UNIVERSIDAD NACIONAL DE
EDUCACIN Enrique Guzmn y Valle
LA CANTUTA
BIOLOGIA CELULAR
GUA N2
TINCIN Y OBSERVACIN DE LAS BACTERIAS
INTEGRANTES: Rivera Gonzales Sandra
Teves Mendoza Joel
SECCIN: C-7
PROMOCIN: 2015
2016
INTRODUCCIN
Coloracin Gram
Son tcnicas que permiten observar microorganismos en funcin de la capacidad
de los mismos para retener o no determinadas sustancias colorantes, lo que
depende de la carga de la clula y del colorante.
Los colorantes pueden ser de distintos tipos:
Catinicos: Son sustancias que tienen carga positiva. Penetran en el
interior de las clulas y las tien. Ejemplos: azul de metileno, cristal violeta,
safranina.
Aninicos: Con carga negativa. No penetran en el interior celular, de modo
que no tien las clulas, sino el entorno. En este caso se habla de tincin
negativa. Ejemplos: eosina, nigrosina.
Liposolubles: Se mezclan con los lpidos celulares y los tien. Ejemplo:
negro sudn.
Las tinciones pueden ser:
Simples: Utilizan un solo colorante. Se basan en el hecho de que las
clulas tienen una composicin qumica diferente a la de su entorno, de
modo que ambos se comportan de forma diferente frente a un colorante. El
colorante tie las clulas (azul de metileno, safranina) o no (nigrosina).
Diferenciales: Se basan en el hecho de que distintos tipos de clulas
tienen distinta composicin qumica, y por lo tanto reaccionan de forma
diferente frente a una tincin, lo que permite clasificar los microorganismos
en diferentes grupos, segn su capacidad de tincin. En este apartado
estn dos tinciones de importancia taxonmica y mdica: la tincin de Gram
y la de cido-alcohol resistencia (de Ziehl-Neelsen). Estas tinciones utilizan
ms de un colorante.
Selectivas: Se basan en el hecho de que distintas estructuras celulares
tienen distinta composicin qumica, de modo que se tien selectivamente
con ciertos colorantes. Ejemplos: tincin de esporas, de flagelos, de
paredes celulares, de corpsculos metacromticos. Pueden utilizarse uno o
ms colorantes.
a) Azul de metileno (Tincin positiva).- Permite teir el interior
celular. Tie microorganismos procariticos (vivos o muertos). Los
eucariticos slo se tien si estn muertos. Algunas estructuras,
como los corpsculos metacromticos, se tien ms
intensamente con este colorante que el resto de la clula.
b) Nigrosina (Tincin negativa).- Se trata de un colorante aninico,
que no penetra en el interior celular. Proporciona una visin de la
forma y el tamao celulares al observarse los microorganismos
brillantes sobre un fondo oscuro.
OBJETIVO
Realizar estudios morfolgicos y demostrar la diferenciacin de las
bacterias en dos grupos: Gram positivas (color violeta) y Gram
negativas (color rosado).
MATERIALES
Microscopio compuesto
Porta objetos
Cubre objetos
Asa de siembra
Mechero de alcohol
Colorantes, reactivos:
Cristal violeta o violeta de genciana
Lugol
Alcohol-acetona
Safranina
Muestra: yogurt y sarro dental.
ACTIVIDAD N1
LAS BACTERIAS EN EL YOGURT
Las bacterias cido-lcticas se han empleado para fermentar o crear cultivos de
alimentos durante al menos 4 milenios. Su uso ms corriente se ha aplicado en
todo el mundo a los productos lcteos fermentados, como el yogur, el queso, la
mantequilla, el kfir y el koumiss, constituyen un vasto conjunto de
microorganismos benignos, dotados de propiedades similares, que fabrican cido
lctico como producto final del proceso de fermentacin. Se encuentran en
grandes cantidades en la naturaleza, as como en nuestro aparato digestivo.
La accin de estas bacterias desencadena un proceso microbiano por el cual la
lactosa (el azcar de la leche) se transforma en cido lctico. A medida que el
cido se acumula, la estructura de las protenas de la leche va modificndose (van
cuajando), y lo mismo ocurre con la textura del producto. Existen otras variables,
como la temperatura y la composicin de la leche, que influyen en las cualidades
particulares de los distintos productos resultantes.
