INTRODUCCIÓN

La capacidad del ojo humano es limitada a la hora de estudiar lo pequeño. Hay una inmensa cantidad
de células y microorganismos que influyen significativamente en la vida del hombre y que, por ello, exigen ser
estudiadas en favor de un mayor conocimiento y mejora en la calidad de vida. Gracias a los avances y el
progreso en el campo de la microscopia, el hombre ha sido capaz de ver organismos y estructuras que a simple
vista serian invisibles y, con ello, efectuar descubrimientos decisivos en el campo de la microbiología,
relacionado con las transformaciones de la materia, las causas de las enfermedades o los agentes implicados
en los cambios geoquímicos, además al ser capaz de observar de qué manera crecen los materiales, su
composición química, el comportamiento de sus fallas internas etc., el ser humano ha sido capaz de crear
nuevos materiales con más y mejores características físicas y químicas, que cumplen con los requisitos para
ser usados en ambientes extremos con una mayor duración que los materiales convencionales.

HISTORIA DE LA MICROSCOPIA
Las fuentes históricas procedentes de civilizaciones antiguas como la asiria, la clásica o la árabe, nos
hablan ya del poder amplificador de las lentes biconvexas y de la utilización de técnicas de ampliación de la
imagen. El termino microscopio deriva etimológicamente del griego mikrós (pequeño) y skoopéo (observar) y
fue propuesto por Jean Faber en 1624. Sin embargo, el impulsor más significativo de la microscopia fue e
holandés Anton Van Leeuwenhoek (1632-1723). Anatomista y fisiólogo, construyo sus propios microscopios
con lentes convexas que él mismo pulía. Entre sus aportaciones mas importantes esta la de ser uno de los
primeros en estudiar la composición de la sangre y en observar y dibujar protozoos; en 1676 descubrió las
bacterias.
Los primeros microscopios denominados simples constaban solamente de una lente, la cual se
sostenía con la mano y se dirigía hacia la fuente de luz para que esta atravesara la lente y el objeto. Estos
microscopios producían, no obstante, difracciones y aberraciones, que se corrigieron gracias a la técnica del
doblete, aportada por Wollastone (1766-1826), aplicando al microscopio un ocular astronómico.

A principios del siglo XVIII (dieciocho), el microscopio sufre sus modificaciones mas importantes, no
solo en lo referente a óptica, sino también en la mecánica. En relación con la mecánica, cabe mencionar el de
Hooke en 1667, con una bola de vidrio que condensaba los rayos luminosos; el microscopio de trípode de Von
Asch (1687), el de la columna de Bonnani (1691) y el de Joblot (1716) con cristal de campo.

Una de las aportaciones más interesantes fue la de Cuff-Baker (1744) que confeccionó un aparato de
columna con movimiento rápido y movimiento micrométrico con un espejo fijo para concentrar la luz. Este
sería el precedente del actual microscopio compuesto y producía defectos y aberraciones cromáticas y
esféricas, a pesar de dar buenas ampliaciones, por lo que se regresó al estudio del microscopio simple, mas
sencillo que éste y más efectivo para entonces.

El descubrimiento del microscopio compuesto pertenece a la misma época que al de las lupas y se
debe principalmente a Zacarias Janssen, su primer constructor (1590). El gran paso en el perfeccionamiento
de éste se debe a Dolland, que, con su objetivo apocromático compuesto de dos lentes superpuestas, una
convergente y otra divergente logró mejorar en gran medida las observaciones. A partir de entonces, la
evolución del microscopio compuesto ha sido progresiva.
 Existen dos tipos de microscopios que emplean la luz como fuente de energía para formar imágenes
aumentadas y detalladas de objetos que a simple vista no es posible observar:

A. Microscopio fotónico o simple lupa.

B. Microscopio fotónico compuesto.

El microscopio simple o lupa es un instrumento de amplificación de imágenes que consiste en la

utilización de una o más lentes convergentes en un solo sistema óptico. Dependiendo de la curvatura de la
superficie de las lentes las lupas pueden ampliar las imágenes de los objetos desde 5, 8, 10, 12, 20 y hasta 50
veces. Formando una imagen de mayor tamaño derecha y virtual.

