Flores-Hernandez et al.

Caracterización de Opuntia spp

3(7):75-89,2016

CARACTERIZACIÓN ISOENZIMÁTICA DE CULTIVARES DE NOPAL ( Opuntia spp.)

Isoenzyme characterization of nopal cultivars ( Opuntia spp.)
1 2
Arnoldo Flores-Hernandez , Cecilia B. Peña-Valdivia , Luis Hernández-Montiel , Rogelio Ramírez-Serrano ,
3 3
1 1 4
Ricardo Trejo-Calzada , Cesar Alberto Meza-Herrera , Pablo Preciado-Rangel , Bernardo Murillo-Amador
3∗

1
Unidad Regional Universitaria de Zonas Áridas-Universidad Autónoma Chapingo. Bermejillo, Durango, México.
2
Botánica, Colegio de Postgraduados, Campus Montecillo, México.
3
Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste, S.C., La Paz, Baja California Sur, México.
4
Instituto Tecnológico de Torreón, Torreón, Coahuila, México.
∗
Autor de correspondencia: bmurillo04@[Link]

Artículo cientíco recibido: 27 de enero de 2015, aceptado: 4 de agosto de 2015

RESUMEN. En nopal (Opuntia spp.) como en muchos géneros, los problemas de clasicación taxonómica son fre-
cuentes, esto complica la identicación correcta de cultivares. Este estudio se realizó con la nalidad de detectar
polimorsmo en nueve cultivares de nopal de las especies O. amyclaea Ten. (O. albicarpa), O. megacantha, O. crassa
y O. cus-indica (L.) Mill., ubicados en la reserva de germoplasma de la Unidad Regional Universitaria de Zonas Áridas
de la Universidad Autónoma Chapingo. La proteína soluble de las raíces se separó por electroforesis para evaluar la
presencia de nueve sistemas enzimáticos. De estos, fosfoglucomutasa (PGM), 6-fosfogluconato deshidrogenasa (6-
PGD), glutamato oxaloacetato transaminasa (GOT) y malato deshidrogenasa (MDH) expresaron reacción suciente
para una identicación de bandas de actividad enzimática. Las enzimas málicas (ME) y aconitasa (ACO) no presentaron
polimorsmo, por tanto no se recomiendan para la clasicación de cultivares de nopal. En contraste, PGM, 6-PGD,
GOT y MDH presentaron diferencias o polimorsmo indeterminado en su patrón de bandeo, por lo que se consideran
relevantes para la identicación taxonómica y evaluación de la variabilidad genética de nopal.
Palabras clave: Enzimas, marcadores moleculares, taxonomía, variabilidad

ABSTRACT. Taxonomic classication problems are frequent in the case of nopal (Opuntia spp.), as well as for
many other genera; this complicates the accurate identication of cultivars. This study was done with the objective
of detecting polymorphism in nine nopal cultivars of the O. amyclaea Ten. (O. albicarpa), O. megacantha, O. crassa
and O. cus-indica (L.) Mill. species located in the germplasm reserve of the Unidad Regional Universitaria de Zonas
Áridas of the Universidad Autónoma Chapingo. The soluble protein of the roots was separated through electrophoresis
to evaluate the presence of nine enzyme systems. Among these, phosphoglucomutase (PGM), 6- phosphogluconate
dehydrogenase (6-PGD), glutamate oxaloacetate transaminase (GOT) and malate dehydrogenase (MDH) showed a
sucient reaction for the identication of bands of enzymatic activity. The malic enzymes (ME) and aconitase (ACO)
did not present polymorphism; they are therefore not recommended for the classication of nopal cultivars. In contrast,
PGM, 6-PGD, GOT and MDH presented dierences or undetermined polymorphism in their band pattern; they are
therefore considered relevant for the taxonomic identication and evaluation of the genetic variability of nopal.
Key words: Enzymes, molecular markers, taxonomy, variability

INTRODUCCIÓN especies. El género Opuntia presenta gran dis-

tribución y representatividad, con más de 200 es-
Las cactáceas originarias de América consti- pecies desde Canadá hasta la Patagonia (Illoldi-
tuyen una de las familias de mayor distribución y Rangel et al. 2012). Uno de los principales cen-
variación e incluye 98 géneros y más de 1 500 tros de origen del nopal es México (Maki-Díaz et

