todos los
microscopios electrónicos cuentan con un sistema que registra o muestra la imagen que producen
los electrones.

La luz.

La luz (del latín lux, lucis) es la parte de la radiación electromagnética que puede ser
percibida por el ojo humano.[1] En física, el término luz es considerado como parte del campo de
las radiaciones conocido como espectro electromagnético, mientras que la expresión luz visible
señala específicamente la radiación en el espectro visible. La luz, como todas las radiaciones
electromagnéticas, está formada por partículas elementales desprovistas de masa denominadas
fotones,[2]cuyas propiedades de acuerdo con la dualidad onda-partícula explican las
características de su comportamiento físico. Se trata de una onda esférica.

La óptica es la rama de la física que estudia el comportamiento de la luz, sus características y

sus diferentes manifestaciones.

A principios del siglo XVIII era creencia generalizada que la luz estaba compuesta de
pequeñas partículas. Fenómenos como la reflexión, la refracción y las sombras de los cuerpos, se
podían esperar de torrentes de partículas. Isaac Newton demostró que la refracción estaba
provocada por el cambio de velocidad de la luz al cambiar de medio y trató de explicarlo diciendo
que las partículas aumentaban su velocidad al aumentar la densidad del medio. La comunidad
científica, consciente del prestigio de Newton, aceptó su teoría corpuscular.

Rayo de luz solar dispersado por partículas de polvo en el cañón del

Antílope, en Estados Unidos.

Propiedades de la luz.
  Propagación: Una de las propiedades de la luz más evidentes a simple vista es que se
propaga en línea recta. Lo podemos ver, por ejemplo, en la propagación de un rayo de luz
a través de ambientes polvorientos o de atmósferas saturadas. La óptica geométrica parte
de esta premisa para predecir la posición de la luz, en un determinado momento, a lo
largo de su transmisión.

De la propagación de la luz y su encuentro con objetos surgen las sombras. Si interponemos un

cuerpo opaco en el camino de la luz y a continuación una pantalla, obtendremos sobre ella la
sombra del cuerpo. Si el origen de la luz o foco se encuentra lejos del cuerpo, de tal forma que,
relativamente, sea más pequeño que el cuerpo, se producirá una sombra definida. Si se acerca el
foco al cuerpo surgirá una sombra en la que se distinguen una región más clara denominada
penumbra y otra más oscura denominada umbra.

Sin embargo, la luz no siempre se propaga en línea recta. Cuando la luz atraviesa un obstáculo
puntiagudo o una abertura estrecha, el rayo se curva ligeramente. Este fenómeno, denominado
difracción, es el responsable de que al mirar a través de un agujero muy pequeño todo se vea
distorsionado o de que los telescopios y microscopios tengan un número de aumentos máximo
limitado.

 Reflexión: Al incidir la luz en un cuerpo, la materia de la que está constituido retiene

unos instantes su energía y a continuación la reemite en todas las direcciones. Este
fenómeno es denominado reflexión. Sin embargo, en superficies ópticamente lisas,
debido a interferencias destructivas, la mayor parte de la radiación se pierde, excepto la
que se propaga con el mismo ángulo que incidió. Ejemplos simples de este efecto son los
espejos, los metales pulidos o el agua de un río (que tiene el fondo oscuro).

La luz también se refleja por medio del fenómeno denominado reflexión interna total, que se
produce cuando un rayo de luz, intenta salir de un medio en que su velocidad es más lenta a otro
más rápido, con un determinado ángulo. Se produce una refracción de tal modo que no es capaz
de atravesar la superficie entre ambos medios reflejándose completamente. Esta reflexión es la
responsable de los destellos en un diamante tallado.

En el vacío, la velocidad es la misma para todas las longitudes de onda del espectro visible,
pero cuando atraviesa sustancias materiales la velocidad se reduce y varía para cada una de las
distintas longitudes de onda del espectro, este efecto se denomina dispersión. Gracias a este
fenómeno podemos ver los colores del arcoíris. El color azul del cielo se debe a la luz del sol
dispersada por la atmósfera. El color blanco de las nubes o el de la leche también se debe a la
dispersión de la luz por las gotitas de agua o por las partículas de grasa en suspensión que
contienen respectivamente.
  Refracción: La refracción es la variación brusca de dirección que sufre la luz al cambiar
de medio. Este fenómeno se debe al hecho de que la luz se propaga a diferentes
velocidades según el medio por el que viaja. El cambio de dirección es mayor cuanto
mayor es el cambio de velocidad, ya que la luz recorre mayor distancia en su
desplazamiento por el medio en que va más rápido. La ley de Snell relaciona el cambio
de ángulo con el cambio de velocidad por medio de los índices de refracción de los
medios.

Como la refracción depende de la energía de la luz, cuando se hace pasar luz blanca o
policromática a través de un medio con caras no paralelas, como un prisma, se produce la
separación de la luz en sus diferentes componentes (colores) según su energía, en un fenómeno
denominado dispersión refractiva. Si el medio tiene las caras paralelas, la luz se vuelve a
recomponer al salir de él.

Ejemplos muy comunes de la refracción es la ruptura aparente que se ve en un lápiz al

introducirlo en agua o el arcoíris.

