Carrera : Farmacia y Bioquímica
Curso : Toxicologia
Tema : Extracción de venenos fijos e Identificación de
Venenos fijos por cromatografía
Docente : Dra. María Susana Roque Marroquin
Ciclo :X
Turno : Noche
Grupo :A
Integrantes : Falen Muñoz, Vanessa
Paredes Huamacto, Enrique
Tocto Salvador, Nancy
Zedano Quispe, Marina
INTRODUCCION
En los análisis toxicológicos son muchas las sustancias que pueden ser identificadas
por lo que se hace necesario la participación de métodos que permitan determinar la
presencia de sustancias no volátiles como alcaloides, barbitúricos, pirazolonas, etc.,
no sólo para su identificación sino también para su cuantificación.
La presente experiencia se basa en la solubilidad del principio activo así como de su
pH, por se utiliza una marcha analítica para separar los xenobióticos acidicos y
también los de carácter básico.
Xenobiotico: La palabra xenobiótico deriva del griego xeno ('extraño') y bio ('vida'). Se
aplica a los compuestos cuya estructura química en la naturaleza es poco frecuente o
inexistente debido a que son compuestos sintetizados por el ser humano en el laboratorio.
La mayoría han aparecido en el medio ambiente durante los últimos 200 años, Conocer el
metabolismo de xenobióticos es básico para una comprensión racional de
la farmacología y la terapéutica, farmacéutica, toxicología, investigación del cáncer y
toxicomanía.
Cromatografía:
La cromatografía es una técnica de separación de una mezcla de solutos contenidos
en un mismo disolvente, que se basa en la distinta movilidad de cada uno de los
solutos en la fase estacionaria, cuando la mezcla es arrastrada por un fluido (un
líquido, un fluido supercrítico o un gas), o fase móvil, que se mueve en el seno de la
fase estacionaria.
Las sustancias incoloras, pueden ponerse de manifiesto mediante diversos métodos,
como puede ser la luz ultravioleta en algunos casos, o formando un compuesto
coloreado mediante un reactivo químico en otros; a este proceso se lo denomina
revelado.
De acuerdo con el estado de la fase móvil podemos distinguir los siguientes tipos de
cromatografía (fase móvil - fase estacionaria):
Cromatografía de gases: Gas-Líquido o Gas-Sólido
Cromatografia de líquidos: Líquido-Sólido o Líquido-Líquido
Cromatografía con fluido supercrítico: Fluido supercrítico – Líquido
Rf
Cada componente de la mezcla se mueve siguiendo una línea vertical. La distancia
que recorre es proporcional a la distancia recorrida por el disolvente en el papel, a la
constante de proporcionalidad se le llama Rf (del inglés, "retention factor"):
Objetivos:
Esta experiencia permitirá a los estudiantes conocer el tratamiento químico
para extraer el tóxico que podría encontrase en una muestra biológica como la
sangre, orina etc. Un vez extraído se procederá a su identificación, a fin de
determinar si se trata de una sustancia toxica.
Materiales:
MATERIALES Y REACTIVOS
1) Vaso de 250 ml. 7) Aro
2) Trípode 8) Soporte Universal
3) Rejilla de asbesto. 9) Pera de bromo
4) Mechero de Bunsen. 10) Viales rotulados.
5) Baño María. 11) Bagueta.
6) Embudo.
REACTIVOS
1) Papel de pH. 6) Sulfato de amonio.
2) Papel de filtro. 7) H2SO4 (20 %).
3) Éter etílico. 8) Amoniaco conc.
4) Cloruro de metileno. 9) Agua destilada.
5) Sol. Saturada de 10) NaOH (1.8%)
11) Bicarbonato de sodio
Procedimiento: Extracción de venenos fijos
1.- 2.-
Muestra problema viseras Se fracciona la muestra
biológica
3.- 4.-
Fraccionada la MP se coloca en un Se adiciona H2O destilada y
vaso calentar hasta cerca del punto
ebullición.
5.- 6.-
A la M.P se agrega sulfato de Seguidamente se agrega
amonio, seguir calentando ácido sulfúrico
7.- 8.-
Filtramos Llevar a pH de 3 a 4 con H2SO4, y
trasvasar a una pera
9.-
Extraíamos con éter etílico
Cuestionario:
Fundamente el proceso de extracción realizado
El proceso de extracción que realizamos se denomina “éter acido” porque en el
van las sustancias acidas y las neutras.
Escriba el procedimiento de cada método de extracción, para tóxicos
gaseoso, volátil, inorgánico, orgánico
Extracción para tóxicos gaseoso: Se procede extrayendo los gases
dela sangre y se hace por leyes físicas como la solubilidad y la
temperatura. Existen dispositivos especiales para este tipo de
operaciones, como la trompa de mercurio. También se pueden extraer los
tóxicos gaseosos mediante técnicas que se utilizan para tóxicos
volátiles.
Extracción para toxico volátil: Técnica espaciado de cabeza: es la técnica
más sencilla y más usada, aquí el dispositivo usado es la cámara de aire
Micro difusión: detección de forma rápida y fácil. El dispositivo más utilizado es la
célula de Conway.
