Dr. Mariano J. Morales Amella Laboratorios Albitar.

Arzobispo Apaolaza, 12 50009 Zaragoza Telf: 976-306495 FAX: 976-306496 Email: laboratorio@[Link] [Link]

TOMA DE MUESTRA PARA ANLISIS

En Medicina se emplea el concepto normal para describir los hallazgos que s objetivizan de ordinario, en los pacientes sanos. Por ello, es sorprendente y perturbador que de tal filosofa, incluso utilizando tcnicas idnticas, se obtengan en parte valores muy divergentes. Una porcin de esas discrepancias se debe al distinto esmero con el cual se llevan a cabo los procesos para realizar las determinaciones. Y nos encontramos que en la cadena de elaboracin de un determinado anlisis, existen puntos crticos en los que debemos ser exigentes con nosotros mismos. El primer eslabn del proceso es la toma y recogida de muestras. Todo el intento para evitar errores preanalticos dar como resultado fiabilidad, calidad y por supuesto anlisis interpretables.

I. TOMA Y ENVIO DE UNA MUESTRA PARA REALIZAR HEMATOLOGIA

ESTUDIO

La hematologa es una especialidad mdica que tiene una gran dependencia de los mtodos de laboratorio en general y de las tcnicas citolgicas en particular, recordemos que esta ltima resuelve la problemtica diagnstica en un 80% de las hemopatas. Para realizar un correcto anlisis hematolgico, la sangre tiene que seguir conservando sus caractersticas fsico-qumicas para que no existan alteraciones o artefactos en la muestra extrada y que pudieran dar lugar a resultados errneos. Las muestras de sangre deben recogerse en animales que han estado en ayunas. El perodo de ayuno debe ser al menos de 8 horas y preferiblemente de 12 horas. La primera premisa a respetar para realizar un anlisis hemocitolgico es que la sangre obtenida y transferida a un tubo con anticoagulante no tenga cogulo. La segunda premisa es conservar siempre la proporcin entre sangre y anticoagulante.

EL EDTA
Es el anticoagulante de eleccin para hematologa, se utiliza a una concentracin 1 mg por 1 c.c. de sangre o 0.5 mls de solucin al 1 % para 5 mls de sangre, o 0.1 mls de solucin al 1% para 1 mls de sangre. Una excesiva prolongacin con el anticoagulante hace que se altere las clulas sanguneas. Se recomienda realizar un frotis sanguneo si el envo se prolonga ms de 24 horas. Tambin es el anticoagulante de eleccin para Test de Coombs y para realizar tinciones citoqumicas.

LA HEPARINA
No es el anticoagulante de eleccin en hematologa. Se utiliza a una concentracin de 0.2 c.c. de heparina saturada por cada 1 c.c. de sangre. Las alteraciones que se producen son: degeneracin nuclear de los neutrfilos, deg No es APTA par estudios de inmunohematologa: Test de Coombs. No se utiliza para las tinciones citoqumicas.

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El resumen de la toma de muestras y envo en hematologa sera: 1- Emplear sangre con EDTA, manteniendo siempre la proporcin sangre/anticoagulante. 2- Envo de la muestra refrigerada, NUNCA congelar o situar la muestra junto a la pared del acumulador trmico. 3- Si es posible enviar frotis SOLO FIJADO SIN TEIR. 4- Empleo de tubos de un solo uso y estriles. No se pueden realizar contajes celulares en sangres de ms de 3 das de antigedad.

TOMA Y ENVIO DE UNA MUESTRA PARA REALIZAR ESTUDIO DE HEMOSTASIA O PRUEBAS DE COAGULACIN
El citrato sdico al 3.8% es el anticoagulante de eleccin para los estudios de coagulacin. Se utiliza a una concentracin de un parte de citrato sdico 0.11 M por nueve partes de sangre total. Es totalmente necesario e imprescindible mantener la relacin anticoagulante/ sangre para realizar las pruebas de coagulacin, los valores obtenidos sin esta relacin no tienen ningn valor diagnstico. Ejemplo: para conseguir un volumen total de muestra de 3 cc se deben poner en la jeringa 0,3 cc de citrato y extraer 2,7 cc de sangre (0,3 x 9). Una vez obtenida la muestra, se mezcla y se deja a temperatura ambiente durante 5-7 minutos. Se centrifuga la muestra a 2500-3500 rpm durante 15 minutos y se separa el plasma por pipeteado a otro tubo de plstico dentro de los 30 primeros minutos post-extraccin. Refrigerar en caso de envo rpido. Congelar a C en caso de envo retardado (> de 4 horas hasta 15 das como 28 mximo) La congelacin o descongelacin pueden producir la crioprecipitacin de algunos factores de coagulacin.