Ejemplo de la refracción. La pajita parece partida, por la refracción de la luz al paso desde el líquido al aire.

Descomposición:

La dispersión tiene su origen en una disminución en la velocidad

de propagación de la luz cuando atraviesa el medio. Debido a que el
material absorbe y remite la luz cuya frecuencia es cercana a la
frecuencia de oscilación natural de los electrones que están
presentes en él, esta luz se propaga un poco más despacio en
comparación a luz de frecuencias distintas. Estas variaciones en la velocidad de propagación
dependen del índice de refracción del material y el oxígeno y hacen que la luz, para frecuencias
diferentes, se refracte de manera diferente. En el caso de una doble refracción (como sucede en el
prisma) se distinguen entonces de manera organizada los colores que componen la luz blanca: la
desviación es progresiva, siendo mayor para frecuencias mayores (menores longitudes de onda);
por lo tanto, la luz roja es desviada de su trayectoria original en menor medida que la luz azul .
 En esta ilustración se muestra la descomposición de la luz al atravesar un prisma.

Tipos de lentes.

Las lentes son medios transparentes de vidrio, cristal o plástico

limitados por dos superficies, siendo curva al menos una de
ellas.

Una lente óptica tiene la

capacidad de refractar
la luz y formar una imagen. La
luz que incide
perpendicularmente
sobre una lente se refracta
hacia el plano focal, en el caso de las lentes convergentes, o desde el plano focal, en el caso de las
divergentes.

 Lentes convergentes.

Existen principalmente tres tipos de lentes convergentes:

 Biconvexas: Tienen dos superficies convexas.

 Planoconvexas: Tienen una superficie plana y otra convexa.
 Cóncavoconvexas (o menisco convergente): Tienen una superficie ligeramente concava y
otra convexa.
 Las lentes convergentes son más
gruesas por el centro que por el borde, y concentran (hacen converger) en un punto los rayos de
luz que las atraviesan. A este punto se le llama foco (F) y la separación entre él y la lente se
conoce como distancia focal (f).

Observa que la lente (2) tiene menor distancia focal que la (1).
Decimos, entonces, que la lente (2) tiene mayor potencia que la (1).
La potencia de una lente es la inversa de su distancia focal y se
mide en dioptrías si la distancia focal la medimos en metros.

Las lentes convergentes se utilizan en muchos

instrumentos ópticos y también para la corrección de la hipermetropía. Las personas
hipermétropes no ven bien de cerca y tienen que alejarse los objetos. Una posible causa de la
hipermetropía es el achatamiento anteroposterior del ojo que supone que las imágenes se
formarían con nitidez por detrás de la retina.

Si las lentes son más gruesas por los bordes que por el centro, hacen diverger (separan) los
rayos de luz que pasan por ellas, por lo que se conocen como lentes divergentes.

 Lentes divergentes.
 Existen tres tipos de lentes divergentes:

 Lentes bicóncavas: Tienen ambas superficies cóncavas.

 Lentes planocóncavas: Tienen una superficie plana y otra cóncavas.
 Lentes convexocóncavas (o menisco divergente): Tienen una superficie ligeramente
convexa y otra cóncava.

Si miramos por una

lente divergente da la
sensación de que los rayos
proceden del punto F. A éste
punto se le llama foco virtual.

En las lentes divergentes la distancia focal se

considera negativa.

La miopía puede deberse a una deformación del ojo consistente en un alargamiento

anteroposterior que hace que las imágenes se formen con nitidez antes de alcanzar la retina. Los
miopes no ven bien de lejos y tienden a acercarse demasiado a los objetos. Las lentes divergentes
sirven para corregir este defecto.
 Microscopio.

El microscopio (del griego μικρός micrós, ‘pequeño’, y σκοπέω scopéo, ‘mirar’)[1] es

una herramienta que permite observar objetos que son demasiado pequeños para ser observados a
simple vista. El tipo más común y el primero que fue inventado es el microscopio óptico. Se trata
de un instrumento que contiene dos lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto
y que funciona por refracción. La ciencia que investiga los objetos pequeños utilizando este
instrumento se llama microscopía.

Microscopio compuesto fabricado hacia 1751 por Magny. Proviene del laboratorio del duque
de Chaulnes y pertenece al Museo de Artes y Oficios, París.
El microscopio fue inventado por Zacharias Janssen en 1590. En 1665 aparece en la obra de
William Harvey sobre la circulación sanguínea al mirar al microscopio los capilares sanguíneos, y
Robert Hooke publicó su obra Micrographia.

En 1665 Robert Hooke observó con un lente un delgado corte de corcho y notó que el material
era poroso; contenía cavidades poco profundas a modo de celditas a las que llamó células. Se
trataba de la primera observación de células muertas. Unos años más tarde, Marcello Malpighi,
anatomista y biólogo italiano, observó células vivas. Fue el primero en estudiar tejidos vivos al
microscopio.

