UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS ESPE
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS DE LA VIDA Y AGRICULTURA
CARRERA DE INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA
INFORME DE RESULTADOS
ASIGNATURA: Laboratorio - Sistemas Biológicos
PERIODO LECTIVO: Marzo – Julio 2019
TÍTULO DE LA PRÁCTICA: USO DE MICROSCOPIO
NRC: 5650 FECHA: 23/05/2019
NOMBRES: Erick Calvache, Leonardo Muzo, Jeimy Calahorrano
N° DE PRÁCTICA: 03
OBJETIVOS:
Objetivo General
Conocer el funcionamiento, componentes, cuidados y limpieza del microscopio
óptico y el microscopio estereoscópico.
Objetivos Específicos
Conocer las diferentes partes del microscopio compuesto y sus respectivas
funciones.
Reconocer la importancia del microscopio en el desarrollo de las ciencias
biológicas.
Distinguir los tipos de microscopios, conjuntamente con su utilidad y manejo.
RESULTADOS:
CONCLUSIONES:
El microscopio es un instrumento de laboratorio que se utiliza como herramienta
que permite, describir las características y función de distintos organismos
unicelulares y pluricelulares.
La microcopia óptica ha sido una herramienta básica para el desarrollo de la
microbiología y sigue siendo un instrumento muy útil en la investigación
microbiológica.
Se utilizan en la actualidad varios tipos de microscopios ópticos: de campo claro,
de contraste de fases, campo oscuro y florescencia. También hoy en día se
manejan también la microscopia de contraste de interferencia, fuerza atómica y
con focal y la microscopia electrónica.
CUESTIONARIO:
1. Cuando utilizó el microscopio, ¿las imágenes se observaron derechas o
invertidas? ¿Y por qué?
Se observa la imagen invertida porque cada lente hace converger los rayos
luminosos que la atraviesan. El objetivo forma una imagen real, aumentada e
invertida.
2. Cuando movió el tornillo hacia la derecha, izquierda, abajo y arriba, ¿hacia
dónde se desplazó la imagen?
La imagen se mueve conforme se vaya manipulando los diferentes tornillos del
microscopio, como son el micrométrico y micrométrico que sirven para el
enfoque y los mandos movimiento de platina que nos ayudan a explorar la
muestra de izquierda a derecha, de atrás hacia adelante.
3. Explique las razones porque NO deben tocarse los lentes de un microscopio
con los dedos.
Porque podrían quedar la huella en la superficie de los lentes,
y al removerlas se podría correr el riesgo de dañar su superficie,
que es muy precisa y delicada.
4. Consulte sobre la apertura numérica, poder de resolución y amplificación
La A. N. de un objetivo esta impresa en el objetivo junto con otras
especificaciones del objetivo. Esta puede variar desde 0.04 para objetivos de
bajo aumento hasta 1.3 o 1.4 para objetivos apocromáticos de altos aumentos
para uso con aceite de inmersión.
La A. N. de un objetivo se define por:
A. N. = I.R. sen θ
Donde I.R., es el índice de refracción del medio, por ejemplo, aire, agua, o
aceite, y θ es la mitad del ángulo del máximo cono de luz que sale o entra al
objetivo.
Incrementar el índice de refracción del medio entre el lente frontal del objetivo y
la muestra da como resultado una mayor A. N. efectiva de trabajo. Los objetivos
están disponibles para agua (IR = 1.33), glicerina (IR = 1.47) y aceite de
inmersión (IR = 1.51) aun cuando algunos de estos objetivos, especialmente los
antiguos, generalmente no son intercambiables sin incurrir en artefactos de
imagen.
Un objetivo con gran A. N. colecta más luz, brinda una imagen más brillante y
es capaz de definir detalles más finos (por ejemplo, tienen un mayor poder de
resolución) comparado con un objetivo con menor A. N. La relación entre
imagen e intensidad está dada por:
A. N. 4/AT2
Donde AT son los Aumentos Totales
5. Investigue sobre las técnicas de luz ultravioleta, fluorescencia, contraste de
fases, campo oscuro, polarización y luz reflejada.
