UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA

CURSO: QUÍMICA ANALÍTICA – LABORATORIO

INFORME DE LA PRÁCTICA N° 02

TÍTULO: DETERMINACIÓN DE NITRÓGENO ORGÁNICO - KJELDAHL

Alumno Código
Huaman Velasquez Alejandro 20070118
Paucar Altamirano, Víctor 20160137
Rosas Delgado, Karla 20160140
Valle Tito, Samantha 20160142

 Horario de práctica: Jueves 11:00 am – 13:00 pm

 Fecha de la práctica: 06 de setiembre del 2018

 Fecha del informe: 13 de setiembre del 2018

LA MOLINA – LIMA – PERÚ

 I. OBJETIVOS

 Determinar el porcentaje de proteína en la muestra.

 Familiarizarse con el método de Kjeldahl.

II. RESUMEN

En la presente práctica determinaremos el porcentaje de proteínas en una

muestra de quinua, haciendo uso del método de Kjeldahl.
Para la realización de la práctica se hizo uso del método de Kjeldahl el cual se
dividió en tres partes: digestión, se utilizó la muestra de ceniza ya digestada
horas antes la cual se pone a disolver; alcalinización arrastre y captura de
amoniaco en ácido, se hizo uso de los siguientes reactivos: hidróxido 20N,
indicador de fenolftaleína, agua destilada y la muestra de ceniza disuelta; por
último la titulación, teniendo también como sustancias reactivas al hidróxido de
sodio 0.096 M en la bureta para la titulación, indicador de fenolftaleína y el
amonio proveniente de la cámara de muestra, el fin de este procedimiento se
indica en el cambio de color de incoloro a rojo grosella. Obteniéndose así el gasto
de hidróxido de sodio el cual es usado para determinar la cantidad de nitrógeno
orgánico, y este al ser multiplicado por un factor de conversión da como resultado
el porcentaje de proteína contenido en la muestra.
Al final de la práctica se obtiene un % de nitrógeno, por lo tanto, de proteína.

III. INTRODUCCIÓN

Esta práctica tiene como principal fin el de Familiarizarse con un método de

obtención de porcentaje de proteína (Método Kjeldahl) en una muestra, y sus
respectivos fundamentos fisicoquímicos y procedimientos analíticos a lo largo
del proceso.
IV. PARTE EXPERIMENTAL
 V. DISCUSIONES

La determinación de proteína en quinua se llevó a cabo por el Método Kjeldahl,

el cual es un método no extractivo. El método Kjeldahl tiene aplicación en todos
los alimentos, siendo su fundamento la determinación de nitrógeno. (Torres-
Eurofins)

La quinua es considerada una semilla a pesar de ser consumida como cereal.

Entonces, el factor de conversión que se debió usar es 5.3 (que es el de las
semillas), en reemplazo del 6.25. (FAO)

A continuación, se presenta una tabla con la composición química y valor

nutricional de la quinua.

El valor de peso de las muestras es 0.5300 g y 0.4640 g, siendo el porcentaje

de proteínas encontrada es 15.8292% y 19.0765%. Esta cantidad excede a lo
establecido por FAO.

Esto podría explicarse por algunas desventajas en el Método de Kjeldahl, como

la interferencia de nitrógeno no proteico (Torres- Eurofins). También podría
haberse visto afectado por una mala práctica de laboratorio, con
instrumentalización contaminada anteriormente.

VI. CONCLUSIONES

- El porcentaje de nitrógeno para la primera prueba fue de 2.5327%.

- El porcentaje de proteína en la primera prueba fue de 15.8292%.

- El porcentaje de nitrógeno para la segunda prueba fue de 3.0522%.

- El porcentaje de proteína en la segunda prueba fue de 19.0765%.

VII. CUESTIONARIO

1. ¿Cuál es el título, propósito e hipótesis de la práctica 2?

