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11- INCLUSIÓN
.La parafina es una sustancia de aspecto ceroso que está formada
por mezclas de hidrocarburos saturados. A temperatura ambiente
es sólida y su punto de fusión puede variar entre 40 °C y 70 °C
según la composición de la mezcla de hidrocarburos. Así,
parafinas más duras a temperatura ambiente tienen un punto de
fusión mayor, mientras que las más blandas uno menor. Es
recomendable una dureza mayor para incluir muestras más duras. Las parafinas más
usadas tienen un punto de fusión en torno a los 60 °C.
La parafina no es miscible con agua, mientras que todos los tejidos están formados
principalmente por agua. Además, la mayoría de los fijadores son soluciones acuosas.
Esto implica que para que la parafina líquida pueda penetrar completamente en el tejido
ha de sustituirse el agua por un solvente orgánico. Esto se consigue mediante
la deshidratación del tejido en alcoholes, normalmente etanol, de gradación creciente
hasta alcohol de 100°. La deshidratación debe ser completa porque de no ser así
afectará a la infiltración posterior de la parafina. Posteriormente se transfiere el tejido a
un líquido que es miscible tanto con el alcohol de 100° como con la parafina,
denominado sustancia
intermediaria, como es el
benceno, xileno, tolueno o
el óxido de propileno, entre
otros. Estas sustancias son
normalmente aclarantes
por lo que comprobando la
translucidez de la pieza
podemos cerciorarnos de la
penetración de la sustancia
intermediaria en el tejido. El
tiempo de incubación de la
pieza en algunos de estos
líquidos intermediarios
Porque donde esté vuestro tesoro, allí estará también vuestro corazón
Mateo 6:21
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como el tolueno o xileno no debe ser excesivo puesto
que estas sustancias endurecen la pieza y crean
problemas al hacer las secciones.
Por último se pasa el tejido a parafina
previamente licuada en una estufa regulada a la
temperatura apropiada para dicho tipo de parafina.
Tras el embebimiento completo de la muestra se vierte
parafina líquida en un molde, se introduce la muestra
y se coloca según la orientación deseada de corte y se
deja solidificar a temperatura ambiente.
*METODOS
1. El método de inclusión en parafina.- Es la más
usada la más simple para trabajar habitualmente y
para obtener placas permanentes, así se las puede
almacenar y mantener.
2. El método de inclusión en celoidina.- Es
adecuada para la obtención de cortes de tejidos grandes en aquellos que contienen
grandes cavidades, en aquellos tejidos que tienden a colapsarse, por ejemplo: Ojo y
embriones, este método es caro lento y tedioso, y los cortes no son tan delgados como
con el método de inclusión de parafina. Otra desventaja de la celoidina puede causar
encogimiento y distorsión en los tejidos.
3. El método de inclusión en gelatina.- La gelatina es una sustancia hidrosoluble
utilizada en la formación de bloques para realizar cortes con el micrótomo a congelación
o con el criostato, se utiliza en casos en que los tejidos no sean sometidos por las fases
de deshidratación, diafanización, e impregnación, generalmente se lo utiliza también
para pruebas histoquímicas donde por este método se preservan enzimas también se
la usa para la detección de grasa con el método del SUDAN o del Rojo aceitoso que
sirve para la detección de grasa.
Para la inclusión e impregnación en parafina se deben utilizar parafinas filtradas y
preparadas, la parafina es un derivado del petróleo soluble en xilol, toluol, cloroformo y
benzol ( sustancias aclaradoras)
Porque donde esté vuestro tesoro, allí estará también vuestro corazón
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Insoluble en alcohol y agua, es una sustancia blanca opalescente en estado sólido y se
torna cristalina en estado líquido.
PUNTO DE FUSION DE LA PARAFINA.- Varía desde los 45 a 60º, la parafina a emplearse
en la impregnación y en la inclusión debe ser de alta calidad, la consistencia ideal de la
parafina depende del punto de fusión y de la temperatura ambiente, para los cortes debe
ser resistente y plástica, para que los cortes no sufran enrollamiento.
PARAFINA BLANDA.- Que tiene que estar a 45º C para tejidos delicados. Eje
Sistema Nervioso Central y Embrionarios.
PARAFINA DURA.- Es la que esta a 60º C y son para tejidos duros.
PARAFINA NORMAL.- Es la que esta a 56º C y es para el resto de los tejidos.
Por el método a parafina se pueden seguir 3 métodos de impregnación:
1. PROCEDIMIENTO MANUAL.- Mediante el uso de 4 baños de parafina en cada una
por espacio de 2 horas.
2. PROCEDIMIENTO AUTOMATICO.- Esta se realiza en el procesador de tejidos
automático con dos baños de parafina cada una por espacio de dos horas.
3. PROCEDIMIENTO POR EL IMPREGNADOR AL VACIO.- Cuando los tejidos son muy
densos y cuando los métodos habituales son insuficientes requieren de una exposición
extra de parafina
El impregnador al vacío actúa ejerciendo una presión negativa por medio de una bomba
al vacío con una presión de 450 a 500mmHg
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