FUNDAMENTO DEL METODO DE ANALISIS
NITRATOS EN AGUA
El contenido de nitratos es un indicador importante de la calidad del agua y ha demostrado tener
un alto peso estadstico a la hora de clasificarla. El ion nitrato tiene un origen natural pero por el
uso de fertilizantes inorgnicos, principalmente, o por residuos humanos o animales se puede
introducir en exceso, llegar por filtracin o escorrenta hasta las aguas superficiales y subterrneas
y ser acumulado en concentraciones muy altas para la salud humana. Ya sea por los procesos
agroindustriales, residuos domsticos o residuos industriales, los nitratos en altas concentraciones
multiplican el crecimiento de organismos vegetales, elevan el nivel de fotosntesis y agotan el
oxgeno de las aguas superficiales frescas, daando la vida y los ecosistemas.
La determinacin de los nitratos en el agua de consumo humano es importante ya que si estos se
encuentran en concentraciones que sobrepasan los 10 ppm, como N, pueden causar una
enfermedad infantil conocida como metahemoglobinemia, que se caracteriza por la dificultad de
la sangre para absorber oxgeno.
Por otra parte, los nitratos, as como los fosfatos, constituyen parte de los nutrientes esenciales
para muchos organismos auttrofos o fotosintticos y en este sentido, su presencia en el agua,
puede ocasionar fenmenos de eutrificacion en ros y lagos.
Mtodo Espectrofotometrico UV Visible
Este mtodo es aplicable a muestras limpias con bajo contenido de materia orgnica, tales como
las provenientes de plantas suministro y/o aguas subterrneas. Las mediciones se realizan
utilizando un fotmetro a 220 nm, para concentraciones inferiores a 10 mg/l, rango para el cual se
cumple la Ley de Beer.
Teniendo en cuenta que tanto la materia orgnica como el ion nitrato absorben energa radiante
a una longitud de onda de 220 nm yque la materia orgnica mas no el nitrato, absorbe tambin a
275 nm, el mtodo analtico realiza las mediciones a estas dos longitudes de onda, con el objeto
de corregir las primeras mediciones por la interferencia que halla podido ocasionar la materia
orgnica presente en la muestra. El grado de esta correccin emprica se reacciona con la
naturaleza y concentracin de la materia orgnica y puede variar a partir de un agua a otra.
El mtodo fotomtrico es muy bueno para muestras limpias y puede adaptarse bien para muestras
con materia orgnica, siempre que esta permanezca estable y constante.
La filtracin de la muestra se piensa para quitar interferencia posible de partculas suspendidas.
Este mtodo es sensible a interferencias por cloruros y bromuros que se encuentran en altas
concentraciones en las aguas de estuarios y en materia orgnica disuelta en aguas dulces.
DESCRIPCION DE LA TECNICA EMPLEADA
La tcnica empleada mide directamente la absorbancia del analito o despus de que ha
reaccionado con un reactivo y se forma un producto capaz de absorber la radiacin. La primera
tcnica tiene ms restricciones, en particular con muestras complejas porque pocas veces se
puede encontrar una longitud de onda en la que solo se absorba el analito. En ocasiones, las
separaciones previas ayudan a eliminar las especies que puedan absorber e interferir con la
determinacin espectrofotometrica del analito. En otros casos, las interferencias se pueden
corregir con una segunda medicin de absorbancia. Un ejemplo de este segundo enfoque es la
determinacin de nitrato en muestras de aguas naturales (lo realizado). El ion nitrato absorbe a
220 nm, y la materia orgnica disuelta tambin puede absorber a esta longitud de onda. Para
corregir las interferencias debidas a la materia orgnica, se toma una segunda lectura de
absorbancia a 270 nm, donde no absorbe el nitrato. Aunque tome ms tiempo a veces es
preferible hacer una separacin previa para eliminar las especies que interfieren.
Tambin es frecuente tratar la muestra con un reactivo selectivo, de modo que en la reaccin se
forme una especie que absorba una regin donde no haya interferencias.
