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Introduccin
Qu es Apoptosis?
Es la muerte celular programada, es
decir, la clula se suicida ya que activa
una serie de protenas (caspasas) que la
autodestruyen.
APOPTOSIS Muerte celular programada
NECROSIS Muerte local + productos residuales + reaccin tisular
La apoptosis es mediada por una serie de
proteasas de cistena, especificas para el
cido asprtico, denominadas caspasas.
APOPTOSIS
NECROSIS
Clulas individuales que
mueren.
Fragmentacin
celular
(cuerpos apoptticos).
Hay contraccin celular en
vez
de
aumento
de
volumen.
Proceso
controlado
dependiente de energa.
No hay liberacin del
contenido citoplasmtico y
los restos celulares son
rpidamente fagocitados.
Grupo de clulas que
mueren.
Destruccin
del
citoesqueleto (Bleb).
Inflamacin.
Procesos
Incontrolado
pasivo (no hay gasto de
energa).
Hay
ruptura
de
la
membrana, el contenido
citoplasmtico sale y hay
atraccin
de
clulas
inflamatorias.
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Necrosis vs Apoptosis
Causas de la Apoptosis
Fisiolgicas
La muerte por apoptosis es un
fenmeno normal que sirve para
eliminar clulas que ya no se necesitan.
Patolgicas
La
muerte
por
apoptosis
tambin es responsable de la prdida de
clulas en diversos estados patolgicos.
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Causas Fisiolgicas
Involucin de tejidos dependientes de hormonas:
*Endometrio, estrgenos y progesterona
*Prstata hormonas masculinas
Renovacin de epitelios (piel, tubo digestivo, etc.)
Eliminacin de clulas que ya han cumplido su funcin
(linfocitos al final de una reaccin inmunolgica)
Eliminacin de clulas infectadas por virus, de clulas
neoplsicas y de clulas de rganos trasplantados (inducida
por linfocitos T citotxicos)
Causas Patolgicas
Apoptosis inducida por lesin al DNA (efectuada por
radiacin y frmacos antineoplsicos).
Lesin celular en ciertas enfermedades vricas, tales como
hepatitis vrica, en las cuales la prdida de las clulas
infectadas se debe, en su mayor parte, a la muerte
apopttica.
Atrofia de rganos tras obstruccin ductal (pncreas,
partida y rin).
Muerte celular en tumores.
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Morfologa Celular durante la
Apoptosis
Sufre una condensacin nuclear
y citoplasmtica .
- Condensacin de la cromatina nuclear
-Desintegracin nucleolar
-Disminucin del tamao celular
-Compactacin del citoplasma
Durante
el
proceso
final
ocurre
fragmentacin del DNA debido a una
ruptura internucleosomal del DNA y se
forman fragmentos nucleares recubiertos de
membrana (cuerpos apoptticos).
Posteriormente son fagocitados por
clulas epiteliales adyacentes, fagocitos
mononucleares
e
incluso
clulas
neoplsicas.
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Objetivo
Verificar en los estudios analizados el
proceso de la apoptosis en diferentes
circunstancias y los genes que
participan en este.
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Mecanismo de la Apoptosis
Va Intrnseca
La va intrnseca de la apoptosis se activa desde
el interior de la clula por daos en el ADN o en
los microtbulos.
Va Extrnseca
La va extrnseca se activa desde el exterior de la
clula por ligandos agonistas de los receptores
pro-apoptticos.
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Genes en la Apoptosis
p53
Detencin del
ciclo celular
Favorece
la
reparacin del
ADN daado
c-myc
Induce
a
apoptosis
Expresin
aumentada
Bcl-2
la
Resistencia de la
clulas
Sobrevivencia
celular
Favorece
las
mutaciones
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Va Intrnseca
Activada por la liberacin de factores pro-apoptticos
mitocondriales (como el citocromo c y la protena
Smac/Diablo).
La quimioterapia y radioterapia, precisan en algunos
casos de la intermediacin de la protena supresora de
tumores p53, causando daos en el ADN.
Bcl-2
*Anti-apoptticos
Sobreexpresin
BAX
Pronostican
*Cncer de mama
*Cncer de ovario
*Pro-apoptticos
La reduccin
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Protenas de la Familia Bcl-2
Es una familia de protenas formada por
alrededor de 25 miembros que regulan
procesos de permeabilizacin mitocondrial y
constituyen un punto clave en la va intrnseca
de apoptosis celular.
