CULTIVOS MICOLÓGICOS
• Generales: El más característico y clásico es el Agar Dextrosa de Sabouraud (SDA) utilizado para el
aislamiento de hongos a partir de muestra clínicas y para su identificación.
• Enriquecidos: Se utilizan especialmente en micosis sistémicas endémicas (histoplasmosis,
paracoccidioidomicosis, etc.), un ejemplo es el agar infusión cerebro-corazón (BHIA).
• Selectivos: Son medios que favorecen el aislamiento de los microorganismos deseados impidiendo el de
otros. Se utilizan con antibacterianos (cloranfenicol, gentamicina, penicilina, estreptomicina) y/o antimicóticos,
(cicloheximida). Útiles en micosis cutáneas y sistémicas.
• Diferenciales: Ayudan a la identificación del hongo basada en la apariencia de éste en dicho medio, gracias
a la adición de determinados componentes (sustancias cromógenas, o indicadores de pH). DTM para
Dermatofitos, CHROMagar Candida.
• Especializados: Son aquellos medios que contienen algún componente destinado a aislar e identificar un
agente concreto (semillas de girasol Guizotia abyssinica para (Cryptococcus neoformans) o a favorecer la
identificación de ciertas especies (medio de Czapeck para las especies de Aspergillus).
MEDIOS DE CULTIVO MÁS UTLIZADOS
• Agar Dextrosa de Sabouraud, (SDA)
• Agar Infusión cerebro-corazón (BHIA) con o sin sangre de cordero al 5%, con o sin antibacterianos Agar
inhibidor para mohos (MIA)
• Mycosel/Mycobiotic(antibacterianos/cicloheximida)
• Agar Dextrosa de Papa (PDA).
• Agar agua
Los hongos también pueden crecer en medios no selectivos, incluidos la mayoría de los medios bacteriológicos, si se
incuban el tiempo suficiente.
• Agar de Urea: se utiliza para diferenciar entre levaduras e identificar diferentes especies de Trichophyton
• Agar de harina de maíz (“Corn Meal Agar”):
o Suplementado con Tween 80: para diferenciar distintas especies de Cándida y para realizar
subcultivos ya que estimula la esporulación de hongos miceliales.
o Suplementado con 10 gramos de Glucosa: para diferenciar el Género Trichophyton
DIAGNÓSTICO
1. Detección de la presencia del hongo
a. Examen directo
b. Examen histológico
2. Cultivo
El hongo se pleomorfiza con facilidad y su esporulación es escasa, lo que dificulta su diagnóstico
Medio de cultivo:
• Estimular la esporulación: Agar patata zanahoria: Agar harina de avena Agar V8 Agar harina de
Maíz
• Tasa de crecimiento y producción de pigmento: Agar patata dextrosa Agar Harina de avena
• Identificación de especies (Fusarium): Agar nutritivo sintético Agar hojas de clavel
• Identificación de especies (Aspergillus y Penicillium): Agar extracto de malta al 2% Agar Czapek
Dox
Incubación:
Condiciones estándar para un patógeno oportunista: Temperatura: 24-28ºC Luz: oscuridad 12h UV / 12h
oscuridad
3. Identificación
Se basa fundamentalmente en la morfología. No existen métodos rápidos, miniaturizados ni automatizados,
ni tests nutricionales y fisiológicos que nos permitan identificar la mayoría de especies.
Identificación de especies:
Estudio de los caracteres macroscópicos (diámetro de la colonia, color, textura, etc) y microscópicos
(morfología de las hifas, de las estructuras fértiles, etc).