Destilación:
D. básica: anfetaminas anilinas y gases solubles en agua.
D. acida: tóxicos minerales y tóxicos orgánicos.
Extracción para toxico inorgánico: Estos tóxicos se encuentran en
el organismo firmemente unidos albumina, lípidos, o glúcidos. La
destrucción de esta materia orgánica y la consiguiente liberación del toxico
se consigue mediante un proceso conocido como mineralización del cual existen
dos modalidades:
1. Calcinación
2. Tratamiento con oxidantes enérgicos por ej. Mezcla sulfo-nitro-perclorica
Extracción para toxico orgánico:
Escriba una marcha analítica que involucre los xenobioticos a pH acido,
otra marcha analítica a pH neutro y otra a pH básico
Procedimiento: Identificación de venenos fijos por cromatografía
Preparación de estándar:
MATERIALES
1.- 2.-
Primer paso: En un vial se agrega 1/3 Segundo paso: seguidamente se
del estándar (veneno) agrega 1/3 de metanol.
4.- 5.-
Tercer paso: Se agrega 2 gotas de Quinto paso: La muestra estándar se lleva
ácido clorhídrico. a baño maría aproximadamente 40” para
simular una digestión.
Preparación de la placa de cromatografía:
1.- 2.-
a.- Con un lápiz marcar en la placa b.- con un capilar, tomar un poco de la
los puntos en donde se van a disolución orgánica conteniendo la M.P. 1 y 2,
depositar ambas muestras. estándares y picar cada uno en la placa de
cromatografía varias veces.
3.-
C.-Dejamos secar con ayuda de la
cocina, para evitar que la mezcla se
difunda.
Preparación de la cámara, desarrollo y corrida cromatografía:
Colocamos 20ml de la fase móvil Corrida cromatografía: Luego de sembrar
(CETONA) en la cámara (en este caso las MP y el estándar se coloca la lámina en
utilizamos vaso). la cámara. Retirar la lámina al llegar al
frente de solvente y evaporar dicho
solvente (CETONA).
Observación luz UV:
Colocamos las placas que han corrido en la cuba, bajo la luz UV
Cuestionario:
3.-Indicar cuál sería la mezcla de disolventes más adecuada para realizar
la separación:
Utilizar solvente con mucha afinidad (polaridad) y otra con poca afinidad tiene
que tener mediana polaridad por ello se puede utilizar mezclas.
4.- ¿Qué mecanismos de separación cromatografía existen?
Cromatografía fase normal: Cromatografía de fase normal:
phase HPLC" (NP-HPLC) fue el primer tipo de sistema HPLC utilizado en el campo de
la química, y se caracteriza por separar los compuestos en base a su polaridad. Esta
técnica utiliza una fase estacionaria polar y una fase móvil apolar, y se utiliza cuando
el compuesto de interés es bastante polar. El compuesto polar se asocia y es retenido
por la fase estacionaria. La fuerza de absorción aumenta a medida que aumenta la
polaridad del compuesto y la interacción entre el compuesto polar y la fase
estacionaria polar (en comparación a la fase móvil) aumenta el tiempo de retenció[Link]
fuerza de interacción no sólo depende de los grupos funcionales del compuesto de
interés, sino también en factores estéricos de forma que los isómeros estructurales a
menudo se pueden diferenciar el uno del otro. La utilización de disolventes más
polares en la fase móvil disminuye el tiempo de retención de los compuestos mientras
que los disolventes más hidrofóbicos tienden aumentar el tiempo de retención.
Cromatografía reversa: La cromatografía en fase reversa (RPC) permite separar
moléculas en base a su polaridad. El principio de la cromatografía en fase reversa es
semejante al de la cromatografía en capa fina. Sin embargo, aquí la fase estacionaria
es de partículas de sílica químicamente modificadas con hidrocarburos saturados,
insaturados o aromáticos de diferentes tipos. Esto convierte a la fase estacionaria en
una matriz apolar. Por lo tanto, para este tipo de cromatografías se emplean mezclas
de solventes polares, tales como agua, acetonitrilo, acetato de etilo, acetona y alcoles
alifáticos.
5. ¿Qué diferencias existen entre Cromatografía de Gases y
Cromatografía por HPLC?
Cromatografía de Gases Cromatografía por HPLC
Técnica Cromatografía en la que la En su fase reversa, en la que la fase
muestra volatiliza y se inyecta en la estacionaria tiene carácter no polar y
cabeza de una columna cromatografía la fase móvil posee carácter polar.
de gases. Cromatografía para líquidos.
BIBLIOGRAFIA:
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PA535&dq=extracto+fraccion+basica&source=bl&ots=YzfoJbYKBl&sig=B
2gImA3a5zzwUy26yTroL-SQ14A&hl=es-
419&sa=X&sqi=2&ved=0ahUKEwiki_WhiOfTAhXC4yYKHTcWASEQ6AEIJz
AB#v=onepage&q=extracto%20fraccion%20basica&f=false
[Link]