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al. 2015). La clasicación del género Opuntia se uso y manejo de Opuntia spp. (Ávalos-Huerta et al.
complica por la diversidad de especies y ecotipos, 2013). Otras investigaciones han denido e iden-
producto de procesos de hibridación natural debido ticado variedades de Opuntia spp. y otras cac-
a su proceso de propagación sexual o asexual, que táceas al usar marcadores moleculares como isoen-
permite una gran cantidad de variantes (Gallegos- zimas (Chessa et al. 1997, Uzun 1997), RAPDs
Vázquez y Mondragón-Jacobo 2011), así como por (Wang et al. 1998, Mondragón 2003, Luna-Paez
su plasticidad morfológica, resultado de la constitu- et al. 2007, Zoghlamiet al. 2007, Bendhi et al.
ción genética e interacción con el ambiente (Mad- 2013, Valadez-Moctezuma et al. 2014b), cpSSR
dams 1972). Las clasicaciones desarrolladas por (Labra et al. 2003, Caruso et al. 2010), ISSR
Sánchez-Mejorada (1982) y Barthlott y Hunt (1993) (Luna-Paez et al. 2007, Valadez-Moctezuma et
se basan en diferencias fenotípicas que son la base al. 2014b, Ganopoulos et al. 2015, Contreras-
para identicar diversos géneros y especies. Sin em- Negrete et al. 2015), AFLP (Labra et al. 2003,
bargo, presentan debilidades para una identicación Espinoza-Sánchez et al. 2014), análisis logenético
taxonómica correcta en el género Opuntia, ya que Bayesiano de nrITS de secuencias de ADN (Grif-
con cierta frecuencia existe coincidencia limitada th 2004, Lyra et al. 2013). Los marcadores
entre las características de las plantas in situ y la moleculares basados en la amplicación por PCR de
descripción de los sistemas de clasicación. Por lo genoma especíco de secuencias, se han propuesto
que es preferible realizar la clasicación mediante como herramientas directas y ecaces para estimar
la aproximación de caracteres (Peña-Valdivia et al. la relación intergenérica e interespecíca entre los
2008). El uso de los métodos de clasicación co- diferentes taxones (Labra et al. 2003). En este
munes generan numerosas sinonimias; además, los sentido, el análisis de los caracteres para la clasi-
problemas se acentúan por las descripciones que cación de las plantas avanza y se profundiza pau-
se realizan con ejemplares únicos de jardines y latinamente en diferentes campos del conocimiento
herbarios, de tal forma que la variabilidad natural de como el anatómico, morfológico (Scheinvar et al.
las poblaciones respectivas se ha excluido, a pesar 2010), genético (citogenético) y bioquímico. Para
de que es fundamental para la descripción apropiada los aspectos bioquímicos se ha recurrido a la electro-
de las especies y conformación de grupos (Schneider foresis y a la secuencia de moléculas químicas como
1999). ADN, proteínas e isoenzimas en diferentes órganos
La preservación de Opuntia, como recurso de la planta (Uzun 1997, Henry 2012, Lyra et al.
genético, es importante. Se requiere de investi- 2013).
gación siológica, morfológica, genética, bioquímica En nopal, el análisis de isoenzimas se utiliza
y taxonómica para expandir la información y el para su clasicación taxonómica, a la vez que puede
conocimiento acerca de la diversidad de especies, ampliar y complementar la descripción varietal de
el efecto de los cambios ambientales y las modi- la especie. Además, las isoenzimas son marcadores
caciones que resultan de su domesticación (Mon- ideales debido a que son colineales con el gen, por
tiel et al. 2012). En este sentido, la clasicación lo común codominante en efecto y poco afectadas
de variedades y especies silvestres de nopal se han por el ambiente. El fortalecimiento de la carac-
basado en características morfológicas de los fru- terización del nopal con herramientas alternativas,
tos y cladodios (Valdez-Cepeda et al. 2003, Reyes- permite conocer de forma más eciente la diversidad
Agüero et al. 2005, Peña-Valdivia et al. 2008, genética existente, apoyar su ubicación taxonómica,
Gallegos-Vázquez et al. 2011, Gallegos-Vázquez et contribuir en programas de mejoramiento genético
al. 2012, Espinoza-Sánchez et al. 2014, Samah y para la creación de nuevas variedades, así como
Valadez-Moctezuma 2014), tolerancia a las heladas enriquecer los bancos de germoplasma (Chessa et
(Parish y Felker 1998), nomenclatura y clasicación al. 1997), en este caso del nopal, el cual es recono-
vernácula, la ubicación de nopaleras silvestres, el cido por su importancia como recurso natural, pues

