UNIVERSIDA NACIONAL MAYOR DE SAN

MARCOS
(Universidad del Per, Decana de Amrica)

FACULTAD DE QUMICA, INGENIERA QUMICA

DEPARTAMENTO ACADMICO DE QUIMICA ORGANICA

Laboratorio de productos naturales

Practica N :2

Prctica : triterpenoides: saponinas triterpenoidales

Turno : lunes 9-1 pm

Integrantes :
Melendez Cabrera Ronal 02070033
Ochoa Rojas William 10070003
Snchez Romani Ruth Rosemary 11070166
Valentn Carhuancho Rocio Lizeth 13070158

Profesora : Gloria Eva Tomas Chota

Fecha de Entrega : 1 10 2017

 TABLA DE CONTENIDO

I. Introduccin3

II. Principios tericos.4

III. Detalles experimentales..6

IV. Reacciones qumicas..8

V. Resultados.10

VI. Discusin de resultados..14

VII. Conclusiones.15

VIII. Recomendaciones16

IX. bibliografa..17

X. apndice..18

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 I. INTRODUCCION

Las saponinas son hetersidos (azcar + sapogeninas) que se caracterizan por su

capacidad para producir espuma cuando se agita una solucin acuosa que las contiene. Se
forma espuma debido a que las saponinas disminuyen la tensin superficial del agua. Son
por lo tanto tensoactivos naturales. El uso que se le ha dado a las saponinas es muy amplio
destacndose en la industria farmacolgica debido a sus diferentes tipos de accin. Brindan
beneficios a la salud como por ejemplo ayudan a reducir el colesterol, poseen propiedades
anticancergenas, tienen propiedades antioxidantes, refuerzan el sistema inmune, etc.

El objetivo de esta prctica la comprobacin de la presencia de saponinas en una muestra

a travs de pruebas fsicas y qumicas caractersticas para el reconocimiento de saponinas.

II. PRINCIPIOS TEORICOS

Saponinas

Se le da el nombre de saponina a un grupo de glucsidos que se disuelven en agua y

disminuyen la tensin superficial de esta, por lo tanto, al sacudir sus soluciones se forma
una espuma abundante, y relativamente estable. Por hidrlisis de las saponinas se obtienen
carbohidratos y unas agliconas, llamadas genricamente sapogenina, la cual puede tener
un esqueleto esteroidal (tipo colano) como la esmilagenina, o triterpeno o tipo -amirina
como en la chichipegenina.

Figura 1. Sapogeninas de esqueleto esteroidal y triterpenoide

Las saponinas son sustancias polares, y es posible extraerla en caliente o en fro con agua
o alcoholes de bajo peso molecular. Los materiales lipoides presentes en estos extractos
se separan con benceno. Al concentrar la solucin alcohlica se separan las saponinas y
despus se cristalizan las mezclas de alcohol-agua.

Para obtener sapogeninas, se pueden hidrolizar las saponinas con sus enzimas naturales,
con enzimas de origen microbiolgicos o hidrolizarlas con cido clorhdrico o cido sulfrico
(este ltimo se prefiere para sapogeninas insaturadas). Despus, se extraen las
sapogeninas, que son poco polares, con benceno, ter de petrleo, o acetona y
recristalizan.

4
5
 III. DETALLES EXPERIMENTALES
Materiales
o 2 vasos de 250 mL
o 10 tubos de ensayo
o 2 baguetas
o 1 pipeta Pasteur
o Propipeta
o Mortero y piln
o Licuadora

Reactivos
o cido actico (3 gotas). Reactivo txico
o Anhdrido actico (5 mL). Reactivo controlado
o cido sulfrico (5 mL). Reactivo controlado
o Cloroformo. Reactivo txico
o Quinua molida
o Boliche molido
o Avena molida

Procedimiento

1) Prueba de la espuma
Se aadi a un tubo de ensayo una pequea cantidad de quinua,
avena y boliche, y se le agreg agua destilada.
El tubo fue sometido a agitacin vigorosa durante 30 segundos.

