V.D.R.L.
(Venereal Disease Research Laboratory)
Sinonimia: prueba no treponémica.
Método: microfloculación. Reemplaza al test de Kahn, test Kline, Mazzini Wasserman.
Muestra: suero libre de hemólisis, no es necesario que la persona este en ayuno. Conservar
en heladera. Líquido cefalorraquídeo sin contaminación con sangre.
Valor de referencia: no reactivo.
VDRL es una técnica de floculación que utiliza el antígeno de cardiolipina para detectar
anticuerpos antitreponémicos inespecíficos producidos por el individuo ante una infección
sifilítica.
Significado clínico:
Esta prueba esta diseñada para detectar en el suero la presencia de reaginas, un grupo
heterogéneo de anticuerpos formados por el huésped en la respuesta a material lipídico
liberado por células lesionadas en el curso de la infección, así como lípidos de la superficie
celular del treponema; por lo tanto no son anticuerpos específicos frente a T. pallidum. Ya
que existen otras subespecies como T. carateum el cual causa Pinta y T psibe endemicun la
cual causa sífilis endémica o no venérea. En estas pruebas se usan cardiolipina, lecitina y
colesterol como antígeno.
Un resultado positivo se debe confirmar determinando anticuerpos treponémicos
específicos mediante las técnicas FTA-ABS.
Un resultado negativo puede significar ausencia de infección o realización de la prueba
antes de la respuesta inmunológica.
Los anticuerpos inespecíficos aparecen entre las 2 y 6 semanas después de la inoculación,
alcanzan el título máximo en el segundo período sifilítico, descendiendo posteriormente.
También disminuyen después del tratamiento, por lo que es necesaria la titulación de dichos
anticuerpos.
El 25 % de sujetos con neurosíifilis tardía tienen VDRL negativa pero FTA ABS positiva.
La FTA ABS se hace positivos antes que la VDRL.
La VDRL comienza a ser positivizarse a las 2 semanas después del chancro y sigue positiva
por 6 semanas.
En la etapa primaria el 90% de los casos serán positivos, a las 9-12 semanas es el estadio
secundario el 100% de los casos serán positivos.
Aún sin tratamiento la VDRL se puede negativizar años después de la infección.
En sífilis terciaria la VDRL es negativa.
La VDRL en LCR es útil en el diagnóstico de sífilis en el sistema nervioso central (SNC),
un resultado positivo debe confirmarse con FTA-ABS.
El diagnóstico de sífilis en personas infectadas por HIV puede ser dificultosa por la falta de
respuesta serológica .
Utilidad clínica
Screening de sífilis.
Monitoreo para seguimiento de sífilis congénita.
Diagnóstico de sífilis precoz: un paciente sospechoso de sífilis una VDRL negativo
se debe volver a repetir en próximos estudios. Ante un paciente con úlcera genital o
de otra localización sospechada de ser sifilítica se debe realizar una VDRL, tres
meses después del inicio de la clínica.
Una VDRL negativo excluye el diagnóstico de sífilis como causa de la lesión.
El diagnóstico de sífilis precoz en pacientes que previamente han tenido sífilis
tienen la FTA-ABS positiva y si no ha transcurrido mucho tiempo también tiene la
VDRL positiva. Para diagnosticarla se debe observar un aumento del título de la
VDRL aunque ello pueda deberse a un falso positivo biológico.
Diagnóstico de sífilis secundaria: ya que todos los pacientes tienen una VDRL
positiva con títulos superiores de 1:[Link] pacientes con clínica atípica y/o títulos
bajos se debe repetir la determinación y confirmar con FTA-ABS.
(Inmunofluorescencia indirecta con absorción del suero)
Diagnóstico de Sífilis latente: se encuentra VDRL positiva en ausencia de hallazgos
en la exploración y/o la historia clínica. La exclusión de falsos positivos puede
realizarse repitiendo la prueba en el momento y a intervalos de 6 meses. La
categoría de sífilis latente precoz o tardía según la infección tenga menos o más de
un año de duración.
Diagnóstico de neurosíifilis: la exploración del liquido cefalorraquídeo se
recomienda en pacientes con signos y /o síntomas sugerentes de neurosíifilis, se
debe realizar en sífilis de más de un año de duración, la VDRL es especifica para
neurosíifilis, pero en ocasiones da resultados falsos negativos; esta baja sensibilidad
es mayor en pacientes con tabes dorsal. El V.D.R.L. es positivo en líquido
cefalorraquídeo en el 70% de neurosíifilis.
Screening en uveitis o inflamación ocular inexplicable.
Monitoreo del tratamiento: se debe realizar el seguimiento a los 3,6 y12 meses
después del tratamiento en los casos de sífilis precoz y congénita y una prueba
adicional a los 24 meses en los casos de sífilis de más de un año de duración.
En la sífilis precoz la VDRL cuantitativas muestran un descenso hasta volverse no
reactivas o débilmente positivas en el curso de un año de tratamiento. Cuando la
enfermedad es más larga los títulos descienden más lentamente y a veces se alteran
poco.
