PRUEBA API 20 E
INTRODUCCIÓN
API 20E es un sistema estandarizado que permite la identificación de
enterobacteriaceae y otros bacilos Gram negativos no exigentes. Esta prueba,
incluye una base de datos y 21 test bioquímicos que son los siguientes:
Prueba Reacción/ Enzimas
ONPG Beta-galactosidasa
ADH Arginina deshidrolasa
LDC Lisina descarboxilasa
ODC Ornitina descarboxilasa
CIT Utilización del citrato
H2S Producción de H2S
URE Ureasa
TDA Triptófano desaminasa
IND Producción de Indol
VP Producción de acetoína (voges- proskauer)
GEL Gelatinasa
GLU Fermentación/oxidación de glucosa
MAN Fermentación/oxidación de manitol
INO Fermentación/oxidación de inositol
SOR Fermentación/oxidación de sorbitol
RHA Fermentación/oxidación de ramnosa
SAC Fermentación/oxidación de sacarosa
MEL Fermentación/oxidación de melobiosa
AMY Fermentación/oxidación de amigdalina
ARA Fermentación/oxidación de arabinosa
OX Citocromo oxidasa
NOTA: la prueba citocromo oxidasa se hace de forma independiente a la tira.
PROCEDIMIENTO.
1. Suspender una colonia aislada en una suspensión de 5ml de solución
salina (1% de NaCl).
2. Llenar los tubos de cada pocillo con la solución inoculada (cada pocillo tiene
un tubo y una cúpula).
3. Llenar hasta la cúpula de los pocillos CIT, VP, GEL con la suspensión.
4. Cubrir con aceite las cúpulas de los pocillos ADH, LDC, ODC, URE, H2S
para obtener anaerobiosis.
5. Llenar previamente la cámara de agua y a continuación, poner la tira sobre
esta. (El agua proporciona una atmósfera húmeda durante la incubación).
6. Incubar a 37ºC durante 18-24 hrs.
7. Luego de la incubación, se anotan aquellos resultados que no necesitan ser
revelados por reactivos.
Para las pruebas que requieren ser reveladas por reactivos, se tienen en
cuenta los siguientes criterios:
Si la glucosa es negativa y los test son dos o menos de dos, no se
añade reactivos. Cuando se presenta este caso, se deben hacer otras
pruebas tales como API 20NE, API OF, API M o API 10S para la
determinación de metabolismos especiales.
Si la glucosa es positiva y/o más test son positivos, se revelan las
siguientes pruebas con los reactivos:
PRUEBA REACTIVO
TDA Añadir una gota de FeCl3 al 10%
VP Añadir una gota del reactivo 1(KOH AL
40%) y una gota del reactivo 2
(C2H5OH)
IND Añadir una gota de reactivo de
KOVACS
OXIDASA Añadir una gota del reactivo
TETRAFENILENDIAMINA
INTERPRETACIÓN.
La lectura se lleva a cabo por la comparación de los colores de cada pocillo con
los colores expuestos en la siguiente tabla:
Prueba Negativo Positivo
ONPG Sin color Amarillo
ADH Amarillo Rojo o naranja
LDC Amarillo Rojo o naranja
ODC Amarillo Rojo o naranja
CIT verde Azul oscuro o turquesa
H2S Sin precipitado negro Precipitado negro
URE Amarillo Rojo o naranja
TDA amarillo Marrón o rojo
Color rosa o anillo rosa-
IND Amarillo
rojo
VP Sin color Rosa-rojo
GEL Sin difusión Difusión de pigmento
GLU Azul o verde amarillo
MAN Azul o verde Amarillo
INO Azul o verde Amarillo
SOR Azul o verde Amarillo
RHA Azul o verde Amarillo
SAC Azul o verde Amarillo
MEL Azul o verde Amarillo
AMY Azul o verde amarillo
ARA Azul o verde amarillo
OX
Del conjunto de tripletes se obtiene un numérico de 7 cifras. Para obtener este
perfil, a cada pocillo se le dará el valor de 0, 1, 2 o 4 según los siguientes criterios:
Si la reacción es negativa se pone 0.
Si la reacción es positiva se pone: 1 si es el primer pocillo de un triplete, 2 si
es el segundo, 4 si es el tercero.
NOTA: la suma de las pruebas positivas deben ir reportadas en el siguiente
formato:
ANEXOS
PERFILES NUMÉRICOS.
0104452 Shigella flexmeri
0104452 Salmonella paratyphi A
0104504 Pasteurella multocida
0104521 Yersinia enterocolitica
0140004 Pasteurella sp.
0144042 Shigella boydii
0206042 Acinetobacter calcoaceticus
0210004 Achromobacter sp.
0210004 Alcaligenes faecalis
0210004 Alcaligenes sp.
0314000 Proteus mirabilis
1000004 Pasteurella sp.
0676001 Proteus vulgaris
1014743 Klebsiella ozaenae
1104112 Shigella sonnei
1214012 Yersinia pseudotuberculosis
1214773 Klebsiella pneumoniae
2206004 Pseudomona aeruginosa
2504752 Salmonella sp.
3005573 Enterobacter cloacae
3246527 Aeromonas hydrophilia
4004550 Salmonella cholerasuis
4004550 Salmonella tiphy
4504010 Salmonella pullorum
4604552 Salmonella sp.
5004024 Pseudomona cepacea
5044124 Vibrio cholerae
5046753 Serratia odorífera
5100100 Yersinia ruckeri
5104111 Hafnia alvei
5104542 Salmonells arizonae
5144572 Escherichia coli
5207323 Serratia rubidae
5255573 Klebsiella oxytoca
5346761 Serratia marcescens
5314173 Enterobacter gergoviae
6144204 Plesimonas shigelloides
6704752 Salmonella gallinarum
PRUEBA RapiD ONE
INTRODUCCIÓN.