En la experiencia dada realizamos los siguientes pasos:
1. Solucin stock de nitrato: se disolvi 0.3626g de KNO3, previamente secado a 105 C durante
24 horas, en 500 ml de agua y preservar por adicin de 2 ml de cloroformo. Esta solucin
contiene 100 ppm de nitrato como N. (es estable por 6 meses)
2. Preparacin de solucin patrn intermedia de nitrato de 100ppm a partir de la solucin
stock. El cual resulta de 10 ppm.
3. Soluciones de patrn de nitratos: se preparan por dilucin de la solucin intermedia. De 0 a
5 ppm de NO3- N a 50ml.
4. El blanco: en una fiola de 50 ml colquese aproximadamente 45 ml de agua ultra pura,
adase 1 ml de solucin de HCl 1N y luego compltese el volumen hasta el enrase.
5. Tratamiento de la muestra. sobre 5 y 25 ml de muestra transparente, filtrada si fuera
preciso, adase antes de enrazar 1 ml se solucin de HCl 1Ny mezcle vigorosamente. El
HCl tiene por objeto impedir interferencias por concentraciones de hidrxido o carbonatos
que pueden estar en las muestras.
6. Se prepara la curva de calibracin y se lee la absorbancia de las muestras y patrones.
DESCRIPCION DE LOS INSTRUMENTOS O APARATOS USADOS
Espectrofotmetro de doble haz
En un espectrofotmetro de doble haz, la luz pasa alternadamente por la cubeta de la muestra y
de la referencia, dirigida por un motor que gira un espejo, que de esta manera entra y sale del
paso de la luz. Cuando el cortador no desva el haz, la luz pasa a travs de la muestra, y el detector
mide la potencia radiante que llamamos P. Cuando el cortador desva el haz a travs de la cubeta
de referencia, el detector mide P0. El haz se corta varias veces por segundo, y el circuito compara
automticamente P y P0, dando as la transmitancia y la absorbancia. Este procedimiento permite
hacer una correccin automtica de las variaciones de intensidad de la fuente, y de la respuesta
del detector con el tiempo y la longitud de onda, porque se comparan con mucha frecuencia la
potencia que sale de las dos muestras. Los espectrofotmetros de mayor calidad destinados a
investigacin tambin permiten un barrido automtico de longitudes de onda y un registro
continuo de absorbancia. Cuando se registra un espectro de absorbancia, es de rutina registrar
primero el espectro de la lnea base con las disoluciones de referencia (disolvente puro o blanco)
en las dos cubetas. Despus se resta el espectro base de la absorbancia medida de la muestra,
para obtener as la verdadera absorbancia de la muestra a las distintas longitudes de onda. En la
figura 1 se muestra un espectrofotmetro visible de doble haz. La luz blanca procede de una
lmpara de halgeno de cuarzo (como la de luz larga de un automvil), y la fuente ultravioleta es
una lmpara de arco de deuterio, que emite en el intervalo de 200-400 nm. En un momento dado
slo se utiliza una de ellas. La red de difraccin 1 selecciona una banda estrecha de longitudes de
onda, que entra en el monocromador, y ste selecciona una banda an ms estrecha, que es la
que pasa a travs de la muestra. Despus de cortado el haz, y una vez que pasa por las cubetas de
la muestra y referencia, la seal es detectada por un tubo fotomultiplicador, que produce una
corriente elctrica proporcional a la potencia radiante que llega al detector.
Espectrofotmetro de ultravioleta visible
El instrumento con el que se trabaj en la experiencia fue un espectrofotmetro SHIMADZU que
es un espectrofotmetro de doble haz que nos evita estar en cada medida de absorbancia poner el
blanco de referencia porque tiene un comportamiento para este, las celdas paraleleppedos con
las que trabajamos fueron de cuarzo con un lado transparente a la radiacin y el otro difuso por el
no pasa la radiacin y por donde se puede manipular, se pude trabajar con el espectrofotmetro
usando la pantalla liquida que tiene o desde una computadora usando el software UV PROVE.
El UV-1700 de Shimatzu puede operar como instrumento independiente o controlado por una PC
con el software UV Prob, cumple con todas las especificaciones principales internacionales de la
farmacopea. El UV-1700 diseado para facilitar el cumplimiento con los requisitos mundiales,
incluye una resolucin de 1 nm funciones de validacin integrales. Una amplia gama de funciones
analticas ofrecen la experimentacin rpida y fcil.
