CASPASAS
Las caspasas son un grupo de protenas perteneciente al grupo de
las cisten-proteasas, caracterizadas por presentar un residuo
decistena que media la ruptura de otras protenas. En el caso de las
caspasas el corte se produce al nivel de un residuo de aspartato de lo
que deriva su nombre (cisteinil-aspartato proteasas). Las caspasas
son mediadores esenciales de los procesos de apoptosis, la muerte
celular programada, de especial relevancia en los procesos
morfogenticos del desarrollo embrionario. Algunas caspasas tambin
estn implicadas en procesos de maduracin proteica como en el
caso de mediadores del sistema inmune del tipo de lainterleucinas.
Por estos motivos, fallos en los procesos mediados por caspasas son
algunos
de
los
principales
responsables
del
desarrollo
de tumores y enfermedades autoinmunes, as como una excesiva
activacin se cree vinculada con enfermedades como el Alzheimer.
Clasificacin y estructura
La familia de las caspasas est compuesta por 14 protenas de las
que 11 se corresponderan con protenas humanas. La primera en
descubrirse fue la enzima convertidora de interleucina-1-b (ICE),
conocida desde entonces como caspasa-1 y responsable de la
maduracin de la pro-interleucina-1-b a su forma pro-inflamatoria y
biolgicamente activa. La importancia de las caspasas como
responsables de los procesos de apoptosis fue establecida por Robert
Horvitz y colaboradores al encontrar que el producto del gen ced-3,
una cisten-proteasa anloga de ICE, estaba implicado en los procesos
de muerte celular durante el desarrollo de C. elegans. Estudios
posteriores permitieron clasificar el resto de la familia de las caspasas
en funcin de su orden de descubrimiento y filogenticamente en dos
grupos, el grupo inflamatorio que estara formado por los homlogos
de ICE como la caspasa-11, y el grupo apopttico, formado por las
relacionadas con ced-3 como las caspasas-3 y -7. Aunque ambos
grupos presentan similitudes en cuanto a la especificidad de sustrato,
el primero mediara la maduracin de citocinas pro-inflamatorias y el
segundo el procesamiento de productos que desencadenaran
cambios celulares incluyendo degradacin del ADN, condensacin
de cromatina y desintegracin de la membrana plasmtica.
Las caspasas contienen tres dominios: un prodominio N-terminal, una
subunidad grande (p20) que contiene el centro activo con cistena
dentro de un motivo conservado QACXG, y una subunidad pequea
(p10) en el C-terminal. Las caspasas son unas de las proteasas ms
especficas con un requerimiento inusual y absoluto de cortar despus
de un residuo de cido asprtico (Asp). El prodominio y la subunidad
grande estn separados por un lugar de corte con Asp, y la subunidad
grande est separada de la pequea por uno o dos motivos de este
tipo. La presencia de Asp en los motivos de corte para la maduracin
es consistente con la habilidad de las caspasas de autoactivarse o de
ser activadas por otras caspasas como parte de una cascada de
amplificacin.
Aparte de clasificarse por su filogenia y funcin general, las caspasas
se pueden clasificar en dos tipos segn su funcin en las diversas
cascadas de sealizacin intracelular en las que median: caspasas
iniciadoras y caspasas efectoras. Las caspasas iniciadoras como las
caspasas-8 y -9 procesan las formas inactivas de las caspasas
efectoras como las caspasas-3 y -7, activndolas. Las caspasas
efectoras una vez activadas procesan a su vez otros sustratos
proteicos que mediarn en las distintas vas de apoptosis. La
iniciacin de estas reacciones en cascada est regulada por
inhibidores de caspasas.
Regulacin y mecanismos de accin
Como ya se ha comentado, las caspasas estn reguladas a nivel
postraduccional, asegurando as que puedan ser activadas
rpidamente.
