FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA
La Biología Celular
tecnológica; y más específicamente con el desarrollo de mejores
técnicas microscópicas.
Por ello, es necesario apoyar las explicaciones teóricas con prácticas
de laboratorio; en donde cada persona puede realizar sus propias
observaciones y sacar conclusiones.
El poder de resolución del ojo humano logra identificar objetos de hasta
de 200 micras, por lo que se hace necesario recurrir a instrumentos
ópticos que faciliten la observación de objetos de menor tamaño, como las células; este
instrumento es el microscopio, que consiste en juegos de lentes que agrandan ó amplifican la
imagen.
Para observar los objetos a través del microscopio óptico compuesto, es necesario colocarlos
sobre una laminilla de vidrio (Porta objetos) y generalmente se le coloca otra laminilla de vidrio
más delgada (Cubre objetos); en esta forma se obtiene la preparación microscópica; la que
puede durar poco tiempo (preparación temporal), o puede ser guardada (preparación
permanente), lo que nos da la clasificación de preparaciones de acuerdo a su duración.
La palabra microscopio viene del griego mikro, pequeño y skop, visión. El primer microscopio fue
inventado, por una casualidad en experimentos con lentes según los Italianos hacia 1610 por
Galileo y según los holandeses por Zacharías Janssen (1580 -1638) quien inventó un microscopio
con una especie de tubo con lentes en sus extremos, de 8 cm. Sin embargo las primeras
publicaciones importantes en el campo de la microscopia aparecen en 1660 y 1665 cuando
Malpighi prueba la teoría de Harvey sobre la circulación sanguínea al observar al microscopio los
Microscopio desarrollado por Anthony van Leeuwenhoek’s capilares sanguíneos y el inglés
Robert Hooke (1635 - 1701) publica su obra Micrographia, con dibujos de sus observaciones. A
mediados del siglo XVII un comerciante holandés, Leenwenhoek, utilizando microscopios simples
de fabricación propia describió por primera vez protozoos, bacterias, espermatozoides y glóbulos
rojos. Durante este siglo muchos estudiosos de las lentes y los microscopios hicieron toda clase
de pruebas y ensayos para lograr un resultado de mayor precisión.
DESCRIPCION DEL MICROSCOPIO.
PARTE MECANICA.
Está compuesta por el pie, la platina y el tubo.
EL PIE. Es una pieza maciza y pesada, para asegurar la estabilidad del aparato y servir de soporte
a sus demás partes. Suele estar provista de charnela, que permite la inclinación de la parte
superior.
LA PLATINA: Es una pieza metálica, redonda o cuadrada, donde se colocan las preparaciones;
tiene en el centro una abertura circular por la que pasarán los rayos luminosos procedentes del
sistema de iluminación. En los microscopios corrientes puede ser fija o estar endosada a un carro
con dos tornillos y cremallera que permitan dos movimientos de translación, para centrarla, y
también, si los tornillos están graduados, para medir sus desplazamientos.
La preparación se sujeta, en las platinas fijas, con dos palanquitas móviles, y en las platinas de
carro, por un reborde, en forma de escuadra y pestillo, que le impide cualquier movimiento
imprevisto.
El pie se prolonga por encima de la platina, en arco más o menos curvo. La parte superior de este
arco es la que sostiene el tubo y su mecanismo de traslación vertical. Esta tiene suma
importancia, pues permite enfocar el objetivo mediante dos movimientos uno rápido, gracias a
una cremallera, y otro lento, con un tornillo micrométrico.
PIE, BASE O SOPORTE: sostiene el cuerpo del microscopio.
COLUMNA O BRAZO: se utiliza para transportarlo.
CARRO Y TORNILLOS DEL CARRO: con ellas se puede movilizar la preparación microscópica
hacia atrás, adelante y hacia los lados.
TORNILLO MACROMÉTRICO: sube y baja la platina.