→ Para caracteres microscópicos:
a) Preparaciones directas
▪ Preparaciones semipermanentes: Lactofenol Lactofenol-Azul Algodón Ácido Láctico al 85
Ácido Láctico- Azul Algodón
▪ Preparaciones permanentes: Alcohol Polivinilo
▪ Preparaciones con cinta adhesiva
b) Microcultivo → permite preservar las estructuras frágiles
▪ Crecimiento en CHROMAgar: Candida de C. albicans (verde) C. tropicalis (azul), C. krusei
(rosa y rugosa), C. parapsilosis (rosácea-lisa) Prototheca wickerhamii (crema, flecha)
▪ Cultivo mixto de Cryptococcus neoformans y Candida albicans en Medio Staib (Agar de Staib
(Guizotia abyssinica, Agar semillas de alpiste) mostrando el color marrón de las colonias de
C. neoformans.
CONSEJOS PRÁCTICOS PARA EVALUAR UN CULTIVO DE MUESTRAS RESPIRATORIAS Y EMITIR UN
INFORME
• No todos los hongos tienen capacidad para producir una micosis invasora del tracto respiratorio inferior, por
lo que hay que evaluar especialmente los aislamientos de aquellos hongos que con mayor frecuencia se han
visto implicados en procesos clínicos.
• El aislamiento de A. fumigatus o A. flavus en una muestra respiratoria de un paciente leucémico y/o
neutropénico tiene un alto valor de infección fúngica invasora.
• La gravedad y agresividad de una mucormicosis pulmonar justifica siempre informar de la presencia de un
mucoral en una muestra respiratoria correctamente procesada.
• La corticoterapia prolongada es por sí sola un importante factor de riesgo para desarrollar una aspergilosis
invasora.
• El aislamiento de C. neoformans en una muestra respiratoria es indicativo de criptococosis pulmonar o de
infección sistémica.
• Scedosporium apiospermum y S. prolificans pueden dar lugar a micosis pulmonares invasoras clínicamente
indistinguibles de la aspergilosis.
• La fusariosis pulmonar suele deberse a diseminación hematógena en un cuadro sistémico y, en más del 50%
de los casos, cursa con hemocultivos positivos.
• La especies del género Candida rara vez dan lugar a micosis pulmonares invasoras, si no es en pacientes
terminales, estando presentes en las secreciones respiratorias del 20% de la población sana y en más del
50% de los pacientes que han recibido antibioticoterapia.
INFECCIONES POR INHALACION DE ESPORAS
• Histoplasmosis
• Blastomicosis
• Paracoccidioidomicosis
• Coccidioidomicosis
• Aspergilosis
• Zygomycosis
• Cryptococosis
RESPUESTA INMUNOLOGICA DEL HUESPED
• Mediación celular: IDR
• Mediación por anticuerpos: aglutinación, hemaglutinación, inmunoprecipitación, ria, elisa, etc.
DETECCION DE LA SENSIBILIDAD CUTANEA
Induce la formación de anticuerpos. Presencia de reacciones cruzadas con otras micosis. Uso epidemiológico. Sin
valor diagnóstico.
• Antígeno: Histoplasmina (filtrado del cultivo miceliano)
• Reacción positiva: Infección en evolución (infiltración pulmonar, lesiones cutáneas) o crónica (calcificación
pulmonar, esplénica)
• Reacción negativa: no excluye infección (comienzo, diseminación, anergia).
INMUNODIAGNOSTICO DE HONGOS PATOGENOS
Se han desarrollado diversos métodos alternativos al cultivo que pueden proporcionar al clínico información rápida y
fiable ante la sospecha de una micosis invasora. Entre estos métodos destacan:
✓ Detección de antígenos
✓ Detección de anticuerpos
✓ Detección de componentes fúngicos no antigénicos
Algunas de estas técnicas serológicas ya se han convertido en herramientas básicas en el laboratorio de
Microbiología Clínica actual, como:
✓ Detección del antígeno capsular de Cryptococcus neoformans
✓ Detección de galactomanano en pacientes con aspergilosis invasora.
Investigación de antígenos:
✓ Antígeno Polisacárido capsular en el Cryptococcus neoformans
✓ Exoantígenos de C. albicans puede diferenciar C. tropicalis
✓ Detección de los serotipos A y B de Candida albicans.
✓ Antígenos liberados en el medio de cultivo
Investigación de anticuerpos:
Técnicas de IDD
✓ B. dermatitidis
✓ P. brasiliensis
✓ H. capsulatum
✓ C. immitis
✓ Candida
✓ Aspergillus
Reacciones serológicas
✓ Aglutinación
✓ Fijación de Complemento
✓ Inmunoprecipitación en gel:
o Inmunoelectroforesis
o Inmunodobledifusión
✓ Inmunofluorescencia
✓ Inmunoenzimática (ELISA)
✓ Radioinmunología
DETECCIÓN DE ANTÍGENOS
1) Antígeno Cryptococcus
Criptococosis
Se detecta el antígeno polisacárido capsular del hongo en líquidos orgánicos, especialmente el LCR (líquido
cefalorraquídeo) ante la sospecha de meningitis criptocócica.