A mediados del siglo XVII el neerlandés Anton van Leeuwenhoek, utilizando microscopios
simples de fabricación propia, describió por primera vez protozoos, bacterias, espermatozoides y
glóbulos rojos. El microscopista Leeuwenhoek, sin ninguna preparación científica, puede
considerarse el fundador de la bacteriología. Tallaba él mismo sus lupas, sobre pequeñas esferas
de cristal, cuyos diámetros no alcanzaban el milímetro (su campo de visión era muy limitado, de
décimas de milímetro). Con estas pequeñas distancias focales alcanzaba los 275 aumentos.
Observó los glóbulos de la sangre, las bacterias y los protozoos; examinó por primera vez los
glóbulos rojos y descubrió que el semen contiene espermatozoides. Durante su vida no reveló sus
métodos secretos, y a su muerte, en 1723, 26 de sus aparatos fueron cedidos a la Royal Society de
Londres.

Durante el siglo XVIII continuó el progreso y se lograron objetivos acromáticos por la

asociación de Chris Neros y Flint Crown, obtenidos en 1740 por H. M. Hall y mejorados por John
Dollond. De esta época son los estudios efectuados por Isaac Newton y Leonhard Euler. En el
siglo XIX, al descubrirse que la dispersión y la refracción se podían modificar con combinaciones
adecuadas de dos o más medios ópticos, se lanzan al mercado objetivos acromáticos excelentes.

Durante el siglo XVIII el microscopio tuvo diversos adelantos mecánicos que aumentaron su
estabilidad y su facilidad de uso, aunque no se desarrollaron por el momento mejoras ópticas. Las
mejoras más importantes de la óptica surgieron en 1877, cuando Ernst Abbe publicó su teoría del
microscopio y, por encargo de Carl Zeiss, mejoró la microscopía de inmersión sustituyendo el
agua por aceite de cedro, lo que permite obtener aumentos de 2000. A principios de los años 1930
se había alcanzado el límite teórico para los microscopios ópticos, no consiguiendo estos
aumentos superiores a 500X o 1000X. Sin embargo, existía un deseo científico de observar los
detalles de las estructuras celulares (núcleo, mitocondria, etc.).

El microscopio electrónico de transmisión (TEM) fue el primer tipo de microscopio

electrónico desarrollado. Utiliza un haz de electrones en lugar de luz para enfocar la muestra,
consiguiendo aumentos de 100.000X. Fue desarrollado por Max Knoll y Ernst Ruska en
Alemania en 1931. Posteriormente, en 1942 se desarrolla el microscopio electrónico de barrido.

Microscopio compuesto fabricado hacia 1751 por Magny. Proviene del laboratorio del duque de Chaulnes y
pertenece al Museo de Artes y Oficios, París.

Clasificación del microscopio.

Los microscopios se clasifican en óptico, compuesto, estereoscópicos, petrográfico,

confocal, de fluorescencia, electrónico, de transmisión, de barrido, de sonda, de efecto
túnel, de iones en campo, digital y virtual.

El microscopio es un instrumento que permite ver los objetos de pequeño tamaño,

conforme al cual, se pueden apreciar minúsculas partes de los mismos, las cuales, no
pudieran ser percibidas por el mismo órgano ocular, debiendo recurrirse a estos para la
percepción integral del cuerpo en observación.

Tipos de microscopios.
 Existen distintos tipos de microscopios y también muchos criterios para clasificarlos. En este
artículo te presentamos una clasificación básica para identificar los tipos de microscopía más
relevantes que existen.

Microscopios según el sistema de iluminación

1) Microscopio óptico.
2) Microscopio electrónico.
3) Microscopio de luz ultravioleta.
4) Microscopio de luz polarizada.
5) Microscopio de fluorescencia.
Microscopios según el número de lentes.
1) Microscopio simple.
2) Microscopio compuesto.

Microscopios según la transmisión de la luz

1) Microscopio de luz transmitida.
2) Microscopio de luz reflejada.

Microscopios según el número de oculares

1) Microscopio monocular.
2) Microscopio binocular.
3) Microscopio trinocular.

Microscopios según la configuración de los elementos

1)Microscopios digitales.
2)Microscopio estereoscópico.

Otros tipos de microscopios

1) Microscopio confocal.
2) Microscopio de campo oscuro.
3) Microscopio de contraste de fases.

Microscopios según el sistema de iluminación.

A un nivel básico podemos diferenciar los microscopios según el medio utilizado para
iluminar la muestra. El sistema más habitual es iluminar la muestra con luz visible, dando lugar al
microscopio óptico. Sin embargo, existen alternativas.

1) Microscopio óptico.
 En el microscopio óptico la muestra es iluminada mediante luz visible. Esto significa que
existe un foco de luz apuntando hacia la muestra. Esa misma luz es conducida a través del
objetivo y del ocular hasta llegar a formar la imagen en el ojo del observador. Este es el tipo de
microscopio más habitual pero su resolución está limitada por la difracción de la luz. El aumento
máximo que se puede obtener con este tipo de microscopio alcanza alrededor de 1500x.

Muestra en un microscopio óptico.

2) Microscopio electrónico.

En el microscopio electrónico la muestra no es

iluminada con luz sino que se utilizan electrones. Los electrones impactan contra la muestra
dentro de una cámara de vacío. Existen diferentes tipos de microscopio electrónico pero su
principio de funcionamiento se basa siempre en capturar los electrones dispersados u omitidos
por la muestra y así poder reconstruir una imagen.