¿Como funciona una lupa?

Una lupa es un lente biconvexo, lo que significa que se curva hacia fuera a cada lado para hacer una
forma de cúpula. Los lentes convexos hacen que los objetos parezcan más grandes, por que la luz es doblada
por la forma del lente, haciendo que la imagen aparezca más grande en el ojo a pesar de que no lo sea. La
imagen es lo que se llama una “imagen virtual”. El poder de magnificación se determina por la calidad óptica
del lente y la distancia que se toma desde el objeto observado. Si el vidrio se mantiene muy lejos del objeto,
el objeto se vuelve borroso.

Microscopio fotónico compuesto. Los componentes clave de un microscopio compuesto de luz son sus lentes
de objetivo, lente ocular, portaobjeto, puente nasal, perillas de ajuste focal, y la fuente de luz. Hay típicamente
tres o cuatro lentes de objetivo sobre un microscopio de este tipo, pero sólo hay un lente ocular. El portaobjeto
es donde se coloca el objeto que será visualizado. El puente nasal es el dial giratorio que sostiene los lentes
del objetivo en su lugar. Hay dos botones de ajuste: la perilla de ajuste “gruesa” y el botón de ajuste de
“afinación”. La fuente de luz en un microscopio compuesto de luz es una luz constante y eléctrica que
proporciona la iluminación desde el fondo del alcance. Los microscopios mas viejos utilizan espejos para
reflejar la luz desde una fuente externa.

¿Como funciona un microscopio compuesto?

Un microscopio de luz utiliza una combinación de lentes para magnificar objetos mas de los que es
posible con lentes simples tales como lupas. El aumento total de un ámbito de aplicación se determina
multiplicando la potencia del lente de objetivo utilizado por la potencia del lente ocular. Típicamente, los
lentes del objetivo están etiquetados con su potencia de aumento relativo, y el lente ocular es generalmente
10x. Los lentes de objetivo son generalmente 4x ,10x, 40x, y 100x. La luz brilla a través de una abertura en el
portaobjeto, iluminando el objeto desde abajo. Los mandos de ajuste se utilizan para lograr un enfoque
correcto. Éstos controlan la cantidad de luz que entra por la abertura y la distancia física de la dispositiva al
lente. Cuanto menor sea el aumento, más grande será la distancia, y cuando un objeto se esta viendo en 100x
esta casi tocando el portaobjetos en el escenario. La imagen se amplia una vez por el lente de objetivo, luego
esa imagen ampliada se ve a través del lente ocular, el cual aumenta de nuevo por 10x.

Diferencias clave
Las lupas amplían la imagen de un objeto. Sin embargo, la distorsión se produce rápidamente. Una
distancia inadecuada puede hacer que el objeto parezca más pequeño, y el exceso de ampliación puede hacer
que la imagen pierda calidad y aparezca borrosa y fuera de foco (en foque por así decirlo). Los microscopios
compuestos de luz eliminan el problema causado por el lente biconvexo de una lupa. El lente ocular de un
microscopio esta esencialmente realizando la misma función que una lupa, pero se ve la imagen producida

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por el lente objetivo (esto quiere decir que el lente objetivo esta debajo del ocular y es el primero en lanzar
una imagen que después será amplificada por el ocular). El lente de objetivo, cuando se utiliza junto con los
mandos de ajuste sobre el alcance, crea una imagen ampliada y la refleja al lente ocular, de modo que no hay
perdida en la fidelidad o calidad en la imagen.

PARTES DEL MICROSCOPIO

Las partes de un microscopio se pueden clasificar entre las que pertenecen a un sistema mecánico y
las que pertenecen a su sistema óptico.

Figura 1. Partes de un microscopio

SISTEMA MECÁNICO
Dentro del sistema mecánico se incluyen todos los elementos estructurales que dan estabilidad al
microscopio y mantienen los elementos ópticos correctamente alineados.

Base o pie: Es la pieza que se encuentra en la parte inferior del microscopio y sobre la cual se montan el resto
de los elementos. Acostumbra a ser la parte más pesada para proporcionar suficiente equilibrio y estabilidad
al microscopio. Es habitual que incluya topes de goma ara evitar que el microscopio se deslice sobre la
superficie donde se encuentra.