Diagnóstico de neurosífilis dado que es muy específico, pero un resultado negativo no la
descarta (sensibilidad es de 30-70%).,
La sífilis del SNC puede ser asintomática, la neurosífilis incluye sífilis meníngea, la cual se
encuentra años luego de la infección.
El criterio para neurosíifilis es LCR con proteínas mayores de 40 ng/dl y más de 5 células
mononucleares /mm3.
Para los sujetos con HIV se sugiere terapia para sífilis porque pueden desarrollar
neurosífilis, se debe realizar la determinación serial de VDRL en LCR.
Patologías asociadas
1. En primer lugar, se deben considerar las treponematosis: sífilis, frambesia, pinta,
bejel, fiebre recurrente, leptospirosis, enfermedad de Lyme y otras borreliosis. Estas
afecciones provocan una reacción serológica reactiva verdadera.
2. Enfermedades por micobacterias: tuberculosis y lepra.
3. Otras enfermedades producidas por bacterias: neumonías neumocócicas,
endocarditis infecciosa, chancro blando y escarlatina.
4. Enfermedades virales: mononucleosis infecciosa, neumonías virales, sarampión,
varicela, hepatitis infecciosa, vaccinia.
5. Enfermedades por clamidias: linfo-granuloma venéreo.
6. Enfermedades parasitarias: paludismo y tripanosomiasis.
7. Enfermedades por disregulación del sistema inmune: anemias hemolíticas
autoinmunes, enfermedades del colágeno, síndrome antifosfolipídico primario.
8. Situaciones especiales: inmunizaciones y embarazo.
Técnicas y metodología
9. Para su realización, el suero del paciente es mezclado con el antígeno en un soporte
circular de diámetro estándar. Si existen anticuerpos se combinan formando una
floculación que es leída microscópicamente (100 aumentos) 10x técnica de
floculación que utiliza el antígeno de cardiolipina para detectar anticuerpos
antitreponémicos inespecíficos producidos por el individuo ante una infección
sifilítica.
Interpretación de resultados
Interpretación de Lecturas:
Sin grumos o con ligera rugosidad: No Reactivo (NR)
Grumos pequeños: Reactivo débil (Rd)
Grumos medianos a grandes: Reactivo (R)
- TÉCNICA CUANTITATIVA DE VDRL EN SUERO
- Separar las muestras R a cuantificar.
- Dispensar las muestras según figura N° 4.
- Depositar con micropipeta 50 µL de muestra de suero en el pocillo número 1 (dilución
1:1) y 50 µL de suero fisiológico 0.9 % en los pocillos 5 y 9, según figura Nº4.
- En el pocillo número 5 agregue 50 µL de muestra de suero (dilución 1:2), mezclar por
aspiración ocho veces con la pipeta automática, evitando la formación de burbujas y
transferir 50 µL de esta mezcla al pocillo número 9 (dilución 1:4) mezclar ocho veces
igual forma como se explicó anteriormente, descartar los últimos 50 µL.
- Proceder de la misma manera con el resto de las muestras paciente.
- Homogenizar suavemente la suspensión del antígeno y añadir 1 gota a cada pocillo,
con aguja calibre 18G.
- Agitar la lámina por 4 minutos en rotador a 180 rpm.
- Leer las reacciones al microscopio según se indica en el punto 3.4. e interpretar los
resultados según lo indica el ejemplo de la tabla Nº 1.
Consideraciones especiales
Comentarios a las pruebas no treponémicas Todas ellas se basan en antígenos compuestos
de soluciones alcohólicas con cantidades predeterminadas de cardiolipinas, colesterol y
lecitinas. Miden simultáneamente inmunoglobulinas IgG e IgM frente a estas sustancias
que son producidas en los tejidos dañados por la treponema o por otras enfermedades.
Puesto que no miden anticuerpos específicos frente a T. pallidum su positividad no asegura
la enfermedad sifilítica.
Como dato importantísimo diremos que sólo la prueba VDRL está validada para la
detección de anticuerpos no treponémicos en LCR y, en consecuencia, es el único útil para
el diagnóstico de la neurosífilis.
Todas las pruebas no treponémicas pueden presentar fenómenos de prozona - falsos
negativos - cuando las muestras son fuertemente reactivas, por lo que es conveniente
titularlas siempre. Esto es especialmente cierto cuando la prueba se realiza con muestra no
diluida y con un procedimiento incorrecto (como dispensar el antígeno sobre la muestra no
extendida en el círculo de reacción). La temperatura de los reactivos es igualmente
importantísima en relación con la sensibilidad. También puede obtenerse un resultado
negativo en las fases muy tempranas del período primario, incluso cuando la visualización
de las treponemas es positiva.
CRITERIOS DE ACEPTABILIDAD
5.2.1.- Con el antígeno preparado para la técnica de VDRL, los controles R, Rd y NR
presentan una reacción
cómo se observa en la figura
5.2.2.- El control reactivo es titulado en cada preparación, y éste debe dar un título esperado
y reproducible
en cada procedimiento.