Esta prueba es importante porque:
✓ Muy rápida: 10–15 minutos
Muy específica
Alta sensibilidad:
✓ 99% en meningitis criptocócica
✓ 67% en criptococosis diseminada
✓ Mientras tanto el cultivo (aislamiento del hongo) puede tardar varios días.
Tipos de técnicas:
1. Cualitativa: se usa para el diagnóstico inicial y para confirmar la reinfección (ej. en pacientes con
VIH/SIDA)
2. Cuantitativa: Se usa para el seguimiento del paciente y para evaluar si el tratamiento antifúngico está
funcionando
Técnica: Prueba del látex
Fundamento: Es una reacción de aglutinación. Consiste en la precipitación de partículas de látex sensibilizadas
con anticuerpo anti-polisacarido capsular de C. neoformans en muestras de LCR, suero y orina. El límite de
detección es de 3.2 ng/ml a 12.5 ng/ml. Una reacción negativa no descarta infección. La prueba tiene valor
diagnóstico y pronostico, un aumento progresivo de título es de mal pronóstico. Cuando la terapia es inadecuada
se observa aumento o mantenimiento de los títulos sobre muestras consecutivas.
Lectura de resultados: La lectura es visual y se debe realizarse de la siguiente manera
▪ Negativo: suspensión granular muy fina con ausencia de aglutinación
▪ Positivo +: suspensión con escasos grumos contra un fondo homogéneo lechoso
▪ Positivo ++: suspensión con escasos a moderados grumos contra un fondo moderadamente homogéneo
▪ Positivo +++: suspensión con moderados a abundantes grumos contra un fondo claro
▪ Positivo ++++: suspensión con abundantes grumos contra un fondo totalmente claro
Titulación: Cuando la prueba es positiva + o más, se debe realizar titulaciones para el seguimiento de
tratamientos. Las diluciones recomendadas son:
▪ Positivo ++ se recomienda comenzar al 1:2
▪ Positivo es +++ o ++++ se sugiere comenzar en 1:100
Posteriormente para muestras seriadas del mismo paciente se debe utilizar el mismo esquema de dilución. El
seguimiento se debe realizar hasta la negativización de la aglutinación. Cuando se realiza titulaciones para
seguimiento de tratamientos es conveniente realizarlas con el mismo equipo para evita variaciones.
Falsos negativos: La sensibilidad varía entre el 93% y el 100% con un 93-98% de especificidad. Puede haber
falsos positivos:
✓ Presencia de factor reumatoide
✓ Pacientes con lupus
✓ Pacientes con sarcoidosis
✓ Arrastre medio de cultivo de agar chocolate
✓ Asas de platino o desinfectantes
✓ Infección sistémica por Trichosporon ashaii
Para evitar falsos negativos se tratan los especímenes clínicos con pronasa (DE) previa a la prueba, esta enzima
cuya función es separar los complejos inmunes circulantes y destruir el factor reumatoideo, elimina los falsos
positivos y aumentar la sensibilidad de la prueba.
2) Antígeno de Candida
Candidiasis
La Candidosis diseminada representa una de las causas de infección más importantes en lo que concierne a
mortalidad y morbilidad en el paciente inmunocompetente e inmunocomprometido. Los métodos habituales de
diagnóstico (hemocultivo) son negativos en las candidosis profundas. Los métodos serológicos no diferencian
entre la colonización y la invasión.
Técnicas:
a) aglutinación con partículas de látex sensibilizadas
➢ Anticuerpos monoclonales anti mananos → detectan manano (componente de la pared de Candida).
Es más sensible y específica.
