METODOS GENERALES DE ANALISIS MICROBIOLOGICO DEL AGUA
NUMERO MÁS PROBABLE
Angelly Garrido, Jesús Díaz, Danny Ramos, Darluvin Hernández
Universidad de Córdoba (Colombia), Facultad de Ciencias de la Salud,
Bacteriología
Análisis microbiológico de aguas
Introducción
La determinación de microorganismos coliformes totales por el método del
Número más Probable (NMP), se fundamenta en la capacidad de este grupo
microbiano de fermentar la lactosa con producción de ácido y gas al incubarlos
a 35°C durante 48 h., utilizando un medio de cultivo que contenga sales
biliares. Esta determinación consta de dos fases, la fase presuntiva y la fase
confirmativa.
En la fase presuntiva el medio de cultivo que se utiliza es el caldo lauril sulfato
de sodio el cual permite la recuperación de los microorganismos dañados que
se encuentren presentes en la muestra y que sean capaces de utilizar a la
lactosa como fuente de carbono. Durante la fase confirmativa se emplea como
medio de cultivo caldo lactosado bilis verde brillante el cual es selectivo y solo
permite el desarrollo de aquellos microorganismos capaces de tolerar tanto las
sales biliares como el verde brillante.
La determinación del número más probable de microorganismos coliformes
fecales se realiza a partir de los tubos positivos de la prueba presuntiva y se
fundamenta en la capacidad de las bacterias para fermentar la lactosa y
producir gas cuando son incubados a una temperatura de 44.5°C por un
periodo de 24 a 48 h.
Finalmente, la búsqueda de Escherichia coli se realiza a partir de los tubos
positivos de caldo EC, los cuales se siembran por agotamiento en medios
selectivos y diferenciales y posteriormente realizando las pruebas bioquímicas
básicas a las colonias típicas.
Objetivos
Adquirir los conocimientos relacionados con la determinación de coliformes
totales y fecales por el método número más probable.
Evaluar la calidad de muestras de agua mediante la búsqueda de
microorganismos coliformes totales y coliformes fecales.
Diferenciar los organismos coliformes totales de los microorganismos
coliformes fecales.
Equipo y Materiales
Incubadora a 35 0C+/- 2 OC
Pipetas bacteriológicas de 1 mL estériles
Gradillas
Tubos tapa rosca de 18 x 150 y 20 x 180mm
Caldo Lauril Sulfato Doble concentración
Caldo Lauril Sulfato simple concentración
Caldo Brilla
Agua destilada estéril
Resultados
1. Se observó la presencia de turbidez y producción de gas en un solo tubo
de la primera serie en Caldo Lauril sulfato doble concentración, dando
un resultado positivo presuntivo e indicando la presencia de
microorganismos coliformes totales en la muestra de agua de río. Se
procedió a realizar la re-siembra en los medios EMB para confirmar
coliformes totales y en los medios SIM y Caldo BRILLA para confirmar
coliformes fecales.
2. Luego esperar el tiempo el tiempo establecido de incubación para cada
medio de cultivo, se observó crecimiento en el Medio EMB con colonias
verde brillante fermentadoras de lactosa confirmando la presencia de
coliformes totales. En el Medio SIM mostró resultado positivo para la
prueba de indol luego de agregar el reactivo de kovacs, en el Caldo
BRILLA se evidenció la presencia de gas y turbidez. Estos resultados nos
confirman la presencia de Coliformes fecales en la muestra de agua de
rió.
Según la tabla de NMP el crecimiento en un solo tubo de la primera serie nos
da un algoritmo igual a 1-0-0 y el cual nos da un índice de 2, que al ser
multiplicado por nuestro factor de dilución 1:1000, el resultado es igual a
2.000 NMP de Coliformes Totales en 100 mL
Conclusión
Podemos concluir que la muestra de agua río no cumple con las características
sanitarias para consumo humano según los resultados obtenidos iguales a
2.000 NMP de Coliformes Totales en 100 mL y presencia de coliformes
fecales que me indican que el agua ha sido expuesta contaminación fecal. A
pesar de ser agua de río que nunca ha sido tratada y se encuentra expuesta a
múltiples factores que podrían ser tomados como contaminantes, no presenta
una exagerada carga microbiana teniendo en cuenta que solo hubo
crecimiento en un tubo y por los resultados obtenidos en NMP.
Bibliografía
INVIMA. Manual de Técnicas de Análisis, para Control de Calidad Microbiológico de alimentos
para Consumo Humano. 1998.
ESCOBAR BEATRIZ. Manual de técnicas de Análisis Microbiológico de Alimentos. 1993
Técnicas para la enumeración de microorganismos: analisis microbologico del agua y de otras
diversas muestras. (02 de 2012). Obtenido de
[Link]
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