PROPUESTA DE PROTOCOLO DE VALIDACIÓN

Código: PRT-VAL-LIM-004
LABORATORIO DE LIMPIEZA Versión: 01
FARMACÉUTICO Vigencia: 2026 - 2029
Línea Multiproducto de Formulación, Llenado Aséptico y Envase
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(Inyectables)

1. OBJETIVO Y ALCANCE

1.1 Objetivo: Proporcionar la evidencia documentada demostrativa de que los procedimientos operativos
estandarizados de limpieza (POE) aplicados al tren de equipos de la línea de formulación, llenado aséptico y envase
estéril remueven de manera consistente y reproducible los residuos de productos activos, detergentes, carga microbiana
y endotoxinas bacterianas por debajo de los límites de aceptación previamente establecidos y justificados
científicamente.

1.2 Alcance: Este protocolo aplica a la línea multiproducto compartida de soluciones inyectables parenterales (viales y
jeringas prellenadas), la cual procesa los siguientes productos biofarmacéuticos y biológicos:

• Nimotuzumab: Anticuerpo monoclonal recombinante humanizado anti-EGFR (~150 kDa).

• Eritropoyetina Humana Recombinante (rHu-EPO): Glicoproteína eritropoyética (~30 kDa).
• Heparina Sódica: Glicosaminoglicano de origen biológico / derivado químico (~12–15 kDa).
• Heberprot-P®: Factor de Crecimiento Epidérmico Humano Recombinante (rhEGF, ~6 kDa).

2. MARCO REGULATORIO Y PRERREQUISITOS

El diseño de este protocolo se fundamenta en los lineamientos técnicos y normativos vigentes de:

• INVIMA (Colombia): Guía ASS-AYC-GU012 "Guía para la Validación de los Procesos de Limpieza en la Fabricación
de Productos Farmacéuticos" (2022).
• PDA Technical Report No. 29: "Points to Consider for Cleaning Validation" (Revised 2012).
• PDA Technical Report No. 49: "Points to Consider for Biotechnology Cleaning Validation" (2010).
• EMA & WHO: Guías sobre límites de exposición basados en la salud (HBEL / PDE / ADE).

Prerrequisitos Cumplidos requeridos por la Guía INVIMA (Numeral 5.1):

1. Procedimiento Operativo Estandarizado (POE) de limpieza calibrado y aprobado.
2. Calificación de Instalación, Operación y Desempeño (IQ/OQ/PQ) del tren de equipos.
3. Calificación de la cobertura de lavado CIP mediante la prueba de Riboflavina (Ver Sección 3).
4. Sistema de Agua para Inyección (WFI) e Inerte (Nitrógeno/Vapor Puro) completamente validado.
5. Métodos analíticos fisicoquímicos (TOC, HPLC/UPLC, Conductividad) y microbiológicos validados con estudios de
recuperación de superficie (% Rec > 70% o corregido si > 50%).
6. Personal operativo y analítico debidamente capacitado y calificado.

3. CALIFICACIÓN DE COBERTURA (PRUEBA DE RIBOFLAVINA)

Antes de la ejecución de las corridas de validación de limpieza, se debe verificar cuantitativa y cualitativamente la
capacidad de cobertura mecánica del sistema CIP/spray balls y la ausencias de "zonas de sombra" en los tanques de
formulación y reactores de mezcla.

3.1 Procedimiento de la Prueba de Riboflavina

1. Preparación de Solución: Preparar una solución de Riboflavina (Vitamina B2) a una concentración de 0.005% a
0.01% m/v en Agua Purificada.

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 2. Aplicación / Impregnación: Aspersar la solución de riboflavina de forma homogénea sobre el 100% de las
superficies internas del tanque de formulación, garantizando el rociado en la tapa superior, paletas del agitador,
rompemeclas (baffles), tubo de inmersión, sonda de temperatura y puerto de descarga inferior.
3. Secado: Dejar secar la solución sobre la superficie durante un periodo mínimo de 15 a 30 minutos.
4. Inspección Inicial UV: Inspeccionar la superficie interna utilizando una lámpara de Luz Ultravioleta (Luz Negra,
longitud de onda 365 nm) en condiciones de penumbra para corroborar la fluorescencia amarillo-verdosa continua.
5. Ciclo de Enjuague Desafío: Ejecutar un ciclo de enjuague rápido preestablecido con WFI utilizando la presión y
flujo mínimo especificado en el POE de limpieza.
6. Evaluación de Aceptación: Inspeccionar nuevamente con luz UV (365 nm).