TOMA Y ENVIO DE UNA MUESTRA PARA REALIZAR BIOQUMICA Y ELECTROFORESIS.

ESTUDIO DE

Se puede emplear plasma y/o suero para la bioqumica y suero para la electroforesis.

SEPARACION DEL PLASMA

El tubo que contiene sangre ms anticoagulante se debe centrifugar a 1.500-2.000 r.p.m. durante 10-15 minutos. El plasma que es la capa ms externa se puede extraer entonces empleando una pipeta Pasteur o un cuentagotas y se transfiere a un tubo de almacenamiento estril y conservarlo en refrigeracin o congelacin.

SEPARACION DEL SUERO

Se deja que la sangre -transferida a un tubo sin anticoagulante- coagule completamente en el tubo. Cuanto ms tiempo se deje el tubo a temperatura ambiente, alrededor de dos horas, mayor cantidad de suero se obtendr y ms pruebas diagnsticas se podrn realizar. A temperatura ambiente entre 20-25 C la sangre transferida al tubo se debe dejar un mnimo de media hora y preferiblemente de 1-2 horas, la coagulacin y la retraccin se pueden producir mucho ms rpidamente si se incuba el tubo a 37 C. durante 30 minutos y en ambos casos el tubo con la sangre se pone despus en refrigeracin durante 30-60 minutos.

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Una vez obtenida la retraccin del cogulo se centrifuga igual que si de plasma se tratase. Normalmente por cada 1 cc de sangre entera se pueden obtener 0.3 cc de suero. La separacin del cogulo es perfecta si se emplean tubos de vidrio o de poliestireno tratados, los tubos de plstico o de poliestireno sin tratar no son aconsejables porque la retraccin del cogulo es menor, el cogulo se adhiere a las paredes, e incluso se puede alojar en la parte superior del tubo, haciendo que la separacin del cogulo sea ms difcil y a la hora de intentar separar el cogulo se produzca hemlisis, que es el enemigo de la mayora de las pruebas bioqumicas, hormonales y de electroforesis. Lo que nunca se debe hacer es centrifugar la sangre antes de que se complete la coagulacin, en estas situaciones se formarn cadenas de fibrina que retendrn en su arquitectura, enzimas (ALT, AST, lipasa...), substratos (calcio, fsforo, colesterol...), iones (sodio, potasio, cloro...), protenas (anticuerpos, globulinas...), hormonas y metabolitos y, los resultados obtenidos de estos sueros siempre sern menores -y por consiguiente inexactos- a los obtenidos de sueros normalmente procesados. Tambin es importante resaltar que no se deben poner los tubos con sangre sin anticoagulantes inmediatamente a la temperatura de 4 C ya que tampoco se obtendr la retraccin del cogulo. Si la extraccin de sangre se realiza a ltima hora de la tarde, es preferible dejarla en reposo a 20-25 C. durante toda la noche y a la maana siguiente ponerla en refrigeracin a 4 C durante 30 minutos y separar el suero. Si la muestra ha de ser enviada al Laboratorio sta debera estar separada del cogulo ya que los golpes sufridos por las clulas en el cogulo, durante el viaje, puede originar su rotura y que se produzca hemlisis, que afectar negativamente a la mayora de las pruebas. En resumen para la correcta realizacin y envo de muestras para realizar pruebas bioqumicas y electroforesis se debe emplear suero o plasma separado en tubos de poliestireno estriles y refrigerados a 4C y si est congelado mucho mejor. En la siguiente tabla se expone la interferencia de los diferentes anticoagulantes utilizados, influencia de factores externos y estabilidad de las pruebas comnmente utilizadas en Medicina Veterinaria.

HORMONAS
Excepto algunas hormonas que requieren unas condiciones de manejo especiales, se deben seguir exactamente los pasos explicados en el apartado separacin del suero. Se aconseja siempre suero y en segundo lugar plasma de con heparina. Para la determinacin de hormonas tiroideas no se debe utilizar sangre+edta.. Para la determinacin de ACTH se debe emplear sangre+edta.

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ESTABILIDAD E INTERFERENCIAS DE LAS PRUEBAS BIOQUMICAS.