2) Reactivo de Salkowski
Fueron aadidos una pequea cantidad de muestra a un tubo de en-
sayo y luego se le aadieron 1 mL de H2SO4 cc y 5 gotas de anhdrido
actico con ayuda de una pipeta Pasteur.

3) Variante A de Reaccin de Salkowski

Una pequea cantidad de muestra fue agregada a un tubo de en-
sayo, seguido de 1 mL de cloroformo.
Se agreg anhdrido actico refrigerado con una pipeta Pasteur ms
una gota de H2SO4(cc).

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4) Variante B de Reaccin de Salkowski
Una pequea cantidad de muestra fue agregada a un tubo de en-
sayo, seguido de 1 mL de cloroformo.
Se agreg 1 mL de H2SO4 cc.

5) Reactivo de Liebermann Burchard

A una pequea cantidad de muestra se le aadieron 5 gotas de cido
actico en un tubo de ensayo.
Luego se agregaron 3 mL de AC2O/H2SO4 (50:1) con ayuda de una
pipeta Pasteur.

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 IV. REACCIONES QUIMICAS

1. Reaccin de Salkowski

Muestra (quinua) + H2SO4 + Ac2O (gotas)

Amarillo a rojo presencia de saponina

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2. Reaccin de Liebermann-Burchard

Muestra + HOAc (gotas) + Ac2O / H2SO4 (3 mL) => rojo grosella

Muestra + Ac2O + H2SO4

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V. RESULTADOS

1. Prueba de la espuma

Se tomaron alcuotas de las muestras, a cada una se adicion una pequea cantidad de
agua y se agit vigorosamente durante 30 segundos, esto se encontr:

- Boliche: Presento gran cantidad de espuma persistente.

- Quinua: Present poca espuma
- Avena: presento poca espuma
 2. Reactivo de Salkowski

Despus de adicionar cido sulfrico concentrado y gotas de anhdrido actico a cada una
de las alcuotas disponibles y dejar reposar durante 20 minutos, se observ:

- Boliche: Coloracin rojo sangre, la solucin incolora. POSITIVO PARA SAPONI-

NAS.
- Quinua: A pesar de que la muestra no se coloreo, la solucin tom un ligero color
amarillo. POSITIVO PARA SAPONINAS
- Avena: A pesar de que la muestra no se coloreo, la solucin tom un ligero color
amarillo POSITIVO PARA SAPONINAS.

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3. Variante A de reaccin de Salkowski

Con el fin de averiguar la presencia de saponinas triterpnicas saponinas esteroidales, se

disolvieron alcuotas de cada muestra en cloroformo y se aadi anhdrido actico helado
y una gota de cido sulfrico concentrado; se dej reposar 30min y se observ:

- Boliche: Coloracin violeta-rojo intenso. POSITIVO PARA SAPONINAS TRITERPE-

NICAS.
- Quinua: En la parte superior se form un anillo amarillento. POSITIVO PARA SA-
PONINAS TRITERPENICAS.
 - Avena: En la parte superior se form un anillo amarillento. POSITIVO PARA SAPO-
NINAS TRITERPENICAS.

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4. Variante B de reaccin de Salkowski

Las alcuotas se disolvieron en cloroformo y se agreg cido sulfrico concentrado. Se

encontr:

- Boliche: Presento coloracin rojisa. POSITIVO PARA SAPONINAS.

- Quinua: Presento coloracin cafe. POSITIVO PARA SAPONINAS
- Avena: Presento coloracin cafe. POSITIVO PARA SAPONINAS
 12

5. Reactivo de Liebermann-Burchard

Se adiciono una solucin 50:1 de Anhdrido actico: cido sulfrico y unas gotas de cido
actico a cada una de las alcuotas disponibles; no se observaron cambios en la coloracin,
por ello se utiliz una lmpara UV con el fin de hacer una mejor observacin.