Criterio de Aceptación de la Prueba de Riboflavina: Ausencia total de fluorescencia en el 100% de la superficie interna
inspeccionada. No se permite residuo visible bajo luz UV, confirmando la cobertura completa del fluido de limpieza y la
efectividad mecánica de las bolas de aspersión (spray balls) y componentes internos.

4. LISTADO DE DATOS REQUERIDOS PARA DEFINIR LÍMITES Y MATRIZ DE PEOR CASO

Para dar cumplimiento estricto al numeral 5.1.9 y 5.1.10 de la guía INVIMA ASS-AYC-GU012, se recopila la siguiente
información técnica y posológica de los productos y equipos de la línea:

• Nombre del Ingrediente Farmacéutico Activo (IFA)

• Peso molecular, estructura y naturaleza (proteína/polisacárido)
• Dosis Terapéutica Mínima Diaria ($D_A$ o $MDD$)
• Dosis Letal Media ($DL_{50}$ en animales) y ruta de administración
• Límite de Exposición Basado en Salud ($PDE$ / $ADE$ / $HBEL$)
• Solubilidad en agua, medio ácido y medio alcalino
• Estabilidad térmica y susceptibilidad a la desnaturalización/hidrólisis
• Tamaño de lote mínimo ($T_B$ en mg o unidades)
• Peso o volumen de la unidad de dosis ($C_B$)
• Número máximo de dosis diarias tomadas por el paciente ($J_B$)
• Posología y duración del tratamiento
• Listado de equipos compartidos en la ruta (tanques, filtros, mangueras, agujas de llenado)
• Área Superficial Total de contacto directo con el producto ($L$ en $ ext{cm}^2$)
• Materiales de construcción (Acero 316L, PTFE, EPDM, Silicona, Vidrio borosilicato)
• Área de muestreo por hisopado ($M$, ej. $25 ext{ cm}^2$ o $100 ext{ cm}^2$)
• Volumen de solvente de extracción del hisopo ($SEA$ en mL)
• Volumen total de agua de enjuague final ($V_{enjuague}$ en L)
• Porcentaje de Recuperación del Método Analítico ($\%R$)
• Concentración, $DL_{50}$ y composición del detergente empleado

Fuente / Documento de
Categoría de Dato Parámetro / Variable Requerida
Referencia

Propiedades del Producto Dossier de Registro Sanitario, Fichas de Seguridad (MSDS),

(IFA) Monografía Farmacológica, Informes Toxicológicos.

Parámetros del Producto Registros Maestros de Producción (Batch Records), Ficha

Siguiente (Producto B) Técnica del Producto.

Datos del Tren de Equipos Expedientes de Calificación de Equipos (IQ/OQ), Planos de

Disposición Escemática de Áreas Superficiales.

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 Fuente / Documento de
Categoría de Dato Parámetro / Variable Requerida
Referencia

Parámetros de Muestreo y POE de Muestreo de Limpieza, Informes de Validación de

Limpieza Métodos Analíticos, Ficha Técnica del Detergente.

5. ANÁLISIS DE RIESGO Y MATRIZ DE PEOR CASO (INVIMA NUMERAL 5.1.9)

Para determinar el producto Peor Caso A (el producto más contaminante / más difícil de limpiar) y el Peor Caso B (el
producto más susceptible de ser contaminado), se diseña una matriz ponderada multidisciplinaria acorde con los
criterios de la Guía INVIMA y PDA TR 49.

5.1 Criterios de Evaluación para Peor Caso A

• Solubilidad y Dificultad de Limpieza (Ponderación 30%): Facilidad de remoción de la superficie y comportamiento

ante la temperatura/pH. La heparina es muy soluble en agua, mientras que el Nimotuzumab y Heberprot-P pueden
adherirse a superficies de acero/vidrio.
• Toxicidad / Potencia Biomédica ($PDE$/$DL_{50}$) (Ponderación 30%): Evaluación del riesgo toxicológico. La
EPO posee una potencia biológica extremadamente alta a dosis microscópicas.
• Dosis Terapéutica Mínima (Ponderación 20%): A menor dosis, mayor criticidad.
• Tamaño de Lote y Frecuencia de Fabricación (Ponderación 20%): Menor tamaño de lote genera mayor
concentración potencial de residuo.