Brazo: El brazo constituye el esqueleto del microscopio. Es la pieza intermedia del microscopio que conecta
todas sus partes. Principalmente conecta la superficie donde se coloca la muestra con el ocular por donde esta
se puede observar. Tanto las lentes del objetivo como del ocular se encuentran también conectadas al brazo
del microscopio.

Platina: Esta es la superficie donde se coloca la muestra que se quiere observar. Su posición vertical con
respecto a las lentes del objetivo se puede regular mediante dos tornillos para generar una imagen enfocada.
La platina tiene un agujero en el centro a través del cual se ilumina la muestra. Generalmente hay dos pinzas
unidas a la platina que permiten mantener la muestra en posición fija.

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Pinzas: Las pinzas tienen la función de mantener fija la preparación una vez esta se ha colocado sobre la
platina.

Tornillo macrométrico: Este tornillo permite ajustar la posición vertical de la muestra respecto el objetivo de
forma rápida. Se utiliza para obtener un primer enfoque que es ajustado posteriormente mediante el tornillo
micrométrico.

Tornillo micrométrico: El tornillo micrométrico se utiliza para conseguir un enfoque más preciso de la
muestra. Mediante este tornillo se ajusta de forma lenta y con gran precisión el desplazamiento vertical de la
platina.

Revólver: El revólver es una pieza giratoria donde se montan los objetivos. Cada objetivo tiene proporciona
un aumento distinto, el revólver permite seleccionar el más adecuado a cada aplicación. Habitualmente el
revólver permite escoger entre tres o cuatro objetivos distintos.

Tubo: El tubo es una pieza estructural unida al brazo del telescopio que conecta el ocular con los objetivos. Es
un elemento esencial para mantener una correcta alineación entre los elementos ópticos.

SISTEMA ÓPTICO
El sistema óptico incluye todos los elementos necesarios para generar y desviar la luz en las direcciones
necesarias y así acabar generando una imagen aumentada de la muestra.

Foco o fuente de luz: Este es un elemento esencial que genera un haz de luz dirigido hacia la muestra. En
algunos casos el haz de luz es primero dirigido hacia un espejo que a su vez lo desvía hacia la muestra. La
posición del foco en el microscopio depende de si se trata de un microscopio de luz transmitida o de luz
reflejada.

Condensador: El condensador es el elemento encargado de concentrar los rayos de luz provenientes del foco
a la muestra. En general, los rayos de luz provenientes del foco son divergentes. El condensador consiste en
un seguido de lentes que cambian la dirección de estos rayos de modo que pasen a ser paralelos o incluso
convergentes.

Diafragma: El diafragma es una pieza que permite regular la cantidad de luz incidente a la muestra.
Normalmente se encuentra situado justo debajo la platina. Regulando la luz incidente es posible variar el
contraste con el que se observa la muestra. El punto óptimo del diafragma depende del tipo de muestra
observada y de su transparencia.

Objetivo: El objetivo es el conjunto de lentes que se encuentran más cerca de la muestra y que producen la
primera etapa de aumento. El objetivo suele tener una distancia focal muy corta. En los microscopios
modernos distintos objetivos están montados en el revólver. Este permite seleccionar el objetivo adecuado
para el aumento deseado. El aumento del objetivo junto con su apertura numérica suele estar escrito en su
parte lateral.

Ocular: Este es el elemento óptico que proporciona la segunda etapa de ampliación de imagen. El ocular
amplio la imagen que ha sido previamente aumentada mediante el objetivo. En general, el aumento aportado
por el ocular es inferior al del objetivo. Es a través del ocular que el usuario observa la muestra. En función del

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número de oculares se puede distinguir entre microscopios monoculares, binoculares e incluso trinoculares.
La combinación de objetivo y ocular determina el aumento total del microscopio.

Prisma óptico: Algunos microscopios incluyen también prismas en su interior para corregir la dirección de la
luz. Por ejemplo, esto es imprescindible en el caso de los microscopios binoculares, donde un prisma divide el
haz de luz proveniente del objetivo para dirigirlo hacia dos oculares distintos.