- Boliche: Coloracin amarillento. POSITIVO PARA SAPONINAS TRITERPENOIDA-

LES.
- Quinua: No se percibi coloracin.
- Avena: Coloracin rosada. POSITIVO PARA SAPONINAS TRITERPENOIDALES.

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VI. DISCUSIN DE RESULTADOS

En la prueba de la espuma, el boliche presentaro abundante espuma y esta fue

persistente en el tiempo, la quinua y la avena presentaron espuma no tan abundante
pero si persistente. Esto nos indica la presencia de saponinas en grandes cantida-
des en el boliche, en poca cantidad en la quinua y en la avena.

Usando el Reactivo de Salkowski, se obtuvo una coloracin rojo sangre en el boli-

che, la cual indica la presencia de una estructura esteroidal, base de la saponina.
 La avena y la quinua presentaron una coloracin amarilla, lo cual tambin es positivo
para saponinas, pero en menor concentracin. Sin embargo no se puede determi-
nar si dicha saponina es triterpnica o esteroidal.

La reaccin Variante A de reaccin de Salkowski, permite diferenciar a una saponina

triterpnica de la esteroidal, basndose en el color del producto. En nuestro caso,
mediante esta reaccin se determin la presencia de saponinas triterpnicas pues
el producto de la reaccin fue un anillo de color rojizo-grosella en el boliche; la qui-
nua y la avena presentaron un anillo delgado de color amarillo oscuro. Para las cua-
tro muestras result positivo para saponina triterpnica.

La reaccin Variante B de reaccin de Salkowski, tambin permite diferenciar a una

saponina triterpnica de la esteroidal, basndose en el color del producto. En nues-
tro caso, mediante esta reaccin, se determin la presencia de saponinas esteroi-
dales en las 3 muestras pues el producto de la reaccin fue de color cafe oscuro, el
cual indica la presencia de saponinas esteroidales.

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VII. CONCLUSIONES

Las saponinas (sapogeninas) esteroidales son metabolitos ampliamente distri-

buidos en el reino vegetal y se caracterizan por la diversidad de sus formas.

La concentracin de saponinas no solo depende de la especie y subespecie

 analizada, si no de la zona en la que son cultivadas las plantas. Al analizar
muestras de diferentes marcas comerciales se suelen encontrar resultados
muy diferentes.

Se concluye la presencia de saponinas en las muestras vegetales analizadas.

La variante de Salkowski A nos da la referencia de qu clase de saponina se

puede hallar y esta indico que se trata de una saponina triterpnica ya que se
obtuvo una coloracin rojiza

La prueba de Liebermann-Burchard nos indica la clase de saponina que se

tiene, pero presenta interferencias con otras estructuras orgnicas con anillos
aromticos o dobles enlaces conjugados.

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VIII. RECOMENDACIONES

Para observar mejor las coloraciones de las reacciones, que indican la presencia de
saponinas, se debe esperar un tiempo as se observara mejor los colores.

En la prueba de Salkowski el anhdrido actico debe estar necesariamente refrige-

 rado. Las muestras tambin deben de refrigerarse para que la reaccin se d co-
rrectamente y se pueda observar la coloracin.

Se debe trabajar bajo la campana cuando se use anhdrido actico, debido a

que es muy irritante.

Se debe lavar todos los materiales de vidrio, en este caso los tubo de ensayo donde
se realiz la prueba para que no haya impurezas y esto vaya a generar interferen-
cias en las reacciones y nos podra das un resultado errneo.

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IX. BIBLIOGRAFA

Domnguez, Xorge Mtodos de investigacin Fitoqumica, Editorial Limusa, Mxico, 1973, Pg.: 81-
87.

[Link]
 Universidad nacional del centro del Per facultad de ciencias aplicadas escuela acadmico profesio-
nal de ingeniera agroindustrial; determinacin de saponinas

Latinreco (1990) Quinua, hacia el cultivo comercial, Latinreco S.A.; Quito Ecuador.