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colecciones de valor comercial o agronómico que de tres cladodios de cada cultivar se utilizaron para
se describen desde un punto de vista morfológico y determinar las enzimas. Para la obtención de las
antropocéntrico se protegen en bancos de germo- raíces, los cladodios de cada cultivar se colocaron en
plasma (Bellon et al. 2009). En este sentido, el bandejas con sustrato (vermiculita) a capacidad de
objetivo del presente trabajo fue detectar polimor- campo, mantenidas en el laboratorio a temperatura
smo en nueve cultivares de nopal caracterizados ambiente (25 a 30
◦ C) durante 20 d, periodo en que

por producir brotes (nopalito) y frutas (tuna) de emitieron las raíces, manteniéndose en estas condi-
O. amyclaea Ten.
interés comercial de las especies ciones mientras se colectaron las raíces, las cuales se
(O. albicarpa), O. megacantha, O. crassa y O. cus- extrajeron de la base del cladodio mediante cortes
indica (L.) Mill. con bisturí, se lavaron con agua potable y luego con
agua destilada. La extracción de proteínas se realizó
MATERIALES Y MÉTODOS mediante la maceración del tejido de dos segmentos
de raíz con longitudes entre 2 y 3 cm, para luego
Área de estudio poner por tres segundos en homogenizador con 1.5
La presente investigación se realizó en cul- mL de solución extractora compuesta por 20 mL
tivares de nopal establecidos en la zona desértica de Tris-HCl pH 0.5 M y 7.5, 3.0 M de sacarosa,
de la Reserva de la Biosfera Mapimí, Durango, 1.6 M de ácido ascórbico, 1.6 M de polivinil pirroli-
en la plantación experimental de Opuntia de la dona, 0.1 M de metabisulto de sodio y 22 µL de
Unidad Regional Universitaria de Zonas Áridas de la 2-mercaptoetanol. Del sobrenadante que se obtuvo
Universidad Autónoma Chapingo (URUZA-UACh) por centrifugación a 14 000 rpm durante 10 min a
en Bermejillo, Durango, México. Ubicada en las -10
o C, se tomaron alícuotas para la separación de

coordenadas geográcas 25
o 52' 28 LN y 103
o 37' las proteínas (Bradford, 1976).
07 LO, a 1 119 msnm, con una temperatura anual
o
promedio de 21 C y precipitación anual promedio de Electroforesis en gel de almidón
200 mm, registrándose el 50 % durante la estación La separación de las proteínas por electrofore-
de verano (García 1988). sis en gel de almidón y la detección de las isoenzimas
Las plantas de nopal utilizadas pertenecen se realizó con la técnica descrita por Stuber et al.
al banco de germoplasma de la URUZA-UACh que (1982). La solución de bromofenol se usó como
incluyen 55 cultivares de Opuntia, los cuales se indicador de la migración de las proteínas y la mez-
obtuvieron de diferentes centros de investigación, cla de ácido bórico: hidróxido de litio y L-histidina:
universidades públicas y plantaciones comerciales ácido cítrico para la electroforesis. La separación
de México, establecidas a 1.20 m entre hileras y se realizó en cámara horizontal con 140 V durante
1.50 m entre plantas, con densidad de plantación 5 h y 200 V, durante 6 h. En el primero y último
de 5 555 plantas ha
−1 , las cuales no se riegan, carril del gel se aplicó un extracto de raíz de frijol
fertilizan, ni se realiza manejo tosanitario, sólo se (Phaseolus vulgaris L.) como muestra de referencia.
lleva a cabo la eliminación de malezas de forma Los sistemas enzimáticos evaluados fueron fosfoglu-
manual, así como la poda para regular el desarrollo comutasa (PGM, E.C. [Link]), 6-fosfogluconato
de las plantas. deshidrogenasa (6-PGD, E.C. [Link]), glutamato
oxaloacetato transaminasa (GOT, E.C. [Link]),
Obtención de raíces y extracción de proteínas aconitasa (ACO, E.C. [Link]), enzima málica (ME,
Se utilizaron nueve cultivares de Opuntia E.C. [Link]), malato deshidrogenasa (MDH, E.C.
(Tabla 1) que corresponden a las especies O. amy- [Link]), ácido shikímico deshidrogenasa (SAD,
claea Ten. (O. albicarpa) (cvs. 1, 4 y 6), O. E.C. [Link]), fosfatasa ácida (ACP, E.C. [Link])
megacantha (cvs. 2, 3 y 9), O. crassa (cv. 5) y y fosfoglucosa isomerasa (PHI, E.C. [Link]). La lo-
O. cus-indica (L.) Mill. (cvs. 7 y 8). Las raíces calización e identicación de bandas de los sistemas

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Tabla 1. Información descriptiva básica de los cultivares de Opuntia evaluados.

