UNIVERSIDAD NACIONAL

“SANTIAGO ANTÚNEZ DE MAYOLO”

FACULTAD DE CIENCIAS DEL AMBIENTE

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE INGENIERIA
AMBIENTAL

Práctica de laboratorio N° 05
ESPECTROSCOPÍA UV VISIBLE

Curso : Análisis Instrumental

Docente : Ing. MONTANO CHÁVEZ, Yeidy

Integrantes : CALIXTO LÓPEZ, Thalía

CARRASCO LEÓN, Rusbel
HUAYNATE GAMARRA, Darwin
HUANRI OSORIO, Roberth
JARA JULCA, Jhon
MARQUEZ, Robert

Huaraz - 2018
 I. INTRODUCCIÓN

El espectrofotómetro se usa para medir la intensidad de un espectro

determinado en comparación con la intensidad de luz procedente de una fuente

patrón. Esta comparación permite determinar la concentración de la sustancia

que ha producido ese espectro. Los espectrofotómetros también son útiles para

estudiar espectros en las zonas no visibles porque sus elementos de detección

son bolómetros o células fotoeléctricas. Los primeros se aplican especialmente

al análisis de espectros de infrarrojos, y los segundos al de espectros

ultravioletas.

Las redes de difracción pueden emplearse, igual que los prismas, tanto en los

espectrógrafos como en los espectrofotómetros.

El análisis de la calidad es indispensable para saber si una muestra de agua es

apta para el consumo humano para ello los análisis se realizan con el apoyo

de equipos como el espectro-fotómetro; que nos ayuda a determinar la

concentración de metales tales como: Aluminio, Zinc, Cobre, etc.

 II. OBJETIVOS

 Identificar y utilizar los conocimientos proporcionados por el docente

para el manejo adecuado del espectrofotómetro.

 Operar correctamente el espectrofotómetro.

 Preparar muestras utilizando las metodologías adecuadas, según lo

indicado por el docente.

 Hallar la concentración de metales como: Si, Cu, Fe, NO 2, Mn, S los

cuales están presentes en las muestras de agua, y sus concentraciones

deben pertenecer al rango indicado en los diferentes tipos de métodos.

 III. FUNDAMENTO TEÓRICO

Los métodos espectroscópicos están basados en la interacción radiación

electromagnética - materia. Encontramos con que la materia puede estar en
forma de: átomos libres o moléculas.
La espectroscopía es el estudio e interpretación de los espectros. Cuando
podemos medir algo dentro de un espectro estamos en la espectrometría.
Podemos distinguir aquí:
1.- Espectrografía. Cuando el espectro se recoge en una placa fotográfica
2.- Espectrofotometría. Cuando se miden variaciones de intensidad.

3.1. Tipos de espectroscopía:

- Espectroscopía atómica
- Fotometría de llama
- Espectroscopía de emisión
- Espectroscopía de emisión de plasma
- Espectroscopía de absorción atómica
- Espectroscopía de fluorescencia
- Espectroscopía molecular
- Espectroscopía de microondas
- Espectroscopía de infrarrojos
- Espectroscopía de visible-ultravioleta
- Espectroscopía de Raman
- Espectroscopía de RMN (resonancia magnética nuclear)

En la espectroscopía de microondas se producen cambios en los niveles de

rotación en las moléculas al interaccionar la REM con la materia. En la visible
se estudian los fenómenos de vibración, esta se encuentra ligada a cambios de
los electrones. La de fluorescencia se encuentra unida a fenomenos de
fluorescencia, la Raman al efecto de la dispersión de la luz por la materia y la
resonancia magnética nuclear al estudio de la vibración de los núcleos. En la
espectroscopía de emisión se calcula lo que la muestra emite mientras que en
la de absorción lo que la muestra es capaz de absorber.