TIPOS DE MICROSCOPIOS Y FUNCIONES

Microscopio Simple
 Lupas: monoculares
Binoculares

Microscopio compuesto
 Estereomicroscopios
 De luz ultravioleta
 De fluorescencia
 De contraste de fases
 De campo oscuro
 De polarización
 Microscopia por luz reflejada

Microscopia electrónica
 De barrido (MEB)
 De Transmisión (TEM)
 Microscopio confocal de barrido laser

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MICROSCOPIOS SEGÚN EL SISTEMA DE ILUMINACIÓN

Microscopio óptico
En el microscopio óptico la muestra es iluminada mediante luz visible. Esto significa que existe un foco
de luz apuntando hacia la muestra. Esa misma luz es conducida a través del objetivo y del ocular hasta llegar
a formar la imagen en el ojo del observador. Este es el tipo de microscopio más habitual pero su resolución
está limitada por la difracción de la luz. El aumento máximo que se puede obtener con este tipo de
microscopio alcanza alrededor de 1500x.

Figura 4. Muestra en un microscopio óptico

Microscopio electrónico
En el microscopio electrónico la muestra no es iluminada con luz, sino que se utilizan electrones. Los
electrones impactan contra la muestra dentro de una cámara de vacío. Existen diferentes tipos de microscopio
electrónico pero su principio de funcionamiento se basa siempre en capturar los electrones dispersados u
omitidos por la muestra y así poder reconstruir una imagen.
La ventaja principal de este tipo de microscopio es que puede obtenerse un nivel de aumento muy superior al
del resto de microscopios. Sin embargo, es necesario preparar la muestra y colocarla en una cámara de vacío
de modo que no es posible observar muestras biológicas vivas. Los dos tipos de microscopio electrónicos
principales son el microscopio electrónico de barrido y el microscopio electrónico de transmisión.

Figura 5. Muestra observada en un microscopio electrónico

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Microscopio de luz ultravioleta
Los microscopios de luz ultravioleta iluminan la muestra, como el nombre indica, con luz ultravioleta.
Este tipo de luz tiene una longitud de onda más corta que la luz visible utilizada en los microscopios ópticos.
La ventaja principal de utilizar esta técnica es que puede alcanzarse una resolución mejor que con luz visible.
Además, el contraste obtenido en la muestra es distinto que en los microscopios ópticos. De este modo, con
el microscopio de luz ultravioleta pueden observar muestras que aparecen transparentes si son observadas
con luz visible.

Microscopio de luz polarizada

También conocido como microscopio petrográfico. Este microscopio es en realidad un tipo de
microscopio óptico al que se la han añadido dos polarizadores. Esto significa que la onda de luz utilizada para
observar la muestra tiene una dirección de oscilación concreta. Este tipo de microscopio es muy útil para
observar estructuras cristalinas de rocas y minerales.

Microscopio de fluorescencia
Los microscopios de fluorescencia son aquellos que utilizan las propiedades de fluorescencia para
generar una imagen de la muestra. Este microscopio permite observar sustancias que emiten luz propia
cuando son iluminadas con una longitud de onda determinada. Para ello la muestra es habitualmente
iluminada con una lámpara xenón o con una lámpara de vapor de mercurio. Estos microscopios incorporan
además filtros de luz para aislar la luz correspondiente a la muestra.

Figura 6. Muestra observada en un microscopio de fluorescencia (Fuente: Zeiss Microscopy)

MICROSCOPIOS SEGÚN EL NÚMERO DE LENTES

Microscopio simple y Microscopio compuesto (Descritos en hojas anteriores).

MICROSCOPIOS SEGÚN LA TRANSMISIÓN DE LA LUZ

Existen dos tipos básicos de microscopio óptico según el camino seguido por la luz hasta llegar el
objetivo: microscopios de luz transmitida y los microscopios de luz reflejada.

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Microscopio de luz transmitida
En este tipo de microscopio la luz atraviesa la muestra. Para esta clase de microscopios es necesario
preparar la muestra cortándola en láminas muy finas. La muestra se ilumina desde debajo la platina. La
preparación de la muestra hace que esta sea semitransparente y parte de la luz pueda atravesarla y llegar al
objetivo para ser observada posteriormente a través del ocular. En general este es el sistema de iluminación
más utilizado entre los microscopios ópticos.