Grupo I
Actividad anti-apopttica
Bcl-2, Bcl-xL
Grupo II y III
Actividad pro-apopttica
Bax, Bid, Blk
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Ejercen su accin sobre la mitocondria
Puma y Noxa: Miembros de la familia de las Bcl2
asociados con reacciones pro-apoptticas.
Juegan un papel importante en la apoptosis
mediada por p53.
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Gen p53
La protena p53, tambin llamada
protena tumoral 53, es uno de las
protenas supresoras de tumores
mejor conocidos, codificado por el
gen supresor de tumor TP53,
localizado en el brazo corto del
cromosoma 17 (17p).
Cromosoma 17
Esta protena no solo est involucrada en la induccin de la
apoptosis sino tambin tiene un papel clave en la
regulacin del ciclo celular, diferenciacin, desarrollo,
amplificacin
gnica,
recombinacin
del
DNA,
segregacin cromosmica y senescencia celular, por lo
que es llamada guardin del genoma.
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Va Extrnseca
La va extrnseca de la apoptosis es independiente de
p53 y recibe seales pro-apoptticas desde el exterior y
de las clulas vecinas.
Participan dos familias de receptores: la protena Fas
(CD95) y el factor de necrosis tumoral (TNF)
El FNT puede en ocasiones no conducir a la clula a la
apoptosis sino mas bien estimular su supervivencia.
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Fas
FASCD95
TNFR1
Receptor de
muerte que se une
a un dominio de
muerte intracelular
Molcula
adaptadora con
dominio de
muerte: TRADD
Molcula
adaptadora con
dominio de
muerte: FADD
Mediador de
seales antiapoptoticas
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Apoptosis por va extrnseca
Los receptores de la
membrana celular que
median la apoptosis son
miembros de la familia del
receptor del factor de
necrosis tumoral (FNT).
Tienen una zona de la
molcula ubicada en la
membrana celular que se
une a un ligando y una zona
intracitoplasmtica
denominada dominio de
muerte.
FADD activa a la caspasa 8
o 10 iniciando la apoptosis
El dominio de muerte
citoplasmtico se une a una
protena adaptadora que
tambin tiene un dominio de
muerte denominada FADD
(fas associated death
domain)
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Metodologa
Pacientes con
Sndrome de Down
Pacientes con cncer
prolongado
Pacientes con tumores
slidos, hematolgicos
y linfomas
SD > 34 hombres y 28 mujeres
Control > 18 varones y 12 mujeres
Genes en tipos de cncer
Frmacos
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Metodologa: Actividad de la telomerasa y genes de la apoptosis
como parmetros de envejecimiento en linfocitos de pacientes con
sndrome Down.
62 pacientes con SD
34 Hombre, 28
mujeres
PCR con transcriptasa
inversa (RT-PCR) anlisis
de ETS-2, FASL y Bax
ELISA Bcl-2
18 Hombres, 12
mujeres
Ensayo de la
Telomerasa: TRAP
Ensayo de
fragmentacin
del ADN
Criterio de los
pacientes controles:
estar libres de
infecciones y buena
nutricin
Lo que indujo la
divisin de los
linfocitos
30 pacientes control
Se extrajo sangre y
se distribuyo en
placas de tejidos
Se incub por 48
horas sin y con
irradiacin (2 J/cm2 )
en el laser He:Ne
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Resultados
Tabla 1. Marcadores de proliferacin celular y envejecimiento
replicativo en pacientes de DS en comparacin con controles.
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Figura 1. ETS-2 expresin del ARNm en comparacin con los
pacientes con SD carriles controles 1-3 antes He: Ne laser y
carriles 4-6 despus de He: Ne lser.
Tabla 2. Porcentaje de fragmentacin del DNA, FasL, Fas, Bax
y Bcl-2 en la sangre de los pacientes con SD.
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Figura 2. FasL expresin de ARNm en los pacientes con
Sndrome de Down antes y despus de carriles de exposicin
lser 1-3 antes del lser He: Ne y carriles 4-6 despus lser He:
Ne.