El cido lctico es tambin el que confiere a la leche fermentada ese sabor
ligeramente acidulado. Los elementos derivados de las bacterias cido-lcticas
producen a menudo otros sabores o aromas caractersticos. El acetaldehdo, por
ejemplo, da al yogur su aroma caracterstico, mientras que el diacetilo confiere un
sabor de mantequilla a la leche fermentada. Pueden aadirse asimismo al cultivo
de microorganismos, como las levaduras, a fin de obtener sabores particulares.
El alcohol y el dixido de carbono producidos por la levadura, por ejemplo, dan al
kefir, al koumiss y leben (variedades de yogur lquido) una frescura y una
esponjosidad caractersticas. Entre otras tcnicas empleadas cabe mencionar las
que consisten en eliminar el suero o aadir sabores, que permiten crear una
variada gama de productos.
En lo que concierne al yogur, su elaboracin deriva de la simbiosis entre dos
bacterias, el streptococcus thermophilus y el lactobacillus bulgaricus, que se
caracterizan porque cada una estimula el desarrollo de la otra. Cualquier yogur
comercial tambin puede llevar aunque no es necesario Streptococcus lactis. Esta
interaccin reduce considerablemente el tiempo de fermentacin y el producto
resultante tiene peculiaridades que lo distinguen de los fermentados mediante una
sola cepa de bacteria.
Los lactobacilos son bacilos microaerfilos, grampositivos y catalasa negativos,
estos organismos forman cido lctico como producto principal de la fermentacin
de los azcares. Los Lactobacilos homofermentativos dan lugar a cido lctico
como producto principal de fermentacin. Este grupo est integrado por
lactobacillus caucasicus, lactobacillus bulgaricus, lactobacillus lactis, lactobacillus
acidophilus y lactobacillus del brueck, los lactobacilos heterofermentativos
producen adems de cido lctico, dixido de carbono, etanol y otro productos
voltiles, lactobacillus fermenti es heterofermentativo y es capaz adems, de dar
buen crecimiento a temperaturas elevadas.
De (45 C, 113 F), morfolgicamente, algunos bacilos son bastones delgados y
largos, otros son algo parecido al colibacilo, pero, al contrario de este, todos son
grampositivos. Casi todos son inmviles, pero se han sealado excepciones.
Muchos cultivos muestran una forma diplobacilar caracterstica, a menudo
reniforme.
Los Lactobacilos, son microaerfilos o anaerobios, pero despus de cultivos
continuos, algunas cepas pueden desarrollarse en presencia de aire. Sus
necesidades nutritivas son complejas, y la mayor parte de las cepas no puede
cultivarse en los medios nutritivos ordinarios, a menos que se enriquezcan con
glucosa y suero.
Las necesidades individuales de aminocidos varan de 2 a 15, adems, en
general se requiere piridoxina, tiamina, riboflavina, biotina, cido flico y cido
nicotnico, variando las necesidades en cada caso. Estos requerimientos nutritivos
variados tienen aplicacin prctica en tcnicas de dosificacin microbiolgica de
vitaminas y de algunos aminocidos, para los cuales son ms sensibles que los
mtodos qumicos disponibles. En concentracin adecuada, hay cierta relacin
definida, incluso lineal, entre la concentracin de vitamina en un medio de cultivo
adecuado, pero exento de vitamina, y el desarrollo o la cantidad de cido
producidos.
Lactobacilus bulgaris, es una bacteria lctea homo fermentativa. Se desarrolla
muy bien entre 42 y 45, produce disminucin del pH, puede producir hasta un
2,7% de cido lctico, es proteo ltica, produce hidrolasas que hidrolizan las
protenas. Esta es la razn por la que se liberan aminocidos como la valina, la
cual tiene inters porque favorece el desarrollo del streptococcus thermophilus.
Los estreptococos son un gnero de bacterias gram-positivas y catalasa
negativos, esfricas pertenecientes al filo firmicutes. Observadas bajo el
microscopio, se ve que streptococcus thermophilus crece formando pares
(diplococos) o cadenas medianamente largas de clulas esfricas o elipsoides de
un dimetro aproximado de 0,7-0,9 flm. Dentro de sta familia tambin se
encuentran otras especies que son causantes de enfermedades como,
estreptococos del grupo A: streptococcus pyogenes producen amigdalitis e
imptigo; estreptococos del grupo B: streptococcus agalactiae producen meningitis
en neonatos y trastornos del embarazo en la mujer, neumococo: streptococcus
pneumoniae es la principal causa de neumona adquirida en la comunidad,
streptococcus viridans es una causa importante de endocarditis y de abscesos
dentales.