El título de la práctica es Volumetría ácido-base - Determinación de nitrógeno
orgánico con el método de Kjeldahl.
El propósito de la práctica es determinar la concentración de nitrógeno amoniacal
en una muestra de quinua por la técnica de la volumetría ácido-base por
retrovaloración titulando con NaOH estandarizado y aplicando las leyes de la
estequiometria.
La hipótesis es que la concentración de amoniaco, NH3, una base de Bronsted y
Lowry porque acepta iones H+ formando amonio NH4+, puede determinarse
desprendiendo y arrastrándolo como gas NH3 con vapor de agua en una reacción
ácido-base usando la técnica de la retrovaloración y aplicando las leyes de la
estequiometria.

2. ¿Cómo demuestra que el resultado reportado por usted es confiable?

Al momento de realizar el proceso del método de Kjeldahl, seguimos los pasos uno
a uno con ayuda del encargado de prácticas, evitando grandes errores. Y al
momento de calcular ya sea el porcentaje de nitrógeno como el de proteínas

3. ¿Cómo demuestra usted que trabajó de manera segura?

Se demuestra que se trabajó de manera segura, ya que ninguno de los miembros
del grupo sufrió algún percance debido a que se usó la implementación necesaria
para estar dentro del laboratorio (mandil, guantes) y además se siguió las normas
establecidas en el Manual de Buenas Prácticas de Laboratorio.

4. ¿Cómo demuestra usted que el impacto ambiental de su actividad en el

laboratorio fue mínimo?
Los residuos de las operaciones y procesos que realizamos fueron desechados en
sus respectivos lugares designados, y al momento de la titulación, la porción de
NaOH que no se gastó fue colocada nuevamente a su envase original.

5. Interprete el fundamento analítico para la determinación de proteínas por

cada uno de los siguientes métodos:

 Método de Biuret: “Se basa en la formación de un complejo de color violeta

en medio básico entre el Cu2+ y los grupos NH de los enlaces pepiticos. La
intensidad de coloración es directamente proporcional a la cantidad de
proteínas (enlaces peptídicos).” (Fernández y Galván 2006)

 Método de Lowry: “Se basa en la asociación de dos reacciones

complementarias: 1) Reacción del Biuret y 2) Reactivo de Folin-Ciocalteu, en
ella los grupos -OH reductores junto con los complejos cuproprotéicos de la
reacción del Biuret, reducen el reactivo de Folin, el cual vira a color azul
oscuro.” (Fernández y Galván 2006)

 Método del ácido Bicinconínico (BCA): “El ácido bicinconínico, sal sódica,
es un compuesto capaz de formar un complejo púrpura intenso con iones
 Cu1+ en medio alcalino. Este reactivo forma la base de un método analítico
capaz de monitorizar el ión cuproso producido en una reacción entre las
proteínas con Cu2+ en medio alcalino (reacción de Biuret). La estabilidad del
reactivo y el cromóforo proporciona un método para la cuantificación de
proteínas que es sencillo, rápido, muy sensible, y que muestra una gran
tolerancia a compuestos que afectan a otros métodos.” (Fernández y Galván
2006)

 Método de absorción UV a 28nm: “Se basa en la absorción a 280 nm., la

cual se atribuye atribuye al grupo fenólico de la tirosina y al grupo indólico
del triptófano.” (Verdini 2015)

 Método de adhesión de colorante: “La muestra proteica se mezcla con una

cantidad necesaria conocida de un colorante aniónico en una solución buffer.
2as proteínas se unen al colorante para formar un complejo insoluble. &e
mide el colorante no adherido, soluble posterior al equilibrio de la reacción y
la remoción del complejo insoluble por centrifugación y filtración. El colorante
no adherido está inmersamente relacionado al contenido proteico de la
muestra.” (Verdini 2015)

 Método de Bradfort: “Se basa en la unión de un colorante, Comassie Blue

G-250 (también Serva Blue) a las proteínas. El colorante, en solución ácida,
existe en dos formas una azul y otra naranja. Las proteínas se unen a la
forma azul para formar un complejo proteína-colorante con un coeficiente de
extinción mayor que el colorante libre. Este método es sensible (1-15 µg),
simple, rápido, barato y pocas sustancias interfieren en su determinación.
Entre las sustancias que interfieren están los detergentes y las soluciones
básicas.” (Fernández y Galván 2006)