CALCULOS
1.-Preparacin del patrn primario: Partiendo de la solucin madre de KNO 3 =0.1820
g/250 ml, se calcula el nmero de mg NO-3 - N / 1L solucin:
Entonces:
0.1805g X 14 g/mol NO-3 - N = 0.0249g NO-3 - N
250 ml 101.11g/mol KNO3 250ml
0.0252 3 103 103 3
= 99.97 100
250 1 1
2.- Preparacin de la solucin patrn intermedia de 5ppm a partir de la
solucin patrn intermedia de 100 ppm.
(100 ppm x V2) patrn primario = (100ml x 5ppm)
V2 = 5 ml (tomar 5 ml de solucin 100ppm y llevarlo a 100 ml para obtener la solucin
intermedia a 5ppm)
3.- Preparacin de patrones a partir de la solucin 5ppm.
PATRON 1: Obtener 0.1ppm a partir de 5ppm en 50 ml
C1 x V1 = C2 x V2
5ppm x V1 = 0.1ppm x 50ml
V1=1ml.
PATRON 2: Obtener 0.2ppm apartir de 5ppm en 50 ml
5ppm x V1 = 0.2ppm x 50ml
V1=2ml.
PATRON 3 : Obtener 0.3ppm apartir de 5ppm en 50 ml
5ppm x V1 = 0.3ppm x 50ml
V1=3ml.
PATRON 4 : Obtener 0.4ppm apartir de 5ppm en 50 ml
5ppm x V1 = 0.1ppm x 50ml
V1=4ml.
PATRON 5: Obtener 0.5 ppm apartir de 5ppm en 50 ml
5ppm x V1 = 0.5ppm x 50ml
V1=5ml.
4.-Hallamos la ecuacin de la curva de calibrado
Con los datos de concentracin y absorbancia se grafica la curva de calibracin y
aplicamos el ajuste por mnimos cuadrados.
= . + = +
p xi yi xi y x y x x2
yi
m i
b i i i i
p xi2 x i
2
; p x x 2
i i
2
2 2
Solucin Concentracin Absorbancia XY X Y
Muestras de A=y
agua ppm = X
Blanco (BK) 0 0 0 0 0.000
CP1 0.1 0.067 0.0067 0.01 0.0045
CP2 0.2 0.129 0.0258 0.04 0.0166
CP3 0.3 0.170 0.051 0.09 0.0289
CP4 0.4 0.244 0.0976 0.16 0.0595
CP5 0.5 0.313 0.1565 0.25 0.0980
Suma total 1.5 0.923 0.3376 0.55 0.2075
50.3376 1.50.923
= = 0.607 1
50.55 (1.5)2
0.550.923 1.50.3376
= = 0.0025
50.55 (1.5)2
= 0.607 + 0.0025
Igualando: = 0.607 + 0.0025
A=(ab).c +0.0025
= (0.6071 ). + 0.0025
5.-Calculo de la concentracin de Nitratos en la muestra 1
La muestra 1 se prepar con 1mL de agua Vida llevados a un volumen de solucin final
de 50mL teniendo como absorbancia valor igual a 0.162, reemplazando este valor en la
ecuacin de la curva de calibracin:
= (0.6071 ). 3 + 0.0025
0.162 = (0.6071 ). 3 + 0.0025
3 = 0.2628
Usamos el factor gravimtrico:
62
3
3 = 3 = 3 14
62
3 = 0.2628 ( ) = 1.1638
14
Hallamos la concentracin de la muestra usando el factor de dilucin:
50
3 = 3 = (1.1638) ( ) = .
1
Concentracion de la Muestra 1 (Agua Vida) mediante el instrumento:
62 50
3 = 3 ()() = (0.2 63) ( ) ( ) = .
14 1
De la misma manera se realiza los calculos para la muestra 2 y 3 en elcual se encuentra
sealado en la tabla de resultados.