3.2. ESPECTRO: Los espectros son una serie de colores (violeta, azul,
verde, amarillo, anaranjado y rojo, por orden) que se producen al
dividir una luz compuesta con una luz blanca en sus colores
constituyentes. Por ejemplo, el arco iris es un espectro natural
producido por fenómenos meteorológicos.
 Los aparatos empleados para analizar los espectros son:
espectroscopios, espectrógrafos y espectrofotómetros, según sean para
observar visualmente el espectro, registrarlo fotográficamente o para
medir la intensidad de sus diferentes partes.

3.3. ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA VISIBLE: La espectroscopia

ultravioleta-visible o espectrofotometría ultravioleta-visible (UV/VIS)
es una espectroscopia de fotones y una espectrofotometría. Utiliza
radiación electromagnética (luz) de las regiones visible, ultravioleta
cercana (UV) e infrarroja cercana (NIR) del espectro
electromagnético. La radiación absorbida por las moléculas desde
esta región del espectro provoca transiciones electrónicas que
pueden ser cuantificadas.
La espectroscopia UV-visible se utiliza para identificar algunos
grupos funcionales de moléculas, y además, para determinar el
contenido y fuerza de una sustancia.
Se utiliza de manera general en la determinación cuantitativa de los
componentes de soluciones de iones de metales de transición y
compuestos orgánicos altamente conjugados.
Se utiliza extensivamente en laboratorios de química y bioquímica
para determinar pequeñas cantidades de cierta sustancia, como las
trazas de metales en aleaciones o la concentración de cierto
medicamento que puede llegar a ciertas partes del cuerpo.
El principio de la espectroscopia ultravioleta-visible involucra la
absorción de radiación ultravioleta – visible por una molécula, causando la
promoción de un electrón de un estado basal a un estado excitado,
liberándose el exceso de energía en forma de calor. La longitud de onda
(λ) comprende entre 190 y 800 nm.

3.4. LONGITUD DE ONDA: se define como la distancia entre

los picos adyacentes de una onda y puede ser medida en metros,
centímetros, o nanómetros.
3.5. FRECUENCIA: es el número de ondas por ciclos
usualmente sus unidades están dadas en Hertz que son ciclos por
segundos (Hz).
3.6. ESPECTROFOTOMETRO:
 El espectrofotómetro es un instrumento que permite comparar la radiación
absorbida o transmitida por una solución que contiene una cantidad
desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la
mismasustancia.
Todas las sustancias pueden absorber energía radiante. El vidrio, que
parece ser completamente transparente, absorbe longitudes de onda que
pertenecen al espectro visible; el agua absorbe fuertemente en la región del
IR. La absorción de las radiaciones UV, visibles e IR depende de la
estructura de las moléculas, y es característica para cada sustancia
química. El color de las sustancias se debe a que absorben ciertas
longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y sólo dejan
pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbida.
Esta espectrofotometría utiliza radiaciones del campo UV de 80 a 400 nm,
principalmente de 200 a 400 nm (UV cercano) y de luz visible de 400 a 800
nm, por lo que es de gran utilidad para caracterizar las soluciones en la
región ultravioleta-visible del espectro.
Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz
monocromática (de un largo de onda particular) a través de una muestra y
medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra. Esto le
permite al fisiólogo realizar dos funciones:
1. Nos da información sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra. Esto
podemos lograrlo midiendo la absorbancia (Abs) a distintos largos de onda
() y graficar estos valores en función del largo de onda, formando un
espectrograma. Como cada sustancia tiene unas propiedades espectrales
únicas, distintas sustancias producen distintos espectrogramas. Esto se
debe a que cada sustancia tiene un arreglo de átomos tridimensional
particular que hace que cada sustancia tenga características únicas. Al ser
expuestos a la luz del espectrofotómetro, algunos electrones de los átomos
que forman las moléculas absorben energía entrando a un estado alterado.
Al recuperar su estado original, la energía absorbida es emitida en forma de
fotones. Esa emisión de fotones es distinta para cada sustancia, generando
un patrón particular, que varía con el largo de onda usado. Dependiendo del
largo de onda, será la cantidad de energía absorbida por una sustancia, lo
que logra generar un espectro particular al graficar Abs vs 
2. Nos dice cuanta cantidad de la sustancia que nos interesa está presente en
la muestra. La concentración es proporcional a la absorbancia, según la Ley
Beer-Lambert: a mayor cantidad de moléculas presentes en la muestra,
mayor será la cantidad de energía absorbida por sus electrones.
Abs = K C L
Abs: absorbancia
K: coeficiente de extinción molar
C: concentración
L: distancia que viaja la luz a través de la
muestra. (normalmente es de 1 cm)
 La cubeta promedio, que guarda la muestra, tiene dimensiones internas
de un centímetro (L). La ecuación describe una línea recta, donde el
origen es cero. Si L es constante (1.0 cm) y se conoce el valor de K,
podemos calcular C en base a Abs:
Abs / K L = C
El espectrofotómetro mide la absorbancia de una muestra en los
espectros de luz ultravioleta y visible (200 a 850 nm). El largo de onda es
determinado por un prisma que descompone el rayo de luz de acuerdo al
largo de onda escogido. Luego la luz pasa por una hendidura que
determina la intensidad del haz. Este haz atraviesa la muestra y llega a un
tubo fotográfico, donde es medido. La cantidad de luz que atraviesa la
muestra es el porcentaje (%) de tramitancia. Podemos usar esta unidad o
cambiarla a absorbancia usando la siguiente ecuación.
%T = - Log Abs.
El espectrofotómetro nos puede dar ambos valores a la misma vez,
ahorrando la necesidad de hacer los cálculos. (Tramitancia= cantidad de
luz que atravieza la mezcla).
Una característica del instrumento es la necesidad de “blanquear”
el aparato antes de cada lectura. Esto se hace colocando una cuveta con
una solución control que tenga todos los componentes de la reacción
menos la sustancia que va a ser medida en el instrumento y ajustando la
lectura a cero absorbancia. El propósito de esto es eliminar el registro de
absorbancia (background) que puedan presentar los demás componentes
de la reacción a ese largo de onda particular. Todas las moléculas
presentan absorbancia porque todas interfieren con el paso de la luz. Sólo
que la absorbancia será óptima a un largo de onda de luz específico para
cada tipo de sustancia.