➢ Anticuerpos policlonales anti glucoproteínas → detectan varias proteínas del hongo
b) Platelia Candida Ag (Bio-Rad)
Es un ELISA que detecta manano en suero utilizando el anticuerpo monoclonal EBCA1. Este anticuerpo
reconoce residuos ß-1,5 del manano de C. albicans, C. tropicalis, C. glabrata, C. guilliermondii, C.
parapsilosis y C. pseudotropicalis pero no de C. krusei. El límite de detección de la prueba es 0,25 ng/ml
de suero.
3) Antígeno de Aspergillus
Aspergilosis
Se diagnostica detectando el antígeno galactomanano → componente de la pared celular del Aspergillus que se
libera durante la infección.
Técnica: Platelia Aspergillus EIA
✓ Detecta galactomanano en suero utilizando el anticuerpo monoclonal EBA-2, que reconoce el
galactomanano de A. fumigatus, A. flavus y A. niger, aunque puede dar positiva con hongos del género
Penicillium, Alternaria y Paecylomyces.
✓ El límite de detección de la prueba es 1 ng/ml de suero.
✓ Tiene una especificidad del 89,6% y sensibilidad del 87,5%.
✓ Esta prueba en algunos estudios se ha demostrado que es positiva antes de que aparezca la
sintomatología clínica.
✓ Actualmente, se considera un resultado positivo cuando el paciente presenta dos muestras consecutivas
con un índice ³0,5.
✓ La detección de galactomanano puede verse disminuida en pacientes con enfermedad granulomatosa
crónica y Síndrome de Job.
✓ No ha sido evaluado en profundidad en plasma, orina, BAL y LCR.
✓ Alimentos como los cereales, pollo, pastas y productos lácteos pueden contener galactomanano que
puede ser adsorbido en niños y pacientes con alteraciones en la barrera intestinal.
✓ Resultados falsos positivos en pacientes tratados con: piperacilina-tazobactam y amoxicilina-clavulánico.
4) Antígeno de histoplasma
Histoplasmosis
✓ Se detecta el antígeno en líquidos corporales, las pruebas pueden aplicarse a muestras tales como:
suero, plasma, liquido peritoneal o LCR.
✓ Se da en pacientes con enfermedad respiratoria, hepatoesplenomegalia, signos de infección sistémica
extrapulmonar o con compromiso meníngeo, en pacientes que vivieron o trabajaron en zonas endémicas
de Histoplasma capsulatum.
✓ La detección de antígeno de Histoplasma se hace generalmente por ELISA.
DETECCIÓN DE ANTICUERPOS
✓ Se buscan anticuerpos del paciente contra el hongo.
✓ Se usan principalmente en micosis profundas
✓ Problemas generales:
o Difícil estandarizar antígenos
o Respuesta inmune débil (bajo título de anticuerpos)
o Reacciones cruzadas (poca especifidad)
✓ En criptococosis no sirve para detectar anticuerpos
✓ En candidiasis si se pueden detectar anticuerpos contra el manano, enolasa, antígenos del micelio, aunque
no es lo ideal
✓ En aspergilosis si tienen utilidad especialmente en aspergiloma pulmonar y aspergilosis broncopulmonar
alérgica (ABPA)
✓ Las técnicas empleadas son inmunodifusión doble y la contrainmunelectroforesis
Inmunodifusión
Interpretación de resultados
▪ Reacción de identidad: Fusión completa de los anticuerpos del paciente con los antígenos del hongo. Fusión
de los extremos de las bandas precipitantes del suero de referencia y del suero del paciente. Constituye una
prueba positiva pone en evidencia que el paciente posee anticuerpos específicos para el antígeno de un
hongo en particular.
▪ Reacción de identidad parcial: Anticuerpos del paciente reaccionan en forma incompleta con el antígeno de
referencia. Esto ocurre por la existencia de fracciones antigénicas comunes a varios hongos que reaccionan
parcialmente con los anticuerpos del suero del paciente (histoplasmosis-paracoccidioidomicosis). No se
interpreta como positiva realizar otras pruebas complementarias como la IEF, FC, ELISA, etc.
▪ Reacción de no identidad: Las bandas de precipitación se entrecruzan. La muestra del paciente presenta
anticuerpos que pueden reaccionar con uno de los múltiples componentes no específicos del antígeno de
referencia. Constituye una prueba negativa.