[Link]

[Link]
farm2c/evanswc01/[Link]

[Link]

[Link]

17

X. APENDICE

Cuestionario

1. Indique la clasificacin de las saponinas segn su estructura y de un ejemplo

para cada una.
Saponinas esteroidales
La genina es un esteroide, unida a un glcido (generalmente un polisacrido)
mediante enlace O-glucosdico. Generalmente el esteroide es tetraciclico. De
manera general, su esqueleto bsico contiene anillos con nmero de carbonos en
el siguiente orden: 6-6-6-5.

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Ejemplo
Dioscina

Es una saponina esteroide presente en las races de las especies Dioscorea

composita y Dioscorea floribunda. Por hidrlisis se descompone endiosgenina, D-
glucosa y 2 unidades de L-Ramnosa.
Saponinas triterpnicas: La genina es un triterpeno, unida a un glcido por enlace O-
glucosdico. El triterpeno es pentaciclico. Generalmente su esqueleto bsico contiene
anillos con nmero de carbonos en el siguiente orden: 6-6-6-6-5.

En este grupo de saponinas, las geninas consisten en tres unidades de terpenos (figura de
la izquierda de la tabla de abajo). Cada terpeno se compone de dos unidades de isopreno
(cinco de carbono), de modo que las geninas son molculas con 30 tomos de carbono.

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Ejemplo:

Glicirricina

Glicirricina es la sal de Ca ++ y K + glicirricina cido, un glucsido que se deriva de la raz de

la planta Glycyrrhiza glabra (regaliz). Es 50 veces ms dulce que el azcar.
 2. Escriba dos reacciones diferentes a las realizadas en la prctica para diferen-
ciar las saponinas segn su estructura.

a) Reaccin de Rosenheim: se utiliza para diferenciar al ergosterol del colesterol,

slo los compuestos que dan la reaccin positiva son aquellos que tienen dos
dobles enlaces conjugados. El ergosterol, por ejemplo, posee dos dobles enla-
ces conjugados en el anillo B.
Esta reaccin consiste en tratar la muestra de solucin clorofrmica de un
esteroide con una solucin de cido tricloroactico, el desarrollo de un
color rojo que cambia a azul o violeta plido indica una reaccin positiva.

Muestra + CHCl3 + CCl3COOH 90% violeta o azul.

b) Prueba del bicarbonato de sodio 10%: se disuelve 1-2mg de la muestra en

metanol, se le agregan de 2-3 gotas de cido sulfrico concentrado. Se agita
ligeramente. Luego se agregan 2-3 gotas de la solucin de bicarbonato de sodio.
La aparicin de burbujas y su permanencia por ms de un minuto indican la
presencia de saponinas.

Muestra + CH3OH + H2SO4 CC + NaHCO3 burbujas

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3. Con un diagrama de flujo describa un mtodo de extraccin de una saponina.

En el siguiente diagrama de flujo se describen dos mtodos de extraccin de saponinas: el

mtodo Soxhlet y el mtodo asistido por ultrasonido.
Metodologa para la comparacin de mtodos Soxhlet vs Ultrasonido para la extraccin de
saponinas del bagazo del fique.

La extraccin Soxhlet es un mtodo cclico en el que se usa un equipo de tres piezas (baln,
cmara extractora y condensador) que se utiliza para extraer compuestos contenidos en
materiales slidos. El compuesto se diluye en el solvente por la afinidad polar que hay entre
ambos producindose una solucin del compuesto en el disolvente que se ir concentrando
a medida que el ciclo se repita.

El mtodo de extraccin asistido por ultrasonido (EAU) proporciona una alta eficiencia de
contacto en la muestra entre la matriz y el disolvente. Un efecto de cavitacin snica es
producido bajo la irradiacin del ultrasonido en donde microburbujas son formadas cuando
la presin negativa es suficientemente alta. Una vez creadas, estas burbujas crecen y se
comprimen cuando las presiones son negativas y positivas, respectivamente, la constante
expansin y compresin genera el colapso de las burbujas en donde se rompen paredes
celulares y facilitan la penetracin de solvente en estas, se aumenta la temperatura
disminuyendo la viscosidad y estos factores hacen que el fenmeno de transferencia de
masa sea mejor.