Número de Nombre del Especie Origen Característica
identicación cultivar
1 Tuna cv-8 O. amyclaea Ten. (O. albicarpa) Estado de México Tuna cristalina, sin espinas.
2 Tuna cv-50 O. megacantha San Luis Potosí Tuna Amarilla, sin espina
3 Verdura cv-69 O. megacantha Aguascalientes Alto rendimiento, susceptible al
frío
4 Verdura cv-12 O. amyclaea Ten. (O. albicarpa) Estado de México Alto rendimiento, resistente al
frío
5 Tuna cv-4 O. crassa Zacatecas Tuna amarilla, sin espinas.
6 Tuna cv-2 O. amyclaea Ten. (O. albicarpa) Aguascalientes Tuna roja, poca espina.
7 Tuna cv-F O. cus-indica (L.) Mill. Zacatecas Tuna cristalina, susceptible al
frío.
8 Verdura cv-14 O. cus-indica (L.) Mill. Estado de México Alto rendimiento, susceptible al
frío.
9 Tuna cv-35 O. megacantha Zacatecas Tuna rosada, con espinas.

enzimáticos y sus variantes isoenzimáticas se realizó fueron fosfoglucomutasa (PGM), 6-fosfogluconato

a partir de su Rf (movilidad relativa de la proteína) deshidrogenasa (6-PGD), glutamato oxaloacetato
en el gel, utilizando los dibujos de los zimogramas transaminasa (GOT), aconitasa (ACO), enzima
previamente fotograados. málica (ME) y malato deshidrogenasa (MDH). Los
sistemas ácido shikímico deshidrogenasa (SAD),
Análisis estadístico fosfatasa ácida (ACP) y 6-fosfoglucosa isomerasa
Cada banda de cada gel se consideró como un (PHI) mostraron poca denición y fue imposible la
carácter o locus independiente, que se codicó vi- identicación correcta de las bandas de actividad
sualmente como polimórca ausente (0) o presente enzimática atribuibles a los diferentes cultivares.
(1) para cada uno de los cultivares y anotadas como En la Figura 1 se muestra el bandeo obtenido de
variables discretas, las diferencias cualitativas entre las seis enzimas de mayor denición. Los sistemas
bandas no se consideraron. Para tener una mayor enzimáticos ACO y ME se distinguieron porque
conabilidad y precisión de los datos, se utilizaron muestran resultados similares en la expresión en-
tres repeticiones independientes de cada cultivar, zimática (monomórcos), mientras que los demás
además del testigo ( Phaseolus vulgaris L.) que se exhibieron polimorsmo en mayor o menor grado
colocó en la primera y última banda. Sólo las bandas en todos los cultivares. Las enzimas ACO y ME del
con actividad satisfactoria, buena resolución y resul- primer grupo no presentaron diferencias en su expre-
tados consistentes se seleccionaron y se utilizaron sión, es decir, no aportaron información importante
para los análisis respectivos. La matriz básica de para la identicación de los cultivares. En el segundo
datos se generó con la información de cada enzima. grupo, PGM, 6-PGD, GOT y MDH mostraron
La similitud genética se estimó mediante el coe- diferencias en el patrón de bandeo atribuibles a
ciente de Jaccard y para el agrupamiento se utilizó los cultivares, por lo que es conveniente utilizarlas
el método UPGMA. Los dendogramas se realizaron en estudios futuros de identidad y evaluación de la
con el programa MVSP v. 3.1 (Kovach 1999). variabilidad genética.

RESULTADOS Enzimas de nopal

El análisis particular de cada enzima muestra
Identicación de zonas de actividad enzimática que entre las enzimas monomórcas, la aconitasa
De los nueve sistemas enzimáticos solo seis (ACO) se encontró sólo en una zona de actividad
presentaron denición aceptable para la identi- enzimática en todos los cultivares y está codi-
cación de zonas de actividad enzimática, los cuales cada por un locus (ACO1 ) con alelos en condición

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Figura 1. Patrón de bandeo característico de cultivares monomórcos y polimór-

cos de nopal en seis sistemas isoenzimáticos [cvs. 1, 4 y 6 O. amyclaea (O. albi-
carpa); cvs. 2, 3 y 9, O. megacantha; cv. 5 O. crassa; cvs. 7 y 8 O. cus-indica
L. Mill.].

homocigota (Figura 1). La enzima málica (ME), y MDH presentaron el mayor número de zonas de
básica en el ciclo de carboxilación-descarboxilación actividad enzimática (Figura 1), lo que no facilita
de las plantas con metabolismo ácido de las cra- su interpretación adecuada. Para PGM (Figuras 1 y
suláceas (CAM) como el nopal, se caracterizó por 2) se detectaron de tres a cinco bandas por cultivar,
la presencia de un locus con tres bandas en todos los las cuales de acuerdo a sus distancias se agrupan
cultivares, a una distancia considerable (Figura 1); en cinco loci con dos alelos por locus, todos en
ello diculta la circunspección pues se trata de un condición homocigota dominante o recesiva según
locus con tres alelos. De los sistemas isoenzimáti- el cultivar; los cultivares 1 y 9 presentaron alelos
cos que exhibieron polimorsmo, el sistema GOT nulos. En la enzima 6-PGD (Figura 1) se mostraron
presentó zonas de actividad denidas con claridad de cinco a ocho bandas por cultivar (siete bandas
(Figura 1) e indica dos locus, GOT1 y GOT2 con dos fue lo más frecuente). De acuerdo a las distancias
alelos en condición homocigota o heterocigota de del patrón de bandeo, se maniesta la posibilidad de
acuerdo con el cultivar de nopal. Por la distribución cuatro loci, con dos y tres alelos según el cultivar.
de las bandas, se estableció la presencia de alelos En el sistema enzimático MDH (Figuras 1 y 5) se
nulos. Los sistemas isoenzimáticos PGM, 6-PGD detectaron entre cinco y ocho bandas por cultivar