La ventaja principal de este tipo de microscopio es que puede obtenerse un nivel de aumento
muy superior al del resto de microscopios. Sin embargo, es necesario preparar la muestra y
colocarla en una cámara de vacío de modo que no es posible observar muestras biológicas vivas.
Los dos tipos de microscopio electrónicos principales son el microscopio electrónico de barrido y
el microscopio electrónico de transmisión
 Muestra observada en un
microscopio electrónico

3) Microscopio de luz ultravioleta.

Los microscopios de luz ultravioleta iluminan la muestra, como el nombre indica, con luz
ultravioleta. Este tipo de luz tiene una longitud de onda más corta que la luz visible utilizada en
los microscopios ópticos. La ventaja principal de utilizar esta técnica es que puede alcanzarse una
resolución mejor que con luz visible. Además, el contraste obtenido en la muestra es distinto que
en los microscopios ópticos. De este modo, con el microscopio de luz ultravioleta pueden
observar muestras que aparecen transparentes si son observadas con luz visible.

4) Microscopio de luz polarizada.

También conocido como microscopio petrográfico. Este microscopio es en realidad un tipo de

microscopio óptico al que se la han añadido dos polarizadores. Esto significa que la onda de luz
utilizada para observar la muestra tiene una dirección de oscilación concreta. Este tipo de
microscopio es muy útil para observar estructuras cristalinas de rocas y minerales.

5) Microscopio de fluorescencia.

Los microscopios de fluorescencia son aquellos que utilizan las propiedades de fluorescencia
para generar una imagen de la muestra. Este microscopio permite observar sustancias que emiten
luz propia cuando son iluminadas con una longitud de onda determinada. Para ello la muestra es
habitualmente iluminada con una lámpara xenón o con una lámpara de vapor de mercurio. Estos
microscopios incorporan además filtros de luz para aislar la luz correspondiente a la muestra.

Muestra observada en un microscopio de fluoresencia (Fuente: Zeiss Microscopy)

 Microscopios según el número de lentes.

En el caso concreto del microcopio óptico puede hacerse una distinción según el número de
lentes de su sistema óptico.

1) Microscopio simple.

Este tipo de microscopio dispone de una única lente y es más habitualmente conocido como
lupa. Aún así, con un microscopio simple pueden conseguirse grandes aumentos. Hay que
destacar que durante el siglo XVII, Antonie van Leeuwenhoek utilizó este tipo de microscopios
para conseguir el mayor aumento alcanzado hasta el momento. A día de hoy, uno de los conceptos
basados en la misma idea es el Foldscope.

Microscopio monocular

2) Microscopio compuesto.

Este tipo de microscopio es aquél que dispone de por lo menos dos lentes. Este es el caso más
habitual en todos los microscopios modernos. Normalmente los microscopios disponen de
distintas lentes tanto en el objetivo como en el ocular para corregir las aberraciones ópticas y
alcanzar una imagen con buena calidad. La invención del microscopio está asociada con la
invención del microscopio compuesto. Este apareció en los Países Bajos a finales del siglo XVI.

Microscopios según la transmisión de la luz.

Existen dos tipos básicos de microscopio óptico según el camino seguido por la luz hasta
llegar el objetivo: microscopios de luz transmitida y los microscopios de luz reflejada.

1) Microscopio de luz transmitida.

En este tipo de microscopio la luz atraviesa la muestra. Para esta clase de microscopios es
necesario preparar la muestra cortándola en láminas muy finas. La muestra se ilumina desde
debajo la platina. La preparación de la muestra hace que esta sea semitransparente y parte de la
luz pueda atravesarla y llegar al objetivo para ser observada posteriormente a través del ocular. En
general este es el sistema de iluminación más utilizado entre los microscopios ópticos.

2) Microscopio de luz reflejada.

En este caso la luz ilumina la muestra y parte de esta es reflejada y dirigida al objetivo. De este
modo es necesario iluminar la muestra desde la parte superior de la platina. Este tipo de
microscopía es utilizada para examinar materiales opacos como pueden ser estructuras metálicas,
materiales cerámicos, etc. Existen microscopios ópticos que permiten los dos tipos de iluminación
de modo que es posible observar tanto muestras semitransparentes como opacas. Los
microscopios estereoscópicos (permiten observar la muestra en tres dimensiones) son siempre de
luz reflejada.

Microscopios según el número de oculares.

Los microscopios también pueden ser clasificados según el número de oculares. En base a este
criterio puede distinguirse entre microscopios monoculares, binoculares o trinoculares.

1) Microscopio monocular.

Este tipo de microscopio dispone de un solo ocular a través del cual se puede observar la
muestra. Es el tipo más sencillo y es ideal para aficionados a la microscopía o para alguien que se
introduce en este campo. Su desventaja principal es que puede resultar un poco incómodo si tiene
que utilizarse durante largos periodos de tiempo. Por este motivo los microscopios monoculares
no son en general utilizados en ámbitos profesionales.

2) Microscopio binocular.