Streptococcus
thermophilus, es
una
bacteria
homo fermentativa
termorresistente produce cido lctico como principal producto de la fermentacin,
se desarrolla a 37-40 pero puede resistir 50 e incluso 65 media hora. Tiene
menor poder de acidificacin que el lactobacilus. En el yogur viven en perfecta
simbiosis.
PROCEDIMIENTO
-
Utilizar yogures comprados y abiertos 1 2 das antes de la prctica. No
mantenerlos en refrigeracin para favoreces el crecimiento bacteriano.
Tomar la muestra de lquido sobrenadante del yogurt con el asa de siembra
y extenderla lo mejor posible sobre el porta objetos (frotis).
Fijar por calor, teniendo precaucin de que la preparacin no se queme.
Colorear: colocando una gota suficiente del colorante cristal violeta o violeta
de genciana sobre la muestra dejndolo actuar por 1 minuto.
Lavar con agua corriente.
Cubrir el porta objetos con Lugol por 30 a 60 segundos.
Decolorar: eliminar el Lugol y lavar la lmina con alcohol-acetona hasta
observar que ya no sale ms colorante.
Lavar la lmina con agua corriente
Coloracin de contraste: colocar unas gotas de safranina o fucsina de Ziehl
por 30 a 60 segundos.
Lavar la lmina, luego observar al microscopio con la lente de inmersin.
Resultado: las bacterias Gram+ aparecern color violeta y las Gram de
color rosado a granate.
Tincin de Gram
La tincin de Gram es una tcnica de laboratorio que permite identificar distintos
tipos de bacterias segn se coloree su superficie, aportando informacin muy til
para orientar el tratamiento antibitico.
La tincin
una
de
Gram, tambin conocida como coloracin de Gram, es
tcnica de laboratorio que se utiliza
rutinariamente
en
los
estudios
microbiolgicos de las bacterias. Fue
diseada por Christian Gram, un
cientfico dans, en el ao 1884. El
objetivo de Gram era conseguir una
prueba con la que fuera posible
diferenciar diferentes grupos de bacterias
para as poder estudiarlas y clasificarlas.
La
prueba result todo un xito y pronto se
convirti en una tcnica muy til no solo para el estudio de las bacterias, sino
tambin para poder identificarlas rpidamente en una infeccin y seleccionar
el antibitico ms adecuado para tratarla.
La tcnica se basa en aplicar una serie de colorantes a una muestra de cualquier
origen (esputo, orina, pus, etctera) que supuestamente contenga bacterias no
identificadas. Los colorantes tien la pared de las bacterias de color morado y, tras
unos minutos, se realiza un lavado del colorante. Despus de eso puede que el
colorante permanezca en la pared bacteriana o que se haya ido. En el primer caso
permanecera el color morado, y se tratara de bacterias Gram positivas y, en el
segundo, la pared tendra un color rosado, y seran Gram negativas.
Estos dos grupos de bacterias son los pilares en los que se basa la clasificacin
de la amplia mayora de las bacterias. Cada uno de los grupos responde de forma
diferente a cada tipo de antibiticos, por eso es una tcnica til para seleccionar el
frmaco antimicrobiano inicial ante una infeccin. Hay que tener en cuenta que en
ciertas situaciones (como la sepsis) es muy importante iniciar un tratamiento
antibitico adecuado de forma precoz, por eso la tincin de Gram se pide de
urgencia en muchas ocasiones.
La tincin de Gram tambin tiene ciertas limitaciones. Algunas bacterias no tienen
pared, como por ejemplo las Chlamidias, y no se podrn identificar, al igual que los
virus. En esos casos la tincin no colorear ningn germen. Otro aspecto negativo
de la prueba es que no puede identificar el tipo exacto de bacteria responsable de
la infeccin. Para ello es necesario realizar un cultivo microbiolgico que se
acompaa siempre de un antibiograma para estudiar de forma exacta el antibitico
ms efectivo.