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Figura 2. Dendograma de clasicación de nueve cultivares de nopal [cvs. 1,

4 y 6 O. amyclaea (O. albicarpa); cvs. 2, 3 y 9 (O. megacantha); cv. 5 (O.
crassa); cvs. 7 y 8 (O. cus-indica L. Mill.)] utilizando la enzima fosfogluco-
mutasa (PGM). El análisis del conglomerado se realizó mediante la distancia o
similaridad del coeciente Jaccard y el dendograma se construyó con el método
de agrupamiento UPGMA.

Figura 3. Dendograma de clasicación de nueve cultivares de nopal [cvs. 1, 4 y 6

O. amyclaea (O. albicarpa); cvs. 2, 3 y 9 (O. megacantha); cv. 5 (O. crassa); cvs.
7 y 8 (O. cus-indica L. Mill.)] utilizando la enzima 6-fosfogluconato deshidro-
genasa (6-PGD). El análisis del conglomerado se realizó mediante la distancia o
similaridad del coeciente Jaccard y el dendograma se construyó con el método
de agrupamiento UPGMA.

(siete bandas fue lo más frecuente). De acuerdo a que la similitud en el patrón isoenzimático de los cul-
las distancias del patrón de bandeo, puede presen- tivares ubicados en una sola especie fue inexistente
tarse cinco loci con dos alelos por locus por loci. en los sistemas PGM, 6-PGD y MDH (Figura 1), es
decir, en la misma especie se presentan diferencias
Especies de nopal en su patrón de bandeo (polimorsmo). El den-
El análisis de las especies en estudio mostró

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Figura 4. Dendograma de clasicación de nueve cultivares de nopal [cvs. 1, 4 y

6 O. amyclaea (O. albicarpa); cvs. 2, 3 y 9 (O. megacantha); cv. 5 (O. crassa);
cvs. 7 y 8 (O. cus-indica L. Mill.)] utilizando la enzima glutamato oxaloac-
etato transaminasa (GOT). El análisis del conglomerado se realizó mediante la
distancia o similaridad del coeciente Jaccard y el dendograma se construyó con
el método de agrupamiento UPGMA.

Figura 5. Dendograma de clasicación de nueve cultivares de nopal [cvs. 1, 4 y

6 O. amyclaea (O. albicarpa); cvs. 2, 3 y 9 (O. megacantha); cv. 5 (O. crassa);
cvs. 7 y 8 (O. cus-indica L. Mill.)] utilizando la enzima malato deshidrogenasa
(MDH). El análisis del conglomerado se realizó mediante la distancia o simi-
laridad del coeciente Jaccard y el dendograma se construyó con el método de
agrupamiento UPGMA.

dograma de la isoenzima PGM (Figura 2) mues- a la misma especie ( O. cus-indica); en el segundo

tra dos ramicaciones, la primera, representada por se mantiene independiente el cultivar 5 ( O. crassa);
los cultivares 1 y 2, clasicados como O. amyclaea en el tercero y cuarto grupo se encuentran los cul-
y O. megacantha, respectivamente. La segunda tivares 6 ( O. amyclaea) y 9 (O. megacantha) como
ramicación se subdivide en cinco grupos; el primero independientes; mientras que en el grupo cinco se
agrupa a los cultivares 7 y 8, los cuales corresponden