Inconvenientes de la inmunodifusión (IDD)
✓ Es lenta (incubación de hasta 3 días), aunque a las 24 h ya se pueden observar arcos de precipitación.
✓ Puede producir reacciones cruzadas entre distintas especies de Aspergillus y se extienden a otras especies
de hongos e incluso algunas bacterias.
✓ Esta técnica no distingue el tipo de anticuerpo específico presente en el suero (IgG, IgM o IgE).
✓ Tiene una sensibilidad baja, por esto no es de utilidad en aspergilosis invasoras.
✓ El factor reumatoide y la proteína C-reactiva presentes en el suero pueden causar falsas precipitinas.
Inmunodoble difusión HC: Titulación
M: La banda M se encuentra cerca del hoyo del antígeno. Histoplasmosis aguda o crónica. de una infección
pasada o de una prueba cutánea reciente.
H: la banda H cerca del hoyo del suero control positivo. Histoplasmosis activa y progresiva. Puede persistir de
uno a dos años.
DETECCIÓN DE COMPONENTES NO ANTÍGENOS
✓ Se basa en la detección de D-arabinitol, DNA y (1, 3)-ß-Dglucano.
✓ El D-arabinitol es un metabolito producido por C. albicans, C. tropicalis, C. parapsilosis y C. kefyr que
puede detectarse mediante cromatografía gaslíquido o mediante una técnica enzimática comercializada
en Japón.
✓ Niveles elevados de D-arabinitol se han detectado en pacientes con candidiasis invasora y su
monitorización se ha mostrado útil en el seguimiento de estos pacientes.
✓ La técnica presenta falsos positivos en pacientes con insuficiencia renal o en tratamiento con esteroides y
suele ser necesario ajustar las concentraciones de D-arabinitol con respecto a las de creatinina o L-
arabinitol. El D-arabinitol también puede detectarse en orina.
✓ La detección de (1, 3)-ß-D-glucano en plasma es otra posibilidad diagnóstica en las micosis producidas
por Candida, Aspergillus y Pneumocystis.
✓ El ser humano carece de glucanasas para digerir (1, 3)-ß-D-glucano y por tanto su eliminación es lenta.
✓ Existen varias pruebas comercializadas para la detección (1, 3)-ß-D-glucano, siendo el Fungitell la más
recientemente comercializada.
✓ Las pruebas para detectar (1, 3)-ß-D-glucano pueden presentar falsos positivos en pacientes sometidos a
hemodiálisis con aparatos que tengan membranas de acetato de celulosa, o en tratamiento con
albúmina, inmunoglobulinas, algunos agentes anticancerosos y sulfamidas.
REACCIÓN DE AMPLIFICACIÓN ENZIMÁTICA (PCR)
✓ Sondas quimioluminiscentes marcadas con Ester de Acridina → Histoplasma capsulatum, Blastomyces.
dermatitidis, Coccidioides immitis, Cryptococcus neoformans.
✓ Tiene un 100% de especificidad y ± 96% de sensibilidad
✓ Identificación rápida (2 horas vs 3 días) para la investigación de exoantígenos de un cultivo miceliano de 7 a
10 días de desarrollo.
INMUNODIAGNOSTICO DE HONGOS PATOGENOS
Hibridación de ADN: Identificación rápida, sensible y específica del material genético detectado con sondas de ADN
marcado. Permite una detección e identificación simultánea, directamente de la muestra clínica o de colonias aisladas
con ayuda de la amplificación enzimática, de sondas nucleicas.
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO
El objetivo principal de la seguridad en el laboratorio es el de minimizar el riesgo de exposición, infección y
enfermedad en el personal que en él labora, debido a la manipulación de productos biológicos, o sustancias químicas
peligrosas.
Se debe tomar en cuenta:
1) No fumar, comer o beber, ni almacenar productos alimenticios en el laboratorio.
2) Usar el cabello recogido, evitar la ropa suelta y las joyas cuando trabaje con materiales de riesgo
biológico, inflamable o maneje equipos.
3) Es indispensable el uso del mandil, guantes, mascarilla y gafas, para proteger al personal, además debe
quitarse el mandil antes de salir del laboratorio.
