RMN en dos dimensiones
Dr. Federico del Ro Portilla Instituto de Qmica U.N.A.M.
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RMN en dos dimensiones
Jeener propone en 1971 la RMN de 2D. 1977, Ernst y Jeener realizan el primer experimento de RMN en 2D. Grupos de Ernst y Freeman impulsan la RMN en 2D. Para 1985 existen ms de 500 experimentos de RMN en 2D. RMN en 3D, 1991.
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Experimentos de ms de una dimensin
1D : S(t) 2D : S(t1, t2) S(F1,F2) S(F) P(t1, F2)
3D : S(t1, t2, t3) Q(t1, F2, F3)
P(t1, t2, F3) R(F1, F2, F3)
Experimento en dos dimensiones.
Fundamentos
Periodo de preparacn
Los espnes nucleares se encuentran en un estado pseudo-estacionario.
Evolucin.
Se introduce un tiempo en la secuencia de pulsos que variar en intervalos finitos.
Mezclado.
Modulacin de los espines nucleares de acuerdo al prametro a observar.
Adquisicin.
Periodo normal de adquisicin.
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Ejemplo de un experimento en 2D.
13C
90 x
t1 t2
1H
Considerese un sistema de dos ncleos AX, como el CHCl3. Evolucin de la seal como funcin del segundo tiempo. Ecuacin que gobierna la altura:
cos( Jt1)
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Factor fundamental en la RMN en 2D.
Inclusin de un tiempo variable en la secuencia de pulsos.
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Representacin de Experimentos en 2D.
Diagrama de contornos. Diagrama en 3 dimensiones.
Representacin de Experimentos en 2D.
Representacin en 3D. No es prctica.
Consume memoria. Tarda mucho en graficarse.
Existen los diagramas de contorno.
Interpretacin de Espectros en 2D
Diagrama de contornos
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Adquisicin
Se requiere de la adquisicin de varios FIDs. El tiempo variable pude estar definido por el software o por el usuario. Es necesario definir la resolucin digital en la dimensin indirecta. El tiempo del experimento vara de unos minutos hasta fines de semana, dependiendo del tipo de experimento y de la cantidad de muestra.
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Como procesamos
Definir el nmero de puntos en ambas dimensiones (zero filling). Apodizar sta dimensin de acuerdo al resultado del espectro. Transformar la dimensin de adquisicin. Ajustar la fase en la primera dimensin. Apodizar la siguiente dimensin. Transformar la dimensin indirecta. Ajustar la fase con el espectro completamente procesado.
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Limitaciones del procesamiento
Experimento en una dimensin:
Aproximadamente 8192 puntos, equivalen a 32,768 bytes o 32 Kbytes
Experimento en dos dimensiones:
1024 X 1024 X 4 = 4,1941,304 bytes o 4.2 Mbytes.
Si se incrementa la resolucin al doble, la memoria necesario se incrementa cuatro veces: 16.8 Mbytes y el tiempo del procesamiento aumenta tambin en un factor de 4.
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Experimentos en modo absoluto
Emplea la relacin: (Real**2 + Imaginario**2)1/2 No se requiere ajustar la fase en ninguna dimension. Apodizarlos en ambas dimensiones. Ejemplos: Cosy y Hetcor.
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Experimentos en modo fase sensible
Requiere ajustar la fase en ambas dimensiones. Procesamiento complejo. Necesario adquirir parte real e imaginaria en la dimensin indirecta. Apodizarlos en ambas dimensiones. Ejemplos: Noesy, Tocsy y HSQC.
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Clasificacin de los Experimentos en 2D
Homonucleares.
COSY COrrelated SpectroscopY. NOESY NOE SpectroscopY. TOCSY Total Correlated SpectroscopY. DQF-COSY Double Quantum Filetered COSY.
Heteronucleares.
Deteccin Directa.
HETCOR HETeronuclear CORrelated spectroscopy. FLOCK.
Deteccin Indirecta.
HSQC Heteronuclear Simple Quantum Coherence. HMQC Heteronuclear Multiple Quantum Coherence. HMBC Heteronuclear Multiple Bond Coherence.
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COSY
Correlacin de nlceos de la misma especie protn-protn o flor-flor.
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Forma de las seales en los experimentos COSY fase sensible. a) y c) lneas de absorcin; b) y d) lneas de dispersin.
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TOCSY
Correlacin de nlceos de un mismo sistema de espn.
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NOESY
Correlacin de nlceos a travs del espacio.
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Deteccin heteronuclear
Directa, observa directamente al ncleo menos sensible. Indirecta, observa al protn.
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Deteccin heteronuclear Directa
Ventajas:
El ncleo menos sensible, por lo general tiene la ventana espectral mayor. La determinacin directa permite una mayor resolucin en esta dimensin en menor tiempo. Los probes eran construidos para observar carbono o al ncleo menos sensible.
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HETCOR
Correlacin de nlceos heteronucleares por su desplazamiento qumico. DETECCIN DIRECTA.
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FLOCK
Correlacin de nlceos heteronucleares a dos y a tres enlaces de distancia. DETECCIN DIRECTA.
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Deteccin heteronuclear Indirecta
Ventajas:
Se observa protn que es el ncleo ms sensible. La sensibilidad se incrementa al doble. Pese a:
Menor digitalizacin en el ncleo X. Eliminacin de la seal de H-12C. Cambio de probes. Electrnica ms fina.
Mejor experimento.
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HMQC
Correlacin de nlceos heteronucleares por su desplazamiento qumico a un enlace de distancia. DETECCIN INDIRECTA.
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HSQC
Correlacin heteronuclear a un enlace de distancia. DETECCIN INDIRECTA.
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HMBC
Correlacin heteronuclear a dos y tres enlaces de distancia. DETECCIN INDIRECTA.
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