Microscopía de luz transmitida - campo claro
Es el método de microscopía óptica más usual, ya que con su ayuda se pueden
observar sencilla y rápidamente los preparados bien contrastados o teñidos ([Link]. frotis
sanguíneos).
Microscopia de luz trasmitida- campo oscuro
Se utiliza para preparados biológicos no teñidos, tales como bacterias o cultivos
celulares vivos, muy a menudo no o casi no se pueden reconocer en luz transmitida -
campo claro debido a su transparencia. En campo oscuro solamente los rayos de luz
difractados y dispersados, que son importantes para Is formación de la imagen,
penetran en el objetivo, mientras que los haces de luz directos, no influenciados, pasan
por delante del objetivo.
Microscopia de luz transmitida- Contraste de fases
El método del contraste de fases utiliza los moduladores ópticos "diafragma anular de
fases y anillo de fases", así como los procedimientos de interferencia en la formación
de la imagen intermedia, para convertir las tenues diferencias de fases en diferencias
de intensidad y color visibles por los [Link] canal óptico anular, definido por el
diafragma anular de fases y el anillo de fases, sirve para atenuar las partes de luz
intensas y directas, y ocasionar un desplazamiento de fase constante, Las partes de
luz indirectas difractadas en diferentes componentes de las células, por el contrario,
pasan por delante de este canal óptico y son influenciadas en cuanto a sus fases por
las diferencias de los índices de refracción y espesores en el preparado.
Microscopia de luz transmitida-Constraste Diferencial Interferencial
La luz polarizada linealmente por un polarizador es desdoblada en dos rayos
parciales por un prisma birrefringente. Estos rayos atraviesan a poca distancia dos
detalles adyacentes del preparado y experimentan allí distintas diferencias de
trayectorias a causa de las diferencias en el índice de refracción y el espesor del
preparado. Luego, los dos rayos parciales son unidos en un segundo prisma
birrefringente. y, habiendo atravesado e analizador, tienen la misma dirección de
oscilación. Así, ambos rayos parciales pueden interferir entre si en la imagen
intermedia, siendo convertidas las distintas diferencias de trayectorias en diferentes
valores acromáticos (intensidades). Posteriormente, un compensador λ (placa
lambda) convierte los valores acromáticos en colores.
Microscopia de luz reflejada- Epi-fluorescencia
Gracias a una lámpara especial, generalmente de mercurio, que se coloca en el
microscopio y que actúa emitiendo una luz excitadora de los fluorocromos, con los
que se tiñen las muestras a observar. El método de la epi-fluorescencia posibilita la
representación bien contrastada de estas sustancias fluorescentes en los colores típicos
para la fluorescencia. En el microscopio para epi-fluorescencia, la luz generada por
esta lámpara potente pasa por un filtro antitérmico para llegar al filtro excitador
(pasabanda). La radiación de excitación de ondas cortas filtrada es reflejada por un
separador de rayos dicromático y enfocada por el objetivo al preparado.
Microscopía Confocal
La microscopía confocal produce un aumento significativo de la resolución óptica y
del contraste de las imágenes, ventajas que la convierten en una herramienta
imprescindible en la obtención de imágenes de alta resolución y en estudios de
colocalización. La microscopía confocal de reflexión sigue los mismos principios que
la anterior, en este caso se recoge la luz reflejada por la muestra.
BIBLIOGRAFIA:
Gray, P. (1964). Handbook of Basic Microtechnique. Mc Graw Hill Nook Co. New
York. 302 pp.(2001). Instrucciones de manejo. Axiostar plus.
Microscopio de luz transmitida y Fl.(2002). Stereomicoscopes. Stemi DV4. Operation
Manual. Carl Zeiss Ligth. Microscopy. Gottingen, Germany.