4) Lavarse las manos al entrar y al salir del laboratorio.
5) Usar soluciones desinfectantes para las manos y las áreas de trabajo.
6) Evite la circulación de personas no autorizadas al laboratorio.
7) El personal de laboratorio debe estar entrenado sobre el uso, almacenamiento, tratamiento y desecho de
materiales biológicos o químicos.
8) Estar familiarizados con los procedimientos de descontaminación o equipos de protección, como cámara
de seguridad, extractores, purificadores de aire, equipos de lavado de emergencia, entre otros.
Evaluación de los riesgos:
El riesgo aumenta con la frecuencia y el nivel de contacto con el agente contaminante, y si el personal no trabaja en
las condiciones adecuadas de bioseguridad, para la autoprotección y la de los que nos rodean.
Consideraciones físicas:
➢ El espacio físico debe estar basado en la función del laboratorio (por ejemplo, diagnóstico, investigación,
producción).
➢ El espacio y el diseño del laboratorio deben facilitar la limpieza y poseer un lugar para la descontaminación
del material infeccioso antes de ser desechado.
PRÁCTICA DE LA BIOSEGURIDAD
1) Identificar los riesgos o peligros
➢ Peligros biológicos → Bacterias, virus, parásitos u hongos que pueden provocar enfermedades en
humanos.
➢ Peligros químicos → Las propiedades físicas, la estabilidad, toxicidad, cantidad y duración de la
exposición a sustancias químicas que pueden envenenar, dañar o causar enfermedades sistémicas.
➢ Peligros físicos → Radiación, ruidos, cargas termales, otros factores del medio ambiente que pueden
causar angustia física y mental en el trabajador.
➢ Peligros económicos → Relacionados al diseño del lugar de trabajo (localización de los equipos,
altura de las mesas de trabajo, pueden causar inconformidad física y estrés mental.
➢ Peligros psicológicos → Relaciones interpersonales (trabajadores, supervisores), entrenamiento
inadecuado, cargas de trabajo, pueden causar estrés en el trabajador.
2) Tratar los riesgos identificados
➢ Reducir el riesgo, reemplazando, ya sea el procedimiento, el equipo y/o los reactivos. Eliminar el
riesgo completamente al eliminar el factor o los factores que lo ocasionan.
PRECAUCIONES
Los agentes biológicos y químicos, ya sean líquidos, sólidos o aerosoles, entran al cuerpo por las siguientes rutas:
piel, absorción, inhalación, ingestión, inyección, etc.
AEROSOLES
Son suspensiones de partículas en el aire, y dichas suspensiones pueden ser de bacterias, parásitos u hongos. Con
las siguientes manipulaciones se crean aerosoles:
➢ Al flamear las agujas y asas de inoculación.
➢ Al romperse los tubos durante la centrifugación.
➢ Al descartar sobrendantes.
➢ Al usar pipetas automáticas.
➢ Al dejar caer los tubos o frascos de caldo de cultivo.
➢ Al dejar caer suspensiones microbianas o gotas sobre la superficie de la mesa de trabajo.
➢ Al usar un vórtex.
NIVELES DE BIOSEGURIDAD
NIVEL 1
✓ Son poco probable que causen una enfermedad en el hombre.
✓ No producen enfermedad en el ser humano sano y de susceptibilidad conocida y estable a los
antimicrobianos.
✓ Ejemplo: E. coli, Saccharomyces cerevisiae, microorganismos que se utilizan en la industria de la
alimentación para la elaboración de quesos, embutidos, entre otros.
NIVEL 2
✓ Pueden causar una enfermedad en los trabajadores, siendo poco probable la propagación y existe
generalmente profilaxis o tratamiento eficaz.
✓ Algunos pueden ser de la propia flora habitual del hombre, son capaces de originar patología infecciosa
humana de gravedad moderada o limitada.
✓ Ejemplo: Staphylococcus epidermidis, Salmonella sp, entre otros.
NIVEL 3
✓ Presenta un serio peligro para los trabajadores, con riesgo de que se propague a la colectividad y existe
frente generalmente profilaxis o tratamiento largo y eficaz.
✓ Implican patología grave, ocasionalmente producir la muerte.