Los microscopios binoculares disponen, como indica su nombre, de dos oculares. Esto permite
observar la muestra simultáneamente con los dos ojos resultando en una mayor comodidad para el
usuario. Este es el tipo de microscopio más utilizado en los laboratorios de investigación. La
distancia entre los dos oculares puede regularse para adaptarse a las necesidades del usuario. No
hay que confundir el microscopio binocular con el microscopio estereoscópico. El microscopio
estereoscópico siempre es binocular. Sin embargo, no todo microscopio binocular es
estereoscópico.

3) Microscopio trinocular.
El microscopio trinocular está equipado con dos oculares para observar la muestra además de un
tercer ocular para conectar una cámara. En el caso de conectar una cámara digital esta puede
conectarse a un ordenador para ver la imágenes de la muestra en tiempo real. Con este
microscopio es posible observar la muestra y al mismo tiempo tomar fotografías o videos con la
cámara.

Microscopios según la configuración de los elementos.

Los microscopios convencionales tienen una configuración vertical. Esto significa que el foco de
luz se encuentra en la parte inferior de la estructura. A continuación hay la platina donde se coloca
la muestra y finalmente el cabezal con los objetivos y el ocular en la parte superior. Esta es la
configuración más habitual pero no la única.

Existen también los microscopios invertidos. Esto microscopios tienen una configuración
totalmente opuesta a la del microscopio vertical. La muestra es iluminada desde la parte superior
y los elementos ópticos se encuentran debajo la platina. Con este tipo de microscopio es posible
observar muestras colocadas en el fondo de un recipiente. Esto es muy útil para mantenerlas
hidratadas y poder así observar muestras vivas y procesos biológicos que duran días.

Microscopio invertido (Fuente: Zeiss Microscopy)

Microscopios digitales.

Los microscopios digitales son aquellos que capturan una imagen digital de la muestra. Esto se
consigue conectando una cámara digital en lugar del ocular. Existen microscopios digitales con
distintas configuraciones. Habitualmente deben conectarse al ordenador para poder transmitir las
imágenes y a continuación visualizarlas. También es cierto que
existen microscopios digitales con una pantalla incorporada.
Estos permiten ver la muestra en la pantalla y almacenar
imágenes que pueden transmitirse a continuación a un
ordenador mediante conexión USB o tarjeta SD.

Un tipo especial de microscopios digitales son los

microscopios USB. Estos microscopios consisten únicamente
en una lente de gran aumento y una cámara digital. El aumento que se alcanza es limitado en
comparación con un microscopio óptico convencional. Aún así son instrumentos muy versátiles y
útiles para observar objetos cotidianos. Los microscopios USB se conectan al ordenador mediante
conexión USB y permiten guardar imágenes de la muestra.

Microscopio estereoscópico.

El microscopio estereoscópico es un tipo de microscopio que permite observar la muestra de

forma tridimensional. Estos microscopios están equipados siempre con dos oculares. La imagen
de la muestra que llega a cada ocular es ligeramente distinta de modo que cuando se combinan se
consigue el efecto 3D. Este efecto no podría conseguirse si la muestra se observara con un solo
ocular.

El aumento que se consigue con el microscopio estereoscópico es inferior al que se consigue

con un microscopio óptico convencional. Sin embargo, los microscopios convencionales solo
permiten una observación bidimensional de la muestra. Los microscopios estereoscópicos son
muy utilizados en aplicaciones donde debe manipularse la muestra mientras se observa. Por
ejemplo para el montaje de circuitos o relojes.

Otros tipos de microscopios.

Además de los microscopios anteriormente presentados existen multitud de técnicas de

microscopía adicionales optimizadas para tipos de muestra específicas. Algunos de los que vale la
pena mencionar son:

1) Microscopio confocal.

Este es un tipo de microscopio de fluorescencia. En lugar de iluminar la muestra de forma

global se ilumina punto a punto de forma sucesiva y se reconstruye la imagen al final del proceso.
Este proceso de escaneado de la muestra es similar al que se produce en los microscopios
electrónicos de barrido. Este tipo de microscopio fue inventado por Marvin Minsky en 1957.

2) Microscopio de campo oscuro.

Esta técnica de microscopía consiste en iluminar la muestra oblicuamente. De este modo los
rayos de luz que llegan al objetivo no provienen directamente del foco de luz sino que han sido
dispersados primero por la muestra. Esta técnica permite ver muestras que de otro modo no serían
visibles debido a su transparencia. También tiene la ventaja que no requiere teñir la muestra para
aumentar su contraste y poder observarla.
 Muestra observada en un microscopio de campo oscuro.

3) Microscopio de contraste de fases.

La luz viaja a distintas velocidades dependiendo del medio de propagación. Esta propiedad es
utilizada en el microscopio de contraste de fases ya que la luz atraviesa la muestra con distintas
velocidades en distintas secciones. Este
efecto es amplificado para generar la imagen de
la muestra. Mediante esta técnica no hace falta
utilizar tintes y, por lo tanto, pueden
observarse células vivas. El microscopio de
contraste de fases fue inventado por Frits
Zernike en 1932 y recibió por ello el premio
Nobel de física en 1953.

Uso del microscopio.