 Método de Ninhidrina: “Es utilizada para visualizar las bandas de

separación de aminoácidos por cromatografía o electroforesis cuantitativos
para la determinación de aminoácidos. Reacciona con todos los aminoácidos
alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando una coloración que varía de
azul a violeta intenso. Este producto colorido (llamado púrpura de Ruhemann)
se estabiliza por resonancia, la coloración producida por la ninhidrina es
independiente de la coloración original del aminoácido.
Esta prueba es positiva tanto para proteínas como para aminoácidos. En
aquellos casos donde no da positiva la prueba de Biuret, da positiva la de
ninhidrina, e indica que no hay proteínas pero sí hay aminoácidos [Link]
un ph 4 y 8.” (González 1997)

 Método turbidimétrico: “Se basa en la medición de la turbidez resultante de

la precipitación de proteínas; es decir, mide la disminución de la luz
transmitida a través de una suspensión de partículas utilizando para ello un
espectrofotómetro.” (UJAEN 2006)
6. Un determinado cereal contiene 16% de proteínas. Calcular el peso del cereal
que se tomaría como muestra para que al analizar con el método de kjeldahl del
ácido bórico se utilice 50ml de HCl 0.025 M; (factor de conversión =5.7)

7. Una muestra de leche desecada pesa exactamente 1 g y se analiza por el método

de Kjeldahl. El amoniaco se recoge en 50 mL de HCl 0.122 M y el exceso de ácido
gasta 20.7 mL de NaOH 0.145 M. Calcular el % de proteínas:

8. Una muestra de 0.5g embutido es analizada por la técnica de kjeldahl

(modificación ácido bórico). El gasto de HCl 0.116M fue de 7.2ml. Calcular el % de
proteínas totales en la muestra.

9. Un gramo de un fertilizante comercial es analizado por el procedimiento de

Kjeldahl. El amoniaco destilado es recibido en 30 mL de solución de ácido bórico
al 2%. Finalmente se necesitaron 45.32 mL de HCl 0.182 M. Calcular el % de
nitrógeno en el fertilizante:
10. ¿Cuál es el peso en gramos de la muestra que se analizará para que por la
técnica de kjeldahl, variante ácido bórico, el gasto HCl 0.1M consumido en la
titulación final sea igual al porcentaje de proteínas totales de la muestra?

11. Una muestra impura de 0.25 g de urea es analizada por la técnica de [Link]
gasto en la valoración final fue de 4.42 ml de HCl 0.35 M. Calcular el porcentaje
de pureza de la muestra.

n(H2BO3)=n(HCl)=M(HCl)xV(HCl)=0.35 Mx0.00442 L=0.0015470 mol.

Murea=60.06 g/mol.

n(urea)=2xn( H2BO3)=0.0030940.

m(urea)=Mureaxn(urea)=0.18583 g.

%pureza=m(urea)/m(muestra)=(0.18583/0.25)X100=74.332%.

12. Se sabe que un embutido tiene 20.09 de proteínas totales. ¿Cuál será el
volumen de HCl 0.125M que se gastará en la valoración final si se analiza una
muestra de 0.875g por la técnica de kjeldahl?
VIII. BIBLIOGRAFÍA

- Fernández, E; Galván, A. 2006. Métodos para la cuantificación de proteínas (en

línea). Departamento de Bioquímica: 1-7. Disponible en:
[Link]
+la+cuantificaci?n+de+prote?nas#1.

- Verdini, R. 2015. Análisis Del Contenido De Proteínas En Los Alimentos 2015. :1-
54.

- González Rodríguez, Lucia. Manual de Laboratorio Bioquímica I. Facultad de

Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Nacional de Colombia. Bogotá
1997.

- UJAEN. 2006. Métodos para el análisis de proteínas (en línea). : 12. Disponible
en: [Link]
- Marcela Torres- Eurofins. METODOLOGIAS ANALITICAS APLICABLES AL
ETIQUETADO NUTRICIONAL. MÉTODOS PARA ANALISIS DE PROTEINA
(Ley 20606)
[Link]
Lic.-Q.-[Link]
- Nutricion y alimentacion de peces y camarones cultivados
manual de capacitación. FAO.
[Link]
- Quinua. FAO. [Link]