✓ Mayor riesgo son los aerosoles y fluidos biológicos.
✓ Ejemplo: M. tuberculosis, Brucella sp, Coxiella burneti, entre otros.
NIVEL 4
✓ Poseen un riesgo individual alto de producir infecciones de laboratorio transmitidas por aerosoles y
enfermedades mortales.
✓ Los miembros del personal de laboratorio deben poseer una capacitación específica y completa para
manipular agentes infecciosos extremadamente peligrosos.
✓ Normalmente son microorganismos de dosis infectiva baja y alta contagiosidad.
✓ Ejemplo: Arenavirus como el que produce la fiebre de Lassa, Machupo, Ebola, Hantavirus, etc.
CLASIFICACIÓN DE LOS HONGOS EN GRUPOS DE RIESGO
GRUPO 2
▪ Aspergillus fumigatus (a)
▪ Candida albicans (a)
▪ Candida tropicalis
▪ Cryptococcus neoformans var. Neoformans (a)
▪ Cryptococcus neoformans var. Gattii (a)
▪ Epydermophyton floccosum (a)
▪ Penicillium marneffei (a)
▪ Microsporum spp. (a)
▪ Emmonsia parva var. parva
▪ Emmonsia parva var. crescens
▪ Fonsecaea compacta
▪ Fonsecaea pedrosoi
▪ Madurella grisea
▪ Madurella mycetomatis
▪ Neotestudina rosatii
▪ Scedosporium apiospermum
▪ Scedosporium prolificans (inflatum)
▪ Sporothrix schenckii
▪ Trichophyton rubrum
▪ Trichophyton spp.
GRUPO 3
▪ Coccidioides immitis (a)
▪ Blastomyces dermatitidis
▪ Cladophialophora bantiana
▪ Histoplasma capsulatum var. capsulatum
▪ Histoplasma capsulatum var. duboisii
▪ Paracoccidioides brasiliensis
CONTENCIÓN
Son los métodos seguros para manejar materiales infecciosos en el medio ambiente de laboratorio donde son
manipulados o conservados. Su objetivo es reducir o eliminar la exposición de quienes trabajan en laboratorios u
otras personas y del medio ambiente externo a agentes potencialmente peligrosos.
Niveles de contención
1) Contención primaria: Consiste en la protección del personal y de medio ambiente inmediato contra la
exposición a agentes infecciosos y/o productos químicos de riesgo. La protección personal, incluye una
vestimenta adecuada a la actividad que se va a realizar (ejemplo: guantes, mascarillas, mandiles de manga
larga, etc.). La aplicación de vacunas aumenta el nivel de protección personal. Como medida de contención
también se considera el uso apropiado de equipos y dispositivos que garantizan la seguridad (ejemplo:
cabinas de seguridad biológica).
Sustancias químicas peligrosas
➢ Hipoclorito de sodio (lejía de uso doméstico) son potentes oxidantes que liberan cl2 → produce
irritación de mucosas y del tracto respiratorio superior → Usar guantes resistentes, protectores
oculares y ropa adecuada mandil Áreas donde se manipulen estos productos con ventilación
adecuada.
➢ Compuestos de amonio cuaternario 0,4-1,6% → Irrita piel y produce alergias → Son menos cáusticos
que muchos otros desinfectantes.
➢ Ácido sulfúrico, Ácido clorhídrico, Metanol, tolueno nitrobenceno → Irritación de ojos, mucosa nasal,
vías respiratorias y quemaduras → Manipulado sólo en campana de gasas y con protectores de ojos
impermeable, máscaras y guantes resistentes.
➢ Formaldehido y glutaraldehído Son compuestos tóxicos → Potenciales agentes carcinogénicos,
irritaciones oculares y tracto respiratorio → Manipulados sólo en campana de gases y con protectores
de ojos impermeables.
Almacenamiento de sustancias químicas
➢ Debe realizarse según sus características de peligrosidad. Nunca organizar los productos químicos
por orden alfabético o por número de articulo ascendente.
➢ No se deben almacenar por tiempo indefinido los productos químicos.
➢ En caso de sustancias inflamables estas deben ser refrigeradas en armarios frigoríficos especiales.