Un microscopio es un dispositivo que magnifica una imagen permitiéndote ver estructuras

pequeñas al detalle. Si bien tienen una variedad de tamaños, los que se utilizan en casa y la
escuela suelen tener partes similares: una base, un ocular, una lente y una plataforma.

Conocer los aspectos fundamentales del uso de un microscopio permitirá que el equipo esté
bien protegido y te proporcionará una herramienta de investigación valiosa.

 Conecta el cable del microscopio en un enchufe eléctrico. Si tu microscopio utiliza

baterías no necesitarás conectarlo.

 Coloca el portaobjetos de vidrio en una superficie plana, como en un mostrador o mesa.

 Moja un hisopo de algodón y frótalo en la parte interior de tu boca.

 Frota el hisopo en la parte media del portaobjetos de vidrio.

  Coloca una cubierta para portaobjetos de vidrio en la parte superior de la mitad del
portaobjetos, cubriendo el área en la que depositaste el contenido de tu hisopo.

 Mueve los dos brazos deslizables a un costado en el microscopio.

 Coloca el portaobjetos preparado en la platina y levanta los brazos deslizables para

colocarlos sobre el portaobjetos y mantenerlo en su lugar.

 Enciende la luz del microscopio.

 Coloca tu ojo sobre el ocular del microscopio. Verás una luz brillante con objetos
borrosos en su interior.

 Gira la perilla de ajuste gruesa, que es la más grande localizada a un lado del
microscopio. Mira a través del ocular mientras giras la perilla. Notarás que el objeto
comenzará a verse más claro a medida que la giras. Una vez que el objeto se vea claro y
enfocado, deja de moverla.

 Gira la perilla de ajuste delgada, que es la más pequeña y está localizada a un costado.
Mira a través del ocular mientras giras la perilla. El objeto en el portaobjetos del
microscopio comenzará a verse muy claro y se podrán apreciar sus diminutos detalles.
Una vez que el objeto se vea claro deja de girar la perilla.

Cuándo se finaliza la observación de una muestra, hay que seguir unos pasos sencillos para
dejar el microscopio en las mejores condiciones de almacenamiento y en las mejores condiciones
para su próximo uso.

El microscopio se debe dejar con el objetivo de menor aumento en la posición de trabajo, con
la platina centrada para que no sobresalga y con la funda (normalmente de plástico) cubriéndolo.

Una de las precauciones más obvias en el uso y manejo de estos aparatos, pero a menudo
también de las más olvidadas, es no tocar nunca las lentes con los dedos. En caso de que las
lentes estén sucias, habrá que limpiarlas con papel de filtro o con papel de óptica para no rallar la
lente.

Igualmente, hay que limpiar la lente del objetivo de inmersión cada vez que se termine de usar.
Lo mejor es utilizar papel especial de óptica o, en su defecto, papel de filtro. El papel se pasa por
la lente con cuidado, con movimientos en un sólo sentido y sin frotar. Lo mejor es la limpieza
inmediata con papel sin utilizar ningún.
 Ninguno de los tornillos del sistema
mecánico deben forzarse durante su uso. Cada uno tiene un tope que no se debe forzar.

También hay que tener precaución al girar el revólver para cambiar de objetivo. Tampoco hay
que cambiar de objetivo tirando
directamente de él, para eso está la rueda
del revólver. Por último, cabe
mencionar que la platina y el resto del
microscopio han de mantenerse limpios
y secos.

Partes de microscopio.

Las partes de un microscopio se

pueden clasificar entre las que pertenecen a su sistema mecánico y las que pertenecen a su
sistema óptico.

Partes principales del microscopio óptico.

 Sistema mecánico.

Dentro del sistema mecánico se incluyen todos los elementos estructurales que dan estabilidad
al microscopio y mantienen los elementos ópticos correctamente alineados.

 Base o pie: Es la pieza que se encuentra en la parte inferior del microscopio y sobre la
cual se montan el resto de elementos. Acostumbra a ser la parte más pesante para
proporcionar suficiente equilibrio y estabilidad al microscopio. Es habitual que incluya
algunos topes de goma para evitar que el microscopio se deslice sobre la superficie donde
se encuentra.

 Brazo: El brazo constituye el esqueleto del microscopio. Es la pieza intermedia del

microscopio que conecta todas sus partes. Principalmente conecta la superficie donde se
coloca la muestra con el ocular por donde ésta se puede observar. Tanto las lentes del
objetivo como del ocular se encuentran también conectadas al brazo del microscopio.

 Platina: Esta es la superfície donde se coloca la muestra que se quiere observar. Su

posición vertical con respecto a las lentes del objetivo se puede regular mediante dos
tornillos para generar una imagen enfocada. La platina tiene un agujero en el centro a
través del cual se ilumina la muestra. Generalmente hay dos pinzas unidas a la platina que
permiten mantener la muestra en posición fija.

 Pinzas: Las pinzas tienen la función de mantener fija la preparación una vez esta se ha
colocado sobre la platina.