Dosis
Solubilidad / Toxicidad / Tamaño Puntaje
Producto (IFA) Mínima Clasificación
Limpieza (1-5) Potencia (1-5) Lote (1-5) Total
(1-5)

Nimotuzumab (50 4 (Media-Baja) 3 (Moderada) 2 (Dosis 3 (Mediano) 3.10 Candidato A

mg/vial) alta)

rHu-Eritropoyetina 3 (Moderada) 5 (Muy Alta 5 (Muy baja 4 (Lote 4.20 PEOR CASO
(EPO) Potencia) µg) Pequeño) A

Heparina Sódica 1 (Muy Alta) 2 (Baja) 2 (Dosis 2 (Lote 1.70 Bajo Riesgo
(5000 UI/mL) Alta) Grande)

Heberprot-P® (75 3 (Moderada) 4 (Alta - Factor 4 (Baja 5 (Lote 3.90 PEOR CASO
µg/vial) Crecimiento) dosis) Pequeño) B

Conclusión de la Matriz:
• Peor Caso A (Producto Limpiado): Eritropoyetina Humana Recombinante (rHu-EPO). Debido a su elevada potencia
biológica, pequeña dosis terapéutica y tamaño de lote reducido, representa la mayor amenaza de contaminación
cruzada.
• Peor Caso B (Producto Siguiente): Heberprot-P®. Se selecciona como el producto subsiguiente más crítico debido
a su reducido tamaño de lote mínimo y administración en heridas abiertas (alta susceptibilidad a contaminación).

6. CRITERIOS Y FÓRMULAS PARA EL CÁLCULO DE LÍMITES DE ACEPTACIÓN

De acuerdo con la Guía INVIMA ASS-AYC-GU012 (Numeral 5.1.10), el límite de aceptación final debe ser el valor más
estricto (menor) resultante de calcular los límites mediante al menos tres métodos cuantificables, sumado al criterio
visual y microbiológico.

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6.1 Método 1: Dosis Terapéutica ($L.L._{Dosis}$)

Calcula la cantidad máxima de residuo del Peor Caso A ($EPO$) permitida en la dosis diaria del Peor Caso B
($Heberprot-P$), utilizando un factor de seguridad ($F = 1,000$ a $10,000$ para parenterales):

L.L._{Dosis} (mg/25 ext{ cm}^2) = \left[ rac{\left( rac{D_A}{F} ight)}{J_B} ight] imes \left( rac{K_B}
{L_{Compartido}} ight) imes M

Donde: $D_A$ = Dosis terapéutica mínima de EPO (mg); $F$ = Factor de seguridad (1000); $J_B$ = Dosis diarias
máximas de Heberprot-P; $K_B$ = Tamaño de lote mínimo de Heberprot-P (unidades); $L$ = Área compartida ($
ext{cm}^2$); $M$ = Área de hisopado ($25 ext{ cm}^2$).

6.2 Método 2: Límite Basado en Salud / Dosis Tóxica (HBEL / PDE / $DL_{50}$)

Basado en la Exposición Diaria Permitida ($PDE$) obtenida de datos toxicológicos ($NOAEL$) o $DL_{50}$:

PDE (mg/día) = rac{NOAEL imes Peso\ Adulto (70 ext{ kg})}{UFC imes MF imes PK} \quad \Rightarrow \quad
MACO = PDE imes \left( rac{T_B}{C_B} ight)

L.L._{Tóxico} (mg/25 ext{ cm}^2) = \left( rac{MACO}{L_{Compartido}} ight) imes M

6.3 Método 3: Criterio General de las 10 ppm

Establece que no se admiten más de 10 mg de Peor Caso A por kg de Peor Caso B (10 ppm):

L.L._{10ppm} (mg/25 ext{ cm}^2) = \left( rac{10 ext{ mg/kg} imes T_B ( ext{kg})}{L_{Compartido} ( ext{cm}^2)}
ight) imes M ( ext{cm}^2)

6.4 Método Visual (Criterio Organoléptico)

El ojo humano detecta residuos a niveles $\ge 100\ \mu ext{g} / 25 ext{ cm}^2$ ($0.1 ext{ mg}/25 ext{ cm}^2$ o $4\ \mu
ext{g}/ ext{cm}^2$). La superficie debe estar completamente limpia e inmune a manchas, partículas o películas.