➢ La manipulación de sustancias que desprenden vapores, gases irritantes o mal olor, debe realizarse
bajo campana de seguridad.
➢ Toda sustancia química debe ser catalogada y mantener un inventario visible actualizado de todas las
sustancias químicas que almacena y lo utiliza.
➢ Se debe mantener neutralizantes disponibles para cualquier emergencia como: bicarbonato de sodio
para los ácidos, ácido acético diluido para los álcalis.
Desechos químicos
➢ No deben eliminarse directamente al sistema de desagüe, sin el tratamiento previo.
➢ Los solventes miscibles con el agua previamente diluidos 1 en 10, los ácidos y los álcalis
previamente diluidos 1 en 30, se pueden desechar en el desagüe tomando las precauciones del
caso.
2) Contención secundaria: Es la combinación entre las características de la edificación y prácticas
operacionales. La magnitud de contención secundaria dependerá del tipo de agente infeccioso que se
manipule en el laboratorio. Dentro de éstas características se incluyen: La separación de las zonas donde
tiene acceso el público (precámaras), la disponibilidad de sistemas de descontaminación (autoclaves), el
filtrado del aire de salida al exterior (uso de cabinas), el flujo de aire direccional, señalización, etc.
Cabinas de seguridad biológica → Tienen como función proveer un contenedor primario para agentes
infecciosos. Trabajan con un sistema de funcionamiento y remoción de aire, el cual es diseñado para
minimizar el escape de aerosoles de la cabina. Esto depende del diseño y de la localización del filtro. Puede
proveer protección al producto y/o al trabajador.
Tipos de CSB
▪ Clase I: Protege al trabajador, no al producto. Escape de aire filtrado HEPA dentro del
laboratorio o hacia fuera. No se debe usar con químicos tóxicos o inflamables.
▪ Clase II:
Tipo A: Protege al trabajador Protege al producto. Escape del 30 % del aire filtrado
HEPA dentro del laboratorio y recircula el 70 % en la cabina. No se debe usar con
químicos tóxicos o inflamables.
Tipo B: Protege al trabajador y al producto. Ducto hacia fuera (no hay escape hacia el
interior del laboratorio). Recircula el 30 % del aire en la cabina y el 70 % del aire
filtrado escapa hacia afuera. Puede ser usada con sólo pequeñas cantidades de
materiales radioactivos tóxicos o volátiles.
Tipo C: Protege al trabajador y al producto. Ducto hacia fuera (no hay escape hacia el
interior del laboratorio). Escape del 100 % del aire filtrado por HEPA hacia afuera.
Puede ser usada con químicos radioactivos tóxicos o volátiles.
▪ Clase III: Protege al trabajador y al producto. juste de gas totalmente cerrado. Guantes de
caucho pegados con acceso al área de trabajo. Doble filtración por HEPA, escape de aire
hacia afuera.
DESCONTAMINACIÓN, ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN
➢ Descontaminación → Es el proceso por el cual se remueve la contaminación por destrucción de los
microorganismos; lo que hace a los objetos seguros para su desecho o uso.
➢ Esterilización → Es la destrucción completa o remoción de todos los microorganismos por medios físicos o
químicos, usualmente se logran artículos estériles para el uso.
➢ Desinfección → Es la destrucción de tipos específicos de organismos, usualmente por medios químicos. Es
un medio de descontaminación.
DESINFECTANTES MÁS UTILIZADOS
➢ Alcohol etílico del 70 al 90 % → Bactericida, fungicida y viricida → Usos: personal (manos, heridas o zonas
afectadas del cuerpo), además objetos, materiales, mesa de trabajo, etc.
➢ Compuestos de amonio cuaternario 0,4- 1,6% → Fungicida, actividad bactericida y viricida limitada → Usos:
áreas de trabajo, materiales, objetos, etc.
➢ Hipocloritos (500 ppm) → Bactericida, fungicida, viricida y tuberculicida → Usos: áreas de trabajo, materiales,
objetos, etc.
➢ Agua oxigenada al 3% → Bactericida, fungicida, viricida, tuberculicida y esporicida → Usos: personal (heridas
cortantes).