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ubican los cultivares 3 y 4 que corresponden a O. dicando dos locus, GOT1 y GOT2 con dos alelos en
megacantha y O. amyclaea, respectivamente. condición homocigota o heterocigota, lo cual diere
El dendograma formado por la enzima 6-PGD de lo reportado por Uzun (1997), que encontró solo
(Figura 3) muestra dos ramicaciones; la primera una banda isoenzimática con actividad denida para
por los cultivares 2 y 3, ambos clasicados como frutos y cladodios de nopal. También dieren del re-
O. megacantha. En la segunda ramicación apare- sultado obtenido por Chessa et al. (1997), quienes
cen cuatro grupos; el primero por los cultivares 6 encontraron que sólo un patrón de banda para GOT
(O. amyclaea) y 7 (O. cus-indica); el segundo por se presentó en todos los genotipos de nopal cuando
el cultivar 4 (O. amyclaea) como independiente; el se utilizó tejido de cladodios, mientras que cuando
tercero formado por los cultivares 5 (O. crassa), 8 se utilizó tejido de polen, se detectaron tres bandas
(O. cus-indica) y 9 (O. megacantha). El cultivar 1 isoenzimáticas; sin embargo, la actividad de GOT no
(O. amyclaea) aparece en el cuarto grupo de forma fue diferenciada de forma clara para algunos genoti-
independiente. El dendograma de la enzima GOT pos, por lo que no se utilizó para la identicación
(Figura 4) presentó dos ramicaciones, ambas con de genotipos en esa etapa de investigación.
dos grupos. En el primer grupo con los cultivares En cuanto a la presencia de alelos nulos en
1 y 6 ( O. amyclaea) O. megacantha) y en un
y 2 ( algunos cultivares, cabe señalar que el alelo nulo
segundo con el cultivar 7 (O. cus-indica) como in- está ausente y se considera que su expresión en la
dependiente. La segunda ramicación mostró un síntesis del producto proteico es reducida, lo que
primer grupo con los cultivares 3 ( O. megacantha), puede indicar un homocigoto nulo. Al respecto, la
4 ( O. amyclaea) y 5 (O. crassa) y un segundo con interpretación de los resultados de los ensayos en
los cultivares 8 (O. cus-indica) y 9 (O. megacan- los que se involucran alelos nulos debe conrmarse
tha). con estudios de mejoramiento genético (Murphy et
El dendograma de la enzima MDH (Figura 5) al. 1990). Mientras que Chessa et al. (1997) re-
presentó dos ramicaciones principales. La primera portaron sólo un patrón de bandeo del sistema en-
que se subdivide en dos grupos, en el primero se zimático PGM cuando se utilizó tejido de cladodios
agruparon los cultivares 1 y 6 ( O. amyclaea) y en para todos los genotipos de nopal estudiados, en
el segundo el cultivar 5 (O. crassa) como indepen- tanto que al utilizar tejido de polen, el sistema en-
diente. La segunda ramicación se subdivide en zimático PGM mostró una variabilidad considerable
cuatro grupos, el primero formado por los cultivares con tres diferentes patrones de bandeo.
3 ( O. megacantha) O. amyclaea), el segundo
y 4 ( Los resultados mostrados en la enzima 6-
por los cultivares 7 y 8, ambos de O. cus-indica, el PGD dieren de los reportados por Chessa et al.
tercero formado por el cultivar 9 (O. megacantha) (1997) quienes encontraron sólo un patrón de ban-
y el cuarto por el cultivar 2 (O. megacantha). deo, cuando se utilizó tejido de cladodios para to-
dos los genotipos de nopal estudiados, mientras que
DISCUSIÓN al utilizar tejido de polen, este sistema enzimático
mostró dos diferentes patrones de bandeo. Los re-
Enzimas de nopal sultados del presente estudio con la enzima MDH
Un estudio con isoenzimas en polen de nopal dieren de aquellos reportados en tejidos de clado-
(Chessa et al. 1997) demostró que la enzima málica dios en los que se presentaron cuatro bandas bien
presentó un patrón único de bandeo para todos denidas (Uzun 1997), tres bandas en tejido verde
los genotipos estudiados, por lo que se descartó (Mukerji y Ting 1969) y tres bandas en tejido de
como útil para la identicación de genotipos; lo cual frutos (Uzun 1997). Sin embargo, los resultados
coinciden con los resultados encontrados en el pre- reportados por Chessa et al. (1997) para el caso
sente estudio. El sistema isoenzimático GOT pre- de polen de nopal, coinciden en parte con los del
sentó zonas de actividad denidas con claridad, in- presente estudio, pues ellos reportaron que el sis-