6.5 Límites Microbiológicos, Endotoxinas y Detergente

Atributo / Parámetro Método de Muestreo Límite de Aceptación Protocolar

Carga Microbiana Hisopado / Placa Contacto / $\le 1 ext{ UFC/cm}^2$ (Superficie) / $\le 10 ext{ UFC/100 mL}$
(Bioburden) Enjuague (Agua enjuague WFI)

Endotoxinas Enjuague Final (WFI) $< 0.25 ext{ UE/mL}$ (Cumplimiento de especificación WFI)
Bacterianas

Residuo de Detergente Conductividad / TOC / HPLC Basado en $DL_{50}$ del detergente o Conductividad $\le 1.3\ \mu
ext{S/cm}$ ($25^\circ ext{C}$)

Carbono Orgánico Total Hisopado / Enjuague Final $\le 500 ext{ ppb}$ ($\mu ext{g/L}$) o según cálculo de
(TOC) fraccionamiento orgánico

7. PLAN DE MUESTREO, PUNTOS CRÍTICOS Y MÉTODOS ANALÍTICOS

De acuerdo con el análisis de riesgo del tren de formulación y llenado, se seleccionan los puntos de muestreo de mayor
dificultad de limpieza y mayor potencial de acumulación de residuo:

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 Código
Equipo / Componente Ubicación Específica del Muestreo Tipo Muestreo Método Analítico
Punto

PM-01 Tanque de Formulación Paleta inferior del agitador y eje de Hisopado ($25 ext{ TOC / HPLC
(100L) mezcla cm}^2$)

PM-02 Tanque de Formulación Empaque de junta de silicona de la Hisopado ($25 ext{ TOC / Microbio
(100L) boca de visita cm}^2$)

PM-03 Tanque de Formulación Válvula de diafragma de descarga Hisopado ($25 ext{ TOC / HPLC
(100L) inferior (punto muerto) cm}^2$)

PM-04 Tubería de Conexión Triclamp y codo de Hisopado / Enjuague TOC /

Transferencia Estéril $90^\circ$ posterior al filtro Conductividad

PM-05 Bomba de Llenado Manguera de silicona de dosificación Enjuague por TOC / HPLC
Peristáltica (interior) Inmersión

PM-06 Agujas de Llenado Lumen interno de agujas de Enjuague/Extracción TOC / Endotoxinas

Aséptico dosificación (316L)

PM-07 Tren Completo Agua de Enjuague Final CIP (Punto de Muestra de TOC, Cond, LAL,
purga) Enjuague Micro

8. PLAN DE EJECUCIÓN Y CRITERIOS DE ACEPTACIÓN DEL PROTOCOLO

8.1 Corridas de Validacion (INVIMA Numeral 6): Se ejecutarán tres (3) corridas consecutivas exitosas de fabricación y
limpieza utilizando el producto Peor Caso A (rHu-EPO) en la línea de producción.

8.2 Tiempos de Espera (Hold Times):

• Tiempo de Espera de Equipo Sucio (Dirty Hold Time - DHT): Se validará un tiempo máximo de retención de
equipo sucio de 24 horas antes de iniciar el procedimiento de limpieza.
• Tiempo de Espera de Equipo Limpio (Clean Hold Time - CHT): Se validará un tiempo máximo de almacenamiento
de equipo limpio y sanitizado de 72 horas antes de la siguiente síntesis/llenado.

8.3 Criterio Final de Aceptación del Protocolo: La limpieza de la línea se considerará VALIDADA si en las tres
corridas consecutivas:

1. El 100% de las muestras de hisopado y enjuague cumplen con estar por debajo del Límite de Aceptación calculado
($L.L.$) corregido por el Porcentaje de Recuperación.
2. No se observan residuos visibles en ninguna superficie inspeccionada.
3. Los conteos de Bioburden y niveles de Endotoxinas se mantienen dentro de las especificaciones establecidas.
4. Se demuestra el cumplimiento de los tiempos DHT y CHT evaluados.

9. FIRMAS DE APROBACIÓN DEL PROTOCOLO

Elaborado por:
Especialista de Validación / Garantía de Revisado por: Aprobado por:
Calidad Jefe de Producción Biotecnológica Director de Aseguramiento de la Calidad

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