3.7. ABSORBANCIA:
La absorbancia, , es la cantidad de intensidad de luz que absorbe una
muestra. Está definida como:

siendo la intensidad después de haber habido la absorción e la

intensidad de la luz que se hace incidir en la muestra.
Se suele emplear en la química analítica ya que se cumple, la
llamada, Ley de Beer-Lambert:

Siendo el coeficiente de extinción molar, la concentración y

distancia de la celda.
La ley de Beer es una ley aditiva en un determinado rango de
concentraciones, y por tanto si se tienen diferentes sustancias en una
muestra la ley de beer se tiene como:
3.8. TRANSMITANCIA:
La transmitancia o transmitencia es una magnitud que expresa la
cantidad de energía que atraviesa un cuerpo en la unidad de tiempo
(potencia).
Transmitancia óptica
La transmitancia óptica que se define como la fracción de luz incidente, a
una longitud de onda especificada, que pasa a través de una muestra.
Su expresión matemática es:

donde I0 es la intensidad del rayo incidente e I es la intensidad de la

luz que viene de la muestra.
La transmitancia de una muestra está normalmente dada
porcentualmente, definida como:

La transmitancia se relaciona con la absorbancia (o

absorbencia) A como

donde T% es el porcentaje de transmitancia y T es

transmitancia en "tanto por uno".
Notese que el término transmisión se refiere al
proceso físico de la luz pasando por una muestra,
mientras que transmitancia se refiere a una cantidad
matematica.

3.9. ESPECTROSCOPIA: es el estudio de la interacción entre la radiación

electromagnética y la materia, con aplicaciones en química, física y
astronomía, entre otras disciplinas científicas.
 Espectro de luz de una flama de alcohol.

Luz visible como parte del espectro electromagnético.