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tema enzimático MDH mostró alta variabilidad, con tosamente en una amplia variedad de especies de
nueve diferentes patrones de bandeo. La cantidad plantas y se utilizan para varios propósitos, entre los
de loci detectada en MDH apoya la sugerencia de que destacan la identicación de cultivares de man-
una estructura compleja. Al respecto Hardisty y zana (Weeden y Lamb 1985), vericar el parentesco
Claire (1989) encontraron en O. cymochila y O. de los híbridos de melocotón y almendro (Carter
phaeacantha dos o más loci en el control de la ex- y Brock 1980), como marcador genético en melo-
presión de la MDH, por lo que las diferencias en cotón (Durham et al. 1987), evaluar la relación lo-
el patrón de bandas de esta enzima, entre estas genética entre Agave fourcroydes y A. angustifolia
dos especies de Opuntia, permiten sugerir su uso (Colunga-GarcíaMarín et al. 1999), valorar la diver-
como marcador taxonómico. Al respecto se sabe sidad genética de Pilosocereus tillianus (Figueredo
que puede haber la posibilidad de que la enzima 6- et al. 2010) y Stenocereus pruinosus (Parra et al.
PGD de nopal, como en el caso de MDH, produzca 2008), identicar la variabilidad genética de maíz
heterodímeros (Stuber et al. 1982). Los sistemas (Sánchez et al. 2000) y aguacate (Torres y Berg
enzimáticos MDH, PGI y PGM han mostrado una 1980). Sin embargo, en la actualidad, las isoen-
variabilidad considerable en tejido de polen de nopal zimas han sido superadas por los marcadores de
y son especialmente útiles para la identicación de ADN, debido al número reducido de marcadores
genotipos de Opuntia, debido a sus distintas bandas que generan, además, pueden ser afectadas por el
y el número de patrones proporcionados; sin em- tipo de tejido y etapa de desarrollo de una planta,
bargo, la identicación de un cultivar no es posible ya que son producto de la expresión de genes. Las
usando sólo sistemas isoenzimáticos (Chessa et al. proteínas, también, pueden modicarse después
1997). La enzima malato deshidrogenasa (MDH) de la traducción y alterar su movilidad electro-
ha mostrado que es altamente polimórca, lo que forética (Kumar 1999); sin embargo, no todas las
signica que tiene múltiples formas moleculares; en- sustituciones cambian la carga eléctrica neta en
contrándose que el polimorsmo de MDH en cada la molécula, ya que aproximadamente 30 % de la
especie está determinado genéticamente por varios variación real asociada a sustituciones de aminoáci-
loci con alelos múltiples, por lo que una alta activi- dos se detecta por electroforesis (Klug y Cummings
dad de MDH en diversos órganos y tejidos, hace de 2000). Los patrones electroforéticos de proteínas
esta enzima un marcador genético conable, conve- de semillas y tallos de dos especies de Opuntia
niente y se puede utilizar en estudios de ecología y (O. rzedowskii Scheinvar y O. robusta Wenland
genética de poblaciones (Yudina 2012). ssp. larreyi Bravo) se estudiaron, se distinguieron
Las isoenzimas fueron los primeros mar- bandas comunes a todos los taxones examinados,
cadores moleculares desarrollados, resultan de la por lo que podrían ser características del género
variación en la secuencia de nucleótidos que reper- Opuntia, ya que los taxones con bandas similares
cute en la substitución de un aminoácido por otro; son interpretados como logenéticamente cercanos,
este reemplazo puede implicar una alteración de la por lo que se concluye que la electroforesis es una
carga eléctrica neta de una proteína. La diferencia herramienta auxiliar en la identicación y clasi-
de cargas se detecta como una alteración de la tasa cación de Opuntia (Estrada-Galván et al. 2000).
de migración de una proteína a través de un campo Recientes estudios utilizando patrones electroforéti-
eléctrico. La separación electroforética se utiliza cos de proteínas de semillas de Opuntia demostraron
para medir la variación de la movilidad de la proteína que no existe una separación entre las especies de
dentro de una población (Klug y Cummings 2000). nopales dulces y nopales ácidos o xoconostles. En
Así, las distintas formas electroforéticas de una pro- base a los marcadores bioquímicos utilizados, se
teína pueden implicar una codicación de diferentes sugiere una revisión de la asignación taxonómica
alelos, es decir, variación genética. La electroforesis de los genotipos que pertenecen al género Opuntia
y el análisis de isoenzimas se han aplicado exi- (Samah et al. 2015), además, estos resultados so-