 Tornillo macrométrico: Este tornillo permite ajustar la posición vertical de la muestra

respecto el objetivo de forma rápida. Se utiliza para obtener un primer enfoque que es
ajustado posteriormente mediante el tornillo micrométrico

 Tornillo micrométrico: El tornillo micrométrico se utiliza para conseguir un enfoque

más preciso de la muestra. Mediante este tornillo se ajusta de forma lenta y con gran
precisión el desplazamiento vertical de la platina.

 Revólver: El revólver es una pieza giratoria donde se montan los objetivos. Cada
objetivo tiene proporciona un aumento distinto, el revólver permite seleccionar el más
adecuado a cada aplicación. Habitualmente el revólver permite escoger entre tres o cuatro
objetivos distintos.

 Tubo: El tubo es una pieza estructural unida al brazo del telescopio que conecta el ocular
 con los objetivos. Es un elemento esencial para mantener una correcta alineación entre
los elementos ópticos.

Sistema óptico.

El sistema óptico incluye todos los elementos necesarios para generar y desviar la luz en las
direcciones necesarias y así acabar generando una imagen aumentada de la muestra.

 Foco o fuente de luz: Este es un elemento esencial que genera un haz de luz dirigido
hacia la muestra. En algunos casos el haz de luz es primero dirigido hacia un espejo que a
su vez lo desvía hacia la muestra. La posición del foco en el microscopio depende de si se
trata de un microscopio de luz transmitida o de luz reflejada.

 Condensador: El condensador es el elemento encargado de concentrar los rayos de luz

provenientes del foco a la muestra. En general, los rayos de luz provenientes del foco son
divergentes. El condensador consiste en un seguido de lentes que cambian la dirección de
estos rayos de modo que pasen a ser paralelos o incluso convergentes.

 Diafragma: El diafragma es un pieza que permite regular la cantidad de luz incidente a

la muestra. Normalmente se encuentra situado justo debajo la platina. Regulando la luz
incidente es posible variar el contraste con el que se observa la muestra. El punto óptimo
del diafragma depende del tipo de muestra observada y de su transparencia.

 Objetivo: El objetivo es el conjunto de lentes que se encuentran más cerca de la muestra

y que producen la primera etapa de aumento. El objetivo suele tener una distancia focal
muy corta. En los microscopios modernos distintos objetivos están montados en el
revólver. Este permite seleccionar el objetivo adecuado para el aumento deseado. El
aumento del objetivo junto con su apertura numérica suele estar estar escrito en su parte
lateral.

 Ocular: Este es el elemento óptico que proporciona la segunda etapa de ampliación de

imagen. El ocular amplia la imagen que ha sido previamente aumentada mediante el
objetivo. En general, el aumento aportado por el ocular es inferior al del objetivo. Es a
través del ocular que el usuario observa la muestra. En función del número de oculares se
puede distinguir entre microscopios monoculares, binoculares e incluso trinoculares. La
combinación de objetivo y ocular determina el aumento total del microscopio.

 Prisma óptico: Algunos microscopios incluyen también prismas en su interior para

corregir la dirección de la luz. Por ejemplo, esto es imprescindible en el caso de los
microscopios binoculares, donde un prisma divide el haz de luz proveniente del objetivo
para dirigirlo hacia dos oculares distintos.
 Sistema de iluminación.

El sistema de iluminación está constituido por las partes del microscopio que producen o
captan, reflejan y regulan la intensidad de la luz que se utiliza para la observación microscópica.
Uno de los aspectos críticos a considerar en la microscopía óptica es la fuente de luz que se
emplea para iluminar el espécimen. Si la muestra es iluminada de manera inadecuada, la calidad
de la imagen que se obtiene se verá afectada, aun cuando se disponga de un excelente sistema
óptico. La iluminación óptima debe ser brillante, sin resplandores y en lo posible debe dispersarse
de manera uniforme en el campo de observación.

Si se emplea luz visible (fotones) es usual que al microscopio se le denomine fotónico. En sus
inicios, la microscopía se practicaba con iluminación por reflexión; se utilizaba un espejo que se
orientaba para recoger la luz solar o en su defecto, luz artificial (la luz de una vela, mechero a gas,
lámparas de aceite o petróleo) y la desviaba hacia la preparación. Este método se mantuvo
durante mucho tiempo, en parte debido al lento perfeccionamiento de las bombillas
incandescentes, que consisten en un globo de cristal en el que se ha hecho el vacío y dentro del
cual va colocado un hilo de metal (platino, carbón, tungsteno, entre otros) que al paso de una
corriente eléctrica se pone incandescente y sirve para alumbrar (50).
Con el uso de la bombilla eléctrica se suprime este espejo y los microscopios pueden utilizarse
en cualquier lugar. Sin embargo, algunos modelos de microscopios actuales, desde los más
sencillos y económicos hasta los más sofisticados, aún poseen un espejo que sirve para desviar la
luz producida por la bombilla, en el caso que ésta no se encuentre alineada con la platina.

El sistema de Iluminación está formado por la fuente de iluminación, Espejo, Condensador, y

Diafragma.

 La fuente: de iluminación consta generalmente de una lámpara incandescente de

tungsteno.

 El espejo: es necesario si la fuente de iluminación no está dentro del microscopio tiene

una cara plana y una es cóncava.