El análisis espectral en el cual se basa, permite detectar la absorción o emisión

de radiación electromagnética a ciertas longitudes de onda, y relacionar éstas
con los niveles de energía implicados en una transición cuántica.
Existen tres casos de interacción con la materia:
Choque elástico: Existe sólo un cambio en el impulso de los fotones. Ejemplos
son los rayos X, la difracción de electrones y la difracción de neutrones.
Choque inelástico: Por ejemplo la espectroscopía Raman.
Absorción o emisión resonante de fotones.

3.10. LA ESPECTROSCOPIA
La ciencia que estudia los espectros en la física y la física química es la
espectroscopia. Esta ciencia se basa en que cada elemento químico tiene su
espectro característico. Los científicos alemanes Gustav Kirchoff y Robert
Bunsen comprobaron esto en 1859 mediante la aplicación de un
espectroscopio de prisma desarrollado por ellos mismos al análisis químico.
Los dos científicos alemanes mencionados anteriormente descubrieron que
cada elemento emite y absorbe distintos tipos de ondas de luz, y que por tanto
cada elemento tiene un espectro distinto.
Como se ha indicado antes, los aparatos empleados para estudiar los
espectros son el espectroscopio, el espectrógrafo y el espectrofotómetro.

- El primero está formado por una rendija por la que entra la luz procedente de
una fuente externa, un conjunto de lentes, un prisma y un ocular. La luz que se
quiere analizar pasa por una lente colimadora, que la convierte en un haz de
luz estrecho y paralelo, y luego por el prisma. Una nueva lente enfoca las
distintas ondas de luz que salen del prisma sobre una pantalla, reflejándose en
ésta las líneas espectrales, cada una de un color diferente.
- En el segundo, la lente de enfoque es sustituida por una cámara fotográfica.
Al llegar las luces a la película se impresionan sobre la misma, y más tarde se
puede calcular su longitud de onda según sus posiciones en la película. Los
espectrógrafos son útiles en casi todas las regiones del espectro, pero como el
vidrio no transmite las radiaciones ultravioleta e infrarroja, las lentes a usar
deben de ser de otro material, como el cuarzo.
- El tercer tipo se usa para medir la intensidad de un espectro determinado en
comparación con la intensidad de luz de una fuente patrón. De esta manera se
puede determinar la concentración de la sustancia que ha producido el
espectro. Estos aparatos son muy útiles para estudiar las partes no visibles del
espectro.
También existe una variante del prisma, que se emplea para estudiar toda la
zona del espectro más allá de la zona ultravioleta. Consiste en una superficie
especular de metal sobre la cual se han trazado varias líneas paralelas con un
diamante. De esta manera, la luz se dispersa de una forma más limpia y se
consigue una resolución del espectro mucho mayor.

ANÁLISIS ESPECTRAL
La luz se emite en fotones, y la energía de cada fotón es directamente
proporcional a la frecuencia, e inversamente proporcional a la longitud de onda.
Esta energía se halla mediante la siguiente fórmula:

Donde h es el factor de proporcionalidad denominado constante de Planck, es

la frecuencia, la longitud de onda y c la velocidad de la luz en el vacío. Puesto
que al moverse los electrones de un átomo de una órbita a otra producen
energía, midiendo la longitud de onda de los fotones emitidos mediante los
espectros que producen, es posible deducir gran información sobre la
estructura y distintos modos de movimiento de los componentes del átomo o
molécula.
TRABAJOS DE NIELS BOHR
En 1913, el físico danés Niels Bohr revisó radicalmente los modelos atómicos
existentes, y llegó a la conclusión de que no eran válidos. Valiéndose de la
teoría de Planck, Bohr ideó un nuevo modelo, con estas características:
El electrón sólo puede moverse sin emitir energía en determinadas órbitas
permitidas llamadas estacionarias.
Sólo son posibles las órbitas en las que se cumple la ecuación