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4. Menciones 5 ejemplos de saponinas con actividad farmacolgica, con su

respectiva estructura.

Saponinas con actividad farmacolgica:

Escina:
Extrado de la planta Aesculus hippocastanum (castao de Indias). Presenta actividad
antiedematosa y antiexudativa con una leve accin sobre el tono del msculo liso de la
pared venosa. Por su accin sobre venas y capilares disminuye la hiperpermeabilidad
vascular, lo que mejora la hemodinamia y reduce el edema de los miembros inferiores en
los pacientes con varices.

Glicirricina:

Tiene propiedades como antiherptico para el herpes simple tipo I, II, Zoster y el virus de
papiloma humano. Tambin se usa como edulcorantes, antiinflamatorios, expectorantes,
aumenta la secrecin de mucus originando as a nivel gastrointestinal una
accin anticida y antiulcerosa.
Saikosaponina:

Posee accin antiinfectiva, antiviral, citostatica, inmunosupresiva y antiinflamatorio.

Matesaponina:

Presente en las hojas de mate presenta actividad antihipercolesterolmica, capacidad de

formar micelas con el colesterol y las sales biliares en el tracto gastrointestinal, formando
complejos que previenen su absorcin.

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Bacsido A:

Estimulan la actividad de las quinasas cerebrales y la restauracin de la actividad sinptica

y ayudan a la reparacin de las neuronas lesionadas por los radicales libres y, en definitiva,
mejoran la transmisin de los impulsos nerviosos. Estudios in vitro han demostrado que la
bacopa protege a los astrocitos y los fibroblastos humanos frente al dao oxidativo.

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5. Con un ejemplo de sntesis indique la aplicacin industrial de las saponinas

Las bondades de la quinua, el grano de oro de los andes, son muchas y muy sorprendentes
pues hasta la sustancia amarga que la cubre, llamada saponina, tiene ahora una utilizacin
comercial en la industria cosmtica y de jabones y detergentes y, en un futuro, en farmacia.

Todo este procedimiento da como resultado un polvillo que podra ser catalogado como
residuo si no fuera por sus mltiples propiedades, las que ahora son aprovechadas en la
fabricacin de diversos productos.

Formulacin de Shampoos con saponinas

Shampoo con SQ.

Texapon (20, 15, 10, 5, 0%)

Saponinas de quinua (2.5, 5 10 15 20 %)

Sales (1%), Glicerina (5%), EDTA (0.15%)

Agua desionizada a 100 mL

6. Indique un mtodo para cuantificar las saponinas

Procedimiento del mtodo

Pesar 0,50 +/- 0,02 g de granos enteros de quinua y colocarlos en un tubo de ensayo.
Aadir 5,0 mL de agua destilada y tapar el tubo. Poner en marcha el cronmetro y sacudir
vigorosamente el tubo durante 30 segundos.

Dejar el tubo en reposo durante 30 minutos, luego sacudir otra vez durante 20 segundos.

Dejar en reposo durante 30 minutos ms, luego sacudir otra vez durante 30 segundos. Dar
al tubo una ltima sacudida como el que se da a los termmetros orales.

Dejar el tubo en reposo 5 minutos, luego medir la altura de la espuma al 0,1 cm ms cercano

Clculos

0.646 ( ) 0.104
=
( )

0.646 ( 30 ) 0.104
% =
( ) 10

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Mtodo rpido

Para realizar determinaciones ms rpidas puede tomarse la lectura de la altura de espuma

despus de una agitacin de 30 segundos, esperando unos 10 segundos ms para que se
estabilice la espuma

0.441 ( 30 ) + 0.001
=
( )

0.441 ( 30 ) + 0.001
% =
( ) 10
26