1.
Definición del método instrumental
¿Qué es la Resonancia Magnética Nuclear?
La Espectroscopia de Resonancia Magnética Nuclear (RMN) es una
técnica analítica de carácter instrumental, físico y no destructivo,
fundamentada en las propiedades magnéticas de los núcleos
atómicos [Skoog et al., 2008]. Esta técnica se basa en la absorción
selectiva de radiación electromagnética dentro de la región de las
radiofrecuencias (que oscilan habitualmente entre 60 MHz y más de
1000 MHz en los equipos modernos) por parte de ciertos núcleos
atómicos, cuando estos se encuentran sometidos a la influencia de un
campo magnético externo extremadamente intenso y homogéneo.A
diferencia de otras técnicas espectroscópicas (como la infrarroja, que
altera los estados vibracionales de los enlaces), la RMN interactúa
directamente con los estados de espín nuclear. Esto la convierte en la
herramienta analítica más potente y precisa de la química moderna
para la elucidación estructural tridimensional de moléculas orgánicas
complejos, macromoléculas biológicas (como proteínas y ácidos
nucleicos) y la caracterización de polímeros.
Principio general de funcionamiento:
El funcionamiento general de la RMN se rige por una secuencia
cronológica de fenómenos físicos aplicados al átomo.
Magnetización de la muestra: En su estado natural, los núcleos con
propiedades magnéticas se orientan de forma completamente
aleatoria debido a la energía térmica. Al introducir la muestra líquida
o sólida dentro del núcleo de un imán superconductor, estos espines
moleculares se ven obligados a alinearse respecto al eje del campo
magnético aplicado , generando una magnetización neta en
equilibrio.
Perturbación por radiofrecuencia (Excitación): Un generador
electrónico emite un pulso corto e intenso de energía en forma de
ondas de radiofrecuencia perpendicular al campo magnético. Este
pulso altera el equilibrio magnético del sistema, provocando que los
espines absorban energía y cambien su orientación (entren en
condiciones de resonancia).
Relajación y detección: Una vez que el pulso de radiofrecuencia cesa,
los núcleos excitados tienden a regresar de manera espontánea a su
estado fundamental de menor energía. Este proceso de retorno libera
la energía absorbida, induciendo una microcorriente eléctrica en una
bobina receptora que rodea la muestra. Esta corriente senoidal
decreciente en el tiempo constituye la señal analítica primaria.
2. Fundamento y mecanismo del método instrumental
Interacción de los núcleos atómicos con un campo magnético:
La interacción comienza cuando el núcleo magnético entra en el
campo magnético externo, llamado B₀. Debido a su momento angular
y su momento magnético, el núcleo no se alinea de forma estática,
sino que realiza un movimiento de precesión: se inclina y gira
alrededor de la dirección del campo, igual que hace un trompo al
girar inclinado sobre sí mismo. La frecuencia con la que realiza este
movimiento se denomina frecuencia de Larmor, y depende
directamente de la intensidad del campo magnético y de una
propiedad característica de cada tipo de núcleo, llamada relación
giromagnética.
Además, el núcleo no está aislado: está rodeado de electrones que
forman la nube electrónica del átomo y de los átomos vecinos. Estos
electrones también generan pequeños campos magnéticos que
actúan como un escudo: reducen ligeramente la intensidad del
campo magnético que llega realmente al núcleo. Como el entorno
químico de cada átomo varía —por ejemplo, un hidrógeno unido a
oxígeno tiene una densidad electrónica distinta a uno unido a
carbono—, el escudo es diferente para cada posición molecular. Esto
hace que núcleos del mismo tipo, como el hidrógeno, presenten
frecuencias de precesión ligeramente distintas según su ubicación en
la molécula.
Concepto de resonancia:
La resonancia se produce cuando la frecuencia de la radiación de
radiofrecuencia enviada coincide exactamente con la frecuencia de
precesión de los núcleos. En este momento, ocurre un intercambio de
energía: los núcleos absorben la radiación y pasan del estado de
menor energía al de mayor energía, invirtiendo su orientación
respecto al campo magnético.
Esta condición no se cumple para todos los núcleos al mismo tiempo,
sino que varía según su entorno. Por eso, cuando se varía la
frecuencia de la radiación o la intensidad del campo magnético, cada
grupo de núcleos con el mismo entorno químico alcanza la resonancia
en un punto distinto. Esa diferencia de posición respecto a una
sustancia de referencia estándar se denomina desplazamiento
químico, expresado en partes por millón (ppm), y es la clave para
identificar qué grupos funcionales o átomos hay en la molécula.
También influyen las interacciones entre núcleos vecinos: el campo
magnético de un núcleo afecta al de los átomos contiguos, lo que
provoca que las señales se dividan en múltiples picos. Este
fenómeno, llamado acoplamiento espín-espín, aporta información
sobre cuántos núcleos vecinos hay y cómo están conectados entre sí.
Obtención del espectro de RMN
El proceso completo empieza preparando la muestra: generalmente
se disuelve en un disolvente que no contiene núcleos activos para la
técnica, o que no genera señales que interfieran, como el agua
desuterada o el cloroformo deuterado. La muestra se coloca en un
tubo de vidrio especial, que se introduce en el interior del imán del
equipo, donde gira a alta velocidad para homogeneizar la exposición
al campo magnético.
Luego, se emite un pulso corto e intenso de radiofrecuencia que
excita simultáneamente a todos los núcleos activos. Al finalizar el
pulso, los núcleos comienzan a relajarse: recuperan su estado de
equilibrio y emiten una señal débil que decae con el tiempo, llamada
señal de interferencia libre. Esta señal se registra en función del
tiempo y, mediante una operación matemática llamada transformada
de Fourier, se convierte a una representación en función de la
frecuencia del espectro de RMN.
En este espectro, el eje horizontal muestra el desplazamiento químico
y el eje vertical la intensidad de la señal. Cada pico corresponde a un
grupo de núcleos con el mismo entorno; la altura y el área del pico
indican la cantidad de núcleos que lo generan, y su forma o división
revela la interacción con átomos vecinos. Al analizar estos datos, se
reconstruye paso a paso la estructura completa de la molécula
analizada.
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%C3%A9tica-nuclear-rmn
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