TABLA DE RESULTADOS
TABLA N 1
SOLUCIN ESTNDAR MADRE (100 ppm)
Solucin de KNO3 0.1820 g /250ml
TABLA N 2
Preparacin de patrones a partir de la solucin intermedia (5ppm).
Patrn V(ml)
1 1
2 2
3 3
4 4
5 5
TABLA N 3
Muestra de agua mineral sin gas: Vida y Cielo (botella de 625 ml)
Muestra Volumen (ml)
M1 1 ml
M2 2 ml
M3 10 ml
TABLA N 4
CURVA DE PATRONES
Patrones V de la solucin estndar Ppm NO-3 N
(ml)
P1 1 0.1
P2 2 0.2
P3 3 0.3
P4 4 0.4
P5 5 0.5
TABLA N 5
ABSORBANCIA Vs. CONCENTRACION
Lectura de la absorbancia de los estndares preparados = .
Absorbancia Concentracin ()
Blanco (BK) 0.000 0.000
P1 0.067 0.100
P2 0.129 0.200
P3 0.170 0.300
P4 0.244 0.400
P5 0.313 0.500
TABLA N 6
Anlisis de las muestras con el espectrofotmetro
Muestra Absorbancia Concentracin (ppm NO-3)
M1 0.162 0.263
M2 0.224 0.365
M3 0.141 0.229
TABLA N 7
Calculo de la concentracin de la muestra
Muestra Por la curva de calibracin Segn espectrofotmetro
(ppm NO-3) (ppm NO-3)
M1 58.19 58.2357
M2 40.4007 40.4107
M3 5.0524 5.0707
GRAFICOS
Determinacin de curva de calibrado tomada a = .
Absorbancia Vs. C N ppm
0.35
0.3 y = 0.6106x + 0.0012
R = 0.9953
0.25
ABSORBANCIA
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
CN ppm
DISCUSIN DEL METODO EMPLEADO
La determinacin de nitratos en aguas es difcil dado los procedimientos complejos con los que se
cuentan, la gran posibilidad de encontrar sustancias interferentes y los rangos de concentracin
limitados que presentan las diferentes tcnicas.
Entre los mtodos que aparecen para la cuantificacin de nitratos en aguas, se pueden citar:
Cromatografa inica, mtodo espectrofotomtrico ultravioleta selectivo, mtodo del electrodo
de nitrato, mtodo de reduccin de cadmio, mtodo del cloruro titanoso, mtodo automatizado
de reduccin de hidracina, mtodo automtico de reduccin de cadmio.
El mtodo de reduccin de hidracina se basa en la reduccin de nitrato a nitrito, empleando como
agente reductor al sulfato de hidracina. Luego el nitrito se determina espectrofotomtricamente a
540 nm, longitud de onda que es absorbida por el colorante , que se forma por diazotacin con
sulfanilamida y apareamiento con diclorhidrato de N-(1-naftil)-etilendiamina. El rango de
aplicacin de este mtodo es de 0.01 a 10 mg N(NO3-)/L.
El mtodo espectrofotometrico ultravioleta, no es un mtodo especfico para la determinacin de
ion nitrato en agua y debe ser utilizado con los recaudos [Link] mtodo presenta la
dificultad de no ser adecuado para el estudio de aguas contaminadas, es decir slo es vlida su
aplicacin para muestras de agua con bajo contenido en materia orgnica.
Para la determinacin de ion nitrato en aguas subterrneas, el mtodo espectrofotomtrico
ultravioleta selectivo presenta como caractersticas principales la baja demanda de tiempo y
reactivos necesarios y su fcil ejecucin. Comparativamente, esta es una ventaja frente al mtodo
de la reduccin con hidracina.
DISCUSION DE RESULTADOS OBTENIDOS
El max obtenido del barrido inicial es igual a 205.6 nm con absorbancia de 0.020.
Los resultados obtenidos de la concentracin de NO3- en las muestras son Muestra 1 (Vida)
= 58.2357ppm, Muestra 2 (Vida) = 40.4107ppm y Muestra 3 (Cielo) = 5.0707ppm, donde la
muestra 1 se encuentra por encima del valor de lo permitido de 50 ppm segn la OMS,
mientras las dos siguientes muestras sin se encuentran dentro del rango establecido.