En
un
primer
momento
son
sintetizadas
como zimgenos inactivos (pro-caspasas) con su estructura clsica
consistente en un prodominio, una subunidad pequea y una
subunidad grande. Las caspasas iniciadoras poseen un prodominio
mayor que las caspasas efectoras que contiene dominios como los de
reclutamiento y activacin de caspasas (CARD) en el caso de
caspasa-2 o caspasa-9 (ver Apaf-1) o efectores de muerte celular
(DED) en el caso de caspasa-8 y -10, que le permite interactuar con
otras molculas que regulan su activacin. Estas molculas
responden a estmulos, ocasionando el agrupamiento de las caspasas
iniciadoras, lo que les permite autoactivarse y as proceder a activar a
las caspasas efectoras. En todos los casos estudiados, la enzima
madura es un heterotetrmero que contiene dos heterodmeros
p20/p10 y dos centros activos. Existen tres mecanismos generales de
activacin de caspasas:
1. Activacin por otra caspasa: en base a su estructura en la
que un punto de corte de Asp separa el prodominio de p20 y
uno o dos separan p20 de p10 se puede suponer que una
posibilidad de activacin sea la autocatlisis, es decir, la
activacin de una pro-caspasa exponindola a otra previamente
activada. Esta estrategia de activacin denominada cascada de
caspasas es muy utilizada por las clulas para la activacin de
las caspasas efectoras de prodominio corto. La cascada de
caspasas es un mtodo til para amplificar e integrar las
seales proapoptticas, pero no pueden explicar cmo se activ
la primera caspasa. Existen al menos dos aproximaciones que
explican dicha activacin.
2. Activacin inducida por proximidad: la caspasa-8 es la
caspasa iniciadora clave en la va de los receptores de muerte.
Despus de la unin del ligando, los receptores de muerte
como Fas se agregan y forman un complejo de sealizacin de
membrana. Estos complejos reclutan, a travs de sus protenas
adaptadoras, varias molculas de procaspasa-8 con lo que se
aumenta la concentracin local de zimgeno. En estas
condiciones, la baja e intrnseca actividad proteasa de la
procaspasa-8 es suficiente para permitir que varias molculas
inactivas se corten mutuamente y se activen unas a otras.
3. Asociacin con una subunidad reguladora: el mecanismo
de activacin ms complejo es el utilizado por la caspasa-9. Al
contrario que en otras caspasas, el procesamiento proteoltico
de la procaspasa-9 tiene un efecto mnimo en su activacin. El
requerimiento clave para la activacin de la caspasa-9 es su
asociacin con un cofactor de protenas, Apaf-1. Tambin es
necesario el citocromo c liberado por la mitocondria. El
citocromo c y Apaf-1 se asocian en un proceso ATP dependiente.
La oligomerizacin de Apaf-1 recluta procaspasas-9 formando
el apoptosoma. La activacin de la caspasa-9 es debida a un
cambio conformacional, no a exclusivamente a la proteolisis.
En resumen, las caspasas efectoras se activan proteolticamente por
otras caspasas mientras que las caspasas iniciadoras son activadas
por interacciones reguladas protena-protena. La cascada de
caspasas puede ser activada por la granzima B liberada por
los linfocitos T citotxicos (CD8+) y que activa las caspasas-3 y -7,
por receptores de muerte celular como Fas, TRAIL o TNF que activan
las caspasas-8 y -10 o por el apoptosoma, regulado por la familia Bcl2 y el citocromo c que activa la caspasa-9. Una vez activada esta
cascada, procesos de retroalimentacin positiva aseguran que la
clula inevitablemente sufrir apoptosis. Por ejemplo, la caspasa-9
activada por el apoptosoma procesa y activa la caspasa-3 que,
adems de procesar sus protenas diana, procesa a la propia caspasa9, aumentando la concentracin de su forma activa.
Algunas de las dianas finales de las caspasas incluyen las lminas
nucleares, el sistema de fragmentacin de ADN ICAD/DFF45, la poliADP-ribosa polimerasa (PARP) y la kinasa PAK2. La contribucin
exacta de las diferentes caspasas y el procesamiento de sus
respectivas dianas a la apoptosis es todava incierta. Sin embargo, s
se sabe que la inactivacin del complejo ICAD/DFF45 mediada por
caspasas permite a la protena CAD entrar en el ncleo y fragmentar
el ADN, originando la caracterstica "escalera de ADN" que se observa
en clulas apoptticas.