TORNILLO MICROMÉTRICO: afina la imagen una vez enfocada.
MECANISMO DE REVOLVER: en él se encuentran incrustados los lentes objetivo y se utiliza
para rotar aumentos entre seco, débil y el objetivo de inmersión.
EL TUBO: En él está instalado el sistema óptico. Está constituido por dos tubos o cuerpos.
Uno de ellos, externo, en el que se encuentran la cremallera y el ocular, y otro, interno, adosado
al anterior, donde está el objetivo. En la parte superior hay una división milimétrica que permite
modificar la distancia entre objetivo y ocular. Son corrientes en los aparatos modernos los
binoculares, que facilitan la visión con los dos ojos, y los revólveres porta-objetivos, con los
cuales se pueden cambiar los objetivos instantáneamente, sin desenfocar la preparación. Tubo
del ocular: en el están incorporados lo lentes del ocular.
DIAFRAGMA: abertura ubicada por debajo de la platina que permite abrir ó cerrar el paso de la
luz. Al abrirlo la intensidad de luz es mayor, al cerrarlo disminuye la intensidad.
PARTE OPTICA.
OBJETIVOS (LENTES OBJETIVO)
Son los elementos más importantes del microscopio. Están formados por la reunión de varias
lentes para corregir las aberraciones. Deben tratarse con mucho cuidado, pues cualquier golpe
puede variar la posición de las lentes y averiarlas. Se atornillan a la parte inferior del tubo o al
revólver portaobjetivos.
La lente inferior del objetivo lente frontal. De ella depende principalmente la mayor o menor
ampliación. Es siempre plano-convexa, de foco muy corto y de diámetro tanto menor cuanto
mayor sea el aumento.
Detrás de esta lente hay otras, que son las que corrigen las aberraciones cromáticas y esféricas.
OBJETIVOS EN SECO: Son los que se emplean más corrientemente. Entre la lente frontal y el
cubreobjetos sólo hay aire. A este grupo pertenecen los objetivos de menores aumentos. Las
lentes frontales tienen de 3 a 10 milímetros de diámetro. Poseen gran profundidad de foco, lo
cual permite observar diferentes planos paralelos del objeto.
OBJETIVOS DE INMERSION: Se llama así a aquellos en los cuales, para la observación, deben
interponerse entre la lente frontal y la preparación un líquido que, por su índice de refracción
apropiado, permita una mayor luminosidad. Este líquido puede ser agua, aceite, mono bromuro
de naftaleno, etc. Estos objetivos son de gran aumento y de gran poder definidor. Se emplean en
Bacteriología y Parasitología. Requieren gran luminosidad y empleo de condensador.
CUALIDADES DE LOS OBJETIVOS: Los objetivos deben poseer tres cualidades: poder
definidor, poder penetrante y poder de resolución.
El poder definidor consiste en la propiedad de presentar con limpieza y corrección los
contornos de la imagen.
El poder penetrante es la propiedad de presentar, sin variar el enfoque, perfectamente
detallados, varios planos del espesor de una preparación.
El poder de resolución permite apreciar delicados detalles de estructura, diferenciando
un punto ó zona del resto de la muestra.
OCULARES (LENTES OCULARES)
Los forman dos lentes separadas por un diafragma, y van montados en la extremidad superior del
tubo. La lente superior se llama lente ocular; la inferior, lente de campo. Hay dos tipos de
oculares; los positivos o de Ramsden, que tienen dos lentes plano-convexas, y cuyas convexidades
se oponen una a la otra y los negativos, o de Huyghens, que se llaman también de compensación,
por tener compensadas las desigualdades del espectro y en los que las curvaturas de las lentes se
dirigen al objeto. Tanto el microscopio simple como el compuesto pueden ser binoculares; estos
dan mejor calidad a la imagen y más cómoda visión. El tubo se bifurca, con los correspondientes
prismas de reflexión total, y termina en dos oculares iguales.