Si se trabaja directamente con la solucin stock habra mucho error por eso se trabaja con
solucin intermedia que es una solucin diluida a partir de la solucin madre.
La curva de patrones es a partir de la dilucin de la solucin intermedia.
El blanco se utiliza para corregir las absorbancias de las interferencias.
Se aade HCl 1N para las interferencias que haber en el agua como carbonatos,
hidrxidos, cloruros, etc. La materia orgnica tambin interfiere.
En este equipo solo se cambia el contenido de la celda que tiene la muestra, la otra celda
contiene el blanco, esto hace que los resultados sean ms precisos.
Para leer en UV no es necesaria que la muestra sea coloreada.
La tcnica utilizada es solamente para seleccionar muestras con bajo contenido de materia
orgnica.
En este mtodo es necesario ser muy exactos en las mediciones porque se trata de
cantidades muy pequeas.
CONCLUSIONES
Las sustancias absorben la luz que posee una longitud de onda caracteristica para dicha
sustancia y una fuente de luz de deuterio.
La sensibilidad del instrumento empleado puede generar errores de medicin pues las
muestras pueden contener algunas sustancias orgnicas presentes como trazas.
Los instrumentos de doble haz hacen medidas de forma prcticamente continua de la luz
que atraviesa las celdas de la muestra y de la referencia.
Para evitar los efectos adversos del nitrato sobre la salud humana, la concentracin del
mismo a sido limitada en aguas de bebida a 45 mgNO3-/L en Estados Unidos, 55 mgNO3-/L
en Europa7 , 45 mgNO3-/L en Argentina y 50 mgNO3-/L basado en la recomendacin de la
OMS .
Los resultados obtenidos de la concentracin de NO3-, N- son por debajo de lo permitido
de 50 ppm segn la OMS. Por tanto de esto se concluy que las muestras de agua son
aptas para el consumo humano, siendo la muestra de agua vida la que tiene ms alta
concentracin de nitratos.
Los nitratos generalmente son provenientes del ciclo del nitrgeno en la naturaleza.
Si los nitratos estn por encima de lo que indica la norma puede producir un cuadro de
metahemoglobinemia que se caracteriza por la dificultad de absorcin del oxgeno por la
sangre. Otro problema con la ingesta de cantidades apreciables de nitratos es la formacin
en el organismo de nitritos que se sabe tienen propiedades cancergenas, por lo cual
considero que la aplicacin de la norma es muy dbil para algunas compaas de agua
mineral pues como notamos en la experiencia una muestra estaba cerca del lmite mximo
establecido en nuestro pas.
RECOMENDACIONES
Agitar vigorosamente los patrones y muestras antes de cada lectura ya que si no se
efecta este procedimiento el equipo no leer correctamente las absorbancias.
No tocar con los dedos las paredes de las celdas por donde debe pasar la luz, las huellas
dactilares dispersan y absorben la luz es por eso que se coge de las partes opacas.
La boca de la pipeta debe estar seca para que el lquido contenido baje con facilidad.
BIBLIOGRAFIA
Skoog D. West D. Analisis Instrumental Edit. Mc. Graw HillMexico 1992
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ANEXO
Cuadro comparativo espectrofotmetro de un haz y de doble haz
espectrofotmetro de un haz simple espectrofotmetro de doble haz
- Son los mas comunes,la radiacin solo pasa por -Realizan la medida a cualquier longitud de onda.
una disolucin a una longitud de onda determinada
-Con el blanco en ambas celdas se ajusta el medidor(
-Se ajusta el medidor a cero( 80%T 100% A) cuando 0% A 100%T)
no llega radiacin al detector.
-Con el blanco en la celda por la que pasa el haz de
-Se coloca la muestra en posicin de medida y se lee referencia y sin que llegue ninguna radiacin al
el correspondiente T o A. detector, se lleva el medidor hasta su valor mximo.
-El mas sencillo y barato consta de una bombilla de
Wolframio , alimentada con una batera.
*espectrofotmetro de un haz simple
*espectrofotmetro de doble haz