Microscopio de luz reflejada

En este caso la luz ilumina la muestra y parte de esta es reflejada y dirigida al objetivo. De este modo
es necesario iluminar la muestra desde la parte superior de la platina. Este tipo de microscopía es utilizada
para examinar materiales opacos como pueden ser estructuras metálicas, materiales cerámicos, etc. Existen
microscopios ópticos que permiten los dos tipos de iluminación de modo que es posible observar tanto
muestras semitransparentes como opacas. Los microscopios estereoscópicos (permiten observar la muestra
en tres dimensiones) son siempre de luz reflejada.

MICROSCOPIOS SEGÚN EL NÚMERO DE OCULARES

Los microscopios también pueden ser clasificados según el número de oculares. En base a este criterio
puede distinguirse entre microscopios monoculares, binoculares o trinoculares.

Microscopio monocular

Figura 7. Microscopio óptico

(Fuente [Link])

Este tipo de microscopio dispone de un solo ocular a través del cual se puede observar la muestra. Es
el tipo más sencillo y es ideal para aficionados a la microscopía o para alguien que se introduce en este campo.
Su desventaja principal es que puede resultar un poco incómodo si tiene que utilizarse durante largos periodos
de tiempo. Por este motivo los microscopios monoculares no son en general utilizados en ámbitos
profesionales.

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Microscopio binocular
Los microscopios binoculares disponen, como indica su nombre, de dos oculares. Esto permite
observar la muestra simultáneamente con los dos ojos resultando en una mayor comodidad para el usuario.
Este es el tipo de microscopio más utilizado en los laboratorios de investigación. La distancia entre los dos
oculares puede regularse para adaptarse a las necesidades del usuario. No hay que confundir el microscopio
binocular con el microscopio estereoscópico. El microscopio estereoscópico siempre es binocular. Sin
embargo, no todo microscopio binocular es estereoscópico.

Microscopio trinocular
El microscopio trinocular está equipado con dos oculares para observar la muestra además de un
tercer ocular para conectar una cámara. En el caso de conectar una cámara digital esta puede conectarse a un
ordenador para ver las imágenes de la muestra en tiempo real. Con este microscopio es posible observar la
muestra y al mismo tiempo tomar fotografías o videos con la cámara.

MICROSCOPIOS SEGÚN LA CONFIGURACIÓN DE LOS ELEMENTOS

Figura 8. Microscopio invertido

(Fuente: Zeiss Microscopy)

Los microscopios convencionales tienen una configuración vertical. Esto significa que el foco de luz se
encuentra en la parte inferior de la estructura. A continuación, hay la platina donde se coloca la muestra y
finalmente el cabezal con los objetivos y el ocular en la parte superior. Esta es la configuración más habitual
pero no la única.

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Existen también los microscopios invertidos. Esto microscopios tienen una configuración totalmente opuesta
a la del microscopio vertical. La muestra es iluminada desde la parte superior y los elementos ópticos se
encuentran debajo la platina. Con este tipo de microscopio es posible observar muestras colocadas en el fondo
de un recipiente. Esto es muy útil para mantenerlas hidratadas y poder así observar muestras vivas y procesos
biológicos que duran días.

Microscopios digitales
Los microscopios digitales son aquellos que capturan una imagen digital de la muestra. Esto se
consigue conectando una cámara digital en lugar del ocular. Existen microscopios digitales con distintas
configuraciones. Habitualmente deben conectarse al ordenador para poder transmitir las imágenes y a
continuación visualizarlas. También es cierto que existen microscopios digitales con una pantalla incorporada.
Estos permiten ver la muestra en la pantalla y almacenar imágenes que pueden transmitirse a continuación a
un ordenador mediante conexión USB o tarjeta SD.
Un tipo especial de microscopios digitales son los microscopios USB. Estos microscopios consisten únicamente
en una lente de gran aumento y una cámara digital. El aumento que se alcanza es limitado en comparación
con un microscopio óptico convencional.