Hemlisis quiere decir que por lo menos hay 5 gr/l de Hemoglobina. Ictericia: quiere decir que por lo menos hay 10 mg/dl de Bilirrubina. Lipemia: quiere decir que por lo menos hay 500 mg/dl de Lpidos.
ANTICOAGULANTE ACIDOS BILIARES ACIDO URICO ALBMINA ALFA AMILASA ALT/ GPT AST/GOT BILIRRUBINAS CALCIO COBRE COLESTEROL COLINESTERASA CLORO CREATININA Estabilidad 2-8 C INTERFERENCIAS Suero o plasma La hemlisis interfiere 7 das Suero, plasma Hemlisis: Interfiere 7 das Lipemia: Interfiere Suero o plasma No hay interferencias 1 mes NO EDTA significativas Suero, plasma La hemlisis interfiere 30 das Suero, plasma La lipemia puede interferir 7 das Suero, plasma con EDTA o La hemlisis y lipemia puede 7 das heparina interferir los resultados. Suero, plasma con La hemlisis interfiere 2 das Luz interfiere Suero o plasma con La hemlisis y lipemia 2 das heparina. NO USAR EDTA interfiere Suero La hemlisis interfiere 14 das Suero o plasma No hay interferencias 7 das significativas Suero o plasma No hay interferencias 3 das significativas Suero o plasma c Hemlisis interfiere 2 das Suero o plasma Le hemlisis, ictericia no 3 das interfiere. La lipemia puede interferir Suero La hemlisis, ictericia no 7 das interfiere. La lipemia interfiere. Suero Hemlisis interfiere 2 das Suero y Heparina No Hemlisis interfiere 7 das EDTA Suero o plasma con No hay interferencias 7 das heparina. No EDTA Solo suero. No EDTA Libre de hemlisis 7 das Solo suero. No EDTA Hemlisis, hemoglobina y 5 das lipemia interfieren Suero o plasma No hay interferencias 5 das Suero o plasma Interfiere hemlisis, lipemia e 1 da ictericia Suero o plasma heparina Hemlisis y lipemia 7 das interfieren Suero o plasma Separacin Hemlisis y separacin tarda 24 horas rpida Suero o plasma No EDTA Hemlisis interfiere 5 das Suero o plasma. No EDTA Hemlisis interfiere 10 das SANGRE+EDTA Hemlisis interfiere 2 das Suero o plasma heparina Hemlisis y lipemia interfiere 2 das Suero o plasma heparina Hemlisis y lipemia interfiere 2 das Suero o plasma Ictericia interfiere 5 das Suero o plasma Hemlisis y amonio interfiere 7 das

CK CREANTINQUINASA

FACTOR REUMATOIDE FOSFATASA ALCALINA FOSFORO FRUCTOSAMINA GGT GLUCOSA GlDH HIERRO LDH LIPASA MAGNESIO PLOMO POTASIO SODIO TRIGLICERIDOS UREA

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ESTABILIDAD SEGN LA TEMPERATURA DE ALMACENAMIENTO

Estabilidad a 20-25 C Estabilidad a + 4C Estabilidad a -20-25C

cidos biliares Albmina Amilasa ALT /GPT AST/GOT Amoniaco: Calcio Cloro Cobre Colinesterasa Creatinina CK activada Fosfatasa activada Fsforo GGT Glucosa Hierro total Lactato LDH Lipasa Magnesio Potasio Protenas totales SDH Sodio Triglicridos Urea

8 horas 6 das 7 das 1 da 1 das Inestable 10 das 2 das 2 das 7 das 24 horas 2 das Perdida de un 10% sin separar 2 das 5 das 8 horas 4 das 3 horas 2 das 1 das 7 das Aumento de un 10% 7 das Inestable 2 semanas Disminucin 20% sin separar el suero 24 horas

1 mes 6 das 6 das 7 das 7 das 2 horas en EDTA 10 das 7 das 4 das 7 das 2 das 7 das 7 das 7 das 10 das 7 das 7 das 1 da 1-3 das 7 das 7 das 2 semanas 1 mes 1 da 2 semanas 3 das 3 das

Varios meses Varios meses Varios meses 1 mes 1 mes Inestable 8 meses 7 das 8 meses 3 meses Varios meses 1 mes 1 mes Varios meses 1 mes 1 mes 1 mes No congelar 1 mes Varios meses 2 das 4 meses 6 meses