Figura 3. Bax expresin de ARNm en los pacientes de
Sndrome de Down antes y despus de exposicin en carriles
1-3 ante el lser He: y carriles 4-6 despus con el lser He: Ne.
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26
27
Tabla 4. Ensayos clnicos con frmacos pro-apoptticos en
pacientes con tumores slidos y hematolgicos.
(Va intrnseca)
Fase II
Fase III
Oblimersen +
Taxotere
Oblimersen+
Dacarbazina
Fracaso
Demostr
mejora
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Receptores proapoptticos ( Va Extrnseca ) :Apo2L/TRAIL o FasL
que se unen respectivamente a los receptores de muerte celular
Fas, pertenecientes a la superfamilia del FNT.
Ensayo clnico
fase I
administracin por
va
intravenosa de
Apo2L/TRAIL
(Duladermina) a
pacientes con
tumores slidos
Otro ensayo
Duladermina+
paclitaxel+carboplatino+
bevacizumab
PRODUJO:
astenia (38%)(nuseas 28%,
vmitos 23%, estreimiento
18%), fiebre (23%) y anemia
(18%).Toxicidad.
Poco efectivo
Destacando como mejor
respuesta dos casos de
condrosarcoma con una
respuesta parcial prolongada.
no se alcanz
toxicidad limitante
de dosis
Demostr actividad
antitumoral en
pacientes con
adenocarcinoma de
pulmn
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Discusin
Sndrome de Down SD
La actividad de la telomerasa fue
significativamente
mayor
entre
los
pacientes con SD en comparacin con los
controles.
El lser de estimulacin He: Ne aument
significativamente la actividad tanto en
pacientes con Sndrome de Down y los
pacientes controles
La fragmentacin del ADN
de plasma, lo que indica que
el aumento de expresin de
ETS-2
ARNm
induce
la
apoptosis de los linfocitos en
pacientes con sndrome de
Down
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Terapia gnica
El factor TNF ha mostrado un alto potencial teraputico en fases
avanzadas o en tumores slidos como cncer de pncreas, esfago,
sarcoma de tejido blandos y el melanoma.
Al activar Bcl-2, miembro de la
familia
anti-apopttica,
se
demostr la eliminacin de clulas
en el cncer de mama.
Las clulas T expresan una protena de
fusin de las caspasas-9, se activan y
producen la muerte celular por
apoptosis en el tratamiento con
medicamentos.
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Terapia con frmacos
Pacientes con tumores slidos y hematolgicos
tratados con medicamentos que suprimen Bcl-2 y
restauran la sensibilidad a la quimioterapia, como
el oligonucletido Oblimersen.
La combinacin de duladermina con
inhibidores de RANKL, frente a la
administracin aislada de cada uno
de los frmacos, ha demostrado
reducir la afectacin tumoral.
Nuevas formas de Apo2L/TRAIL
ligadas a liposomas,
actualmente en estudio preclnicos, podran mejorar la eficacia
antitumoral de estos frmacos en el futuro
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Conclusiones
La apoptosis es la muerte celular programada que se caracteriza
por una serie de cambios morfolgicos y bioqumicos que se
atribuye a la regulacin precisa de eventos moleculares o
cascadas de sealizacin.
Los frmacos que activan la va intrnseca de la apoptosis (como
Oblimersen) podran ayudar a restaurar la sensibilidad del tumor a
los tratamientos de quimioterapia y radioterapia.
Los frmacos que activan la va extrnseca (como el agonista
rhApo2L/TRAIL) ofrecen la ventaja potencial de actuar
selectivamente sobre las clulas tumorales sin afectar a las clulas
sanas.
La telomerasa aument la actividad y la sobreexpresin de ETS-2
en el cromosoma 21 en pacientes con SD puede contribuir al
aumento de la tasa de senescencia temprana en circulacin
linfocitos.
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Bibliografa
Juan Manuel Anaya C. Carlos Alberto Caas D. Ricard Cervera S. Paula A.
Correa V; Autoinmunidad y enfermedad autoinmune, primera
edicion,2005, paginas 170-173.
[Link]
[Link]
[Link]
[Link]
[Link]
[Link]
[Link]
osis_r_ortiz.pdf
34
Gracias
35