SISTEMA DE ILUMINACION.
Se encuentra situado bajo la platina y tiene la misión de iluminar los objetivos por medio de luz
transmitida, a causa de que la mayoría de las observaciones se realizan por transparencia. Consta
de un espejo y de un diafragma. El espejo, redondo y adaptable a las más variadas posiciones,
tiene una superficie plana y otra cóncava, que pueden intercambiarse a voluntad. Es espejo plano,
para objetivos de escaso aumento, y el
cóncavo, para grandes aumentos. La fuente luminosa puede ser natural o artificial. Esta última es
idónea cuando proviene de una lámpara especial para estos aparatos.
El diafragma va montado bajo la platina. Es de sistema iris, y permite, por medio de una palanca,
obtener a voluntad conos luminosos de distinto tamaño y, mediante condensadores, conos
luminosos muy grandes. Los condensadores constan de un sistema de lentes de gran abertura
sujetos a una montura y colocados entre la platina y el espejo, pueden subirse y bajarse a voluntad
y tienen un diafragma unido al conjunto.
REGLAS GENERALES DE OBSERVACIÓN
ILUMINACION. Puede utilizarse luz natural o artificial eléctrica. En general basta cualquier
lámpara potente, de filamento y esmerilada. Si no se dispone de lámpara esmerilada, se
intercalará en el sitio correspondiente un vidrio deslustrado o azul, o un sencillo matraz lleno de
agua con sulfato de cobre y unas gotas de amoníaco que filtre
los rayos amarillos. Si se utiliza luz natural, no debe ser nunca la directa del sol, sin luz difusa; una
excesiva iluminación en la mesa de trabajo perturba la observación.
ENFOQUE. Es regla general enfocar la preparación de abajo arriba: se aproxima el objetivo a
la preparación de modo que la distancia entre ambos sea menor que la distancia focal. Se mira
por el ocular y se hace retroceder el tubo lentamente mediante el tornillo rápido, hasta conseguir
ver la preparación más o menos enfocada. Seguidamente, lograse el enfoque exacto con el
tornillo micrométrico.
Es conveniente efectuar la observación monocular con los dos ojos abiertos, pero mirando sólo
con uno. Es fácil de conseguir cuanto menor iluminada esté la mesa.
El objetivo de inmersión requiere más cuidado: depositada ya la gota de líquido sobre la
preparación, bájese el objetivo hasta que la toque. Para enfocar se utiliza el tornillo micrométrico,
pero sin perder contacto con la gota y sin tocar la preparación.
LIMPIEZA. Una vez terminada la observación debe limpiarse el objetivo con papel limpia lentes,
empapado de xilol o de tolueno. Se guarda el aparato en una caja de madera o se tapa con una
campana de cristal o de plástico.
2.3 CUIDADO DEL MICROSCOPIO. El microscopio es un instrumento costoso. Debemos darle
el mejor cuidado posible. Siga siempre estas instrucciones generales cuando lo utilice:
* Transporte el microscopio sujetándolo con las dos manos: una por debajo de la base y la otra
en el brazo.
* Colóquelo alejado del borde de la mesa. Si hay una lámpara unida al microscopio, tenga
cuidado con los cables. Cuando trabaje con el microscopio quite de la mesa de laboratorio
aquellas cosas que no sean absolutamente necesarias.
* Las lentes del microscopio cuestan casi tanto como todas las demás partes juntas. NUNCA LAS
LIMPIE CON OTRA COSA QUE NO SEA PAPEL LIMPIALENTES).
* Cuando termine su trabajo guarde el microscopio, DESMONTANDO LAS PREPARACIONES
MICROSCOPICAS QUE HA OBSERVADO Y COLOQUE EL OBJETIVO DE MENOR AUMENTO EN LA
POSICION DE ENFOQUE, CON LA PLATINA EN SU POSICIÓN MAS BAJA.