 El condensador: de luz está formado por un sistema de lentes cuya función es captar
los rayos luminosos y dirigirlos hacia la preparación que se va a enfocar.

 El Diafragma: es una abertura que controla la cantidad de luz que debe pasar por el
condensador, que se regula por una palanca lateral.

Como regla general, el sistema de iluminación está colocado debajo de la platina y la finalidad
es de iluminar mediante luz transmitida. En la mayoría de los casos el estudio de las
preparaciones histológicas se hace por transiluminación. En otros casos muy específicos se
emplea el método de luz reflejada, en el cual se ilumina la superficie del espécimen mediante epi-
iluminación (ver capítulo 3). La fuente de luz emite una radiación que es recogida por un
dispositivo denominado condensador, que a su vez forma un cono luminoso necesario para la
visualización con objetivos de mayor aumento.

Formación de imagen.

Combinando los poderes amplificadores de dos lentes, o sistemas de lentes, convergentes, se

construye el microscopio compuesto.

En esencia consta de un tubo en cuyos extremos están los dos sistemas ópticos: el más
próximo al objeto se denomina objetivo, y
el cercano al ojo del observador, ocular.

El objeto se coloca a una distancia

ligeramente mayor que el foco del objetivo, lo
que proporciona una imagen real e
invertida. Esta imagen se debe formar a una
distancia del ocular, menor que la distancia
focal del mismo. En estas condiciones, la
nueva imagen que se forma es virtual y
derecha.

Con relación al objeto que se examina, la imagen que forma el microscopio compuesto es
virtual, invertida y muy amplificada.

Si tomas una lente convergente y la mueves acercándola y alejándola de un folio blanco que
sostienes con la otra mano, comprobarás que para una cierta distancia se forma una imagen
invertida y más pequeña de los objetos que se encuentran alejados de la lente. Cuando es posible
proyectar la imagen formada decimos que se trata de una imagen real, y si no la podemos
proyectar la denominamos imagen virtual.
 Las lentes convergentes,
para objetos alejados,
forman imágenes reales,
invertidas y de menor tamaño
que los objetos.

En cambio, si miras un
objeto cercano a través de la
lente, observarás
que se forma una imagen derecha y de mayor tamaño que el objeto.

Para objetos próximos forman imágenes virtuales, derechas y de mayor tamaño.

Intenta hacer lo mismo con una lente divergente y observarás que no es posible obtener una
imagen proyectada sobre el papel y que al mirar a su través se ve una imagen derecha y de menor
tamaño que los objetos.

Las imágenes producidas por las lentes divergentes son virtuales, derechas y menores que los objetos.
 Caracteristicas e istrucciones para el uso adecuado del microscopio.

 Quitar la funda protectora del microscopio.

 Enchunfar/encender el microscopio.

 Colocar en primera instancia el objetivo de menor aumento para lograr un enfoque

correcto. Este paso es muy importante y se debe realizar siempre, ya que permitirá la
observación de una panorámica del preparado y la ubicación de áreas de interés para su
análisis posterior.

 Subir el condensador utilizando el tornillo correspondiente.

 Colocar el preparado sobre la platina con el cubre-objetos hacia arriba y sujetándola con
las pinzas/guías.

 Enfoque el preparado mirando através del ocular y lentamente mueva el tornillo

macrométrico.

 Recorra todo el preparado y haga sus observaciones. Elija el sitio donde debe seguir
observando a mayor aumento.

 Cambie el objetivo de mediano aumento (20x) y para lograr el enfoque siga moviendo
lentamente el tornillo macrométrico. Al cambiar el objetivo, la imagen debe estar
ligeramente enfocada gracias a que la mayoria de los microscopios son parafocales, es
decir, una vez logrado el primer enfoque, al pasar el objetivo de aumento inmediato
superior la imagen queda en un foco aproximado y solo se debe realizar un ajuste.

 Realice la observación y haga sus anotaciones. Determine cual es la estructura que va a

observar a mayor aumento y coloquela en el centro del campo.

 Cambie el objetivo de mayor aumento. Si realizó el enfoque de manera correcta con el

objetivo anterior, al colocar el objetivo de mayor aumento la imagen se debe enfocar
única y lentamente el tornillo MICROMÉTRICO. Nunca se debe utilizar el tornillo
macrométrico con los objetivos de mayor aumento, pues al estar éste muy cerca del
preparado, se corre el riesgo de partilo.

 Al lograr el enfoque con el objetivo de mayor aumento debe realizar la observación

moviendo constantemente el tornillo micrométrico para variar los planos de enfoque. De
igual manera, abra o cierre el diafragma para regular la intensidad de la luz y mejorar el
contraste. Haga sus observaciones.
  Una vez finalizada su observación, aleje la platina y coloque nuevamente el objetivo de
menor aumento.

 Retire la muestra.

 Limpie la lente objetivo si usó medio de inmersion, apague la/s lámpara/s.

 Cubra el microscopio con la funda protectora.

Recomendaciones: NUNCA dañar, rayar, dejar caer las lentes u otros componentes ópticos.
NUNCA forzar los controles de foco. NUNCA tocar las superficies ópticas. Durante la clase se
discutirá cuál es el procedimiento para limpiar las lentes objetivos correctamente.