Figura 9. Microscopio USB

(Fuente: [Link])

Microscopio estereoscópico
El microscopio estereoscópico es un tipo de microscopio que permite observar la muestra de
forma tridimensional. Estos microscopios están equipados siempre con dos oculares. La imagen de la muestra
que llega a cada ocular es ligeramente distinta de modo que cuando se combinan se consigue el efecto 3D.
Este efecto no podría conseguirse si la muestra se observara con un solo ocular.
El aumento que se consigue con el microscopio estereoscópico es inferior al que se consigue con un
microscopio óptico convencional. Sin embargo, los microscopios convencionales solo permiten una
observación bidimensional de la muestra. Los microscopios estereoscópicos son muy utilizados en

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aplicaciones donde debe manipularse la muestra mientras se observa. Por ejemplo, para el montaje de
circuitos o relojes.

Figura 10. Imágenes 3D con el Microscopio estereoscópico

(Fuente: [Link])

Microscopio confocal
Este es un tipo de microscopio de fluorescencia. En lugar de iluminar la muestra de forma global se
ilumina punto a punto de forma sucesiva y se reconstruye la imagen al final del proceso. Este proceso de
escaneado de la muestra es similar al que se produce en los microscopios electrónicos de barrido. Este tipo de
microscopio fue inventado por Marvin Minsky en 1957.

Microscopio de campo oscuro

Esta técnica de microscopía consiste en iluminar la muestra oblicuamente. De este modo los rayos de
luz que llegan al objetivo no provienen directamente del foco de luz sino que han sido dispersados primero
por la muestra. Esta técnica permite ver muestras que de otro modo no serían visibles debido a su
transparencia. También tiene la ventaja que no requiere teñir la muestra para aumentar su contraste y poder
observarla.

Figura 11. Imágenes bajo el microscopio de campo oscuro

(Fuente: [Link])

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 Microscopio de contraste de fases
La luz viaja a distintas velocidades dependiendo del medio de propagación. Esta propiedad es utilizada
en el microscopio de contraste de fases ya que la luz atraviesa la muestra con distintas velocidades en distintas
secciones. Este efecto es amplificado para generar la imagen de la muestra. Mediante esta técnica no hace
falta utilizar tintes y, por lo tanto, pueden observarse células vivas. El microscopio de contraste de fases fue
inventado por Frits Zernike en 1932 y recibió por ello el premio Nobel de física en 1953.

Este microscopio permite observar células sin colorear y resulta especialmente útil para células vivas.
La mayoría de los organismos vivos no pueden ser teñidos debido a que los colorantes utilizados pueden dañar
su estructura celular hasta el punto de su muerte. Esta técnica de microscopía aprovecha las pequeñas
diferencias de los índices de refracción en las distintas partes de una célula y en distintas partes de una
muestra de tejido. La luz que pasa por regiones de mayor índice de refracción experimenta una deflexión y
queda fuera de fase con respecto al haz principal de ondas de luz que pasaron la muestra. Aparea otras
longitudes de onda fuera de fase por medio de una serie de anillos ópticos del objetivo y del condensador,
anula la amplitud de la porción fuera de fase inicial del haz de luz y produce un contraste útil sobre la imagen.
Las partes oscuras de la imagen corresponden a las porciones densas del espécimen; las partes claras de la
imagen corresponden a porciones menos densas. Por lo tanto, estos microscopios se utilizan para observar
células vivas, tejidos vivos y cortes semifinos no coloreados.

Figura 12. Vista bajo el microscopio de contraste de fases

(Fuente: [Link]

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BIBLIOGRAFÍA

1. N. Arraiza, P.M Viguria. J. Navarro, A. Ainciburu. (2005). Manual de microscopia. Historia, descripción
y uso del microscopio óptico.. 01 de septiembre de 2018, de Museo de ciencias Sitio web:
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2. Kevin Donaldson. (2001). Cuál es la diferencia entre una lupa y un microscopio compuesto de luz. 01
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compuesto-luz-info_226005/
3. Mundo microscopio. (2018). Partes del microscopio. 01 de septiembre de 2018, de Mundo
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