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portan la hipótesis de la existencia de un reducido obtenidos a partir de RAPD, ISSR y una combi-
número de especies de Opuntia en México (Valadez- nación de ambos, los cuales no coinciden con la
Moctezuma et al. 2014a). clasicación taxonómica real, ya que las variedades
clasicadas en la misma especie no se encuentran en
Especies de nopal el mismo grupo, donde O. cus-indica, O. albicarpa
Los resultados de los dendogramas son una y O. megacantha mostraron variación amplia sin
clara evidencia de las diferentes especies que pueden una denición adecuada, por lo que es probable que
presentar el mismo patrón isoenzimático, lo que re- tengan un ancestro común, lo que apoya la hipótesis
eja polimorsmo y probable relación genómica sobre la existencia de un menor número de especies
menor entre las especies utilizadas, esto sugiere de Opuntia, con alta variación genética intraespecí-
que pueden compartir ciertos rasgos fenotípicos co- ca (Valadez-Moctezuma et al. 2014a). Lo an-
munes a pesar de ser especies diferentes (Guerrero- terior, es una evidencia del uso de las herramien-
Muñoz et al. 2006). El polimorsmo se ha obser- tas moleculares para la clasicación de cultivares y
vado en especies como O. robusta, que es endémica para la estimación de la diversidad o la variabili-
de México, sexualmente dimórca, con una ecología dad genética compleja de especies (Taylor y Barker
et al. 2014).
e historia de vida desconocida (Janczur 2012, Bendhi et al. 2013, Shilpha et al. 2013) no
También se ha observado polimorsmo en O. cus- siempre ha sido útil ni garantiza la caracterización
indica (Ganopoulus et al. 2015, Bendhi et al. de especies. La variación morfológica continua en el
2015). Lo que corrobora la discrepancia en los género Opuntia, los sinónimos, los diferentes niveles
diferentes métodos de clasicación de nopal, por lo de ploidía y los descriptores morfológicos inadecua-
que se fortalece la hipótesis de que al efectuar la dos, han llevado a errores de clasicación (Majure
clasicación del nopal por aproximación de carac- et al. 2012). Al respecto Espinoza-Sánchez et al
teres se han generado numerosas sinonimias. Es- (2014) encontraron que el dendrograma no mostró
tos problemas se han acentuado por las descrip- una clara relación con la taxonomía conocida de
ciones realizadas con genotipos únicos de jardines Opuntia. Mientras que Ganopoulos et al (2015)
y herbarios, pues no se consideró la variabilidad utilizando marcadores ISSR, encontraron alta diver-
natural de las poblaciones, la cual es fundamental sidad genética entre el germoplasma de O. cus-
para la descripción apropiada de las especies y con- indica, sugiriendo que este puede ser de benecio
formación de grupos (Schneider 1999, Reyes-Agüero en programas de mejoramiento genético y activi-
et al. 2005). La interpretación de la presencia de dades de manejo de germoplasma de la especie.
isoenzimas en plantas poliploides, como el nopal, Lo anterior, es evidencia para señalar la necesidad
puede conllevar cierto sesgo debido a que existen de otros estudios que permitan detectar con pre-
copias múltiples de cromosomas y su combinación cisión y conabilidad las semejanzas y diferencias
depende del nivel de ploidía. El nivel octaploide para reclasicación del géneroOpuntia (Wang et al.
(2n=8x= 88) de los cultivares de nopal estudia- 1998), ya que estudios en O. cus-indica mostraron
dos, propicia la duda de que exista duplicidad de una divergencia entre los cultivares estudiados y
bandas en la separación electroforética y error en exhibieron variación continua independiente del ori-
su interpretación. Otras posibles explicaciones es gen geográco, no agrupándose por separado de las
la posibilidad de recombinación genética, o que los otras especies de nopal, lo que indica que su clasi-
individuos utilizados para el estudio son atípicos cación taxonómica actual no está alineada con su
y no representan a las variedades referidas y, en variabilidad genética (Bendhi et al. 2015), resul-
última instancia, puede existir un error de clasi- tados que coinciden con los de Lyra et al. (2013)
cación en el banco de germoplasma de donde quienes argumentan la necesidad de realizar estudios
se tomaron los individuos de las especies. Simi- moleculares y morfológicos en Opuntia, ya que la
lares resultados se han obtenido en conglomerados logenia que encontraron sugiere una nueva revisión

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en la taxonomía, encontrando híbridos que causaron se recomiendan para la clasicación de cultivares de

dicultad para caracterizar de una manera segura nopal debido a su falta de polimorsmo. Los sis-
la familia Opuntiodeae. Al respecto Mihalter et al. temas enzimáticos PGM, 6-PGD, GOT y MDH,
(2011) en estudios del DNA de Opuntia, observaron al mostrar diferencias en el patrón de bandeo
discrepancias entre la caracterización molecular y la atribuibles a los cultivares estudiados, pueden ser
clasicación taxonómica. utilizadas en estudios de identidad y evaluación de
la variabilidad genética de nopal.
CONCLUSIONES
AGRADECIMIENTOS
Las enzimas fosfoglucomutasa (PGM), 6-
fosfogluconato deshidrogenasa (6-PGD), glutamato Se agradece al Dr. Porrio Ramírez Vallejo
oxaloacetato transaminasa (GOT) y malato por las facilidades brindadas para la evaluación
deshidrogenasa (MDH) expresaron reacción para de las isoenzimas en el laboratorio de marcadores
identicar bandas de actividad enzimática al mostrar moleculares del Programa de Genética del Colegio
diferencias o polimorsmo en su patrón de bandeo de Postgraduados, Montecillos, Estado de México.
de manera indeterminada, aunque sí se consideran Al Centro de Investigaciones Biológicas del Noroeste
relevantes para la identicación taxonómica y (proyecto AGROT1) por la publicación y difusión
evaluación de la variabilidad genética de nopal. de la presente investigación.
Las enzimas málica (ME) y aconitasa (ACO), no

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