CRITERIOS DE RECHAZO
5.3.1.- Si los controles NR, Rd y R no se comportan de la manera esperada se interrumpe el
proceso y se
siguen los siguientes pasos: (1)
a) Repetir la lectura de los controles utilizando el mismo antígeno. Si la discordancia
persiste, preparar nuevamente el antígeno, idealmente por otro profesional competente.
b) Verificar que la fecha de vencimiento del kit esté vigente. Si el problema continúa,
utilizar un kit
nuevo y repetir los controles. Cambiar de N° de Lote si persiste la no conformidad.
c) Verificar la temperatura ambiental, esta influye en la reactividad del antígeno. Verificar
que esté
entre 23 y 29 °C. Bajo 23°C pueden obtenerse falsos negativos y sobre 29°C falsos
positivos.
RPR
La cual es una reacción antígeno-anticuerpo de floculación en tarjeta (círculo de 18 mm de
diámetro) que se realiza en suero o plasma sin calentar o calentado, empleándose una
suspensión de antígeno VDRL modificado con fosfato de sodio y potasio, mertiolato,
cloruro de colina, EDTA y partículas de carbón. El cloruro de colina elimina la necesidad
de calentar las muestras; el EDTA le da mayor estabilidad a la suspensión de antígeno y las
partículas de carbón permiten que la lectura se realice a ojo desnudo.
El examen RPR mide anticuerpos inespecíficos producidos en respuesta al material lipoidal
liberado desde las células dañadas del huésped, así como en respuesta a material de
estructura proteica, liberado desde las treponemas. Los anticuerpos antilipoidales son
anticuerpos producidos, no solo a consecuencia de una sífilis u otras enfermedades
treponémicas sino también en respuesta a enfermedades no treponémicas, agudas o
crónicas, en las cuales hay daño de los tejidos.
MUESTRA
Suero o plasma
a) Recolección: obtener la muestra de la manera usual. No es necesario inactivar.
b) Aditivos: en caso de obtener plasma, utilizar heparina, EDTA, fluoruro u oxalato de
sodio como anticoagulantes.
c) Sustancias interferentes conocidas: hemólisis o hiperlipemia pueden provocar
resultados erróneos, así como el exceso de anticoagulante empleado en la obtención de
plasma.
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: si no se procesa en el momento, el
suero puede conservarse hasta 7 días en refrigerador (2-10º C). El plasma debe emplearse
antes de las 24 horas de efectuada la extracción
Utilidad Clínica
La prueba de RPR puede usarse para detectar sífilis. Se usa para examinar a personas que
tengan síntomas de infecciones de transmisión sexual y de manera rutinaria para examinar a
mujeres embarazadas en búsqueda de la enfermedad. (2)
Técnicas y Método
En la prueba rápida para reaginas plasmáticas (RPR), las "reaginas" presentes en el suero
de individuos infectados con Treponema pallidum, se detectan por acción de las mismas
con antígeno de cardiolipina, lecitina y colesterol adsorbido sobre partículas de carbón. La
reacción produce una aglutinación visible macroscópicamente, favorecida por las partículas
de carbón. Las reacciones inespecíficas se evitan con el empleo de antígeno altamente
purificado y el agregado de cloruro de colina, por lo que no es necesario inactivar la
muestra.
PROCEDIMIENTO I- PRUEBA CUALITATIVA Llevar a temperatura ambiente los
reactivos y la muestra antes de realizar el ensayo. En cada uno de los círculos de la tarjeta
de reacción colocar con un gotero plástico provisto: C 870860024 / 00 p. 2/9 Muestra o
Controles 1 gota (50 ul) Con el extremo cerrado del gotero distribuir la muestra
uniformemente en todo el círculo. Con el gotero metálico provisto, en posición vertical,
agregar en el centro del círculo: Reactivo A 1 gota (17 ul) SIN MEZCLAR, hacer rotar
horizontalmente la tarjeta de reacción en forma manual o con agitador rotativo a 100 rpm
durante 8 minutos. Observar la presencia o ausencia de aglutinación al cabo de este tiempo.
Tiempos de lectura mayores pueden dar lugar a falsos resultados
Interpretación de resultados
En el examen RPR los resultados se informan como Reactivo o No Reactivo. La reacción
Reactiva mínima (o débil) se informa Reactiva
CRITERIOS DE ACEPTABILIDAD
- Los sueros controles reproducen el patrón de reactividad correspondiente.
CRITERIOS DE RECHAZO
- Si los controles no se comportan de la manera esperada se interrumpe el proceso y se siguen
estos pasos:
- Repetir la lectura de los controles utilizando el mismo antígeno. Si la discordancia persiste,
repetir el procedimiento con un nuevo frasco de antígeno.
- Verificar la vigencia del kit con la fecha de vencimiento. Si el problema continúa, utilizar un kit
nuevo y repetir los controles. Cambiar a otro lote de kit si persiste la no conformidad.
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[Link]
rpr_slide_test_sp.pdf
[Link]
Bibliografía
x
1 Fuentes A. Control Calidad SEIMC. [Online].Acceso 13 de Junio de 2021. Disponible en:
. [Link]
2 Morales RC. Instituto de Salud publica de Chile. [Online].; 2018. Acceso 3 de Junio de 2021.
. Disponible en: [Link]
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