El sistema RapID ONE es un micro método cualitativo que utiliza sustratos
convencionales y cromogénicos para la identificación de microorganismos
médicamente importantes, como Enterobacteriaceae y otros bacilos seleccionados
gramnegativos y negativos a la oxidasa.
El sistema RapID ONE está formado por: 1 panel con 18 pocillos ,2 reactivos
(Rapid One y Rapid spot Indole) y 1 tubo de inoculación con 2ml de solución
salina. El tubo Nº2 de la escala de mcfarland es necesario en esta prueba (no
viene incluida en el sistema).
El Panel contiene las siguientes pruebas:
Nº de Ingredientes de los
Código de la prueba
pocillo reactivos
1 URE Urea
2 ADH Arginina
3 ODC Ornitina
4 LDC Lisina
5 TET Tiol alifático
6 LIP Éster de ácido graso
7 KSF Aldehído de azúcar
8 SBL Sorbitol
ρ-nitrofenil-β,D-
9 GUR glucuronida
σ-nitrofenil-β,D-
10 ONPG galactósido
ρ-nitrofenil-β,D-glucósido
11 GLU
ρ-nitrofenil-β,D-xilósido
12 XYL
ρ-nitrofenil-n-acetil-β,D-
13 NAG glucosaminida 0
14 MAL Manolato
Prolina-β-naftilamida
15 PRO
γ-glutamil-β-naftilamida
16 GGT
17 PYR Pirrolidonil-β-naftilamida
18 ADON Adonitol
18 IND Triptófano
PROCEDIMIENTO.
1. Los microorganismos en estudio deben estar en un medio de cultivo puro,
se debe hacer una tinción de Gram y la prueba oxidasa antes de usar el
sistema.
NOTA: El microorganismo usado para la preparación del inóculo debe tener
preferentemente de 18 a 24 horas.
2. Con un asa redonda, suspender suficiente crecimiento del cultivo en la
placa de agar en el líquido de inoculación RapID (2 ml) para conseguir una
turbidez visual igual a la del estándar de turbidez Nº2 de McFarland o
equivalente. (Se debe esperar 15 minutos antes de proceder al siguiente
paso).
NOTA: Las suspensiones se deben mezclar en vortex en caso de que sea
necesario.
3. Abrir la tapa del panel sobre el acceso de inoculación, tirando de la pestaña
marcada “Peel to Inoculate” hacia la izquierda. Verter suavemente el
contenido de todo el tubo de inoculación a la esquina superior derecha del
panel. Volver a sellar el acceso de inoculación del panel, presionando la
pestaña de apertura para que vuelva a su posición original.
4. Después de añadir la suspensión de prueba, y mientras se mantiene
el panel sobre una superficie nivelada, incline el panel hacia el lado
contrario a los pocillos de reacción, aproximadamente en un ángulo
de 45º.
5. Mientras se mantiene en posición horizontal nivelada, debe inclinarse
lentamente el panel hacia delante, hacia los pocillos de reacción, hasta que el
inóculo fluya a lo largo de las depresiones de los pocillos de reacción. De esta
manera, todo el inóculo de la parte posterior del panel será evacuado.
NOTA: Examinar los pocillos de prueba. No deben presentar burbujas y deben
estar uniformemente llenos. Se aceptan ligeras irregularidades en el llenado de los
pocillos de prueba. No afectarán a su comportamiento. Si el panel está claramente
mal llenado, se debe inocular un nuevo panel y desecharse el erróneo
6. Incubar los paneles inoculados a una temperatura de 35 a 37°C en una
incubadora durante 4 horas.
7. Luego de la incubación, abrir la pestaña inferior de derecha a izquierda para
lo siguiente:
Lectura o puntuación de la prueba ADON y a continuación, añadimos
el reactivo Rapid Spot Indole y se deja actuar máximo 2 minutos para
el resultado de la prueba IND.
Añadir el reactivo Rapid One Reagent para las pruebas PRO,GGT y
PYR, se deja actuar máximo 2 minutos y se procede a hacer la
lectura correspondiente.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
1. La siguiente tabla (Rapid ONE color guide) nos muestra la coloración de los
posibles resultados positivos y negativos para cada prueba. A partir de esto,
se hace la comparación con los resultados obtenidos en la placa de Rapid
One.
2. Los resultados obtenidos serán consignados en la siguiente hoja de
resultados:
NOTA: las pruebas positivas de cada cuadrante se suman para revelar un
código de 7 dígitos.