Donde m v es el momento lineal (masa · velocidad del electrón), r es el radio de

la órbita y n es el número cuántico. Este número indica los distintos subniveles
de las órbitas del electrón.
De todas maneras, el modelo de Bohr no consiguió explicar satisfactoriamente
los átomos con más de un electrón. Pero en 1915, el físico alemán
Sommerfield demostró que las órbitas que Bohr creía circulares también podían
ser elípticas, por lo que cada órbita resultaba ser varias, muy próximas y de
energía diferente, constituyendo subniveles de energía. De esta manera, a los
niveles de energía de Bohr les correspondía el número cuántico principal, n,
mientras que a los subniveles de energía de Sommerfield se les asignó el
número cuántico secundario, l.
Más tarde, el holandés Zeeman descubrió que las órbitas de Sommerfield
tienen orientaciones distintas en el espacio. Esto provoca el llamado efecto
Zeeman, por el cual las rayas espectrales sufren un desdoblamiento al efectuar
el análisis espectral del átomo bajo la influencia de un intenso campo
magnético. Para expresar la cuantización de esas orientaciones se introdujo el
número cuántico magnético, ml, que representa la distinta orientación de las
órbitas en el espacio dentro de una misma energía. Y ya en 1922, Stern y
Gerlach descubrieron que el electrón en cada una de las orientaciones de las
órbitas de Sommerfield podía tener un sentido de giro o su opuesto. Para
expresarlo apareció un nuevo número cuántico, el número cuántico de spin,
ms.

APLICACIONES DEL ANÁLISIS ESPECTRAL

El análisis espectral centra sus aplicaciones en dos campos principalmente:
Análisis químico: Puesto que el espectro de un elemento determinado es
absolutamente característico de ese elemento, el análisis espectral permite
estudiar o identificar la composición y la estructura de las moléculas.
Aplicaciones astrofísicas: La distancia a la que puede situarse un
espectroscopio de la fuente de luz es ilimitada, lo que permite que el estudio
espectroscopico de la luz de las estrellas permita un análisis preciso de su
estructura, especialmente en el caso del Sol. De hecho el helio fue descubierto
antes en el Sol que en la Tierra. Además permite medir con cierta precisión la
velocidad relativa de cualquier fuente de radiación.
Espectro de la luz solar
La espectroscopia también es empleada en el campo de la física nuclear, para
estudiar la influencia del tamaño y la forma del núcleo de un átomo sobre su
estructura atómica externa.

IV. MATERIALES Y REACTIVOS

4.1. Materiales.

 Vaso de precipitado
 Embudo
 Papel filtro
 Agua Residual
 4 Tubos de Ensayo
 Picetas
 Matraz

4.2. Reactivos.
Si-1A Mn-1A
Si-2A Mn-2A
HS-1A Cu-1A
HS-2A Cu-2A
HS-3A Fe-AN
NO2-AN
4.3. Equipos.
Espectrofotómetro

V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

5.1. Preparar la muestra para evaluar metales totales:

a) Tomar 100 ml de la muestra (agua residual) en un matraz y a
continuación lo vertemos sobre un vaso de precipitado.
b) Agregamos 0.5 ml de acido nítrico HNO3 (cc) y 0.5ml de agua
oxigenada H2 O2 (20%).
c) Filtramos en un Erlenmeyer.
d) Luego vertemos lo filtrado y llevamos a la cocina hasta la
sequedad.
e) Agregamos 20 ml de agua destilada.
f) Posteriormente agregamos 30 ml de agua destilada.

5.2. Preparar la muestra para metales disueltos:

a) Tomar 50 ml de la muestra en un matraz (agua residual) y a
continuación lo vertemos sobre un vaso de precipitado.
b) Filtramos en un Erlenmeyer
c) Agregamos 0.5 ml de acido nítrico HNO3 (cc) y 0.5ml de agua
oxigenada H2 O2 (20%)
d) Filtrar nuevamente la muestra.
e) Luego vertemos lo filtrado en un vaso de precipitado, y a
continuación calentamos, hasta la sequedad.
f) Agregamos 20 ml de agua destilada.
g) Posteriormente agregamos 30 ml de agua destilada.

5.3. Luego de preparar las muestras:

a) Colocar 5ml de la muestra para metales totales en cada uno de los 6
tubos de ensayo.
b) Colocar 5 ml de la muestra para metales disueltos en otros 6 tubos de
ensayo (5ml en cada uno).

5.4. Preparar 4 tubos de ensayo con 5ml de agua destilada (solución

blanca), agregar:
Para determinar Fe: añadir 3 gotas de Fe-AN.

Para determinar Cu: añadir 0.5 cucharadita de Cu-1Ay disolver, luego

añadir 5 gotas de Cu-2A.

Para determinar NO-2: añadir una cucharadita de NO2-AN, disolver.

Para determinar Mn: añadir 4 gotas de Mn-1 A y disolver, añadir también

2 gotas de Mn-2 A, disolver.

Para determinar Si: añadir 3 gotas de Si-1 A, mezclar.

Para determinar S: añadir 2 gotas de HS-1 A, 5 gotas de HS- 2 A, y 5

gotas de HS-3 A.
5.5. Llevar las muestras al espectrofotómetro, antes de colocar la muestra
que se quiere estudiar, colocar la muestra en blanco para la selección de
filtro, posteriormente colocar la muestra de agua a ser estudiada.
 VI. RESULTADOS

ELEMENTO METODO LIMITES DE CONCENTRACIÓN OBSERVACIONES

NUMERO LECTRURA
(mg/L)
(mg/L)

Azufre (S) 100 0.25 - 4 *0.01 El asterisco indica que el resultado

está por debajo de los límites de
lectura del equipo. Si deseamos
Cobre (Cu) 042 0.20 - 6 *0.06 consideramos este resultado, si no lo
dejamos.
Hierro (Fe) 033 0.20 - 2.5 1.99 Hay presencia de hierro.
Nitrito (NO-2) 063 0.05 - 3 0.42 Hay presencia de nitrito.
Silicio (Si) 092 0.1 - 5 ---- Puede que haya o no aluminio en la
muestra, si lo hay esta en
pequeñísimas concentraciones que se
consideran insignificantes o
despreciables.
Manganeso 046 0.5 – 10 1.9 Hay presencia de manganeso.
(Mn)
Posibles fuentes de error:

 No haber preparado adecuadamente el blanco.

 Medir las concentraciones de los metales, mucho después del tiempo
estipulado, ya que conforme pasa el tiempo la lectura del equipo tendrá
un mayor margen de error.
 No realizar adecuadamente la medición de los volúmenes solicitados
para la muestra y para la adición de los reactivos.
 Que los materiales no estén limpios o libres de agentes externos que
alteren significativamente los resultados.
 Que la superficie de la cubeta haya tenido alguna capa de suciedad o
grasa al momento de realizar la medición con el espectrofotómetro.
 No realizar una adecuada medición con el espectrofotómetro (error
operacional). Por ejemplo, insertar el código erróneo para un
determinado análisis

RECOMENDACIONES

 Saber calibrar y manejar el equipo espectroscópico.

 Considerar las buenas practicas de laboratorio para el uso de la
actividad.
 Ser exactos y eficientes al momento de añadirlos reactivos a los tubos
de ensayos para obtener datos precisos.
 CONCLUSIONES

 El uso del espectrofotómetro se realizó sin ningún inconveniente, con las

indicaciones previas del docente.

 Se preparó las muestras haciendo uso de la guía de laboratorio y previa

explicación del docente.

 Las concentraciones de los siguientes metales analizados en la muestra

tomada fueron los siguientes: Si=0mg/l, Cu=*0.06mg/l, Fe=1.99mg/l,

NO2=0.42mg/l, Mn=1mg/l y S=ö.01mg/l.

 BIBLIOGRAFÍA

 GONZALES, R. (2004). calibración de espectrómetro ultravioleta visible.

CASMET. Querétaro. México.
 GONZALES, C. (2002). introducción al análisis instrumental. Ariel
ciencia.
 Brunatti, c.,Martin A.(S/A). introducción a la espectroscopia de absorción
molecular ultravioleta, visible e infrarrojo cercano.
 [Link]
 [Link]
 [Link]
Laboratorio-Quimica-Analitica-UNALM-Informe-N-9